疟原虫孢子与红外期的细胞免疫

本文对疟原虫红外期细胞免疫特点及子孢子与肝细胞之间在分析水平相互作用方面的进展进行了综述。     

约氏疟原虫感染大鼠和小鼠的红外期研究

约氏疟原虫约氏亚种的子抱子经尾静脉接种大鼠和三株小鼠(ICR/JCL,C57BL,KM株)后42h,在大鼠和小鼠的肝连续切片中均查见红外期裂殖体(EE裂殖体),但在KM鼠株的切片中,正常的EE裂殖体甚少。不论宿主同否,EE裂殖体均大小不等,呈圆形、椭圆形或其他形状,分化程度不同,发育不完全同步。大鼠肝中的EE裂殖体可看到明显的外膜,周围并出现细胞反应。ICR/JCL、C57BL鼠株和大鼠肝中的EE裂殖体均较KM鼠株发育良好,数量较多,但大鼠中的红内期迅速消失。结果表明;ICR/JCL和C57BL鼠株用作约氏疟原虫—斯氏按蚊系统鼠疟模型的宿主较合适。     

疟原虫子孢子与红外期的细胞免疫

近年来,疟原虫红外期的研究越来越受到重视,红外期免疫机制的研究是疟疾治疗和疫苗研制的基础。本文对疟原虫红外期细胞免疫特点及子孢子与肝细胞之间在分子水平相互作用方面的进展进行了综述。     

聚肌胞对大鼠体内约氏疟原虫子孢子入侵及红外期发育的影响

用干扰素诱导剂聚肌胞(Poly I:C)静脉注射(iv)Wistar大鼠体内,18h后,iv约氏疟原虫子孢子,42h时,肝内红外期(EEF)数量显著减少。其子孢子发育率仅为对照组的5—12％,但大小及成熟程度均未受到影响。接种子孢子后2h,使用Poly I:C,则子孢子发育率、EEF大小及成熟程度均与对照组无异。含干扰素血清与子孢子共孵40min,不影响子孢子的入侵及随后的发育。结果提示干扰素的抗疟作用并非针对EEF本身。     

靶向伯氨喹抗约氏疟原虫红外期作用的初步研究

用半乳糖基新糖白蛋白（Ｇ－ＮＧＡ）包裹伯氨喹（ＰＱ）制成的靶向伯氨喹（ＴＰＱ）静脉注射（ｉｖ）感染约氏疟原虫子孢子２ｈ的Ｗｉｓｔａｒ大鼠，４２ｈ时，２０ｍｇ／ｋｇ和１０ｍｇ／ｋｇＴＰＱ组子孢子发育率（ＳＰＶ）分别为１．２％和２．８％，仅分别为对照组的６％左右和１５％，约有９０％红外期（ＥＥＦ）呈现退变或发育受到明显抑制；２０ｍｇ／ｋｇＰＱ组ＳＰＶ为５．０％，为对照组的２６％，半数以上ＥＥＦ均呈退变或发育受到抑制。昆明株小鼠ｉｖ约氏疟原虫子孢子后２ｈ分别注射药物，ＴＰＱ１０ｍｇ／ｋｇ组和ＰＱ２０ｍｇ／ｋｇ组原虫血症前期较对照组明显后延，尤其是ＴＰＱ１０ｍｇ／ｋｇ组中２只鼠均未出现原虫血症。结果提示ＴＰＱ抗ＥＥＦ药效明显优于ＰＱ。     

瑞香素杀疟原虫裂殖体的作用

[目的 ]研究中药瑞香素在体外和体内的杀裂殖体作用。 [方法 ]在恶性疟原虫FCCl株常规体外培养中测试瑞香素杀裂殖体活性 ,并按“四天抑制性试验”在感染伯氏疟原虫ANKA株的小鼠中测定不同剂量瑞香素的体内抗疟活性。 [结果 ]体外试验中瑞香素在 1～ 10 μmol L剂量范围内有明显杀灭裂殖体作用 ,而体内试验中按D4减虫率与感染鼠在 30d内的平均生存天数评价 ,5 0或 10 0mg kg .d- 1 × 4d瑞香素灌胃以及 10 ,5 0或 10 0mg kg.d- 1 × 4d瑞香素腹腔注射给药在伯氏鼠疟原虫ANKA株感染鼠中的抗疟作用与 10mg kg .d- 1 × 4d氯喹 (CQ)灌胃的疗效相似。 [结论 ]瑞香素在体外和体内均有一定的杀裂殖体作用。     

