化学发光酶联免疫法检测汉坦病毒IgM抗体的研究

目的建立化学发光酶联免疫分析法（CLEIA）检测肾综合征出血热（HFRS）患者血清中IgM抗体。方法以抗人IgM-μ链抗体包被黑色不透明聚乙烯板，辣根过氧化物酶标记汉坦病毒核蛋白作为检测抗原以及luminol-H2O2作为发光底物，建立CLEIA法并对CLEIA与IgM抗体捕获酶联免疫吸附法（MacELISA）进行比较。结果CLEIA与MacELISA相关系数0．97；对于51份确诊的HFRS患者急性期血清CLEIA检测敏感度100％，MacELISA为90．2％；对48份正常人血清两种方法检测特异度均为100％；CLEIA次内变异系数范围5．02％-12．7％，次间变异系数范围0．4％～7．0％，与MacELISA相当。结论化学发光酶联免疫分析法是一种更为灵敏，准确和稳定的方法，适用于检测HFRS早期患者血清中IgM抗体。     

基于荧光微球的病毒性出血热IgM抗体检测方法的建立

目的 建立并初步评价多元检测引起病毒性出血热病原体特异性IgM抗体的方法.方法 在原核细胞中重组表达纯化马尔堡病毒、拉沙热病毒、裂谷热病毒、肺综合征出血热汉坦病毒、汉滩病毒、Seoul病毒及普马拉病毒核蛋白(NP),共价偶联到7种不同的xMAP荧光微球上.优化评价偶联效果,通过参比血清中相应病毒NP特异性抗体检测,评估检测方法,并与常规使用的MacELISA方法进行比较.结果 在Luminex平台的基础上建立了多元检测引起病毒性出血热的病毒核蛋白特异性抗体的方法,特异性与敏感性与常规应用的特异性抗体检测MacELISA试剂盒相当,但可以同时排查多个病毒感染情况.结论 利用Luminex xMAP技术建立基于病毒核蛋白多元检测方法快速敏感,操作简单,可以用于病毒性出血热的检测和血清流行病学调查.     

用重组汉坦病毒NP、GP检测急性期HFRS患者血清中特异性IgG、IgM、IgA抗体

目的 探讨肾综合征出血热(HFRS)患者急性期IgA、IgG、IgM抗体的变化规律。方法 使用套式RT-PCR检测此次病毒感染情况。用杆状病毒表达的汉坦病毒重组核蛋白(rNP)和糖蛋白(rGP)为抗原，使用ELISA方法检测了14例急性期肾综合征出血热患者的6l份系列血清中的IgA、IgG、IgM抗体。结果 14例肾综合征出血热患者中，ll例患者的血清用RT-PCR检出家鼠型汉坦病毒核酸。几乎所有肾综合征出血热患者早期即有IgA、IgM、IgG抗体的迅速升高，抗rNP抗体滴度明显高于rGP。3种抗rNP抗体中早期IgG上升趋势最为显著，IgM与IgA次之，IgM与IgA上升趋势相近，但IgA的滴度明显高于IgM。抗rGP抗体中XgA变化最显著，IgG次之。IgM发病2周内总的变化趋势不明显，但是发病l周内滴度上升趋势明显，而发病第2周内则呈下降趋势。其中l例RT-PCR阳性的患者，早期IgM未测出，IgA的滴度却较高。l例重度患者，抗糖蛋白IgG、IgM和IgA抗体滴度均低于其他患者，且整个急性期一直维持较低水平。结论 肾综合征出血热急性期IgA、IgG、lgM变化具有明显的规律，抗糖蛋白和核蛋白抗体病患规律不同，检测IgM的同时检测IgA，可以提高诊断的准确性。     

