miR-30a对脂多糖诱导人脐静脉血管内皮细胞自噬的影响

目的探究miR-30a对脂多糖（LPS）诱导人脐静脉血管内皮细胞（HUVEC）自噬的影响及其可能机制。方法以HUVEC为研究对象,分为空白对照组（Control组）、模型组（LPS组）、阴性对照组（转染miR-30a-NC,NC组）和过表达组（转染miR-30a-mimics,mimics组）,采用LPS诱导HUVEC建立炎症模型;采用CCK-8法检测细胞存活率;qRT-PCR法检测miR-30a相对表达量;Westernblot法检测自噬相关蛋白自噬相关基因（Atg3）、p62、自噬蛋白微管相关蛋白1轻链3（LC3）-II和LC3-I表达水平;激光共聚焦显微镜法观察自噬小体形成变化。结果LPS组细胞存活率明显低于Control组,miR-30a相对表达量明显低于Control组,差异均有统计学意义（均P＜0.05）。与Control组比较,LPS组细胞p62蛋白表达水平降低,Atg3蛋白表达水平升高,LC3-II/LC3-I比值升高,差异均有统计学意义（均P＜0.05）。转染miR-30a后,与LPS组比较,mimics组细胞存活率明显升高,miR-30a相对表达量明显上升,差异均有统计学意义（均P＜0.05）。与LPS组比较,mimics组细胞p62表达水平升高,LC3-II/LC3-I比值和Atg3表达水平降低,差异均有统计学意义（均P＜0.05）。与LPS组比较,mimics组细胞胞质内自噬小体显著减少。结论miR-30a能通过抑制自噬减轻LPS诱导HUVEC损伤。     

miR-449a靶向 DLL1调控骨关节炎软骨细胞的凋亡

目的 探讨miR 449a对骨关节炎（OA）软骨细胞凋亡的影响及机制。方法 体外分离培养人正常软骨细胞和OA软骨细胞,采用实时荧光定量PCR检测miR 449a的表达。将体外培养的OA软骨细胞分为miR 449a mimics组（转染miR 449a mimics）、mimics-NC组（转染miR-449a mimics阴性对照）、miR 449a inhibitor组（转染miR-449a-inhibitor）和inhibitor-NC组（转染miR 449a inhibitor阴性对照）4组,采用实时荧光定量PCR检测各组细胞中miR-449a表达,流式细胞仪检测各组细胞凋亡率;采用双荧光素酶报告基因实验检测miR-449a与Delta样配体1(DLL1)的靶向关系,免疫印迹法检测miR-449a对DLL1蛋白表达的影响;通过转染DLL1干扰序列siRNA DLL1和DLL1过表达质粒GFP-DLL1构建DLL1低表达和过表达的OA软骨细胞,观察DLL1对OA软骨细胞凋亡的影响。结果与人正常软骨细胞比较,OA软骨细胞中miR-449a的表达水平明显升高（P＜0.05）。与mimics-NC组比较,miR-449a mimics组细胞中miR 449a表达水平和细胞凋亡率明显升高;而miR-449a inhibitor组细胞中miR-449a的表达水平和细胞凋亡率较inhibitor NC组明显降低（均P＜0.05）。DLL1是miR-449a的潜在靶基因,miR 449a可负向调控DLL1蛋白的表达。DLL1低表达的OA软骨细胞凋亡率较相应对照siRNA-NC组明显升高,而DLL1过表达后OA软骨细胞凋亡率较相应对照GFP组明显降低（P＜0.05）。结论 miR-449a可通过靶向调控DLL1表达促进OA软骨细胞凋亡。     

