hPTTG1基因沉默下调bFGF表达并抑制A2780细胞侵袭的研究

目的：探讨RNAi技术沉默卵巢癌细胞A2780细胞内hPTFG1表达对其侵袭性的影响及调控机制。方法：利用阳离子转染试剂将hPTTG1siRNA转染A2780细胞．荧光实时定量PCR检测hPTTG1及bFGF表达水平;MTT基质黏附实验检测细胞黏附能力;细胞侵袭重建基底膜实验测定细胞体外侵袭能力;划痕实验检测细胞迁移能力;Western blot检测bFGF蛋白表达水平。结果：hPTTG1siRNA转染组hPTTG1mRNA表达下降,抑制率为（76．8±4．1）％;转染hPTTG1siRNA后细胞黏附、侵袭和迁移能力降低;hPTTG1干扰后bFGFmRNA及蛋白表达下降。结论：hPTTG1siRNA能够抑制A2780细胞侵袭,可能是通过下调bFGF表达实现的。     

抑癌基因OVCA1体外对卵巢癌细胞A2780迁移和侵袭的抑制作用

目的:探讨卵巢癌基因1[ovarian cancer gene 1,OVCA1;也称为DPH2L( diphthamide synthesis protein 2-like)基因]体外对卵巢癌细胞系A2780迁移和侵袭能力的抑制作用.方法:采用脂质体法将GFP标记的携带OVCA1的重组质粒pEGFP-OVCA1或GFP空白质粒分别转染A2780细胞后,G418筛选稳定转染细胞,有限稀释法筛选稳定转染细胞的单克隆细胞株,荧光显微镜检查绿色荧光蛋白的表达及RT-PCR方法检测A2780细胞OVCA1基因mRNA的表达.A2780-OVCA1细胞为实验组, A2780-GFP细胞和A2780细胞为对照组,采用划痕实验、Transwell体外迁移实验和Matrigel体外侵袭实验检测OVCA1对A2780细胞迁移和侵袭能力的影响.结果:重组质粒pEGFP-OVCA1转染后获得了稳定表达GFP标记OVCA1蛋白的A2780细胞株.A2780-OVCA1组划痕后的细胞迁移速度明显小于两对照组(P<0.05);A2780-OVCA1组穿过Transwell滤膜的迁移细胞数明显少于两对照组(P<0.05);A2780-OVCA1组穿过Matrigel滤膜的侵袭细胞数明显少于两对照组(P<0.05).结论:OVCA1在体外具有显著抑制卵巢癌A2780细胞迁移和侵袭的作用.     

下调OTX1的表达抑制直肠癌Colo320细胞的增殖和侵袭

目的:下调直肠癌细胞系Colo320的 Orthodenticle 人同源盒基因1(orthodenticle homeobox 1,OTX1)的表达,观察其对Colo320细胞增殖和侵袭能力的影响.方法:构建OTX1 siRNA重组质粒载体pGPU6-OTX1,并转染Colo320细胞.应用qRT-PCR法检测OTX1的基因表达水平,Western blot法检测OTX1的蛋白表达,CCK-8法检测pGPU6-OTX1对Colo320细胞增殖能力的影响,Transwell小室法检测Colo320细胞侵袭能力的变化.结果:成功将构建的pGPU6-OTX1转染Colo320细胞.qRT-PCR和Western blot结果显示pGPU6-OTX1下调Colo320细胞OTX1的表达,CCK-8结果显示pGPU6-OTX1明显抑制SGC-7901细胞的增殖能力,Transwell结果显示下调OTX1的表达抑制Colo320细胞的侵袭能力.结论:下调OTX1的表达能够抑制直肠癌细胞Colo320的增殖和侵袭能力.     

伽马-分泌酶抑制剂下调Notch1可诱导卵巢癌细胞A2780生长抑制及凋亡

目的 探讨γ-分泌酶抑制剂对Notch1的抑制作用及对卵巢癌细胞生长抑制及凋亡的影响。方法 采用Western blot及实时定量PCR检测四株卵巢癌细胞（A2780, SKOV3, HO-8910, HO-8910PM）及一株卵巢上皮细胞（IOSE144）Notch1及其下游基因hes1的表达情况;采用MTT、流式细胞术、ELISA及克隆形成实验检测γ-分泌酶抑制剂（DAPT）对卵巢癌细胞的影响。结果 Notch1、hes1在IOSE 144及四株卵巢癌细胞系中均有表达,且在A2780细胞系中的表达最高;DAPT下调Notch1可抑制A2780细胞生长、诱导细胞G1期阻滞、诱导细胞凋亡并呈现时间和剂量依赖性,同时A2780细胞中DAPT 下游hes1基因的表达也呈现时间和剂量依赖性。结论 γ-分泌酶抑制剂DAPT可抑制卵巢癌细胞A2780生长、诱导细胞凋亡,γ-分泌酶抑制剂下调Notch1可能是卵巢癌治疗的潜在靶点。     

