N-乙酰半胱氨酸对抗丙酮醛引起的心肌细胞损伤

 目的: 观察N-乙酰半胱氨酸(N-acetylcysteine,NAC)对抗丙酮醛诱导的H9c2心肌细胞损伤及相关机制。方法: 实验分为正常对照组、丙酮醛损伤组(不同浓度丙酮醛处理)、NAC+丙酮醛组(NAC与丙酮醛共处理)、SP600125预处理+丙酮醛组、NAC组和SP600125组。H9c2心肌细胞常规消化种板,经相应处理24 h后:应用CCK-8法检测心肌细胞的存活率;Western blot法检测H9c2心肌细胞内磷酸化和总的c-Jun氨基端激酶(p-JNK、t-JNK)表达水平;双氯荧光素(DCFH-DA)染色法检测心肌细胞内活性氧(ROS)水平;罗丹明123(Rh123)染色法检测细胞线粒体膜电位(MMP);Hoechst 33258染色法观察H9c2心肌细胞凋亡形态学变化。结果: 与对照组相比,不同浓度的丙酮醛均能够降低H9c2心肌细胞存活率,且呈剂量依赖性(P<0.01),NAC在一定浓度范围内(500~1500μmol/L)可对抗丙酮醛引起心肌细胞损伤(P<0.01),抑制丙酮醛引起细胞内ROS水平升高,对抗丙酮醛引起细胞内MMP降低,抑制丙酮醛诱导细胞内JNK蛋白的磷酸化(P<0.01)。与NAC的细胞保护作用类似,选择性JNK抑制剂SP600125也可抑制丙酮醛诱导的细胞损伤,包括减轻氧化应激、改善线粒体膜电位及抑制细胞凋亡。结论: N-乙酰半胱氨酸能够保护H9c2心肌细胞对抗丙酮醛引起的损伤,其机制可能与其降低细胞内ROS水平、改善MMP、抑制JNK磷酸化和抗凋亡有关。     

活性氧与丝裂原激活蛋白激酶通路的相互作用介导高糖引起的心肌细胞损伤

目的探讨活性氧(ROS)与丝裂原激活蛋白激酶(MAPK)通路的相互作用在高糖损伤H9c2心肌细胞中的作用。方法应用细胞计数盒(CCK-8)检测细胞存活率;Hoechst 33258核染色检测凋亡细胞形态及数量的改变;双氯荧光素(DCFH-DA)染色荧光显微镜照相检测细胞内ROS水平;Western blot测定蛋白质表达水平。结果高糖(35 mmol/L葡萄糖)处理H9c2心肌细胞24 h可引起明显的损伤,表现为细胞存活率下降,凋亡细胞数量及ROS水平明显升高。另方面,高糖可明显地上调磷酸化(p)p38MAPK、细胞外信号调节蛋白激酶1/2(ERK1/2)及c-Jun N端激酶(JNK)(为MAPK家族的3个成员)的表达水平。N-乙酰半胱氨酸(NAC,为ROS清除剂)能抑制高糖引起的心肌细胞毒性和细胞凋亡,也能阻断高糖对p-p38MAPK、p-ERK1/2及p-JNK表达的上调作用。此外,p38MAPK、ERK1/2和JNK的选择性抑制剂均能抑制高糖引起的心肌损伤,并能抑制ROS生成增多。结论在高糖损伤H9c2心肌细胞中,存在ROS与MAPK通路的正相互作用,这种相互作用可能在高糖引起的心肌细胞损伤中起着重要的作用。     

氧化应激性肠上皮细胞损伤与MAPK信号通路的关系研究

目的观察氧化应激引起肠上皮细胞（IEC-6）损伤后丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号通路活化的情况,从而探讨氧化应激损伤的机制。方法采用MTT法检测不同浓度（100、200、300、400、500、800、1000、2000μmol/L）H2O2对IEC-6生存率的影响;用WesternBlot法检测H2O2作用不同时间（0.25、0.5、1、2、3、4h）下ERK、JNK以及p38磷酸化的激活情况。结果与正常组相比,随着H2O2刺激浓度的增加,IEC-6的生存率逐渐降低,呈浓度依赖性。当H2O2刺激浓度为200μmol/L时细胞的生存率约为50%。ERK1/2、JNK1/2、p38在H2O2刺激0.25h开始磷酸化,在刺激0.5h达到最高,随后磷酸化水平恢复到基础值。结论氧化应激早期可通过激活ERK、JNK以及p38的磷酸化引起IEC-6的损伤。     

