高效液相色谱法测定蝉花中腺苷的含量

蝉花(Cordyceps Cicadae)是我国珍贵药材之一,具有镇静、镇痛、解热等功效[1],蝉花中的腺苷具有降低血压、减慢心率等作用[2].现报告蝉花中腺苷含量的测定方法如下. 1 仪器、样品与试药 1.1 仪器 Waters 510 高效液相色谱仪,484 型紫外检测器,岛津 C-R4A 数据处理器.CQ 250 型超声波清洗器. 1.2 实验材料蝉花(经浙江省药品检验所鉴定);腺苷对照品(英国 BDH 公司);其他试剂皆为分析纯.     

蝉花对免疫功能影响的实验研究

目的:观察蝉花对免疫功能的影响和急性中毒情况。方法:小鼠分组给药后采血测定小鼠的血清溶血素、抗体积数;用鸡红细胞吞噬实验测定小鼠腹腔巨噬细胞(MΦ)吞噬百分数和吞噬指数,观察蝉花对小鼠体液免疫和细胞免疫功能的影响。急性毒性试验测定小鼠最大给药量。结果:蝉花组与空白组比较各指标有非常显著的差异,且高剂量组的作用与双宝素组相当。蝉花最大耐药量为80g/kg,相当于人临床用量444倍。结论:蝉花具有明显促进正常小鼠体液免疫功能和提高巨噬细胞吞噬功能作用。安全无毒。     

蝉花的研究概况

蝉花 (Isaria cicadae Miq)药用已有 10 0 0多年的历史。它是由麦角菌科 (Claviceptaceae)真菌寄生于蝉类若虫的干燥复合体。医家认为蝉花是一种与冬虫夏草相近的珍贵药材。有关文献记载 ,蝉花性寒 ,味甘 ,具散风热、定惊镇痉等功效 [1 ,2 ] 。近年来学者们对其来源、性状、化学成分、药理作用及临床应用做了一些研究工作 ,现予以综述。1　历史沿革原以为蝉花首载于宋·唐慎微所著《经史证类备急本草》(简称《证类本草》)中 ,其言“蝉花味甘寒 ,无毒 ,主小儿天吊 ,惊　 ,　　 ,夜啼 ,心悸”。这是从前人的记录中引用而来。在较早些的宋·…     

蝉花的药理作用研究进展

本文评述了蝉花在药理作用方面的研究现状,提出今后研究发展的方向,并对其发展前景进行展望。     

药用真菌蝉花的研究进展

蝉花是一种传统的药用真菌，除含有与冬虫夏草相似的活性成分外，还具有一些独特的生物活性。现从形态特征、自然分布、人工培养及其所含的活性物质和功能等几个方面评述了药用真菌蝉花的研究现状，且根据当前生物技术的发展趋势，提出了今后研究开发蝉花中一些值得关注的问题，并对其发展前景进行了展望。     

中药蝉花的研究概况

本文对蝉花国内外研究现状、本草考证、背景与资源现状、发酵培养、活性成分及功能、药理作用方面研究做一综述,并根据当前临床应用的需求,对提高产品的产量和有效活性成分的纯度等方面的研究提出建议,并对其发展前景进行了展望。     

中国蝉花的研究进展

 目的综述中国蝉花的化学成分、药理作用等方面的进展。方法查阅近10年国内外有关的文献,并进行总结分析。结果蝉花是一种传统的药用真菌,与名贵中药冬虫夏草的无性型同属,调节免疫功能和脂类代谢,提升机体的营养状况,有抗疲劳抗应激、解热镇痛和滋补强壮等作用。结论蝉花是一种应用前景广阔的药用资源菌,应进一步研究与开发。     

中药蝉花的研究进展

蝉花是我国特有的名贵药用真菌,具有促进造血、改善机体营养状况、增强机体免疫、抗肿瘤、抗衰老等作用,除此之外还具有杀虫的功效.近年来,其主要活性物质受到科学工作者的普遍关注,并做了大量实验研究.因此主要从分类、活性成分、药理功能等几个方面对其取得的成果作简要概述,并对蝉花的进一步研究及应用提出了自己的看法.     