MicroRNA-92a 对大鼠脊髓损伤后 运动功能恢复的影响

目的 分析microRNA-92a（miR-92a）对脊髓损伤大鼠运动功能恢复的影响及可能的作用机 制。方法 第一步,复制大鼠脊髓损伤模型,将30 只大鼠分为假手术组和脊髓损伤组,筛选目标miRNA。 第二步,分析miR-92a 对脊髓损伤大鼠的影响,将剩余54 只大鼠分为假手术组、对照组（脊髓损伤+miR- 92a mimics negative control）和实验组（脊髓损伤+miR-92a mimics）。采用BBB 评分评估大鼠运动功能, TUNEL 染色检测细胞凋亡,qRT-PCR 和Western blotting 检测相关基因和蛋白的表达,双荧光素酶验证人 第10 号染色体缺失的磷酸酶（PTEN）与miR-92a 的靶向关系。结果 ①脊髓损伤组与假手术组大鼠第1、 3、7、14、21 和28 天的BBB 评分在不同时间、不同组间及变化趋势上有差异（P <0.05）,假手术组BBB 评 分高于脊髓损伤组（P <0.05）。脊髓损伤组与假手术组大鼠细胞凋亡率、Caspase-3、Bax、Bcl-2 比较,差异 有统计学意义（P <0.05）。脊髓损伤组与假手术组大鼠miR-92a、miR-132、miR-128、miR-107、miR- 202、miR-451、miR-17 表达水平比较,差异有统计学意义（P <0.05）。②假手术组、对照组、实验组大鼠 第7、14 和28 天的miR-92a 表达水平在不同时间、不同组间及变化趋势上有差异（P <0.05）,实验组miR- 92a 表达水平最高（P <0.05）。假手术组、对照组、实验组大鼠第1、3、7、14、21 和28 天BBB 评分在不同 时间、不同组间及变化趋势上有差异（P <0.05）,假手术组BBB 评分最高（P <0.05）。3 组大鼠细胞凋亡率、 Caspase-3、Bax、Bcl-2 比较,差异有统计学意义（P <0.05）。③对照组与实验组大鼠PTEN-WT 荧光活性比较, 差异有统计学意义（P <0.05）;两组PTEN-MUT 荧光活性比较,差异无统计学意义（P >0.05）。对照组与实 验组大鼠PTEN mRNA 和蛋白相对表达量比较,差异有统计学意义（P <0.05）。PTEN 与miR-92a 表达水平 呈负相关（P <0.05）。结论 大鼠脊髓损伤后miR-92a 表达下调。过表达miR-92a 可促进大鼠运动功能恢复, 抑制细胞凋亡。     

miR-146a通过调节IPr1基因对结核分枝杆菌感染的AEC Ⅱ型细胞活性作用机制

目的 探讨miR-146a通过调节IPr1基因观察对结核分枝杆菌（Mtb）感染的肺泡II型上皮细胞(AEC II)活性的作用机制。方法 采用Mtb感染AECⅡ细胞。将AECⅡ细胞分为结核组（感染Mtb）、 NC组（模型+转染miR-146a NC）、转染组（模型+转染miR-146a mimics）。RT-PCR检测AECⅡ细胞miR-146a、Ipr1基因表达;CCK8检测AECⅡ细胞增殖;流式细胞仪检测AECⅡ细胞凋亡;双荧光素酶报告测定Ipr1与miR-146a靶向关系。结果 DIO荧光染色的Mtb在感染人AECⅡ细胞12 h内会进入细胞质基质中,并围绕细胞核分布,表明建立的结核分枝杆菌感染模型成功;结核组与NC组AECⅡ细胞中miR-146a、Ipr1基因表达比较无差异（P＞0.05）,与NC组相比,转染组AECⅡ细胞中miR-146a、Ipr1基因表达水平升高（P＜0.05）;结核组与NC组AECⅡ细胞在不同时间点的OD值比较均无差异（P＞0.05）,与NC组相比,转染组AECⅡ细胞在不同时间点的OD值均升高（P＜0.05）;结核组AECⅡ细胞凋亡率与NC组相比无差异（P>0.05）,与NC组相比,转染组AECⅡ细胞凋亡率显著降低（P＜0.001）。双荧光素酶报告结果显示,转染miR-146a后野生型Mtb感染的AECⅡ细胞中Ipr1活性升高（P＜0.05）,突变型Mtb感染的AECⅡ细胞中Ipr1活性无明显变化（P＞0.05）,表明Ipr1是miR-146a的靶基因。结论 过表达的miR-146a可增加Mtb感染的AECⅡ细胞活性,降低凋亡,研究机制认为可能与通过激活Ipr1水平相关。Ipr1是miR-146a靶基因,可通过激活表达而发挥减少Mtb对AECⅡ细胞活性的损伤     

