基于成分含量与抗肿瘤抗氧化作用相关性分析的不同产地薏苡仁质量评价研究

目的探明薏苡仁成分含量与对肝癌细胞的增殖抑制作用以及抗氧化作用的相关性,评价不同产地薏苡仁质量。方法分别采用HPLC-ELSD法和气相色谱法测定不同产地薏苡仁中甘油三油酸酯与1, 2-油酸-3-亚油酸甘油三酯、油酸与亚油酸的含量;采用清除1, 1-二苯基苦基苯肼法(DPPH)和四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)评价不同产地薏苡仁体外抗肿瘤活性以及抗氧化能力,并对成分含量和活性结果进行多元线性回归分析。结果经多元线性回归法分析,由SPSS 21.0建立以下方程:Y_1=1.636 x_1~(**)+1.331 x_2~(**)+1.365 x_3+0.225 x_4-24.853;Y_2=1.878 x_1~(**)-0.061 x_2-4.962 x_3~*+9.918 x_4~*+35.007(~*P0.05,~(**)P0.01)。甘油三油酸酯及1, 2-油酸-3-亚油酸甘油三酯总含量与抗肿瘤作用呈正相关;甘油三油酸酯及亚油酸总含量与抗氧化作用呈正相关。结论单一成分含量高低与薏苡仁活性大小并不吻合,采用与活性为正相关的多指标成分的总含量作为薏苡仁质量评价方法,较之单一甘油三油酸酯为指标的评价方法更为科学合理。15个产地薏苡仁质量差异较大,其中以辽宁葫芦岛的薏苡仁质量较优。     

基于HPLC-ELSD指纹图谱和含量测定的薏苡仁药材质量评价研究

目的:建立薏苡仁药材HPLC-ELSD指纹图谱,并测定甘油三油酸酯的含量,为薏苡仁药材质量评价提供依据。方法:采用Merck Purospher? STAR RP-18e(250mm×4.6mm,5μm)色谱柱,以乙腈-二氯甲烷(65∶35)为流动相进行等度洗脱,建立薏苡仁药材HPLC-ELSD指纹图谱,并进行相似度评价、聚类分析及主成分分析,同时测定甘油三油酸酯的含量。结果:18批薏苡仁药材指纹图谱有8个共有峰,相似度均大于0.9,聚类分析及主成分分析将18批药材分为3类,与相似度评价结果一致;不同产地的薏苡仁甘油三油酸酯的含量范围为0.70%～1.91%,以云南产的1批薏苡仁药材含量最高,其他产地的薏苡仁药材甘油三油酸酯的含量较稳定。结论:HPLC-ELSD指纹图谱结合定量检测可以有效评价薏苡仁药材的产品质量。     

不同种源薏苡仁中甘油三油酸酯含量比较△

目的:比较21个不同种源薏苡仁中甘油三油酸酯含量.方法:采用HPLC-ELSD法,色谱柱为Discovery C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为乙腈-二氯甲烷(66:34),流速为0.7 mL·min-1,柱温为30℃;采用蒸发光散射检测器,漂移管温度为45℃;氮气流速为1.5 L·min-1.结果:21个不同种源的薏苡仁中甘油三油酸酯含量都符合<中国药典>标准,含量最高是种子来自福建三明宁化的粳性薏苡仁,为0.793%:含量最低是种子来自浙江缙云的薏苡仁,为0.561%.结论:21个不同种源的薏苡仁中甘油三油酸酯含量有一些差异,种子来自同一地区的薏苡仁中甘油三油酸酯含量也有一些差异.     

HPLC-ELSD法测定丽水薏苡仁中甘油三油酸酯的含量

目的:研究丽水地区薏苡仁中主要成分的含量。方法:采用高效液相色谱法测定甘油三油酸酯的含量[1]。流动相为乙腈-二氯甲烷(65:35),色谱柱为Agilent XDB-C18(4.6×250 mm,5μm),流速为1.0m L·min-1,蒸发光散射检测器检测。结果:丽水地区薏苡仁中甘油三油酸酯的含量均高于国家标准。结论:丽水地区薏苡仁质量较好。     

薏苡仁油中甘油三酯含量的快速测定

目的 建立薏苡仁油中甘油三酯含量的快速测定方法.方法 以甘油三油酸酯为对照品,采用紫外-可见光谱法在412 nm处测定薏苡仁油中甘油三酯的含量.结果 甘油三油酸酯在0.202～1.010 mg/ml范围内线性关系良好,R2=0.9966,甘油三酯平均回收率为101.20%,RSD为1.47%.结论 该方法 简便、快速、结果 准确,适用于薏苡仁油中甘油三酯含量的快速测定.     