短暂激活c-jun N-terminal激酶抑制胆红素诱导的SH-SY5Y细胞凋亡

探讨c junN terminal激酶 (JNK)在胆红素诱导人神经母细胞瘤SH SY5Y细胞凋亡信号转导中的作用。我们用 30 0 μmol LH2 O2 预处理SH SY5Y细胞 1h以激活JNK ,与经PBS预处理的对照组比较 ,流式细胞仪结果显示凋亡细胞百分比由 (37 4± 3 2 ) %降低到 (12 6± 2 6 ) %。为了进一步证实JNK的作用 ,在SH SY5Y细胞经H2 O2 预处理前 ,先经 2 0 μmol LJNK c jun AP1抑制剂curcumin作用 12h以抑制H2 O2 对JNK的激活 ,流式细胞仪结果显示凋亡细胞增高到 (42 8± 4 4 ) % ,curcumin完全抑制了短暂激活JNK所提供的保护作用。结果表明短暂激活JNK可能在胆红素诱导的SH SY5Y细胞凋亡中提供抗凋亡信号 ,提示激活JNK可保护神经细胞     

乙醛脱氢酶2抑制剂大豆甙对缺氧心肌细胞的MAPK信号转导作用

目的 检测乙醛脱氢酶2(ALDH2)对大鼠心肌细胞在缺氧状态下氧自由基(ROS)产生、凋亡发生和信号转导的影响.方法 通过缺氧模型比较大鼠心肌细胞缺氧和经大豆甙(daidzin)24h预处理后缺氧的活性变化,用C400测定ROS,用TUNEL试剂盒检测凋亡,丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路酶磷酸化的改变用Westernblotting的方法检测.每组实验(n)均重复3次以上. 结果 当心肌细胞ALDH2被特异大豆甙抑制后,更易在缺氧环境下诱导产生ROS和凋亡,且与MAPK有关的磷酸化酶活性均表达增强. 结论 当ALDH2被抑制后,心肌细胞对缺氧的耐受性下降,这与ROS的产生、凋亡和MAPK信号通路的激活有关,ALDH2对缺氧引起的细胞改变具有保护作用.     

麝香保心丸通过抑制p38 MAPK和NF-κB信号传导通路表达对抗高糖诱导的心肌细胞损伤

目的探讨麝香保心丸(SBP)是否通过抑制p38丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)和核因子kappa B(nuclear factor kappa B,NF-κB)通路保护H9c2心肌细胞对抗高浓度葡萄糖(高糖,HG)引起的损伤。方法应用35 mmol/L的HG处理H9c2心肌细胞24 h,建立HG诱导的心肌细胞损伤模型;细胞计数试剂盒8测定细胞存活率;Hoechst 33258核染色荧光显微镜照相法测定细胞凋亡;双氯荧光素(2’,7’-dichlorfluorescein-diacetate,DCFH-DA)染色/荧光显微镜照相法测定胞内活性氧(ROS)水平;罗丹明123(Rh123)染色法测定线粒体膜电位(MMP);Western blot法测定p38MAPK和NF-κB p65蛋白表达水平。结果 HG处理H9c2心肌细胞24 h能引起细胞明显的损伤,使细胞存活率降低,凋亡细胞数量和细胞内ROS生成增多,MMP丢失;HG能增加p38 MAPK和NF-κB p65磷酸化水平;SBP预处理能明显抑制HG上调p38 MAPK和NF-κB p65磷酸化水平这一作用;SBP、p38MAPK通路抑制剂SB203580和NF-κB通路抑制剂PDTC均能阻断HG对心肌细胞的上述损伤作用,包括细胞毒性、凋亡、ROS生成增多及MMP丢失等。结论麝香保心丸(SBP)可通过抑制p38 MAPK和NF-κB信号传导通路保护H9c2心肌细胞对抗高糖(HG)引起的损伤。     

