大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞体外培养和鉴定

目的 建立大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞（简称ＡＴ－Ⅱ）的改良体外原代培养法，并比较其鉴定方法的优劣。方法 ＡＴ－Ⅱ分离、用胰蛋白酶消化地并用ＩｇＧ包被的培养瓶粘附纯化，原代培养后通过鞣酸多彩、碱性磷酸酶（Ａｌｋａｌｉｎｅ ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ，ＡＫＰ）、肺表面活必不知所措霜关蛋白Ａ（ＳＰ－Ａ（）免疫组化三种染色法和电镜鉴定ＡＴ－Ⅱ。结果 胰酶消化加ＩｇＧ粘附纯化后所得的ＡＴ－Ⅱ纯度为９０％。ＡＫ 色鉴定     

吸入石英粉尘对大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞的影响

对大鼠吸入石英粉尘后肺泡Ⅱ型上皮细胞（Ｔ＿Ⅱ）的变化进行了形态学观察和定量分析。９个月的实验结果表明，石英粉尘导致Ｔ＿Ⅱ增生，且呈双相反应，染尘结束后０～４周、和９个月为两个增生高峰期。Ｔ＿Ⅱ胞浆内板层体（ＬＢ）数量增多，肺泡腔内含大士游离ＬＢ，管样髓磷脂。提示增生Ｔ＿Ⅱ合成和分泌表面活性物质的功能增强。     

急性呼吸窘迫综合征大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞的超微结构观察

目的 观察急性呼吸窘迫综合征(ARDS)大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞的超微结构。方法 建立大鼠油酸性ARDS模型，对其肺泡Ⅱ型上皮细胞进行分离、纯化，电镜鉴定并观察超微结构的变化。结果 电镜下ARDS大鼠Ⅱ型上皮细胞胞质内板层小体排空明显而致空泡化。结论 分离纯化细胞后更易观察到Ⅱ型细胞的形态学改变，板层小体的变化最为突出提示肺泡Ⅱ型上皮细胞在ARDS中可能起重要作用。     

急进高原大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞超微结构与肺泡液体清除率变化

目的 研究急进高原肺损伤大鼠肺脏超微结构及肺泡液体清除率(alveolar liquid clearance,ALC)的变化规律,并探讨二者间的内在关系.方法 将大鼠暴露于高原低氧环境,分别于1、24、48、72 h测定基础ALC,取病理切片观察肺脏超微结构的变化.并对上述结果进行相关分析.结果 急进高原大鼠暴露于高原低氧24 h后ALC (22.60±3.41％)与正常大鼠ALC(41.14±9.36％)比较有明显变化(P＜0.05),内皮细胞出现损伤,而上皮细胞无明显结构变化;48 h时ALC(25.28±6.30％)明显降低(P＜0.05),肺泡上皮细胞的结构和上皮细胞间的紧密连接并无明显损伤;72 h ALC(45.52±10.05％)无明显变化(P＞0.05),但肺泡上皮细胞结构被破坏.结论 高原低氧致急进大鼠ALC降低,但肺泡上皮屏障结构无明显改变,提示急进高原大鼠肺泡内液体的储积与钠水通道有关.     

博莱霉素对大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞功能的损伤

目的探讨博莱霉素(BLM)对肺泡Ⅱ型上皮细胞(AT-Ⅱ)功能的损伤作用.方法向SD大鼠气管内一次性注入BLM复制肺纤维化模型,对照组注人生理盐水,分别于7、14和28 d在1.5%戊巴比妥钠麻醉下行支气管肺泡灌洗,膜天平法测定肺表面物质(PS).活性.不同浓度博莱霉素直接刺激培养正常成年大鼠的AT-Ⅱ,荧光定量(FQ)PCR检测AT-Ⅱ表面活性物质蛋白(SP)A、B及水通道蛋白(AQP2)mRNA的表达.结果7 d模型组动物出现低氧血症及PS活性明显降低;14 d逐渐好转,但仍然低于正常;28 d基本恢复正常.BLM刺激AT-Ⅱ组与空白对照组比较,SP-A、SP-B及AQP1 mRNA表达均明显降低(P＜0.001).结论博莱霉素具有细胞毒性,可降低AT-Ⅱ分泌的SP-A、SP-B及AQP1 mRNA的表达,使PS系统功能异常,从而导致低氧血症及肺水肿的发生.     