miR-99a对乳腺癌细胞侵袭和迁移的负向调控机制研究

目的探讨miR-99a对乳腺癌细胞侵袭及迁移的影响,并初步分析其影响乳腺癌细胞侵袭及迁移的可能分子机制。方法利用荧光实时定量PCR检测乳腺癌细胞系MDA-MB-231和MCF-7中miR-99a的表达。运用脂质体介导的转染方法分别将miR-99a模拟物（miR-99amimics）、miR-99a抑制物（miR-99ainhibitors）以及相应对照miRNA转染MDA-MB-231和MCF-7细胞,通过Transwell侵袭实验检测细胞的侵袭力;采用Transwell迁移实验及划痕实验检测细胞的迁移能力;利用生物信息学方法预测miR-99a的靶基因,并对靶基因进行验证。结果（1）高转移潜能的MDA-MB-231细胞中miR-99a表达明显低于低转移潜能的MCF-7细胞,划痕实验中转染miR-99amimics的与转染controlmimics的MDA-MB-231细胞比较迁移能力显著减弱（P＜0.05）,而MCF-7细胞转染miR-99ainhibitors后迁移能力明显增强（P＜0.01）。（2）Transwell的侵袭及迁移实验显示,转染miR-99amimics后MDA-MB-231细胞的侵袭和迁移能力明显减弱（P＜0.01）;MCF-7细胞转染miR-99ainhibitors后迁移能力增强（P＜0.01）,而侵袭能力基本不变（P＞0.05）。（3）生物信息学方法预测微管相关蛋白（MTMR3）是miR-99a的靶点,实时定量PCR和3′UTR荧光素酶报告基因实验验证了该靶点。（4）干扰了MTMR3后MDA-MB-231细胞的迁移和侵袭能力明显减弱。结论（1）miR-99a对乳腺癌细胞的侵袭及迁移发挥负向调控作用。（2）miR-99a可能通过靶向于MTMR3发挥其对乳腺癌细胞迁移和侵袭的调控作用。     

miR-26a靶向HMGA1基因对结肠癌细胞生长、侵袭和迁移的影响

目的：探讨miR-26a靶向高迁移率族蛋白1（HMGA1）基因对结肠癌细胞生长、侵袭和迁移的影响,阐明HMGA1基因是否为miR-26a的靶基因。方法：将miR-NC （对照）、miR-26a mimics （模拟物）和miR-26a inhibitor （抑制物）转染人结肠癌SW480细胞作为miR-NC组、miR-26a mimics组和miR-26a inhibitor组。RT-PCR和Western blotting法分别检测各组SW480细胞中HMGA1 mRNA和蛋白表达水平。采用荧光素酶报告基因检测试剂盒检测各组SW480细胞中双荧光素酶活性,以此确定HMGA1是否为miR-26a的靶基因。采用CCK8实验检测各组细胞增殖活力,Transwell小室法检测各组细胞侵袭数和迁移数。结果：HMGA1基因是miR-26a的靶基因。与miR-NC组比较,转染24、48和72 h时miR-26a mimics组SW480细胞增殖活力明显降低（P<0.01）,而miR-26a inhibitor组细胞增殖活力明显升高（P<0.01）。与miR-NC组比较,各时间点miR-26a mimics组和miR-26a mimics+pcDNA3.1-HMGA1组细胞增殖活力、细胞侵袭数和细胞迁移数均降低（P<0.01）,而miR-NC+pcDNA3.1-HMGA1组细胞增殖活力、细胞侵袭数和细胞迁移数均升高（P<0.01）;与miR-26a mimics组比较,各时间点miR-26a mimics+pcDNA3.1-HMGA1组细胞增殖活力、细胞侵袭数和细胞迁移数均升高（P<0.01）;与miR-NC+pcDNA3.1-HMGA1组比较,各时间点miR-26a+pcDNA3.1-HMGA1组细胞增殖活力、细胞侵袭数和细胞迁移数均降低（P<0.01）。结论：HMGA1是miR-26a的靶基因。上调miR-26a表达可抑制人结肠癌SW480细胞增殖,下调miR-26a表达可促进人结肠癌SW480细胞增殖。     