ROS/PKC/p38 MAPK途径在山茱萸多糖抑制心肌细胞缺氧/复氧损伤的作用

 目的:观察山茱萸多糖（polysaccharide from Fructus corni,PFC）对缺氧/复氧（hypoxia/reoxygenation,H/R）损伤心肌细胞的保护作用,并探讨其对ROS/PKC/p38 MAPK途径的影响。方法: 分离原代乳鼠心肌细胞,建立H/R模型,细胞分为7组：正常对照组（N组）、缺氧/复氧组(H/R组)、缺氧/复氧+PFC（终浓度20 mg/L、100 mg/L和200 mg/L）预处理组、缺氧/复氧+PFC（100 mg/L）预处理+蛋白激酶C特异性阻断剂chelerythrine（1 μmol/L）组及缺氧/复氧+PFC（100 mg/L）预处理+p38 MAPK特异性阻断剂SB203580（10 μmol/L）组。倒置显微镜下观察细胞形态和自发搏动频率,Hoechst 33258染色观察细胞凋亡率,酶标仪测定ROS含量、SOD活性及LDH漏出量,免疫印迹法检测PKC、p-p38 MAPK和HSP70的蛋白水平。结果: H/R组细胞活力下降,搏动频率减慢,细胞ROS含量、LDH漏出量、细胞凋亡率及p-p38 MAPK的水平均较N组显著增加（P<0.01）。经PFC预处理后,细胞搏动频率、SOD活性及PKC、HSP70的水平较H/R 组显著增加（P<0.05,）,p-p38 MAPK的水平和细胞凋亡率均减少（P<0.05）,而PFC的保护作用能被chelerythrine或SB203580抑制。结论: 山茱萸多糖可抑制心肌细胞缺氧/复氧损伤,其作用可能与增加SOD活性、抑制ROS产生、激活PKC并抑制p38MAPK的过度激活有关。     

瘦素抑制H_2O_2诱导的大鼠心肌细胞凋亡

目的:观察瘦素(leptin)对H2O2诱导的大鼠心肌细胞凋亡的影响并探讨其作用机制。方法:应用脱氧三磷酸尿苷缺口末端标记(TUNEL)法观察瘦素对H2O2诱导的大鼠心肌细胞H9c2凋亡的影响;应用Western blotting法观察瘦素、H2O2对caspase-3、胞外信号调控激酶(ERK)活性的影响。结果:(1)瘦素对H2O2诱导的H9c2细胞凋亡具有显著的抑制作用(与对照组比较P0.01),该作用可被ERK激酶抑制剂PD98059所阻断。(2)H2O2明显抑制ERK活性;而瘦素可激活ERK并部分阻断H2O2诱导的caspase-3激活。结论:瘦素对H2O2诱导的H9c2细胞凋亡具有抑制作用,其机制可能与其激活ERK信号途径有关。     

活性氧清除剂 NAC 抑制阴道毛滴虫排泄分泌物诱导的 SiHa 细胞凋亡

本研究旨在探讨活性氧（ ROS）清除剂N－乙酰－L－半胱氨酸（ NAC）能否抑制滴虫排泄分泌物（ Tv ESP）诱导的人子宫颈癌SiHa细胞凋亡。体外培养阴道毛滴虫并制备Tv ESP,分别用100μg／mL Tv ESP和PBS处理SiHa细胞, Tv ESP处理SiHa细胞30 min前加入NAC,进行预处理。使用CellTiter 96 AQueous单溶液细胞增殖检测试剂盒检测细胞存活率;利用2′,7′－二氯荧光黄双乙酸盐（ DCFH－DA）进行荧光探针标记测定胞内ROS水平;免疫印迹法检测cleaved caspase－3和PARP－1蛋白表达。结果显示, NAC预处理可降低Tv ESP的细胞毒性作用。 Tv ESP作用SiHa细胞16 h后,细胞内ROS水平升高,但经过NAC预处理后胞内ROS生成显著降低。此外, NAC预处理后能显著下调Tv ESP诱导的cleaved caspase－3和cleaved PARP－1的表达水平。     