肺泡Ⅱ型上皮细胞功能的研究进展

 肺泡Ⅱ-型上皮细胞(alveolar epithelial type Ⅱ cell,AT2)是构成哺乳类动物肺泡上皮的主要细胞之一,是合成和分泌肺泡表面活性物质的主要细胞。近年来研究发现其合成和分泌功能受多种体液及环境因素的影响和调控,并涉及多种相关基因、蛋白及信号通路。AT2具有增殖、分化及修复功能,其异常转分化可能与肺纤维化及肿瘤发生有关。AT2在维持肺泡内液体平衡中发挥重要作用,并受多种体液与炎症因子调控,可能参与肺损伤和肺水肿的病理过程。AT2参与固有免疫及免疫调节机制,可向T细胞呈递抗原并调节T细胞的分化。对肺泡Ⅱ 型上皮细胞功能的研究有助于理解肺泡生理功能和多种肺部疾病的发病和病理过程,对其功能调节机制的研究在多种肺部疾病的防治中有临床应用前景。     

利多卡因对哮喘大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞影响的实验观察

目的:探讨利多卡因对哮喘大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞(AT-Ⅱ)的影响.方法:用卵白蛋白(OVA)制备Wi star大鼠哮喘模型并用利多卡因雾化吸入进行干预.采用硝酸还原酶法测定支气管肺泡灌洗液(BALF)中一氧化氮(NO)浓度;分离和纯化AT-Ⅱ,利用吖啶橙(AO)荧光染色法检测AT-Ⅱ细胞的损伤率,并与NO浓度进行相关分析.结果:哮喘组BALF中N0浓度显著高于正常对照组(P＜0.01)和利多卡因组(P＜0.05);哮喘组AT-Ⅱ细胞损伤率分别高于正常对照组(P＜0.01)和利多卡因组(P＜0.05);BALF中N0浓度与AT-Ⅱ细胞损伤率呈显著正相关(r=-0.903,P＜0.01).结论:哮喘时AT-Ⅱ细胞损伤增加与体内NO的合成和释放增多有关,而利多卡因有降低BALF中N0水平及AT-Ⅱ细胞保护作用.     

体外循环血清对培养大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞损伤的研究

目的 探讨体外循环（ＣＰＢ）血清对肺泡Ⅱ型上皮细胞（简称ＡＴ－Ⅱ）的损伤作用。方法 原代培养大鼠ＡＴ－Ⅱ,并与ＣＰＢ血清共同孵育后观察其形态及生化指标变化和还原型谷胱甘肽（Ｒ－ＧＳＨ）的保护作用。结果 培养液中ＭＤＡ、ＬＤＨ、ＡＫＰ增加,细胞凋亡率上升,Ｒ－ＧＳＨ能减轻细胞损伤。结论 ＣＰＢ血清能直接损伤ＡＴ－Ⅱ,氧自由基可能是主要原因,这可能是术中肺表面活性物质减少的重要原因。Ｒ－ＧＳＨ在体外能     

脂多糖诱导大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞凋亡的机制研究

目的 研究脂多糖诱导大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞(AT-Ⅱ)凋亡的机制.方法 体外原代培养的AT-Ⅱ分为对照组和脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)损伤组(LPS浓度10μg/mL),培养24 h后分别进行两组细胞的Fas蛋白免疫组织化学检测和Annexin V/PI双染法流式细胞仪细胞凋亡检测.结果 LPS组Fas阳性率(35.16±2.37)%明显高于对照组(9.01±1.62)%(P《0.05);LPS组的细胞凋亡率(24.98±1.41)%明显高于对照组(6.16±1.03)%(P《0.05);坏死率(14.85±0.99)%亦明显高于对照组(4.00±0.72)%(P《0.0s).结论 Fas/FasL途径可能是LPS诱导AT-Ⅱ细胞凋亡的重要途径.     