下调Beclin1 抑制卵巢癌A2780/DDP细胞对顺铂的耐药性

目的：探究敲减Beclin1 表达对卵巢癌细胞A2780 对顺铂耐药的影响及其相关机制。方法：以Western blotting 及qPCR 检测卵巢癌细胞株A2780 及耐药细胞株A2780/DDP 中Beclin1 的表达情况；A2780/DDP 细胞转染Beclin1 siRNA 后，用MTT法检测细胞对顺铂敏感性的变化，克隆形成实验检测各组细胞的克隆形成情况，流式细胞术检测各组细胞的凋亡，MDC荧光染色检测细胞的自噬情况，Western blotting 检测自噬相关蛋白、溶酶体相关膜蛋白Lamp-2 以及组织蛋白酶Cathepsin B的表达情况。结果：顺铂耐药细胞株A2780/DDP 中Beclin1 mRNA及蛋白的表达水平均明显高于A2780 细胞株（均P<0.05），在A2780细胞中加入顺铂刺激后Beclin1 蛋白的表达水平显著升高（P<0.05）。敲减Beclin1 表达可促进顺铂诱导的A2780/DDP 细胞的凋亡（P<0.05）、抑制细胞自噬的发生（P<0.05）、减少细胞克隆形成（P<0.05）和增加细胞对顺铂的敏感性（P<0.05）；Western blotting结果显示，敲减Beclin1 可上调A2780/DDP 细胞中cleaved-caspase 3 和Cathepsin B的蛋白水平，下调Atg3、Atg7、LC3Ⅱ/Ⅰ、Lamp-2的表达水平（均P<0.05）。结论：敲减Beclin1 表达可提高A2780/DDP细胞对顺铂的敏感性，其机制可能与调节自噬相关蛋白表达抑制细胞保护性自噬和影响溶酶体功能，从而促进顺铂诱导耐药细胞凋亡有关。     

DUSP10对人卵巢癌A2780细胞迁移及侵袭的影响

目的：探讨DUSP10在浆液性卵巢癌组织中的表达情况及其与卵巢癌细胞迁移及侵袭能力的关系。方法：实时荧光定量PCR方法检测浆液性卵巢腺癌和正常输卵管伞端组织中 DUSP10的表达情况;转染DUSP10过表达和干扰质粒至人卵巢癌A2780细胞,划痕实验和Transwell实验观察癌细胞迁移及侵袭能力的变化。结果：DUSP10在浆液性卵巢癌组织的表达低于正常输卵管伞端组织（ P﹤0.05）。与对照组相比,转染DUSP10过表达质粒后A2780细胞迁移及侵袭能力受到抑制,转染DUSP10干扰质粒后A2780细胞迁移及侵袭能力增强。结论：DUSP10在浆液性卵巢癌组织中低表达;DUSP10可抑制人卵巢癌A2780细胞的迁移及侵袭能力。     

沉默FOXQ1基因抑制肝细胞癌SMMC-7721细胞迁移侵袭能力

目的：探讨沉默叉头框蛋白Q1(forkhead box Q1,FOXQ1)基因后对肝细胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC）SMMC-7721细胞迁移侵袭能力的影响及其机制。方法: 制备FOXQ1-shRNA、NC-shRNA重组慢病毒,将其感染到SMMC-7721细胞中;实验设干扰组、阴性对照组和空白组,用Transwell小室法检测细胞迁移、侵袭能力;利用qRT-PCR和Western blotting法检测SMMC-7721细胞中FOXQ1、MMP-2和MMP-9mRNA和蛋白的表达。结果: 随着肝癌SMMC-7721细胞的迁移侵袭能力的增强,FOXQ1的表达逐渐增加;干扰组较阴性对照组与空白组FOXQ1表达水平降低\[（0.34±0.03）vs（0.89±007）和（0.84±0.05）,P<0.05\];沉默FOXQ1基因后,SMMC-7721细胞的迁移侵袭能力显著下降\[(9.67±1.15) vs （25.67±208）和(27.33±2.52),P<0.05\],MMP-2与MMP-9表达水平下降\[MMP-2：(0.35±0.04) vs (0.61±0.05)和(065±008);MMP-9： (0.40±0.05) vs (0.73±0.07)和(0.77±0.06),均P<0.05\]。结论: 沉默FOXQ1基因的表达能够抑制肝癌SMMC-7721细胞的迁移、侵袭能力,其机制可能与MMP-2与MMP-9的表达下调有关。     