人肝癌HepG2细胞miR-26a对其活性和Wnt信号通路的作用机制

【摘要】 目的 探讨人肝癌HepG2细胞miR-26a对其活性和Wnt信号通路的作用机制。 方法 将人肝癌细胞株HepG2细胞分为肝癌组（无干预的HepG2细胞）、miR-26a组（HepG2细胞转染miR-26aminmics）（模拟物）、miR-26a-NC组（HepG2细胞转染miR-26a-NC）（空转）,多种方法检测HepG2生物活性,免疫印迹和PCR分别检测β-catenin、Wnt3蛋白水平和mRNA表达。结果 miR-26a-NC组与肝癌组HepG2细胞侵袭数量、HepG2细胞迁移率、HepG2细胞凋亡率,两组比较差异无统计学意义(P＞0.05）,miR-26a组HepG2细胞侵袭数量、HepG2细胞迁移率、HepG2细胞凋亡率,与miR-26a NC组相比差异有统计学意义（P＜0.05）;miR-26a-NC组与肝癌组HepG2细胞中β-catenin、Wnt3蛋白水平比较差异无统计学意义(P＞0.05）,miR-26a组HepG2细胞β-catenin、Wnt3蛋白水平与miR-26a-NC组比较差异有统计学意义（P＜0.05）;miR-26a-NC组与肝癌组HepG2细胞中β-catenin、Wnt3mRNA水平比较差异无统计学意义(P＞0.05）,miR-26a组HepG2细胞β-catenin、Wnt3mRNA水平与miR-26a-NC组比较差异有统计学意义（P＜0.05）。结论miR-26a抑制HepG2细胞活性,促使其凋亡,其作用机制可能与抑制β-catenin、Wnt3表达相关。     

MicroRNA-29a 对人正常滋养细胞迁移和侵袭功能的影响及其可能的机制

目的 检测microRNA-29a（miR-29a）在子痫前期孕妇胎盘组织中的表达及其对人正常滋养细 胞系HTR8/Svneo 迁移和侵袭能力的影响及可能的作用机制。方法 收集行剖宫产分娩的30 例子痫前期孕 妇及30 例正常妊娠孕妇的胎盘组织,应用实时聚合酶链反应（real-time PCR）检测胎盘组织miR-29a 的表 达水平。应用生物信息学软件预测miR-29a 的潜在靶基因,选取ITGB 1 作为研究靶基因。将miR-29a 模拟 物（miR-29a mimics）转染人正常滋养细胞系HTR8/Svneo,real-time PCR 检测转染后HTR8/Svneo 细胞中 miR-29a 的表达变化,划痕实验和Transwell 侵袭实验检测转染后HTR8/Svneo 细胞迁移和侵袭能力的变化, Western blot 检测转染后HTR8/Svneo 细胞ITGB1 蛋白的表达变化。结果 real-time PCR 结果显示子痫前 期孕妇胎盘组织中miR-29a 表达水平均较正常妊娠孕妇增高（P <0.05）。人正常滋养细胞系HTR8/Svneo 细 胞转染miR-29a mimics 后,miR-29a 表达水平增高（P <0.05）,ITGB1 蛋白表达水平降低（P <0.05）,划痕 实验和Transwell 侵袭实验显示细胞迁移和侵袭能力降低（P <0.05）。结论 miR-29a 在子痫前期孕妇胎盘组 织中高表达,可能通过调控ITGB1 的表达参与子痫前期的发生发展。     

希望Ⅱ号对被动吸烟小鼠心脏的保护作用

目的 观察希望Ⅱ号对被动吸烟小鼠心脏的保护作用，并探究其作用机制。方法 将72只雄性昆明种小鼠随机分为6组，分别为对照组，模型组，阳性药组，希望Ⅱ号低、中、高剂量组。对照组暴露于实验室空气中，模型组每日暴露于香烟烟雾3 h，持续45 d，至第16天开始给药，第45天处死小鼠，分离心脏。检测心脏丙二醛（malondialdehyde, MDA）含量，总超氧化物歧化酶（total superoxide dismutase, T-SOD）、铜锌超氧化物歧化酶（copper-zinc superoxide dismutase, Cu-ZnSOD）、髓过氧化物酶（myeloperoxidase, MPO）活性。进行心脏组织形态学观察，计算心脏胶原纤维面积比，采用免疫组织化学法检测心脏转化生长因子β1（transforming growth factor beta 1, TGF-β1）表达水平。结果 与对照组比较，模型组Cu-ZnSOD、T-SOD活性显著降低（P＜0.05），MPO活性和MDA含量显著升高（P＜0.05），心肌纤维比显著增加（P＜0.05），心脏TGF-β1表达水平显著升高（P＜0.05）。与模型组比较，希望Ⅱ号低、中、高剂量组Cu-ZnSOD、T-SOD活性显著升高（P＜0.05），MPO活性、MDA含量、心肌纤维比、心脏TGF-β1表达水平显著降低（P＜0.05）。结论 希望Ⅱ号对被动吸烟小鼠心脏的保护作用与调节心脏氧化应激反应有关。     