β-榄香烯体内外对人肺癌细胞株的作用及其机制

目的:系统研究β-榄香烯体内外抗肺癌药理学作用及其作用机制。方法:体外抗肿瘤实验采用MTT法,检测浓度12.5~200μmol·L-1的β-榄香烯对人肺癌细胞株SPC-A-1,A549及人正常胚胎肺成纤维细胞MRC-5的细胞增殖抑制率;抗肿瘤机制研究采用Hoechst 33258染色,观察细胞凋亡时细胞核的形态学变化,流式细胞术FITC-Annexin V/碘化丙啶(PI)双标记染色法检测细胞凋亡率。体内以裸鼠移植瘤为模型,肿瘤生长抑制率为指标,检测β-榄香烯对荷瘤裸鼠肿瘤生长的抑制作用。结果:β-榄香烯作用48 h时SPC-A-1,A549的50%抑制浓度(IC50)分别为126.0,134.1μmol·L-1,但对人胚胎肺成纤维细胞MRC-5有促进增殖作用,表明β-榄香烯对肺癌细胞具有选择性抑制作用。β-榄香烯对人肺癌细胞株SPC-A-1增殖的抑制作用呈时间和浓度依赖性,干预24,48,72 h的IC50值分别为549.7,126.0,21.2μmol·L-1;Hoechst 33258染色后倒置荧光显微镜下观察可见β-榄香烯孵育后出现凋亡细胞核固缩,浓染,着色深而呈亮蓝色;流式细胞术检测结果显示,β-榄香烯可诱导SPC-A-1细胞出现不同程度的凋亡。给药剂量为45,135 mg·kg-1的β-榄香烯在体内对裸鼠移植性人肺癌SPC-A-1细胞的增殖抑制率分别为34.01%,49.57%。结论:β-榄香烯具有选择性抗肺癌作用,提示其在发挥抗肿瘤作用的同时其毒副作用小,而且该作用可能机制是通过诱导肺癌细胞凋亡实现的。     

不同炮制方法对薏苡仁抗肿瘤成分甘油三油酸酯含量的影响

目的比较炮制对薏苡仁中甘油三油酸酯含量的影响。方法按照《中国药典》和炮制规范制备炮制品;HPLCELSD法测定含量:Diamonsil C18(5μm,250 mm×4.6 mm)色谱柱;乙腈:二氯甲烷(65∶35)为流动相;柱温30℃;流速0.7m L·min-1;载气流速1.4 L·min-1,漂移管温度60℃。理论塔板数不低于5000。结果不同方法炮制后薏苡仁中甘油三油酸酯的含量较生品均有提高:土炒品0.7618%清炒品0.7016麸炒品0.5682生品0.5442%。结论炮制提高薏苡仁中甘油三油酸酯的含量,土炒法较其他炮制方法增加明显;薏苡仁炮制后甘油三油酸酯的含量升高可能是不同饮片规格功效变化的重要原因。     

不同炮制方式对薏苡仁品质的影响

薏苡仁为禾本科植物薏苡的干燥成熟种子,是我国传统名贵中药材。现代药理研究表明,薏苡仁中的具抗肿瘤的活性成分为甘油三酯类组分,其中有甘油三油酸酯、甘油三亚油酸酯、1,2-油酸-3-亚油酸-甘油三酯、1,2-亚油酸-3-油酸-甘油三酯等,并收录于2005年版的《中国药典》中。     