hPTTG1与肿瘤发生发展的研究进展

人垂体瘤转化基因（hPTTG）是一种潜在的癌基因,自发现以来一直是研究的热点,在人体肿瘤中主要表达hPTTG1,且在多种肿瘤中高表达。研究证实,hPTTG1具有促进细胞转化、血管生成及肿瘤转移等生物学功能,在肿瘤的发生、发展、侵袭、转移及复发中起重要作用。hPTTG1对肿瘤的诊断具有重要的参考价值,有望成为肿瘤基因治疗的新靶点。     

慢病毒介导的Notch1基因沉默抑制软骨肉瘤SW1353细胞的增殖和侵袭

目的:探讨慢病毒介导的Notch1基因沉默对软骨肉瘤SW1353细胞增殖和侵袭的抑制作用及其机制。方法:将SW1353细胞分为对照组（未感染）、空载体组（LV-NC-shRNA慢病毒感染）和沉默组（LV-Notch1-shRNA慢病毒感染），RT-PCR和Western blot检测慢病毒的感染效果，MTT法和克隆形成实验检测各组细胞的增殖活力，Transwell小室实验检测细胞的侵袭能力，Western blot检测PCNA、MMP-2和p-AKT蛋白的表达。结果:LV-Notch1-shRNA慢病毒感染使SW1353细胞中Notch1 mRNA和Notch1、PCNA、MMP-2、p-AKT蛋白的表达均明显降低（P<0.05），显著抑制了SW1353细胞的增殖和侵袭能力（P<0.05）。结论:Notch1基因沉默可抑制软骨肉瘤SW1353细胞增殖和侵袭，其作用机制可能与下调PCNA、MMP-2和p-AKT蛋白表达有关。     

Heparanase及bFGF在胃癌组织中的表达及其与胃癌侵袭转移的关系

目的:探讨乙酰肝素酶(Heparanase HPA)及碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)在胃癌组织中的表达及其与胃癌生物学行为的关系.方法:RT-PCR法检测HPA mRNA在胃癌组织中的表达,同时应用免疫组织化学法检测bFGF蛋白在胃癌组织中的表达.结果:HPA mRNA的高表达与胃癌的大体类型、浸润深度、细胞分化程度及组织学生长方式、淋巴结转移、腹膜转移、TNM分期呈正相关:而与肿瘤大小无明显关系.bFGF与浸润深度及TNM分期呈正相关.HPA与bFGF共同表达的病例腹膜转移率、淋巴结转移率、腹腔脱落癌细胞检出率均明显增高.结论:HPA在胃癌组织中的表达增高.HPA及bFGF的表达与胃癌的恶性程度密切相关,在胃癌的侵袭转移中发挥重要作用.两者共同表达时恶性程度明显增高.     

直肠癌组织中hPTTG1和survivin的表达及意义

目的:检测人垂体瘤转化基因1(human pituitary-tumour transforming gene,hPTTG1)与存活素(sur-vivin)在直肠癌、直肠腺瘤和癌旁正常组织中的表达,分析两者与直肠癌生物学行为的关系和机制。方法:收集2006-2008年间我院直肠癌手术标本60例,直肠腺瘤10例,癌旁正常组织10例,应用免疫组化SP法检测60例直肠癌、10例直肠腺瘤、10例癌旁正常组织中hPTTG1与survivin的表达,分析两者与直肠癌生物学行为的关系及意义。结果:在直肠癌、直肠腺瘤与癌旁正常组织中,hPTTG1的阳性表达率分别为80%(48/60)、20%(2/10)和0(0/10);hPTTG1的表达在直肠癌与直肠腺瘤之间及直肠癌与癌旁正常组织之间差异有显著性意义(P<0.01)。survivin的阳性表达率为90%(54/60)、80%(8/10)和20%(2/10)。survivin的表达在直肠癌和直肠腺瘤组与癌旁正常组织之间差异有显著性意义(P<0.05)。直肠癌中hPTTG1的表达与肿瘤Dukes分期、分化程度,淋巴结转移和分型关系密切(P<0.05)。直肠癌中survivin的表达与肿瘤Dukes分期和淋巴结转移关系密切(P<0.05)。60例直肠癌中两者与患者的性别、年龄、术前CEA、肿瘤所在直肠部位无相关性(均为P>0.05)。结论:hPTTG1和survivin可能在直肠癌的发生发展过程中发挥重要作用,可能与直肠癌侵袭转移密切相关。     