姜黄素通过miR-181a调控KLF6表达抑制骨肉瘤细胞的生长

目的：探讨姜黄素通过微小RNA-181a(miR-181a)调控锌指蛋白Kruppel样因子6(KLF6)表达对骨肉瘤细胞生长的影响。方法：体外培养骨肉瘤细胞系U2OS细胞,将U2OS细胞分为对照组（不作处理）、姜黄素组（终浓度分别为5, 10, 20μmol/L姜黄素）、miR-181a阴性对照（miR-NC）组、miR-181a模拟物（miR-181a mimics）组、姜黄素（20μmol/L）+NC组、姜黄素（20μmol/L）+miR-181a mimics组,细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法与平板克隆形成实验检测各组U2OS细胞增殖情况;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测miR-181a与KLF6 mRNA表达情况;蛋白印迹分析法检测各组U2OS细胞KLF6、细胞周期蛋白B1(Cyclin B1)、Cyclin D1表达变化;双荧光素酶报告实验验证miR-181a与KLF6的靶向关系。结果：与对照组相比,随着姜黄素浓度升高,U2OS细胞存活率、细胞平板克隆形成率、Cyclin D1、Cyclin B1蛋白、miR-181a表达水平逐渐降低,KLF6表达水平逐渐升高,...     

原花青素对体外阿尔茨海默病的预防作用

目的:研究原花青素(PC)对体外阿尔茨海默病模型(AD)的预防作用。方法:H2O2100μmol/L诱导PC12细胞损伤18 h复制体外阿尔茨海默病模型,原花青素80 mg/L、40 mg/L、20 mg/L、Tempol 800μmol/L于造模前30 min预处理后,双抗体一步夹心法酶联吸附实验(ELISA)检测细胞上清液中硫氧还蛋白(Trx)含量;黄嘌呤氧化酶法检测细胞中的总超氧化物歧化酶(T-SOD)活力;硫代巴比妥酸盐法测定细胞上清液的丙二醛(MDA)。结果:H2O2100μmol/L诱导PC12细胞损伤后,细胞内Trx浓度和T-SOD活力显著降低,MDA含量显著升高(P<0.01);原花青素各剂量组可增高Trx浓度和T-SOD活力,降低MDA含量(P<0.01,P<0.05)。结论:原花青素能减轻H2O2引起PC12细胞的氧化应激损伤。     

银杏酮酯对过氧化氢诱导大鼠乳鼠心肌细胞凋亡的抑制作用

目的探讨银杏酮酯（Ginkgo biloba extract 50,GBE50）对过氧化氢诱导的大鼠乳鼠心肌细胞凋亡的抑制作用。方法利用体外培养模型,以过氧化氢0．2mmol·L^-1诱导心肌细胞损伤。乳大鼠心肌细胞分为正常对照组、过氧化氢组、过氧化氢＋银杏酮酯0．2mg·mL^-1组。用MTT法检测心肌细胞存活率;Western Blot方法检测Bcl-2、Bax和Caspase-3的蛋白表达水平。结果与正常对照组相比,过氧化氢组使心肌细胞的存活率显著降低（P〈0．01）,Bcl-2的蛋白表达水平明显降低（P〈0．01）,而Bax和Caspase-3蛋白表达水平显著增加（P〈0．01）,Bcl-2／Bax的比率降低（P〈0．01）;与过氧化氢组相比,过氧化氢＋银杏酮酯组中,心肌细胞的存活率升高显著（P〈0．01）,银杏酮酯使Bcl-2的蛋白表达水平明显升高,Bax和Caspase-3的蛋白表达水平明显降低（P〈0．01）,Bcl-2／Bax的比率升高（P〈0．01）。结论银杏酮酯对过氧化氢诱导的乳大鼠心肌细胞凋亡具有抑制作用。     