尼古丁促进高糖/高脂培养的大鼠心肌细胞系H9C2凋亡

目的研究在不同浓度尼古丁(Nic)条件下高糖/高脂(HGHL)对大鼠心肌细胞系H9C2凋亡的影响。方法体外培养H9C2细胞,给予不同浓度Nic(6×10^-8、6×10^-7、6×10^-6mol/L)2 h后,HGHL(33 mmol/L葡萄糖和500μmol/L棕榈酸酯)培养24 h,CCK8法检测细胞增殖;乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒测定细胞活力;Western blot检测Bax、Bcl-2、cleaved-caspase3及caspase3的表达及ERK1/2、JNK和p38MAPK磷酸化水平;流式细胞计量术测定细胞凋亡和上清液ROS水平。结果与对照组相比,HGHL和尼古丁联合HGHL均显著抑制细胞活力,增加上清液中LDH水平(P<0.001);HGHL及Nic+HGHL细胞凋亡率显著增加(P<0.001)及cleaved-caspase3蛋白表达明显增加(P<0.01);Bcl-2/Bax蛋白表达显著下降(P<0.01);在Nic+HGHL组,ROS水平表达最显著(P<0.001);HGHL能激活MAPK磷酸化,Nic+HGHL组ERK1/2磷酸化水平显著升高(P<0.01);ROS清除剂(NAC)能显著减少caspase3蛋白表达水平(P<0.001)。结论尼古丁、HGHL能导致H9C2细胞损伤并增加其凋亡,其发生与ROS及MAPK信号通路密切相关。     

二烯丙基三硫诱导人髓样白血病HL-60细胞活性氧产生及其细胞毒性作用

目的：探讨二烯丙基三硫(DATS)诱导人白血病HL-60细胞产生活性氧(ROS)及其细胞毒性作用。方法: 用浓度为50、100、150、200 μmol/L DATS处理HL-60细胞1、3、6、12、24 h后，流式细胞计数法检测HL-60细胞内的ROS水平，NBT还原实验分析NADPH氧化酶的活性，分别用NADPH氧化酶特异性阻断剂apocynin与抗氧化剂NAC（N-acetyl-L-cystein）预处理30 min后，观察DATS对HL-60细胞产生活性氧的影响，分光光度法检测细胞质膜氧化产物丙二醛（MDA）与细胞蛋白氧化产物羰基化蛋白（protein carbonyl）。结果: DATS能诱导人白血病HL-60细胞产生ROS，当DATS处理细胞1-3 h 时，HL-60细胞产生ROS随DATS浓度的升高和处理时间的延长而升高，当浓度为150 μmol/L DATS处理细胞3h时，ROS的荧光强度达到最高峰，其后维持在一个较高水平。NADPH氧化酶活性与ROS的产生一致。HL-60细胞的脂质过氧化和羰基化蛋白浓度与DATS诱导ROS产生的趋势基本一致，都在3 h、150 μmol/L处理点达到最高值。应用NADPH氧化酶特异性阻断剂apocynin或抗氧化剂NAC后，能显著降低HL-60细胞ROS的产生和细胞损伤。结论: NADPH氧化酶是DATS诱导 HL-60 细胞产生ROS的主要酶系，ROS能氧化细胞质膜和蛋白质。     