不同产地薏苡仁药材中甘油三酯和脂肪酸含量测定及其质量评价

目的对不同产地薏苡仁药材中的7种甘油三酯含量及2种不饱和脂肪酸含量进行测定,评价不同产地薏苡仁药材的质量。方法采用HPLC-ELSD法测定薏苡仁药材中7种甘油三酯含量,建立HPLC-UV法测定油酸、亚油酸含量,并结合聚类分析对薏苡仁药材质量进行评价。结果 14批薏苡仁药材中三亚油酸甘油酯、1,2-二亚油酸-3-油酸甘油酯、1,2-二亚油酸-3-棕榈酸甘油酯、1,2-二油酸-3-亚油酸甘油酯、1-棕榈酸-2油酸-3-亚油酸甘油酯、三油酸甘油酯、1,2-二油酸-3-棕榈酸甘油酯质量分数分别在0.31%～0.83%、0.81%～1.81%、0.38%～0.95%、1.19%～2.39%、0.67%～1.58%、0.71%～1.55%、0.44%～1.13%;14批薏苡仁药材中油酸、亚油酸含量分别在0.45%～0.72%、0.37%～0.53%;聚类结果可知,以甘油三酯和脂肪酸为变量可以把薏苡仁药材聚为3类。结论不同产地薏苡仁药材甘油三酯及脂肪酸的含量存在一定的差异,聚类结果未发现其含量和产地的相关性。多组分含量测定能更全面地反映薏苡仁药材的质量。     

不同种源薏苡仁中甘油三油酸酯含量比较

目的：比较21个不同种源薏苡仁中甘油三油酸酯含量。方法：采用HPLC—ELSD法,色谱柱为Discovery C18色谱柱（4．6mm×250mm,5μm）,流动相为乙腈-二氯甲烷（66：34）,流速为0．7mL·min^-1,柱温为30℃;采用蒸发光散射检测器,漂移管温度为45℃;氮气流速为1．5L·min^-1。结果：21个不同种源的薏苡仁中甘油三油酸酯含量都符合《中国药典》标准,含量最高是种子来自福建三明宁化的粳性薏苡仁,为0．793％;含量最低是种子来自浙江缙云的薏苡仁,为0．561％。结论：21个不同种源的薏苡仁中甘油三油酸酯含量有一些差异,种子来自同一地区的薏苡仁中甘油三油酸酯含量也有一些差异。     

新疆鼠尾草总酚酸的体外抗氧化活性

目的：研究新疆鼠尾草总酚酸提取物和纯化物的体外抗氧化活性。方法：以40%乙醇提取和大孔吸附树脂纯化分别制备得到新疆鼠尾草总酚酸的提取物和纯化物,以维生素C（VC）为对照,通过体外化学模拟方法测定新疆鼠尾草总酚酸提取物和纯化物的还原能力、对·DPPH自由基、羟基自由基（·OH）和超氧自由基（O₂^-·）的清除能力,研究新疆鼠尾草总酚酸的抗氧化活性。结果：新疆鼠尾草总酚酸提取物和纯化物清除·DPPH自由基的作用50%清除浓度（IC₅₀,分别为0.029,0.039 g·L^-1）弱于VC（IC₅₀0.018 g·L^-1）;对羟基自由基（·OH）的清除作用（IC₅₀分别为0.212,0.165 g·L^-1）强于VC（IC₅₀0.356 g·L^-1）;对超氧自由基（O₂^-·）的清除能力（IC₅₀分别为3.735,1.913 g·L^-1）弱于VC（IC₅₀0.390 g·L^-1）,其纯化物还具有一定的还原能力。结论：新疆鼠尾草总酚酸具有较强的抗氧化作用。     

补中益气汤含药血清对A549/DDP中p-Akt和P-gp表达的影响

目的:研究补中益气汤含药血清逆转人肺腺癌顺铂耐药细胞株(A549/DDP)耐顺铂(DDP)作用及其对磷酸化丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(p-Akt)和P-糖蛋白(P-gp)表达的影响.方法:采用血清药理学方法制备含药血清,随机对照法将24只SD大鼠分为空白对照组(给生理盐水10 mL·kg-1),补中益气汤高、中、低剂量组(11.34,5.67,2.84 g·kg-1,10 mL·kg-1),每日ig给药1次,连续7d后提取血清.将A549/DDP分为空白血清组,补中益气汤高、中、低剂量含药血清组,阻滞剂组,高剂量含药血清联合阻滞剂(LY294002)组,MTT法检测各组细胞对DDP的IC50,并计算耐药逆转倍数.免疫细胞化学法检测各组细胞中p-Akt和P-gp蛋白的表达;逆转录-多聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测各组细胞中Akt和P-gp的mRNA表达.结果:与空白血清组比较,补中益气汤中剂量以上的含药血清可明显降低A549/DDP对DDP的IC50(P＜0.05),并呈浓度依赖效应,与阻滞剂联合效果最佳(P＜0.05);与A549/DDP空白血清组相比,补中益气汤中、高剂量含药血清组,阻滞剂组和高剂量联合阻滞剂组的p-Akt和P-gp的表达显著下降(P ＜0.01,P＜0.05),其中以高剂量联合阻滞剂组下降最多(P＜0.01);与A549/DDP空白血清组相比,中、高剂量含药血清组,阻滞剂组和高剂量联合阻滞剂组的P-gp的mRNA表达量都显著减少(P＜0.01,P＜0.05),中、高剂量含药血清组,高剂量联合阻滞剂组的p-Akt的mRNA表达量也显著减少(P＜0.05).结论:补中益气汤含药血清可逆转A549/DDP细胞的顺铂耐药,与LY294002联合应用效果更佳,其逆转机制可能与减少细胞内p-Akt和P-gp的表达,增强A549/DDP对DDP的敏感性有关.     