肺泡Ⅱ型上皮细胞凋亡在急性肺损伤中的作用

细胞凋亡 (Ａｐｏｐｔｏｓｉｓ)又称为程序性细胞死亡(Ｐｒｏｇｒａｍｍｅｄｃｅｌｌｄｅａｔｈ ,ＰＣＤ) ,是一种由基因调控的主动而有序的细胞死亡过程 ,参与机体许多重要的生理及病理过程。目前认为许多参与全身炎症反应的细胞和介质均可对细胞凋亡产生影响 ,因此细胞凋亡已开始成为全身炎症性疾病的研究热点。急性肺损伤 (Ａｃｕｔｅｌｕｎｇｉｎｊｕｒｙ ,ＡＬＩ)是指机体遭受严重感染、创伤、辐射、休克等打击后 ,出现的以弥漫性肺泡毛细血管膜损伤导致的肺水肿和微肺不张为病理特征的一种肺部炎症和通透性增加综合征 ,目前认为是机体…     

内毒素对鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞钠泵的影响及机制

目的观察内毒素对大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞(ATⅡ)钠泵的影响。方法 ATⅡ细胞成功分离纯化后随机分为两组:①对照组(PBS);②LPS组(1μg/mL)药物干预4 h后用逆转录聚合酶链反应法(RT-PCR)检测ATⅡ细胞上钠泵α1、β1亚基mRNA的表达;免疫组化法检测钠泵α1、β1亚基蛋白的表达;用高效液相法测定细胞ATP、ADP、AMP和腺嘌呤核苷酸总量(TAN),间接测得钠泵的活性。结果 RT-PCR结果显示:LPS组α1、β1亚基的mRNA表达较对照组明显降低(P<0.05);酶活性检测结果显示:LPS组钠泵活性较对照组明显增高(P<0.05);免疫组化结果显示:ATⅡ细胞上钠泵α1、β1亚基蛋白均有表达,各组亚基蛋白的表达量差异无统计学意义(P>0.05)。结论内毒素能下调ATⅡ细胞钠泵α1、β1亚基的mRNA表达,应激调节钠泵活性,但对蛋白表达无明显影响,提示钠泵的变化可能与内毒素性肺损伤有关。     

周期性牵张肺泡Ⅱ型上皮细胞早期凋亡现象

目的 应用细胞力学的方法探讨周期性牵张肺泡Ⅱ型上皮细胞,并观察其早期凋亡现象.方法 周期性牵张肺泡Ⅱ型上皮细胞株A549,首先观察细胞在不同机械力作用下的凋亡情况,分为对照组和机械牵张组(5%、15%、30%应力,0.5 Hz,机械牵张4 h).然后给予细胞应力15%、0.5 Hz、机械牵张0～8 h,观察在不同时间点的细胞凋亡.最后给予细胞应力15%,周期性牵张4 h,牵张频率分别为0、0.2、0.5和1 Hz,观察不同周期频率的机械牵张时细胞凋亡情况.采用流式细胞仪检测细胞凋亡.结果 周期性牵张肺泡上皮细胞A549、0.5 Hz和机械牵张4 h后,细胞早期凋亡随着牵张应力的增加而增加.当给予细胞15%应力和0.5 Hz的机械牵张后,随着牵张时间的延长,早期凋亡细胞的比率增加.给予细胞15%应力,周期性牵张4 h,随着牵张频率的增加早期凋亡的细胞也显著增加.结论 机械应力刺激肺泡Ⅱ型上皮细胞可导致细胞凋亡,这在细胞力学水平为机械通气所致肺损伤提供了实验依据.     