北京市肾综合征出血热聚集疫情分析

目的 描述分析北京市一起肾综合征出血热聚集性疫情,探讨低发病率地区聚集性疫情的流行病学特征.方法 2007-2014年肾综合征出血热病例数据来源于中国疾病预防控制信息系统中现住址为北京市的病例.疫情数据来源于流行病学调查和疫情防控记录.病例血清汉坦病毒抗原和抗体检测采用ELISA法.啮齿类动物使用夹夜法捕捉,其血清汉坦病毒抗原抗体使用间接免疫荧光方法检测.结果 2007-2014年北京市平均每年报告肾综合征出血热病例18例,年发病率在0.09/105-0.16/105.聚集疫情共涉及2名实验室确诊病例和1名无症状感染者.病例临床症状相对较轻,居住地灭鼠前鼠密度为10.0％,灭鼠后密度为1.3％.家鼠肺标本汉坦病毒抗体阳性率为12.5％(1/8),宠物鼠中未检出汉坦病毒.结论 北京市仍存在发生肾综合征出血热聚集疫情的可能,这起涉及3名感染者的疫情为“城中村”家鼠传播.     

单克隆抗体ELISA间接夹心法检测HFRS病人血清IgM和IgG抗体的研究(简报)

肾综合征出血热(HFRS)早期临床症状不典型,因此在病人血清中检出特异性抗体对临床早期诊断和流行病学监测均有重要意义。间接免疫荧光法(IFAT)和免疫酶染色法虽已被广泛应用,但尚存在需用荧光显微镜或判定结果有一定主观性等不足之处。血凝抑制试验主要检出IgG抗体。本文采用抗HFRS病毒单克隆抗体(Mc Ab)和粗纯抗原建立了一种ELISA间接夹心法,以检测HFRS病人血清中IgM和IgG抗体,并与IFAT进行了比较。     

免疫酶斑点法检测汉坦病毒抗原的研究

目的 建立一种新的诊断肾综合征出血热(HFRS)的实验手段。方法 采用R22株、陈株和湖北株3种汉坦病毒接种家兔，制备兔抗汉坦病毒多克隆抗体(抗HTV-IgG)。然后采用混合的3种抗体进行免疫酶斑点法实验(IEDA)，检测患者血清和尿液中的汉坦病毒抗原。同时采用间接免疫荧光法(IFA)检测患者血清中抗汉坦病毒-IgM作对照。结果 经用相关分析，IEDA与IFA检测的结果高度相关。血中汉坦病毒抗原检出率为73．68％，尿中为65．00％。发病5d内，血中检出率为94．34％，尿中检出率为83．33％。5病日内的早期诊断率前者明显高于后者。结论 IEDA与IFA相比，阳性率比后者有较大提高，特别是5病日内的早期阳性率的提高明显，值得用于临床HFRS的早期诊断。     

应用抗人μ链McAb和APAAP法检测HFRS患者血清中IgM抗体

<正> 肾综合征出血热(HFRS)患者的早期特异性诊断多采用免疫荧光法检测血清中IgM抗体。最近有报道采用抗人μ链McAb荧光结合物检测患者血清IgM抗体。本文以HFRS病毒陈株感染Wish细胞作为抗原     

HFRS患者汉坦病毒特异性抗体的动态变化

肾综合征出血热（HFRS）在我国危害严重，我们利用汉坦病毒重组核蛋白（rNP）和重组糖蛋白（rGP）为抗原，对25例急性期HFRS患者的90份血清进行了特异性IgA、IgM检测，探讨HFRS患者的抗体动态变化规律，为临床诊断和治疗提供理论依据。     

肾综合征出血热患者抗体的消长动态

<正> 肾综合征出血热(HFRS)的早期快速诊断国内已多报道,据认为IgM和IgG类特异性抗体均可作为早期诊断的依据。我们试用2-巯基乙醇(2-ME)处理待检血清,用血凝抑制试验检测IgM,籍以观察HFRS患者不同病期IgM和IgG类抗体的消长动态,结果如下。     

用HRP——抗IgM法快速诊断流行性出血热

本文报道用流行性出血热(EHF)病毒抗原片,以酶标抗人IgMu链单克隆抗体染色法(简称HRP-抗IgM)检测患者血清中的IgM抗体,从而对EHF进行早期诊断。为确证本方法的可靠性,同时与间接免疫荧光IgG法(IFA-IgG)进行了比较.经阻断试验和2-巯基乙醇耐性试验证明,HRP-抗IgM检出的抗体系EHF特异性抗体.用双盲法检测了51份血清,结果全部符合。实验结果表明,HRP-抗IgM特异性强.敏感性高,用普通显微镜便可观察,结果清晰.4小时内可获得诊断结果,可以用作早期诊断.     