IL-6对大鼠体内约氏疟原虫红外期发育的影响

目的观察ＩＬ－６对大鼠体内约氏疟原虫红外期发育的影响。方法子孢子（Ｓｐ）接种前２ｈ给Ｗｉｓｔａｒ大鼠腹腔注射１００００ＵｒＨｕＩＬ－６,４２ｈ后活杀、常规制肝切片,观察Ｓｐ发育率,外期原虫（ＥＥＦ）直径。大鼠在接种Ｓｐ前３ｈ、０．５ｈ分别经尾静脉注射１００００Ｕ、３００００ＵｒＨｕＩＬ－６,经肠系膜静脉灌注２８万Ｓｐ,１ｈ后制备肝脏样品,用电镜观察结果。结果与对照组比较,１００００ＵｒＨｕＩＬ－６对约氏疟原虫Ｓｐ发育率没有显著影响,但ＥＥＦ直径明显变小。Ｓｐ接种１ｈ后肝细胞内可见形态退变的Ｓｐ。结论ＩＬ－６作为一种免疫效应分子可抑制大鼠体内约氏疟原虫ＥＥＦ的发育。     

瑞香素对恶性疟原虫细胞色素C氧化酶及核糖核酸还原酶活性的影响

目的 体外测定瑞香素对恶性疟原虫细胞色素C氧化酶（COX）及核糖核酸还原酶（RNR）活性的影响。方法 Trager &; Jensen法体外培养恶性疟原虫FCC1/HN分离株，超声波破碎恶性疟原虫提取总蛋白，用紫外分光光度计检测瑞香素与瑞香素-Fe复合物在不同作用时间和不同作用浓度对恶性疟原虫COX活性的影响，以电子自旋共振法检测经瑞香素与瑞香素-Fe复合物作用1、2、3和4 h后，恶性疟原虫酪氨酸（Tyr）自由基的量以反映恶性疟原虫RNR的活性。 结果 体外同步培养的恶性疟原虫经瑞香素（100 μmol/L）作用2、4、8和12 h后，COX活性分别被抑制了0、6%、73%和80%；在瑞香素浓度为0.1、1、100和1 000 μmol/L，作用6 h后，COX活性分别被抑制3%、31%、53%和84%；而瑞香素-Fe复合物对COX的影响几乎消失。经瑞香素（100 μmol/L）作用1、2、3和4 h后RNR活性分别被抑制7%、51%、69%和75%；在瑞香素浓度为0.1、1、100和1 000 μmol/L，作用6 h后，RNR活性分别被抑制3%、31%、58%和93%；而瑞香素-Fe复合物作用6 h后RNR活性分别被抑制8%、6%、11%和9%。 结论 在体外瑞香素可显著降低恶性疟原虫的细胞色素C氧化酶（COX）及核糖核酸还原酶（RNR）活性。     

鼠疟原虫裂殖子进入红细胞后的早期超微结构演化

为了探讨疟原虫红内早期超微结构的演化，用透射电镜观察了伯氏和约氏疟原虫。裂殖子入侵后补围于内陷红细胞膜所构成的纳虫泡中，起初停留于浅层红细胞浆内，造成该处表面隆起。虫体浑圆，顶端结构很快消失，球形体与核和线粒体分离并萎缩。分离了的线粒体略显舒展，内质网扩大。核变长弯形，核周隙有部分地扩大。双层内膜渐与外膜分离，断裂、卷曲、以至消失。最后变成单层质膜的滋养体。早期滋养体的组织结构仍较精细，以后密度逐渐减低。胞浆内有个别多角形的大内质网池，质膜下出现小食物泡。然后虫体变扁平，边缘卷起，包围红细胞浆，终至封口融合，形成一个食物泡；接着在其旁出现消化泡和色素粒。长成更大的中期滋养体。     

The intradermal route for inoculation of sporozoites of rodent malaria parasites for immunological studies