直肠癌组织中hPTTG1和survivin的表达及意义

目的：检测人垂体瘤转化基因1（human pituitary-tumour transforming gene,hPTTG1）与存活素（sur-vivin）在直肠癌、直肠腺瘤和癌旁正常组织中的表达,分析两者与直肠癌生物学行为的关系和机制。方法：收集2006-2008年间我院直肠癌手术标本60例,直肠腺瘤10例,癌旁正常组织10例,应用免疫组化SP法检测60例直肠癌、10例直肠腺瘤、10例癌旁正常组织中hPTTG1与survivin的表达,分析两者与直肠癌生物学行为的关系及意义。结果：在直肠癌、直肠腺瘤与癌旁正常组织中,hPTTG1的阳性表达率分别为80%（48/60）、20%（2/10）和0（0/10）;hPTTG1的表达在直肠癌与直肠腺瘤之间及直肠癌与癌旁正常组织之间差异有显著性意义（P〈0.01）。survivin的阳性表达率为90%（54/60）、80%（8/10）和20%（2/10）。survivin的表达在直肠癌和直肠腺瘤组与癌旁正常组织之间差异有显著性意义（P〈0.05）。直肠癌中hPTTG1的表达与肿瘤Dukes分期、分化程度,淋巴结转移和分型关系密切（P〈0.05）。直肠癌中survivin的表达与肿瘤Dukes分期和淋巴结转移关系密切（P〈0.05）。60例直肠癌中两者与患者的性别、年龄、术前CEA、肿瘤所在直肠部位无相关性（均为P〉0.05）。结论：hPTTG1和survivin可能在直肠癌的发生发展过程中发挥重要作用,可能与直肠癌侵袭转移密切相关。     

卵巢癌组织MEOX1表达对细胞增殖和侵袭及迁移影响

目的卵巢癌极易发生转移和耐药,严重影响患者预后。前期研究发现,同源盒基因MEOX1可能在肿瘤的转移中发挥着重要作用。但有关MEOX1在卵巢癌中的表达和功能尚罕见报道。本研究探讨MEOX1对卵巢癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响,及其在卵巢癌组织中的表达水平和临床意义。方法采用脂质体转染法将靶向MEOX1的特异性siRNA序列、无效序列分别转染至人卵巢癌细胞OAW28中,命名为实验(siMEOX1)组和阴性对照(siNC)组,同时设置空白对照(Control)组。采用实时荧光定量PCR(real-time fluorescence quantitative PCR,qPCR)和蛋白质印迹法检测转染siRNA对人卵巢癌细胞OAW28中MEOX1的敲降效果。采用Transwell小室法检测细胞的体外迁移和侵袭能力。采用CCK8法检测细胞的体外增殖能力。采用免疫组织化学染色法检测购于西安艾丽娜生物科技有限公司的73例卵巢癌组织中MEOX1的表达水平。结果qPCR和蛋白质印迹结果显示,siMEOX1转染后,卵巢癌OAW28细胞中MEOX1表达水平明显降低,RNA水平敲降效率约72%。敲降MEOX1后卵巢癌OAW28细胞的增殖能力受到抑制,差异有统计学意义,F=59.217,P<0.001。此外迁移实验显示,siMEOX1组迁移细胞数(108.80±4.27)少于siNC组(230.20±5.63),差异有统计学意义,F=491.571,P<0.001。侵袭实验显示,siMEOX1组侵袭细胞数(217.80±3.49)低于siNC组(379.80±3.96),差异有统计学意义,F=712.267,P<0.001。免疫组化结果显示,MEOX1在卵巢癌组织中表达阳性率为60.3%(44/73)。临床关联性研究发现,MEOX1阳性表达与卵巢癌患者的转移具有关联性,χ^2=7.637,P=0.004;但与患者的年龄、TNM分期、病理分级无关联。结论MEOX1可促进人卵巢癌细胞的体外增殖和迁移侵袭能力,且MEOX1高表达与卵巢癌患者转移具有关联性,可能成为抑制卵巢癌转移的潜在靶点。     

MT1-MMP is the critical determinant of matrix degradation and invasion by ovarian cancer cells