枸杞多糖对过氧化氢诱导人主动脉平滑肌细胞损伤的保护作用

目的研究枸杞多糖(LBP)对过氧化氢(H2O2)诱导的人主动脉平滑肌细胞(HASMC)损伤模型的保护作用。方法对HASMC进行传代培养,将生长良好的HASMC分为8组,正常对照组加入磷酸盐缓冲液(PBS),药媒对照组给予50 mg·L-1的LBP,模型组给予200μmol·L-1的H2O2,洛伐他汀组给予200μmol·L-1的H2O2+1μmol·L-1洛伐他汀,脂必妥组给予200μmol·L-1的H2O2+50 mg·L-1脂必妥,低剂量LBP组给予200μmol·L-1的H2O2+25 mg·L-1的LBP,中剂量LBP组给予200μmol·L-1的H2O2+50 mg·L-1的LBP,高剂量LBP组给予200μmol·L-1的H2O2+100 mg·L-1的LBP。采用3,3'-[1-(苯胺酸基)-3,4-四氮唑]-二(4-甲氧基-6-硝基)苯横酸钠法检测细胞增殖,生物化学法检测细胞培养液中丙二醛(MDA)水平及超氧化物歧化酶(SOD)活性,酶联免疫吸附试验检测HASMC上清液中细胞因子水平。结果正常对照组,药媒对照组,模型组,洛伐他汀组,脂必妥组,低、中、高剂量LBP组HASMC活细胞比例分别为84.2%、82.6%、21.3%、52.7%、57.2%、27.4%、42.1%、57.6%,中、高剂量LBP组与模型组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。模型组,洛伐他汀组,脂必妥组,低、中、高剂量LBP组光密度(OD)值、白细胞介素-1(IL-1)、IL-6、组织金属蛋白酶-2(TIMP-2)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、核转录因子-κB(NF-κB)、MDA、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)、血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)水平和SOD活性与正常对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05);药媒对照组,洛伐他汀组,脂必妥组,低、中、高剂量LBP组OD值、IL-1、IL-6、TIMP-2、MMP-2、NF-κB、MDA、ICAM-1、VCAM-1水平和SOD活性与模型组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。低、中、高剂量LBP组OD值、IL-1、IL-6、TIMP-2、MMP-2、NF-κB、MDA、ICAM-1、VCAM-1水平和SOD活性与洛伐他汀组比较差异均有统计学意义(P<0.05);低、中剂量LBP组以上各指标与脂必妥组比较差异有统计学意义(P<0.05);不同剂量LBP组之间以上各指标两两比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 LBP能有效发挥抗炎、抗氧化作用,显著抑制HASMC增殖、迁移,在动脉粥样硬化疾病的治疗方面具有重要价值。     

miRNA-34a对无血清培养诱导心肌细胞凋亡的影响及机制研究

目的：探讨miRNA-34a（miR-34a）对无血清培养诱导的大鼠心肌细胞凋亡及B淋巴细胞瘤-2基因（Bcl-2）表达水平的影响。方法体外培养大鼠心肌细胞H9C2,实验分实验组（转染miR-34a inhibitor）、空白对照组（无转染miR inhibitor）和阴性对照组（转染随机合成NC microRNA片段）。转染24h后无血清培养饥饿诱导细胞凋亡,Western bolt法检测Caspase-3及Bcl-2的表达。结果实验组细胞Caspase-3表达低于空白对照组和阴性对照组（P＜0.05）。Bcl-2表达明显高于空白对照组和阴性对照组（P＜0.05）。结论转染miR-34a inhibitor可以下调miR-34a的表达,减少无血清培养诱导H9C2细胞的凋亡,Bcl-2的表达增加可能参与了其保护机制。     