Rodent malaria parasites are commonly used for investigations into the immunology of pre-erythrocytic stage malaria infection, as sporozoites can be easily produced in the laboratory. In the majority of past immunological studies using this system, sporozoites are inoculated into mice via the intravenous (IV) route. In natural situations, however, sporozoites are deposited into the skin by the bite of Anopheline mosquitoes, and it is likely that the immunological response to such natural intradermal (ID) inoculation will be different to that achieved through the IV route. Although infected mosquito bites are sometimes used during experimental induction of immunity in mice, this method is problematic because of the low numbers of sporozoites introduced to the skin and the large variation in sporozoite inoculation between individual mosquitoes. Here, we show that ID inoculation of dissected mosquito salivary gland sporozoites of Plasmodium yoelii allows the accurate introduction of known numbers of sporozoites into the skin and that these parasites successfully invade the liver. Furthermore, immunization of mice using ID inoculations of live sporozoites contemporaneously with mefloquine treatment induces an immune response that is protective against the development of liver stage parasites, and this protection does not differ significantly from that achieved with IV immunizations performed in the same manner.     

我国分离株间日疟原虫与红细胞黏附关键区DBPⅡ区基因多态性分析

目的　了解我国季节流行区间日疟原虫红内期候选抗原DBP基因多态性特点。方法　疟原虫基因组DNA提取。PCR扩增DBPRⅡ区基因片段,序列直接测序分析。结果　成功扩增18个DBPRⅡ区基因片段,发现9个核苷酸突变,产生4种基因型,导致9个氨基酸置换。其中G115 1-A116 9-A12 70为主导基因型,G384 -H390 -I4 2 4是主导氨基酸型。结论　我国季节流行区分离株DBP基因突变位点完全含盖在以往报道的位点中,同时表明我国分离株DBP基因突变位点有限,提示我国分离株红内期候选抗原DBP蛋白功能相对保守。     

疟疾疗法抗肿瘤效应的实验观察

目的探讨疟疾疗法对肿瘤生长的拮抗效应及其作用机制。方法以S180瘤细胞接种BALB/c小鼠后第2天,实验组小鼠经腹腔感染约氏疟原虫。用吉姆萨薄血膜染色法确定小鼠的虫体血症水平,以ELISA试剂盒检测其脾细胞培养上清中IFN-γ含量,并于瘤细胞接种后第5天开始测量瘤肿块直径。结果疟原虫感染的红细胞于疟原虫接种后的第3天出现在感染小鼠的外周血中,其脾细胞产生IFN-γ的水平于感染后第4天出现显著升高;瘤细胞接种第7天后,疟疗实验组小鼠的瘤肿块直径明显小于单纯瘤细胞接种组。结论约氏疟原虫感染所致的疟疗效应对S180瘤细胞的生长具有一定抑制作用。     

蚊媒感染疟原虫后应答性表达增高基因的富集和筛选

目的　分离和识别蚊媒疟原虫感染相关基因并探讨其机制。方法　以斯氏按蚊 约氏疟原虫为实验模型 ,分别将刺叮约氏疟原虫感染鼠血和正常鼠血后 2 4h的饱血斯氏按蚊作为T组和D组 ,经抑制性差减杂交和选择性PCR扩增 ,建立一个T组表达特异增高基因的差减cDNA库。将此差减库分别与T组和D组的cDNAs混合探针作斑点杂交 ,筛选出差异表达基因 ,测定其序列并做基因库BLAST搜索。结果　T组相对于D组的差异表达基因得到有效富集 ,5 8个重组克隆中有 2 4个表达增高 ,阳性率为 4 1.4 %。所代表的 2 3个基因搜索结果显示 ,12个与功能已知的基因同源 ,4个与功能未知的基因同源 ,7个为新发现的基因 ;其中 9个与LPS诱导的冈比亚按蚊免疫反应性细胞系EST同源 ,占 39.1% (9/ 2 3)。结论　建立了蚊媒感染疟原虫早期 (2 4h)直接导致的全基因组应答性表达增高cDNA库 ,筛选结果显示蚊虫对疟原虫感染的反应涉及多种生化途径及机制 ,尤其与天然免疫系统和能量代谢关系密切     