周期性牵张肺泡Ⅱ型上皮细胞早期凋亡现象

目的应用细胞力学的方法探讨周期性牵张肺泡Ⅱ型上皮细胞,并观察其早期凋亡现象。方法周期性牵张肺泡Ⅱ型上皮细胞株A549,首先观察细胞在不同机械力作用下的凋亡情况,分为对照组和机械牵张组(5%、15%、30%应力,0.5 Hz,机械牵张4 h)。然后给予细胞应力15%、0.5 Hz、机械牵张0~8 h,观察在不同时间点的细胞凋亡。最后给予细胞应力15%,周期性牵张4 h,牵张频率分别为0、0.2、0.5和1 Hz,观察不同周期频率的机械牵张时细胞凋亡情况。采用流式细胞仪检测细胞凋亡。结果周期性牵张肺泡上皮细胞A549、0.5 Hz和机械牵张4 h后,细胞早期凋亡随着牵张应力的增加而增加。当给予细胞15%应力和0.5 Hz的机械牵张后,随着牵张时间的延长,早期凋亡细胞的比率增加。给予细胞15%应力,周期性牵张4 h,随着牵张频率的增加早期凋亡的细胞也显著增加。结论机械应力刺激肺泡Ⅱ型上皮细胞可导致细胞凋亡,这在细胞力学水平为机械通气所致肺损伤提供了实验依据。     

利多卡因对LPS致大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞损伤的保护作用

目的：观察利多卡因（lidocaine,Lido）抗LPS所致的大鼠肺泡Ⅱ型上皮（AT-Ⅱ）细胞凋亡作用。方法：体外培养的大鼠AT-Ⅱ细胞暴露到LPS和Lido中24h后,采用流式细胞仪（FCM）及电镜检测AT-Ⅱ细胞凋亡和坏死率;乳酸脱氢酶（LDH）试剂盒检测LDH活性。结果：LPS可直接导致AT-Ⅱ细胞损伤,表现为AT-Ⅱ细胞坏死和凋亡发生率增高,LDH释放量增多。Lido能降低AT-Ⅱ细胞凋亡率。结论：Lido对LPS所致的AT-Ⅱ细胞凋亡和坏死有直接的抑制作用。     

急性分离的肺泡Ⅱ型上皮细胞钠通道亚基mRNA表达

目的 研究急性大鼠肺泡Ⅱ型细胞钠通道各亚基的表达.方法 20只健康SD大鼠,对其肺泡Ⅱ型上皮细胞进行分离、纯化,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术半定量检测ENaC三个亚单位α、β、γmRNA水平.结果 急性分离纯化大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞ENaC三个亚单化均有表达,其中α-业基mRNA表达最强,显著高于β-和γ-业基,β-和γ-亚基mRNA表达无显著性差别.结论 大鼠肺泡Ⅱ型细胞钠通道在DNA水平上表达以α-亚基为主,α-亚基在肺水清除中起主要作用.     

鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞的分离、鉴定和培养

目的：探讨肺泡Ⅱ型上皮细胞的分离，鉴定和培养。方法：采用改良法（酶消化与碳铁颗粒相结合）、分离、鉴定和培养了肺泡Ⅱ型上皮细胞。结果：使用上述方法分离的肺泡Ⅱ型上皮细胞，经流式细胞仪、鞣酸染色和电子显微镜鉴定，其纯度达７０％以上。结论：经改良法分离的肺泡Ⅱ型上皮细胞，可满足一般试验需求。     

肺泡Ⅱ型上皮细胞在肺移植中的作用及其进展

随着医学的迅速发展 ,大器官的移植 (如肺移植等 )已成为世界医学研究的热点。到 90年代末 ,全世界已进行肺移植的患者达 35 0 0多人 ,1年存活率为 93% ,5年存活率为 4 0 % ,最长存活时间为 10年 ,显示了肺移植的诱人前景。但是 ,与其它器官移植一样 ,肺移植中同样存在移植肺的保存、缺血再灌注、术后感染、急慢性排斥反应等。1　肺移植与肺泡Ⅱ型上皮细胞[1]目前认为 ,脏器获取前血液动力学的不稳定状态、移植肺再灌注、术后感染、排斥都是导致肺移植后高死亡率的原因。肺移植后肺功能障碍、肺部免疫力低下和存活期较短的重要原因是肺部感…     