胰高血糖素样肽-1对大鼠心肌缺血再灌注/细胞缺氧复氧损伤的保护作用及机制

目的: 观察胰高血糖素样肽-1(GLP-1)对大鼠心肌缺血再灌注/细胞缺氧复氧损伤的作用并探讨其机制。方法: 建立大鼠缺血再灌注模型,分别设假手术组(sham)、缺血再灌注组(IR)和IR + GLP-1(0.030 nmol/L、0.16 nmol/L和0.30 nmol/L)组,缺血30 min后再灌注3 h,Evan’s blue-TTC法检测心肌梗死范围;取左心室游离壁心肌组织,TUNEL法检测心肌细胞凋亡,同时测定心肌组织中氧化-抗氧化物质超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)含量;培养乳鼠心肌细胞,随机分为正常对照组(control)、单纯缺氧复氧组(HR)、HR + GLP-1(1 μmol/L、5 μmol/L和10 μmol/L)组,电镜下观察心肌细胞形态的变化,流式细胞术检测心肌细胞的凋亡,测定乳酸脱氢酶(LDH)释放、SOD活性、MDA含量、活性氧簇(ROS)水平以及线粒体膜电位(MMP)。结果: 与IR组相比,IR+GLP-1(0.03 nmol/L、0.16 nmol/L和0.30 nmol/L)组剂量依赖性地减小心肌梗死面积,减轻线粒体超微结构改变及细胞凋亡,增加SOD活性,减少MDA含量(P<0.05 或P<0.01);与HR组相比,HR+GLP-1(1 μmol/L、5 μmol/L和10 μmol/L)组剂量依赖性地逆转HR诱导的细胞损伤,增加SOD活性,减少MDA含量,降低ROS水平,减轻HR诱导的MMP降低(P<0.05或P<0.01)。结论: GLP-1可以减轻大鼠心肌缺血再灌注/细胞缺氧复氧损伤;其作用机制可能与增强心肌抗氧化能力及保护线粒体结构和功能有关。     

N-乙酰半胱氨酸对慢性间歇缺氧大鼠海马神经元凋亡及氧化应激的影响

目的：探讨N-乙酰半胱氨酸(NAC)对慢性间歇缺氧(CIH)模型大鼠海马组织氧化应激及海马神经元凋亡的影响。方法:30只雄性Wistar大鼠随机分为慢性缺氧组、NAC治疗组及正常对照组3组，每组10只。采用化学比色法测定海马组织丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)水平，同时应用免疫组化方法检测海马CA1 区磷酸化JNK(p-JNK)表达水平，应用TUNEL法检测海马CA1区神经元凋亡率。结果:NAC治疗组 MDA水平低于CIH组（1.71±0.43 vs 1.37±0.26，P＜0.05）、SOD活性高于CIH组（44.94±14.01 vs 57.66±14.07，P＜0.05），p-JNK表达水平低于CIH组 （0.53±0.10 vs 0.39±0.16，P＜0.05），海马神经元凋亡率显著低于CIH组（0.32±0.18 vs 0.20±0.11，P＜0.05）。结论:NAC能抑制慢性间歇缺氧导致的氧化应激，从而影响JNK信号转导通路，减少海马神经元凋亡。     

盐酸石蒜碱对TPC-1细胞增殖和周期的影响

目的:探讨盐酸石蒜碱(LH)对甲状腺乳头状癌TPC-1细胞增殖和周期的影响及其机制.方法:体外培养TPC-1细胞,用不同浓度(1.25、2.5、5、10、20、40、60、80和100μmol/L)的LH处理TPC-1细胞48 h,CCK-8法检测LH作用TPC-1细胞的IC50.参照IC50,将对数生长期TPC-1细...     

MAPKs在anti-β2GPI/β2GPI刺激THP-1细胞表达TF过程中的作用探讨

目的:探讨丝裂原活化蛋白激酶(Mitogen-activated protein kinases,MAPKs)在anti-β2 GPI/β2 GPI复合物诱导单核细胞株THP-1表达组织因子(TF)中的活化及其作用。方法:利用荧光定量PCR(Real-time PCR)、TF活性试剂盒等分别检测anti-β2 GPI/β2 GPI复合物诱导THP-1细胞表达TF mRNA及TF活性,Western blot检测细胞表达p38、磷酸化-p38(p-p38)、ERK1/2、磷酸化-ERK1/2(p-ERK1/2)、JNK、磷酸化-JNK(p-JNK)的情况。进一步采用p38、ERK1/2、JNK抑制剂(SB203580、U0126、SP600125)观察是否能阻断anti-β2 GPI/β2 GPI复合物诱导THP-1细胞表达TF。结果:Anti-β2 GPI/β2 GPI复合物(100μg/ml)能够显著增强THP-1细胞表达TF,并使p-p38、p-ERK1/2、p-JNK水平显著升高(P<0.05 vs control);其引发的MAPKs磷酸化具有时间效应性,均在刺激30分钟时达到高峰;对应的特异抑制剂SB203580(10μmol/L)、U0126(5μmol/L)、SP600125(90 nmol/L)单独或合并处理THP-1细胞后,anti-β2 GPI/β2 GPI复合物诱导细胞TF mRNA表达及TF活性的效应明显被阻断(P<0.01 vs control)。结论:Anti-β2 GPI/β2 GPI复合物诱导THP-1细胞表达TF过程中,MAPKs被激活进而发挥重要作用。     