蝉花总多糖的提取纯化及含量测定

目的：探索蝉花总多糖的提取纯化及含量测定方法,为深入研究蝉花总多糖提供技术方法。方法：采用水提醇沉法提取水溶性粗多糖,经Sevag法除蛋白、透析和活性炭脱色制备得蝉花总多糖,采用苯酚硫酸法测定多糖含量,干燥失重法测定水分含量。结果：经纯化后的蝉花总多糖含量为51．6％,水分含量为8．7％,在250～280nm间无明显吸收峰。结论：该系列纯化方法能有效地去除核酸、蛋白质、小分子物质等杂质成分,使蝉花总多糖含量达到50％以上;苯酚硫酸法测定蝉花总多糖含量简便、准确、重现性好。     

蝉花对小鼠血糖及造血功能影响

目的：观察蝉花对血糖和造血功能的影响。方法：腹腔注射四氧嘧啶形成糖尿病小鼠模型,观察蝉花对糖尿病小鼠和正常小鼠血糖的影响。采用尾尖端放血和腹腔注射盐酸苯肼的方法,形成小鼠失血性贫血和盐酸苯肼贫血的模型,分组给药后采血测定小鼠的Hb、RBC,观察蝉花对造血作用影响。结果：蝉花能降低四氧嘧啶造成的糖尿病小鼠和正常小鼠的血糖。蝉花能明显对抗失血性贫血和对抗盐酸苯肼贫血。且高剂量组的作用与阿胶组相似。结论：证明蝉花对糖尿病小鼠和正常小鼠血糖均有显著的降低血糖的作用。具有明显抗失血性贫血和抗盐酸苯肼贫血作用。     

蝉拟青霉不同纯化组分对体外抗肿瘤作用的基础研究

目的：为了进一步研究蝉拟青霉总多糖和腺苷单用或分别联合顺铂（DDP）或阿霉素（ADM）在体外的抗肿瘤作用。方法：用MTT法检测DDP、ADM、总多糖、总腺苷单独及联合用药对人肺腺癌（PAA-1）细胞的生长抑制能力;用流式细胞仪检测其对体外培养细胞系细胞周期的影响;用光镜检查其对体外培养PAA-1细胞系集落形成率的影响;用流式细胞仪检测其对体外培养淋巴细胞亚群分化的影响。结果：DDP、ADM、总多糖、腺苷对人肺腺癌（PAA-1）细胞生长抑制的IC50分别为9.05μg/mL、36.21μg/mL、10.86mg/mL、7.81mg/mL。DDP或ADM和多糖联用对PAA-1细胞的生长抑制主要表现出拮抗效应;0.5mg/mL、0.25mg/mL腺苷与4μg/mL阿霉素联合作用时,显示出拮抗效应,而当8mg/mL腺苷与4μg/mL阿霉素联用时,显示协同效应;不同浓度腺苷单用与和DDP联合使用相比,对细胞生长影响无显著性差异;腺苷和ADM联合作用,随着腺苷浓度的增加,G0/G1期细胞逐渐减少,而G2/M期相对增加。对体外培养PAA-1细胞系集落形成率多糖组和阴性对照组未见明显差异,不同浓度腺苷组的集落形成率略低于阴性对照组,随着腺苷浓度逐渐增加,集落形成率逐渐下降。     

蝉花总多糖对细胞免疫和体液免疫反应的促进作用

目的：研究蝉花总多糖（CCP）体内外对细胞免疫和体液免疫的影响。方法：首先用MTT法和ELISA法测定小鼠脾细胞增殖和IgG抗体的生成水平,以研究CCP体外对细胞免疫和体液免疫的影响;然后通过DNFB诱导的小鼠迟发型超敏（DTH）反应和绵羊红细胞（SRBC）诱导的小鼠血清抗体生成实验进一步观察CCP体内对特异性细胞免疫和体液免疫反应的影响。结果：CCP 0.16~100μg/mL各浓度不仅能直接刺激小鼠脾细胞的增殖和IgG抗体生成,对Con A或LPS诱导的小鼠T、B淋巴细胞增殖和IgG抗体生成也具有显著的促进作用,并呈现良好的浓度依赖性。CPP 20 mg/kg可显著提高小鼠的DTH反应;10和20 mg/kg可剂量依赖性地显著提高抗SRBC抗体的生成。结论：CCP在体内外均能有效促进细胞免疫和体液免疫反应。     

蝉拟青霉多糖的提取纯化工艺研究

目的：确定蝉拟青霉多糖的最佳提取纯化工艺。方法：用苯酚—硫酸紫外分光光度法测定蝉拟青霉多糖含量，采用正交实验设计，以多糖含量为指标，优化蝉拟青霉多糖水提取和醇沉淀工艺。结果：蝉拟青霉多糖水提取最佳条件：加水量1：7，提取时间1h，提取次数3次；醇沉淀最佳条件：水提液浓度0.15g生药/mL，醇浓度60%，醇沉时间72h。结论：优化的蝉拟青霉多糖水提醇沉工艺简便、合理、可行。     

蝉花真菌的分离及液体发酵培养

目的:探讨蝉花真菌分离及液体发酵培养。方法:从蝉花僵虫体、子座芽、孢子分离真菌,并采用三种液体培养基考察菌丝收率。结果:分离得到的蝉花真菌经鉴定为拟青霉属的蝉拟青霉。在含蚕蛹粉、鸡蛋等动物性成分的液体培养基中培养4天,菌丝收率135 g/L。结论:从蝉花分离得到的蝉拟青霉,可用液体发酵培养。     