不同时间高氧对大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞能量代谢的影响

目的 探讨不同时间高浓度氧对肺泡Ⅱ型上皮细胞线粒体能量代谢的影响。方法 将大鼠RLE-6TN细胞分为对照组(21%O₂常规培养4 h)、高氧1、2、3、4 h组(95%O₂分别培养1、2、3、4 h)。采用荧光素酶化学发光法检测各组细胞的三磷酸腺苷(ATP)含量，采用微量法检测线粒体呼吸链复合体V活性，荧光探针JC-1检测细胞线粒体膜电位，实时荧光定量PCR法检测线粒体呼吸链复合体Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ的核心亚基NADH脱氢酶亚基1(ND1)、细胞色素b(Cytb)、细胞色素C氧化酶亚基I(COXI)、ATP酶6(ATPase6)mRNA的表达水平。结果 与对照组比较，高氧1、2、3、4 h组细胞线粒体呼吸链复合体核心亚基ND1(q=24.800,P<0.001;q=13.650,P<0.001;q=9.869,P<0.001;q=20.700,P<0.001)、COXI(q=16.750,P<0.001;q=10.120,P<0.001;q=8.476,P<0.001;q=14.060,P<0.001...     

肠缺血再灌注时肺泡Ⅱ型上皮细胞凋亡与肺损伤

目的 观察肠缺血再灌注中肺损伤与肺泡Ⅱ型上皮细胞凋亡的关系及其可能的发生机制。方法 Wistar大鼠,肠系膜上动脉夹闭后松夹造成肠缺血再灌注。不同时间点活杀动物,测肺通透指数、肺泡灌洗液（BALF）和血浆中NO、IL-2含量,分离肺泡Ⅱ型上皮细胞,观察凋亡率。结果与结论 肠缺血再灌注可能引起肺损伤;肠缺血再灌注后肺泡Ⅱ型上皮细胞凋亡率上升,再灌注30 min 达高峰;缺血再灌注后血、BALF中NO、IL-2增加;肺泡Ⅱ型上皮细胞凋亡率与肺通透指数显著相关,BALF中IL-2水平与肺通透指数、肺泡Ⅱ型上皮细胞凋亡率显著相关。     

急性肺栓塞大鼠肺泡灌洗液磷脂变化

目的探讨急性肺栓塞大鼠肺泡灌洗液总磷脂及大小聚集体的变化。方法雄性SD大鼠24只随机分为对照组、栓塞24h组、栓塞2周组,每组8只;以明胶海绵溶液经颈静脉注入制备大鼠肺栓塞模型,经右心导管测定肺动脉压、心率、呼吸频率,并行动脉血气分析。上述3组大鼠分别于术后2周、24h、2周时处死,取肺组织制备病理切片,HE染色光镜下观察肺组织病理变化;留取肺泡灌洗液行总磷脂及大小聚集体测定。结果对照组、栓塞24h组、栓塞2周组大鼠肺动脉平均压分别为(14.2±4.1)mmHg、(26.1±7.5)mmHg、(29.0±8.2)mmHg,肺栓塞后大鼠肺动脉压升高(F=3.09,P<0.05);动脉血氧分压分别为(94.1±8.8)mmHg、(80.5±5.8)mmHg、(73.4±14.3)mmHg(F=1.25,P<0.05)。实验大鼠肺组织病理切片光镜检查,栓塞24h组可见肺组织多个血管腔有明胶海绵栓塞,栓塞2周组栓子基本溶解。对照组、栓塞24h组、栓塞2周组肺泡灌洗液总磷脂水平分别为(374.17±36.55)mg/100ml、(311.67±48.56)mg/100ml、(325.52±52.16)mg/100ml(F=2.41,P<0.05);大聚集体水平分别是(286.11±20.48)mg/100ml、(211.47±40.56)mg/100ml、(234.37±75.32)mg/100ml(F=1.92,P<0.05);小聚集体水平分别是(208.00±22.36)mg/100ml、(236.71±40.15)mg/100ml、(245.83±34.23)mg/100ml(F=1.83,P>0.05)。结论大鼠急性肺栓塞后肺泡灌洗液总磷脂及大聚集体水平显著降低在肺肺栓塞后血氧过少中起重要作用。