蒿芩清胆汤对流感病毒性肺炎湿热证模型小鼠免疫损伤的影响

目的:通过模拟岭南湿热复合因素造模实现流感病毒性肺炎湿热证模型的构建,并观察蒿芩清胆汤对模型小鼠T淋巴细胞亚群及Th1/Th2细胞因子水平的影响。方法:将4周龄BALB/c小鼠按体质量随机分为正常对照组(A)、单纯病毒感染组(B)、湿热证模型组(C)、蒿芩清胆汤组(D)和阳性药物组(E)。A、B两组均给予普通饲料喂养14 d,B组于第11天滴鼻感染病毒1次。C、D、E组均给予高脂饲料喂养14d,同时连续10 d气候箱暴露,6 h/d,第11天滴鼻感染病毒1次,感染病毒后不再置入气候箱。D、E组分别于病毒感染后2 h开始灌胃给药,每日1次,连续4 d。D组每日灌胃蒿芩清胆汤水煎浓缩液0.4 ml;E组按70 mg.kg-1.d-1剂量灌胃给予利巴韦林溶液0.4 ml;其余各组均同时以灌胃等量生理盐水。连续干预14 d后,处死小鼠眼球取血,检测各组小鼠T淋巴细胞亚群及Th1/Th2细胞因子的水平。结果:①与A组相比,B、C组CD3+CD4+T淋巴细胞水平明显降低(P<0.05),CD3+CD8+T淋巴细胞水平明显升高(P<0.05),CD3+CD4+/CD3+CD8+值显著降低(P<0.05);与C组相比,E组CD3+CD8+T淋巴细胞水平明显降低(P<0.01),D、E组CD3+CD4+/CD3+CD8+值明显升高(P<0.05或P<0.01)。②与A组相比,B、C组血清IFN-γ水平明显升高(P<0.01),IFN-γ/IL-4值亦明显升高(P<0.05);与C组相比,E组IFN-γ/IL-4值明显降低(P<0.05)。结论:蒿芩清胆汤对流感病毒性肺炎湿热证模型小鼠具有多靶点的免疫炎症调节作用。     

苦参碱对常氧及低氧下人肺成纤维细胞增殖、结缔组织生长因子和低氧诱导因子1α表达的影响

目的研究不同浓度苦参碱对常氧及低氧下人肺成纤维细胞株MRC-5的增殖及结缔组织生长因子(CTGF)、低氧诱导因子1α(HIF-1α)表达的影响。方法采用MRC-5常规体外培养传代,细胞培养至80%融合时,将细胞分组,分别在常氧(21%O2,74%N2,5%CO2)及低氧(1%O2,94%N2,5%CO2)下采用不同浓度苦参碱(终浓度0～3.2mmol/L)干预24h。按培养条件不同分为8组:常氧组(N0组)、常氧+苦参碱0.2mmol/L组(N0.2组)、常氧+苦参碱0.4mmol/L组(N0.4组)、常氧+苦参碱0.8mmol/L组(N0.8组)、低氧组(H0组)、低氧+苦参碱0.2mmol/L组(H0.2组)、低氧+苦参碱0.4mmol/L组(H0.4组)和低氧+苦参碱0.8mmol/L组(H0.8组)。采用四氮甲基唑蓝比色法(MTT法)检测细胞活性,采用Westernblot法检测细胞CTGF、HIF-1α蛋白表达情况。结果低氧对各组细胞增殖有促进作用(P0.05);苦参碱对常氧及低氧下细胞增殖有抑制作用(P0.05),具有浓度依赖性。CTGF、HIF-1α在常氧下有低水平表达,低氧下表达明显增强(P0.01);苦参碱对常氧及低氧下CTGF、HIF-1α的表达均有抑制作用(P0.05)。结论苦参碱对常氧及低氧下培养的MRC-5细胞增殖有抑制作用,对细胞CTGF和HIF-1α表达有抑制作用,且具有一定浓度依赖性。     

ERK1/2信号通路介导丙泊酚对 H2O2诱发的心肌细胞损伤保护作用

目的：研究丙泊酚对 H2 O2诱发的心肌细胞损伤的保护作用及其作用机制。方法采用胰酶消化法获取大鼠胎鼠心肌细胞,以 H2 O2损伤心肌细胞获得心肌缺血再灌注损伤实验模型;加入不同浓度丙泊酚（12.5、25、50μmol·L -1）,MTT 法检测细胞存活率;用硫代巴比妥酸法、黄嘌呤氧化酶法分别测定各组细胞培养液中丙二醛（MDA）含量及超氧化物歧化酶（SOD）活性;流式细胞术检测细胞凋亡水平;Western blotting 检测细胞中 ERK1/2、Bcl -2及 Bax 的表达。结果丙泊酚（12.5、25、50μmol·L -1）能抑制由 H2 O2导致的细胞死亡（P 〈0.01）;减少MDA 的产生（P 〈0.01）,提高 SOD 活性（P 〈0.01）;25、50μmol·L -1丙泊酚能抑制由 H2 O2导致的细胞凋亡（P 〈0.05）;25μmol·L -1丙泊酚作用于细胞后能激活 ERK1/2磷酸化,增加 Bcl -2且减少 Bax 的表达。结论丙泊酚通过激活 ERK1/2磷酸化对 H2 O2诱发的心肌细胞损伤起到保护作用。     