Membrane-type 1 matrix metalloproteinase (MT1-MMP), a transmembrane metalloprotease that plays an important role in the invasion of many solid tumour types, promotes pericellular matrix degradation and may also stimulate tumour cell motility. As both these processes are key contributors to intraperitoneal ovarian tumour metastasis, we examined six ovarian cancer cell lines to determine whether MT1 is a critical mediator of invasive behaviour for this tumour type. Our results indicated that only those cell lines that expressed MT1 were capable of penetrating a type I collagen barrier, with the capacity for both matrix degradation and invasion reflecting endogenous MT1 expression level. Ectopic MT1 expression endowed an invasive phenotype upon cell lines lacking MT1 that were previously non-invasive, indicating the crucial role of this protease. Conversely, invasion was abolished by tissue inhibitor of metalloproteinase-2 (TIMP-2), a potent inhibitor of MT1, yet was minimally affected when other (secreted) MMPs were inhibited using TIMP-1 and the gelatinase inhibitor SB-3CT. Whereas collagen I degradation was strikingly accelerated by ectopic MT1 expression, cell motility remained unchanged. We conclude that MT1 is necessary for collagen I invasion by ovarian cancer cells, and that its requisite activity is the promotion of matrix degradation, with no impact on cell motility.     

Differential expression and phosphorylation of Pak1 and Pak2 in ovarian cancer: effects on prognosis and cell invasion

Ovarian cancer is a gynecological malignancy with high mortality. Therefore, the identification of novel prognostic and therapeutic targets is important. p21‐activated kinases (Paks) are involved in cytoskeleton reorganization. This study investigated the clinical significance of total and phosphorylated (p) Pak1 and Pak2 as well as their functional roles in ovarian cancer. Expressions of Pak1, p‐Pak1 Thr²¹², Pak2 and p‐Pak2 Ser²⁰ in ovarian normal and cancerous cell lines as well as in clinical samples of ovarian tumors were evaluated. The effects of Pak1 and Pak2 on ovarian cancer cell functions were determined. Pak1, p‐Pak1 and p‐Pak2 were overexpressed in ovarian cancer cell lines, and clinical samples of ovarian cancers were compared with benign ovarian lesions/inclusion cysts. Similar Pak2 expression levels were observed among normal and cancerous cell lines and clinical samples. After multiple testing correction, high Pak1 and nuclear p‐Pak1 expression in ovarian cancers was significantly associated with histological type and tumor grade, respectively. Pak1 and p‐Pak1 expression was associated with poor overall and disease‐free survival. Pak1 was an independent prognostic factor. Knockdown of Pak1 and Pak2 in ovarian cancer cell lines reduced cell migration and invasion but did not affect cell proliferation and apoptosis. Knockdown of Pak1 also reduced p38 activation and downregulated vascular endothelial growth factor. Conversely, ectopic Pak1 overexpression enhanced ovarian cancer cell migration and invasion in a kinase‐dependent manner, along with increased p38 activation. Our findings suggest that Pak1, p‐Pak1 and p‐Pak2 play important roles in ovarian carcinogenesis. Pak1 and p‐Pak1 may be potential prognostic markers and therapeutic molecular targets in ovarian cancer.     

miR-19b对卵巢癌细胞侵袭和迁移的作用探讨

目的:探讨微小RNA-19b（microRNA-19b,miR-19b）在卵巢癌细胞侵袭和迁移中的作用机制。方法:应用qRT-PCR方法检测正常卵巢组织、卵巢癌组织及卵巢癌细胞系(SKOV-3、OVCAR-3)中miR-19b的表达情况。将miR-19b抑制剂或阴性对照寡核苷酸转染到OVCAR-3细胞中,Transwell实验检测miR-19b的表达对卵巢癌细胞侵袭和迁移能力的影响。免疫印迹分析（Western blot）技术检测miR-19b对第10号染色体缺失的磷酸酶和张力蛋白基因（phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome ten,PTEN）的表达及对PTEN/AKT信号通路相关蛋白表达水平的影响。双报告基因实验用于检测miR-19b与PTEN的 3’-UTR区之间的相互作用。结果:与正常卵巢组织比较,卵巢癌组织及卵巢癌细胞系 SKOV-3和OVCAR-3中miR-19b高表达,其相对表达水平分别为3.56±0.68、3.01±0.02、3.78±0.04（P均<0.05）。Transwell 实验表明,抑制miR-19b 的表达可降低OVCAR-3细胞的侵袭和迁移能力。上调miR-19b的表达可抑制OVCAR-3细胞中PTEN蛋白的表达水平,并使磷酸化的AKT蛋白的表达水平显著升高。双报告基因检测结果显示,与对照组相比,miR-19b可与PTEN的3’-UTR区结合使其重组载体的荧光素酶活性下降。结论:miR-19b在卵巢癌细胞中存在异常高表达,可促进卵巢癌细胞的侵袭和迁移能力,有望作为卵巢癌患者潜在的生物标志物和治疗靶点。