5种中药乙醇提取物的体外抗氧化活性研究

目的: 研究马尾松等5种中药的乙醇提取物的体外抗氧化活性。 方法: 采用乙醇超声提取法获得各中药提取物,并以抗坏血酸(VitC)为阳性对照来考察其对超氧阴离子(O₂^-·)、羟自由基(·OH)、1,1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基(DPPH·)的清除效果。 结果: 甘草、丹参、马尾松、当归、罗汉松对O₂^-·的抑制率分别为(浓度相当于原药材100 g·L^-1):15.86%,11.68%,11.31%,7.88%,5.94%;在清除DPPH·的实验中各中药的IC₅₀(g·L^-1)分别为:丹参1.6,马尾松1.87,罗汉松3.11,甘草13.91,当归22.32;而在清除·OH的实验中各中药的IC₅₀(g·L^-1)则为:丹参1.6,罗汉松2.02,马尾松2.1,甘草2.77,当归4.03;而三大体系阳性对照的IC₅₀分别为0.047,0.93,0.21 g·L^-1。 结论: 5种中药乙醇超声提取物均具有一定的抗氧化活性,其中丹参、马尾松效果较好;但与阳性对照Vit C相比仍有一定差距。     

沙煲暗罗精油化学成分的GC-MS分析及抗肿瘤活性

目的:研究沙煲暗罗精油的主要化学成分,初步研究其抗肿瘤活性,为进一步研究开发沙煲暗罗提供实验依据。方法:采用水蒸气蒸馏法从沙煲暗罗鲜叶中提取精油,计算收率,利用气相色谱-质谱(GC-MS)对其化学成分进行分析。MTT(四甲基偶氮唑盐)法检测精油对白血病细胞(K-562),肝癌细胞(BEL-7402),肺癌细胞(SPC-A-1)和胃癌细胞(SGC-7901)增殖抑制作用。结果:水蒸气蒸馏法提取沙煲暗罗叶精油收率为0.83%,分离出65个峰,鉴定出44种化学成分,占精油总量的84.382%。其中主要成分为邻苯二甲酸单(2-乙基己基)酯(16.824%),二苯胺(10.321%),邻苯二甲酸二异丁酯(8.904%)和桉油烯醇(4.920%)。结论:抗肿瘤活性结果表明沙煲暗罗叶精油对4种肿瘤细胞株显示较好的抑制活性,在高剂量组中对K-562,BEL-7402,GSC-7901的细胞增殖抑制率均可以达到80%以上。其中对白血病细胞K-562和肝癌细胞BEL-7402均表现出很好的抑制活性,其半数抑制浓度(IC_(50))分别为3.78,8.14 g·L~(-1),且2种活性都强于阳性对照药丝裂霉素C。精油对胃癌细胞SGC-7901也表现一定的抑制活性,其IC50为22.94 g·L~(-1)。     

新疆鼠尾草不同部位不同极性提取物抗氧化活性

目的:研究新疆鼠尾草地上部分和根部不同极性提取物体外抗氧化活性。方法:新疆鼠尾草地上部分和根部药材的95%乙醇提取物依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取得相应的提取物和水层部分,将各提取物分别配制成适当浓度的溶液,以Vc为阳性对照,采用1,1-二苯基-2-苦基肼(DPPH)自由基法、超氧阴离子自由基(O-·2)法和铁离子还原法分别测定各提取物的自由基清除能力和铁离子还原能力。结果:新疆鼠尾草地上部分和根部不同极性提取物清除自由基的能力均强于阳性对照Vc,地上部分乙醇层清除自由基的能力(DPPH·法IC500.039 g·L~(-1),O-·2法IC500.130 g·L~(-1))强于根部乙醇层(DPPH·法IC500.160 g·L~(-1),O-·2法IC500.160 g·L~(-1))。对铁离子还原能力的强弱顺序为根部不同极性提取物Vc地上部分不同极性提取物。结论:新疆鼠尾草地上部分和根部不同极性提取物均具有较强抗氧化作用,地上部分可替代根部使用,为合理开发新疆鼠尾草资源提供科学依据。     