青蒿琥酯治疗对约氏疟原虫感染小鼠特异性免疫建立的影响

目的阐明青蒿琥酯治疗对约氏疟原虫感染小鼠特异性免疫建立的影响。方法DBA/2和BALB/c小鼠经腹腔感染约氏疟原虫后均分为三组:感染后未治疗组、感染第3天和第6天青蒿琥酯治疗组。初次感染痊愈后30天用同种疟原虫再次感染,再感染疟原虫清除后30天进行第三次感染,观察每次感染后小鼠原虫血症水平和对重复感染的特异性抵抗能力。结果未治疗的自然自愈组和不同时间治疗组的DBA/2小鼠,其再次感染的感染率、原虫血症水平基本相同,第三次感染均未见疟原虫感染的红细胞;除非治疗组BALB/c小鼠于初次感染早期死亡外,不同时间治疗组的BALB/c小鼠再次感染的感染率与虫体血症水平、第三次感染情况与各组DBA/2小鼠也无差异。结论对于约氏疟原虫初次感染免疫应答能力不同的DBA/2和BALB/c小鼠,青蒿琥酯根治性治疗不影响其特异性免疫的建立和免疫记忆性的维持。     

Effect of chloramphenicol on colony formation from erythrocytic precursors

In the present experiments, we compare the behavior of erythropoietic precursors and granulocytic precurosors exposed to chloramphenicol. Subcutaneous injection of 20 mg of chloramphenicol sodium succinate on five successive days induced a reduction in the number of erythrocytic colony-forming units (CFU-E) and erythropoietic burst-forming units (BFU-E) in murine marrow and spleen, while no change in number of granulocytic precursors (CFU-C) in murine hemopoietic organs was observed. In vitro studies demonstrated concentration-dependent inhibition of chloramphenicol or chloramphenicol sodium succinate in the colony formation of all these precursors from murine and human bone marrow. However, erythropoietic burst formation of murine and human BFU-E was completely suppressed by the addition of chloramphenicol or chloramphenicol sodium succinate to the culture medium at therapeutic concentrations (20-40 μ/ml). From the present results, it can be concluded that the reduced number of BFU-E in mice after injection of chloramphenicol sodium succinate resulted from the selective toxicity of chloramphenicol to BFU-E at therapeutic con centrations.     

约氏疟原虫与伯氏疟原虫侵入期抗原的初步研究

目的　用针对鼠约氏疟原虫(Plasmodiumyoelii)侵入期的8种单克隆抗体,对约氏疟原虫和伯氏疟原虫(P.berghei)侵入期即动合子、裂殖子和子孢子棒状体和表面抗原检测分析。　方法　间接免疫荧光实验(IFA)对各侵入期抗原进行亚细胞结构定位,SDSPAGE及Western印迹对两种鼠疟原虫的不同侵入期进行抗原组分分析。　结果　经上述两种方法检测发现,顶端复合体抗原成分复杂,约氏疟原虫和伯氏疟原虫的棒状体有共同的抗原表位,约氏疟原虫的动合子与其自身的裂殖子有类似成分,也有各自独特的抗原。两种鼠疟原虫动合子抗原有类似成分。约氏疟原虫的子孢子具有与裂殖子、动合子不同的抗原成分。　结论　疟原虫侵入期棒状体和表面抗原在同一虫种的不同侵入期和不同虫种中有共同的抗原表位,也有各自的独特组分。     

蒿甲醚与瑞香素伍用对感染伯氏疟原虫小鼠的治疗作用

目的　研究蒿甲醚与瑞香素伍用(A+D)对感染伯氏疟原虫ANKA株小鼠的疗效及其联合作用方式。　方法　按“四天抑制法”d0 感染,d0 ～d3 给药,每天1次,d4涂薄血膜检查,并计算d4减虫率及各药丰数有效置(ED50),用等效应图解法分析A+D的合并作用。　结果　蒿甲醚0.4mg/(kg·d)× 4d的d4减虫率与对照组相比差异无显著性 ;[A0 .4mg/(kg·d) +D7.7mg/(kg·d) ]× 4d的抗疟效果提高 ,与对照组相比差异有显著性(P<0.05)。A+D各组的ED50均低于单用药组;不同配伍比例的R值皆大于0.4,小于2.7(0.4