参麦注射液对大鼠肢体缺血再灌注损伤保护作用的实验研究

目的探讨参麦注射液对大鼠肢体缺血再灌注损伤的保护机制。方法30只SD大鼠随机分为3组,每组10只：缺血再灌注对照组（对照组）、缺血再灌注参麦组（参麦组）采用扎闭股动、静脉缺血4h,开放再灌注1h制造缺血再灌注模型,并分别于再灌注即刻给予09％氯化钠注射液、参麦注射液4ml／kg腹腔注射;假手术组不结扎股动静脉,4h后给予0．9％氯化钠注射液4ml／kg腹腔注射。腹主动脉取血,予以抗凝离心取上清液,测定总超氧化物歧化酶（T—SOD）活性及丙二醛（MDA）、一氧化氮（NO）、内皮素-1（ET-1）含量。结果与假手术组比较,对照组T—SOD活性降低,MDA含量升高（P〈001）。参麦组T—SOD活性较对照组升高,MDA含量降低,NO及ET-1含量降低（均P〈0．01）,而NO／ET-1增大（P〈001）。结论参麦注射液可减少骨骼肌缺血再灌注损伤后大鼠机体自由基生成,提高自由基清除酶活性,改善再灌注损伤血管内皮功能紊乱,对缺血再灌注损伤有一定的防治作用。     

左卡尼汀DN液体外抗氧化活性

目的观察左卡尼汀体外清除自由基、抗氧化活性。方法超氧阴离子（O2^-）由黄嘌呤（X）与黄嘌呤氧化酶（XOD）反应体系产生,羟自由基（·OH）由Fenton反应体系产生,观察不同浓度下左卡尼汀口服液产生超氧阴离子自由基（O2^-）和羟自由基（·OH）的能力;测定H2O2诱导大鼠红细胞氧化溶血及对EDTANa2-Fe^2＋-H2O2系统所产羟自由基诱生的大鼠红细胞膜丙二醛（MDA）含量的影响来观察左卡尼汀的生物活性。结果分别在10-100g/L及1-100g/L浓度范围内,左卡尼汀口服液产生超氧阴离子自由基和羟自由基的能力随浓度降低而增加且与稀释倍数呈良好的线性关系,直线回归方程分别为Y=14．0652＋24.9066X（O2^-）与Y=34．2673＋38.0382X（·OH）,相关系数（r）分别为0．9830（O2^-）和0．9969（·OH）;在10—100g／L浓度范围内,显著抑制H2O2诱导的大鼠红细胞氧化性溶血并显著降低大鼠红细胞膜丙二醛含量,且抑制能力与浓度呈良好的性关系,直线回归方程分别为Y=23.5309＋0．293X与Y=-0．6978＋0．8971X,r分别为0.9811和0．9998。结论左卡尼汀具清除自由基及抗脂质过氧化的作用。     

绝经过渡期患者性激素代谢紊乱与调节性T细胞的关系

目的从T细胞免疫角度探讨绝经过渡期（MTP）患者激素代谢紊乱与CD4＋CD25＋调节性T细胞（Treg）的关系。方法收集35例MTP患者外周血,采用流式细胞术检测Treg及其细胞因子转化生长因子β1（TGF—β1）及白介素10（IL-10）频率;采用放射免疫法检测性雌二醇（E2）、孕酮（P）及催乳素（PRL）含量;以35例健康女性作为对照组。采用Pearson法分析以上两者之间的相关性。结果与对照组比较,MTP患者Treg及其胞内TGF-β1、IL-10明显升高（P〈0．05）,而E2及T降低（P〈0．05）,但PRL患者升高（P〈0．05）。相关性分析显示Treg、TGF-β1及IL-10三者均与E2及P呈显著负相关性（P〈0．05）,与PRL呈正相关性（P〈0．05）。结论外周血Treg、TGF-β1及IL-10升高是MTP患者的-个重要细胞免疫学表现,并且与性激素代谢异常存在重要关联。