双抗原夹心法ELISA在检测抗肾综合征出血热总抗体中的应用

目的建立可以检测不同来源血清中抗汉坦病毒抗体的简单、灵敏的方法。方法汉坦病毒核蛋白重组表达纯化后，同时作为捕获作用的固相抗原和检测作用酶标记抗原，建立检测血清中抗汉坦病毒总抗体的双抗原夹心法ELISA法，并与常用的IFA法进行比较分析。结果检测不同血清时特异性为100％，敏感性高于IFA法4～8倍。且不需考虑更换检测试剂，不同来源的血清样本对检测结果没有明显的影响。结论本方法操作简单，成本低，具有较高的敏感性和特异性，适合用于汉坦病毒感染的监测、调查和临床诊断以及宿主动物间病毒感染流行的调查与监测。     

Effectiveness of using cultured antigens for the serodiagnosis of hemorrhagic fever with renal syndrome by the immunofluorescence method

Clinical serological studies of hemorrhagic fever with renal syndrome (HFRS) demonstrated high effectiveness of indirect immunofluorescence procedure (IF) for serodiagnosis of this infection. The use of HFRS virus-infected VERO-E6 cells as the antigen for IF enhanced the sensitivity and specificity of the method as compared with the use of cryostatic sections of the lung tissue from wild rodents spontaneously infected with HFRS virus as the antigen. A technology for preparation of a polyvalent HFRS diagnosticum containing the antigens of two virus serotypes has been developed for serological diagnosis of HFRS in the European foci where the serological evidence of circulation of strains of serotypes 1 and 2 of HFRS virus pathogenic for man has been obtained. The specificity and sensitivity of detection of antibody to HFRS virus serotypes 1 and 2 by IF test using the polyvalent diagnosticum is equal to that in tests using individually tissue culture antigens of HFRS virus serotypes 1 and 2. It was found that in the patients' native sera antibodies of the IgM class are masked by antibodies of the IgG fraction, therefore the use of IF technique for detection of IgM antibody to HFRS virus aimed at early serological diagnosis of this infection is not effective.     

人巨细胞病毒单克隆抗体的研制检定和应用

采用人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）ＡＤ１６９株作为免疫原，制备出１３株鼠－鼠杂交瘤细胞系。对其中的６株进行了检定．免疫印迹试验结果表明：单克隆抗体（ＭｃＡｂ）７Ｂ４、７Ｄ７、７Ｅ１１、８Ｅ８和８Ｄ６相对应的ＨＣＭＶ多肽分子量分别为４６、１５０、３８、５１７２和６５ｋＤ．ＨＣＭＶ感染人胚肺二倍体细胞（２ＢＳ）后不同时间制成抗原片，与ＭｃＡｂ作间接免疫荧光试验。结果表明：ＭｃＡｂ８Ｂ８相应的病毒多肽为即刻早期抗原，其它５株ＭｃＡｂ相应的病毒多肽均为晚期抗原，６株ＭｃＡｂ等量混合后，标上辣根过氧化物酶，用于ＩｇＭ抗体捕获法ＥＬＩＳＡ（ＭａｃＥＬＩＳＡ）中，并与间接ＥＬＩＳＡ（ＩＥＬＩＳＡ）同时检测ＨＣＭＶ－ＩｇＭ．在未经选择的１００份脐带血中，两法均为阳性的３份，两法均为阴性的９４份；ＭａｃＥＬＩＳＡ阳性而ＩＥＬＩＳＡ阴性的２份血清的特异性试验证明，ＨＣＭＶ－ＩｇＭ确为阳性．ＩＥＬＩＳＡ阳性而ＭａｃＥＬＩＳＡ阴性的１份血清的特异性试验证明，它是由ＲＦ引起的假阳性。     