自噬在高糖高脂引起心肌细胞系H9C2凋亡中的影响

目的探究自噬在高糖高脂(HGHL)引起的心肌细胞系H9C2凋亡中的影响。方法不同浓度高糖高脂处理H9C2心肌细胞不同时间,HE染色并测量心肌细胞表面积;流式细胞计量术检测细胞活性和凋亡率,确定心肌细胞肥大及凋亡的最适浓度和时间;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测自噬指标LC3Ⅱ、自噬信号通路p62/SQSTM1(p62)、Beclin-1、LAMP2蛋白表达以及自噬抑制剂氯喹预处理后cleaved caspase-3蛋白表达。结果HGHL处理后H9C2心肌细胞肥大呈浓度和时间依赖性,36 h最显著(P0.001);细胞凋亡呈浓度和时间依赖性增高,36 h凋亡率约50%(P0.001);与对照组相比,HGHL诱导24 h时LC3Ⅱ蛋白水平显著增加(P0.01),Beclin-1、LAMP2蛋白水平显著下降(P0.05),而p62蛋白水平显著升高(P0.01);与对照组以及干预组相比,氯喹预处理1 h后cleaved caspase-3蛋白表达显著增加(P0.01)。结论 HGHL诱导H9C2心肌细胞肥大并促进其凋亡。HGHL通过同时抑制自噬形成和降解,使自噬体异常堆积,导致细胞凋亡。这表明抑制自噬可能是促进细胞凋亡的重要原因。     

N-乙酰半胱氨酸保护PC12细胞对抗化学性低氧诱导的损伤

目的 探讨活性氧( ROS)清除剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)能否保护PC12细胞对抗化学性缺氧引起的损伤.方法 应用化学性低氧模拟物氯化钴(CoCl2)处理PC12细胞,建立化学性缺氧损伤PC12细胞的实验模型.在CoCl2处理PC12细胞前60 min将NAC加入培养基中,作为预处理.应用CCK-8比色法检测细胞存活...     

23-羟基白桦酸诱导LoVo细胞凋亡与细胞内活性氧的关系

目的： 研究23-羟基白桦酸诱导人结肠癌细胞株LoVo细胞凋亡过程中活性氧（ROS）的变化及其作用机制。方法：光学显微镜法观察23-羟基白桦酸作用LoVo细胞后细胞形态学改变，并采用流式细胞仪检测细胞凋亡及细胞内ROS水平。结果：分别以浓度为25、50、100、200 μmol/L 23-羟基白桦酸作用LoVo细胞48h后，在光学显微镜下观察到明显的凋亡细胞形态学改变；经流式细胞仪检测，细胞凋亡率分别为(7.17±2.31)%、(15.60±4.02)%、(32.47±5.25)%及(52.71±5.93)%，呈现一定的浓度依赖性关系。23-羟基白桦酸可使 LoVo 细胞内ROS的水平明显高于空白对照组。细胞内ROS含量（MFI，平均荧光强度）分别为2.83±0.80、5.97±1.72、12.53±2.57及16.73±4.58。其中，浓度为100和200 μmol/L 23-羟基白桦酸的作用较明显，与对照组(2.13±0.32)比有显著差异（P<0.05）。结论：23-羟基白桦酸具有明显的诱导LoVo细胞凋亡作用，其作用机制可能与23-羟基白桦酸引起细胞内ROS水平增加有关。