Chemical Constituents from Mycelia and Spores of Fungus Cordyceps cicadae

Objective To isolate and identify the chemical constituents from mycelia and spores of the fungus Cordyceps cicadae,respectively.Methods The chemical constituents were isolated and purified by repeated silica gel,Sephadex LH-20,and reversed phase HPLC.The structures of these compounds were elucidated on the basis of extensive spectroscopic analysis,including 1 D and 2D NMR.Results Nine known sterols such as ergosterol(1),ergosterol peroxide(2),9,11-dehydroergosterol peroxide(3),3β,5α,9α-trihydroxy-(22E,24R)-ergosta-7,22-dien-6-one(4),3β,5α,9α,14α-tetrahydroxy-(22E,24R)-ergosta-7,22-dien-6-one(5),5x,6x-epoxy-(22E,24R)-ergosta-8(l 4),22-diene-3β,7α-diol(6),3β,5α,6β-(22E,24R)-ergosta-7,22-dien-3,5,6-triol(7),3|3,5x,6x-6-methoxyergosta-(22E,24R)-7,22-diene-3,5-diol(8),4-hydroxy-17R-methylincisterol(9),together with a resorcinol derivative,5-n-nonadecylresorcinol(10),a cyclodesipeptide,beauvericin(11),and a nucleoside,N~6-(2-hydroxyethyl)adenosine(12)were successively isolated from the cultivated C.cicadae mycelia and spores.Conclusion Compounds 3-10 are reported for the first time from the title sample,beauvericin exhibits significant cytotoxicity against human leukemia cell line and human lung cancer cell line.     

蝉花汤延缓慢性肾功能衰竭进展的临床观察

目的:观察和评价蝉花对慢性肾功能衰竭患者的临床治疗效果。方法:将临床收集的126例CRF患者随机分为蝉花治疗组(n=42)、人工虫草组(n=42)和西药对照组(n=42),用药治疗180天,检测CRF患者的残存肾功能(Scr、BUN、Ccr)、血脂(TG、TCH)、血清白蛋白(ALb)、血色素(Hb)、红细胞比积(Hct),通过自身对照和组间对照观察和评价蝉花对CRF的临床疗效。结果:蝉花治疗组在治疗后Scr、BUN比治疗前均明显下降(P<0.01)。蝉花治疗组在治疗后ALb、Hb、Hct均明显高于治疗前,其差异十分明显(P<0.01)。蝉花治疗组患者治疗后的TG和TCH较治疗前有所改善(P<0.05)。结论:蝉花能降低血清肌酐、尿素氮水平,提高肌酐清除率,促进蛋白质的合成,纠正负氮平衡的作用;升高CRF患者血浆白蛋白、血红蛋白量和红细胞比积;能改善CRF患者的甘油三酯和降低血清胆固醇水平的作用。     

人工虫草与冬虫夏草HPLC特征图谱研究

目的以人工北虫草、发酵虫草菌粉和冬虫夏草为研究对象,建立高效液相色谱(HPLC)特征图谱。方法采用超声法提取虫草中的水溶性成分,HPLC建立虫草的特征图谱。采用Agilent ZORBAX SB-Aq色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈(A)-0.04 mol/L磷酸二氢钾溶液(B),梯度洗脱(0~16 min,0%A;16~38 min,0%→10%A;38~58 min,10%→15%A;58~65 min,15%→0%A),流速1.0 m L/min,柱温25℃,检测波长260 nm,进样体积20μL。运用国家药典委员会《中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2004 A)》,建立人工虫草与天然虫草HPLC特征图谱,同时指认了7个核苷类成分,并进行比较研究。结果本方法精密度、重复性、稳定性良好。以腺苷为参照峰,对11批冬虫夏草、10批人工北虫草和12批发酵虫草菌粉进行指纹图谱分析结果显示,其指纹图谱相似度分别为0.889~0.982、0.781~0.980、0.502~0.970。结论天然虫草的指纹图谱相似度较高,人工北虫草和发酵虫草菌粉指纹图谱的相似度较低。本方法可作为评价人工虫草和天然虫草质量的参考依据。     

蛹虫草多糖含量的测定与分析

目的：比较5种不同的蛹虫草样品的多糖含量,为蛹虫草多糖提取、开发利用等提供了科学依据。方法：苯酚－硫酸法。结果：同种蛹虫草的不同部位蛹虫多糖含量差异较大,不同培养基质培养的蛹虫草的相同部位蛹虫草多糖没有明显差异。结论：蛹虫草多糖主要存在于菌丝体中。