菟丝子水提液对大鼠的急性毒性及微核试验

目的： 探讨菟丝子水提液对SD大鼠的最大给药量的急性毒性与遗传毒性。 方法： 最大给药量法检测菟丝子水提液对SD大鼠的急性毒性。SD孕鼠骨髓微核试验及胚胎肝转移微核试验,设5组：菟丝子水提液高、中、低剂量组（40,20,10 g·kg^-1）及阴性对照组（NS,10 mL·kg^-1）,阳性对照组[环磷酰胺（CP）40 mg·kg^-1],检测孕鼠骨髓嗜多染红细胞微核率及胚胎肝嗜多染红细胞微核率。 结果： 菟丝子水提液ig对SD大鼠的最大给药量为80 g·kg^-1。菟丝子水提液40 g·kg^-1可致孕鼠骨髓细胞、胚胎肝细胞嗜多染红细胞微核率升高,与阴性对照组对比,有显著性差异（P<0.01）。 结论： 菟丝子水提液对SD大鼠ig最大给药量为80 g·kg^-1,属无毒级。菟丝子水提液ig剂量在40 g·kg^-1时可诱发孕鼠及胚胎微核率增加,有潜在遗传毒性;而在20 g·kg^-1以下剂量时无显著遗传毒性。     

蟾皮活性组分的分离与体外抗肿瘤活性考察

目的： 分离蟾皮活性组分并考察大孔树脂不同洗脱部位对肺癌细胞A549生长的抑制作用。方法： 采用静态吸附-洗脱试验筛选大孔树脂型号,单因素试验优选蟾皮活性组分的大孔树脂纯化工艺。建立乙醇洗脱液中总生物碱和4种蟾毒二烯内酯类成分的含量测定方法,通过MTT试验测定不同洗脱部位对肺癌细胞A549的抑制率。结果： AB-8型大孔树脂对蟾皮总生物碱和4种二烯内酯类成分均具有较好的吸附分离性能,4个不同乙醇洗脱部位对肺癌细胞A549均表现出抑制作用,30%乙醇和70%乙醇洗脱液的细胞抑制率较高,IC₅₀分别为1.83,2.23 mg·L^-1。结论： 大孔树脂可用于分离纯化蟾皮中活性组分,不同洗脱部位对肺癌细胞A549的抑制率呈现一定的浓度依赖性,30%乙醇和70%乙醇洗脱部位可作为蟾皮抗肿瘤制剂的重点有效组分。     

黔产苗药"薄丈达"中不同极性组分DPPH自由基清除活性的研究

为进一步开发贵州药用植物新资源,寻找更多天然抗氧化剂,该实验以黔产苗药"薄丈达"(bod zangd dak)为原料,利用60%乙醇等为溶剂,通过提取分离得到该药材中不同极性组分,以抗坏血酸为阳性对照,采用DPPH自由基(1,1-二苯基-2-苦肼基自由基)清除法评价苗药"薄丈达"中不同极性组分的抗氧化活性。结果黔产苗药"薄丈达"中不同极性组分的IC₅₀依次为抗坏血酸(0.033 4 g·L^-1)<乙酸乙酯部位(0.052 3 g·L^-1)<总鞣质部位(0.054 9 g·L^-1)<60%乙醇提取物部位(0.076 7 g·L^-1)<正丁醇部位(0.110 g·L^-1)<水溶性多糖部位(0.168 g·L^-1)<水提取物部位(0.174 g·L^-1)<萃取后水部位(0.226 g·L^-1)<总多糖部位(0.645 g·L^-1)。研究表明黔产苗药"薄丈达"中不同极性组分均有不同程度的清除DPPH自由基活性,这为进一步寻找其活性成分和研究抗氧化活性机制提供一定的实验依据。