荧光探针定量PCR技术

PCR技术是通过对基因的选择性片段进行体外高效扩增,实现目的基因的检测。荧光探针定量PCR(FQ-PCR)是一种新的基因定量检测技术,国外文献多用“实时定量PCR(real time quantitative PCR)”或“TaqMan PCR(以美国PE公司商标命名)”。该技术是在常规PCR基础上加入荧光标记探针,巧妙地把核酸扩增(PCR)、杂交及光谱技术结合在一起,从而实现了对目的基因的准确定量检测,正发展成为临床实验诊断的常规技术。     

如何在临床上应用PCR定量核酸检测技术

应用PCR技术检测患者体内的病毒核酸已逐渐成为一项十分重要而又可靠的手段来监测病毒在体内的实际复制状况。目前在爱滋和肝炎病毒的诊断和治疗中此项技术应用得较为广泛。临床上除了要求PCR的检测方法能够达到一定的灵敏度发现存在于患者体内极少量的病原体来帮助诊断外,还需要动态监测病毒     

PCR技术的临床应用与管理

聚合酶链反应(PCR)是80年代中期发展起来的一门分子生物学新技术,其在实验室和临床的应用发展极为迅速。PCR技术特异而敏感,但也常出现假阳性和假阴性的问题,因而实行质量保证是十分必要的。本文针对PCR实验中的主要影响因素,提出了一些切实可行的质量保证方案。     

实时荧光定量PCR技术研究进展及应用

实时荧光定量PCR(rea-l time fluorescent quantitative polymerase chain react ion,FQ-PCR)是是20世纪90年代中期发展起来的一种新型核酸定量技术。,它具有特异性强、PCR污染少、自动化程度高等特点。作者就实时荧光定量PCR技术的研究进展及目前肿瘤诊断、细胞因子分析及病毒感染的监测等方面进行了概述。     

PCR技术在检验医学中的应用

聚合酶链反应（Polymerase chaim rection，PCR）作为一项较新的科学技术检测方法，在检验医学领域中的发展及临床应用是有广阔前景的。为适应不同项目研究开发目的、不同的临床诊断对象需求，通过改变组成和反应条件及与其它先进技术相结合，PCR技术越来越被临床所重视。目前已有多种PCR技术，如多重PCR、不对称PCR、莹光标记PCR、[第一段]     

因定量诊断技术评价及其临床应用

为了使《中国医药导刊》的内容更贴进读者,全面介绍医药各方面的发展动向,本刊从2003年第1期起,每期设1～2个专题,重点介绍、讨论某一领域的有关进展和存在问题,供读者思索和争鸣。本期重点报道基因诊断技术,该专题由本刊副总编辑郑怀竞教授组稿和审阅。     

含内标的荧光PCR—荧光定量PCR

1.前言 PCR技术应用于体外基因检测是临床诊断学上的一项重大突破,但由于传统的PCR检测易污染、假阳性率高等原因,被国家明令禁止使用于临床检验。为了克服传统PCR的上述缺点,发挥它早期、快速诊断的优点,近年来,发展了多种将传统PCR技术与其它技术结合起来的新型PCR技术,最成功的有PCR与ELISA结合的PCR-ELISA技术和PCR与荧光检测结合的荧光PCR技     

实时定量PCR的应用进展及常见问题对策

聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)具有较高的敏感性和特异性,能够对核酸分子进行定性和定量检测,随着分子生物学技术的不断进步,PCR技术取得了前所未有的发展.     

实时荧光定皇PCR的研究进展及其应用

随着PCR（聚合酶链反应）技术的飞速发展，实时荧光定量PCR（real—time quantitative PCR）技术以其特异性强、灵敏度高、自动化和重复性好、定量准确、污染少等优点，成为分子生物学和其它领域的重要技术工具，并广泛应用于遗传病、病原体和肿瘤等方面的检测和诊断。本文就实时荧光定量PCR技术的主要原理、定量方法及目前在研究领域中主要的应用进行了概述。     

PCR技术在性病病原体检测中的临床应用

目前,聚合酶链反应(PCR)技术在感染性疾病检测中的应用日趋广泛和成熟,已应用到几十种感染性疾病的诊断和治疗监测,特别是在致病微生物如病毒、细菌、衣原体、支原体、螺旋体等引起的性病感染,通过定性PCR已能达到早期确诊诊断。近10年来,我们实验室在定性基础上,引进实时荧光定量PCR技术,对性病病原体早期确诊,窗口期筛查及疗效检测、基因变异分析和预后评估等具有重要价值,为临床提供可靠依据,也为流行病学调查提供帮助。     

PCR及Real-time PCR评价细菌DNA提取方法

目的:比较几种不同的细菌DNA提取方法,建立一种适于PCR和Real-time PCR的细菌DNA提取方法.方法:分别用蛋白酶K法、碱裂解法、Chelex-100 NP40、Chelex-100 TritonX-100法和水煮法提取同种浓度大肠杆菌DNA,测定OD260/280;用不同方法提取不同浓度的大肠杆菌DNA,进行PCR和实时荧光定量PCR扩增,比较灵敏度.结果:5种方法提取细菌DNA,其中Chelex-100 NP40 法纯度(OD260/280=1.79±0.03)最高,此方法所提取的DNA产物进行PCR及Real-time PCR扩增未见假阳性及假阴性,其灵敏度为10个/ml细菌浓度.结论:Chelex-100 NP40的细菌DNA提取方法纯度及灵敏度高,且适应于PCR及Real-time PCR.     

实时荧光定量PCR技术理论研究及其在医学方面的应用

实时荧光定量PCR(real-time fluorescence quantitative PCR,FQ-PCR)是在传统PCR定性技术基础上发展起来的核定量技术。它是一种在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程,最后通过标准曲线对未知     

乙型肝炎病毒DNA荧光定量PCR检测的临床应用

乙型肝炎病毒 (HBV)DNA是反应HBV复制的最直接、最可靠指标。在评价治疗乙型肝炎药物的疗效与预后判定方面 ,HBVDNA的检测具有至关重要的作用[1] 。目前定量核酸检测方法可以对病毒核酸进行相对的定量检测 ,但检测方法有很多。近年来发展起来的荧光定量聚合酶链反应 (Fluo rescencequantitativePCR ,FQ -PCR) [2 ] 不仅可以避免常规PCR扩增产物易污染而导致的假阳性 ,简化操作 ,还可以给出HBVDNA体内复制的定量结果 ,为临床正确诊断和及时采取恰当的治疗措施提供依据[3 ] 。为此我们采用FQ -PCR对 337例肝炎患者进行HBVDN…