用碱性磷酸酶免疫斑点试验检测小鼠血清中的HFRS病毒抗体

将ＨＦＲＳ病毒陈株可溶性抗原吸附于硝酸纤维素膜上，建立了用碱性磷酸酶免疫斑点试验（ＡＰ－ＤＩＢＡ）检测小鼠血清中的ＨＦＲＳ病毒抗体的方法，并与应用辣根过氧化物酶的免疫斑点试验（ＨＲＰ－ＤＩＢＡ）作了比较。结果表明，ＡＰ－ＤＩＢＡ具有特异性；其敏感性高于ＨＲＰ－ＤＩＢＡ。该法可用于不同ＨＦＲＳ病毒株感染小鼠血清中抗ＨＦＲＳ病毒抗体的检测。     

Application of immunomagnetic particles to enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) for improvement of detection sensitivity of HCG

This investigation was aimed at using superparamagnetic particles to enzyme-linked immunosorbent assay (SPIO-ELISA) of human chorionic gonadotropin (hCG) to enhance detection sensitivity of hCG. We found that N-(3-dimethyl aminopropyl)-N'-ethylcarbodiimide hydrochloride (EDC) was the best cross-linking reagent to link anti hCG α antibody to superparamagnetic particle (SPIO-anti hCG α antibody immunomagnetic particle). To improve the specificity of the assay, a horse radish peroxidase (HRP)-labeled anti-hCG beta monoclonal antibody was used to detect captured hCG using double antibody sandwich ELISA assay. SPIO-ELISA application to determine hCG increased the sensitivity to 1 mIU/mL, which is a level of sensitivity enabling the diagnosis of pregnancy during the early gestational period.     

肿瘤异常蛋白检测在食管癌诊断中的价值研究

目的 对食管癌、癌前病变、正常人群进行分析,探讨TAP检测在食管癌诊断中的价值,为临床应用提供依据.方法 选取2013年1月至2016年1月自贡市第四人民医院肿瘤科收治的经病理学检查确诊的50例食管癌患者、50例Barret食管患者及50例健康者进行分析,使用TAP检测技术对所有受试者进行检查,以病理诊断结果作为金标准,计算TAP检测系统的特异性、灵敏度、约登指数,评价TAP检测系统评价食管腺癌及Barrett食管的检测效力.结果 对50例食管癌患者进行筛选时,TAP的诊断灵敏度为88.00％,特异性为88.00％,约登指数为0.76;对50例Barrett食管患者进行筛选时,TAP的诊断灵敏度为80.00％,特异性为88.00％,约登指数为0.68.结论 检测TAP在食管癌的诊断中具有较高的临床应用价值,其在临床筛选具有很大的参考价值.     

GeneXpertMTB/RIF Assay对肺部结核的临床诊断及治疗价值

目的:探究GeneXpertMTB/RIF Assay对临床诊断及治疗肺部结核的应用价值。方法:收集2019年1月至2019年12月在甘孜藏族自治州人民医院住院的肺结核患者的痰液标本148份,同时选取50份非结核肺部感染患者的痰液标本作为对照。分别采用涂片抗酸杆菌检查、MGIT960检测MTB及药敏法和GeneXpertMTB/RIF检测法对痰液标本中的结核分枝杆菌及其耐药性进行测定,并以MGIT960药敏法为标准分析GeneXpertMTB/RIF检测法检测RIF耐药性的敏感性及特异性。结果:GeneXpertMTB/RIF、MGIT960培养法及直接涂片法检测痰液标本中MTB的敏感度分别为60.14%、58.11%、24.32%;特异度分别为100.00%、92.00%和94.00%。GeneXpertMTB/RIF检测法的灵敏度明显高于其他两项检测方法。GeneXpertMTB/RIF检测法与BACTEC MGIT960培养法无统计学差异(X²=0.126,P=0.722),与痰涂片检测结果差异也无统计学意(X²⁼38.899,P=0.000);GeneXpertMTB/RIF检测法检测利福平耐药性的敏感度为100.00%,特异度为95.31%。结论:GeneXpertMTB/RIF检测法的检测速度快、灵敏度高、特异性强,有助于实验室结核分枝杆菌及其耐药性的快速鉴定和筛查,对于临床上对结核病患者的早期诊断和治疗有着非常重要的临床应用意义。