秋泻灵合剂抗轮状病毒活性的体外试验

目的:研究秋泻灵合剂的体外抗轮状病毒活性及其作用机制。方法:采用体外细胞培养法培养恒河猴MA104细胞, 用人轮状病毒Wa A群感染细胞,通过ELISA法对病毒进行滴定,用于评价细胞生长、病毒繁殖情况,确定细胞受感染程度。结果:秋泻灵处理组与病毒组细胞相比,生长出现明显差异(P<0．05)。结论:秋泻灵合剂对轮状病毒感染有预防、治疗和中和病毒活性的的作用。     

痰热清抗呼吸道合胞病毒作用体外实验研究

目的研究中草药注射液痰热清对呼吸道合胞病毒(RSV、Long株)的抑制作用。方法以病毒唑为阳性对照药,采用细胞培养技术,观察不同药物浓度及不同给药方式下RSV攻击后各组Hep-2细胞的病变效应(CPE),在此基础上采用MTT比色法,测定各组细胞的病毒抑制率。以CPE法计算药物的半数中毒浓度TC50,分别以CPE法及MTT法计算药物的半数有效浓度EC50及治疗指数TI,比较不同药物浓度及不同给药方式下热毒宁对呼吸道合胞病毒(RSV)的抑制作用效果。结果痰热清注射液半数中毒浓度TC50为3.972g/L,预防给药方式、细胞外直接灭活及治疗给药方式均有抗RSV作用,其抗RSV的半数有效浓度(EC50)分别为0.428/1.160/1.189g/L,治疗指数TI分别是9.28、3.42和3.34,痰热清对RSV的抑制作用存在着明显的量效反应关系。结论痰热清对RSV有直接灭活作用,对RSV侵入Hep-2细胞有阻断作用,对RSV在Hep-2细胞内增殖有抑制作用,相同浓度下,以预防作用更显著。     

热毒宁对流感病毒FM_1的抑制作用

目的:研究中草药热毒宁注射液对流感病毒FM_1的抑制作用。方法:以利巴韦林为阳性对照药,采用细胞培养技术及四氮唑蓝(MTT)比色法,观察在热毒宁干预下,受FM_1感染的犬肾传代细胞(MDCK细胞)的病变效应(CPE)及光密度值(D),计算各组细胞的病毒抑制率。比较不同药物剂量及3种不同给药方式(预防给药、直接灭活及治疗给药)下热毒宁对流感病毒FM_1的抑制作用。结果:热毒宁注射液半数中毒浓度(TC_(50))为10.11g·L~(-1)。预防给药、直接灭活及治疗给药方式下,CPE法测得其抗流感病毒FM_1的半数有效浓度(EC_(50))分别为0.625、0.725、0.629 g·L~(-1),治疗指数(TI)分别为16.17、13.94、16.07;MTT比色法测得其抗流感病毒FM_1的EC_(50)分别为1.135、0.770、0.661 g·L~(-1),TI分别为8.91、13.12和15.29。3种方式给药,MTT法测定时,热毒宁对流感病毒FM_1的抑制作用无差异;CPE法测定时,热毒宁浓度在0.812 51 g·L~(-1)及以上对流感病毒FM_1的抑制作用无差异。结论:热毒宁对流感病毒FM_1有直接灭活及抑制增殖作用,对其感染靶细胞有阻断作用,且呈明显量效关系。     

中药香囊挥发油对呼吸道合胞病毒抑制作用研究

目的：研究中药香囊复方的抗呼吸道合胞病毒能力。方法：本实验用MTT法测定体外细胞培养环境该中药香囊挥发油对呼吸道合胞病毒毒细胞作用的抑制能力。结果：中药香囊挥发油提取液对呼吸道合胞病毒毒力的半数抑制浓度为5.97g/L,12.5g/L的香囊挥发油提取液的病毒抑制率为91.4%。结论：中药香囊挥发油具有较好的抗呼吸道合胞病毒能力。     

穿心莲内酯磺化物体外抗流感病毒药效学研究

目的探讨穿心莲内酯磺化物（andrographolide sulfonated,ADS）体外对甲型流感病毒H1N1、H3N2以及乙型流感病毒（B）的抑制作用及最佳浓度。方法采用细胞病变观察法（CPE）、四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法,观察药物对狗肾传代细胞（MDCK）的毒性作用,计算半数有毒浓度（TC50）和最大无毒浓度（TC0）;3种流感病毒分别接种于MDCK,观察不同浓度的药物对病毒致CPE的影响,测定药物对病毒的增殖抑制率,Probit回归法计算药物的半数有效浓度（EC50）和治疗指数（TI）;红细胞血凝素滴定法测定ADS对流感病毒血凝素抑制作用。结果 CPE、MTT法测得ADS对MDCK的TC0≤0.781 3 mg.mL-1,TC50为2.280 8 mg.mL-1。ADS对H1N1、H3N2、B流感病毒的EC50分别为0.072 6、0.152 7、0.158 5 mg.mL-1,TI分别为31.42、14.93、14.39,此外ADS对不同流感病毒血凝素抑制作用,最低抑制浓度分别为0.048 9、0.097 8、0.097 8 mg.mL-1,且呈现出量效关系。结论 ADS体外抗H1N1、H3N2以及B型流感病毒感染作用,可能是通过药物抑制流感病毒表面的血凝素的活性而实现的。     

异叶青兰提取物抗病毒作用及挥发油成分分析

目的:探讨藏药异叶青兰挥发油、石油醚提取物、乙酸乙酯提取物、正丁醇提取物、水提取物抗腺病毒(ADV)、流感甲型病毒A/汉防/359/95(H3N2)及单纯疱疹病毒II型(HSV-2)的作用。方法:细胞病变法测定提取物的半数有毒浓度及对病毒的半数效应浓度,以治疗系数(TI)为指标评价药效。采用气相色谱-质谱联用分析挥发油成分。结果:石油醚提取物抗A/汉防/359/95(TI=12.99)、抗单纯疱疹病毒II(TI=6.48)活性最强。挥发油抗腺病毒(TI=7.77)活性最强。挥发油对单纯疱疹病毒II型有较强的直接灭活作用(TI=3.1)。挥发油主要成分为桉油精(22.18%),桃金娘烯醇(11.28%),顺式松油醇(11.11%)等。结论:异叶青兰挥发油、石油醚提取物、乙酸乙酯提取物、正丁醇提取物、水提取物具有一定的抗腺病毒、流感甲型病毒A/汉防/359/95(H3N2)及单纯疱疹病毒II型的作用。     

牛轮状病毒受体溶解方法的研究

病毒通过与细胞膜病毒受体的吸附而对细胞发生感染,进而穿入细胞,复制子代病毒。猴肾细胞MA104株可被轮状病毒感染,因其细胞膜上有该病毒受体。目前对轮状病毒与其受体相互作用的分子机制、受体的分子结构仍不明确,因此,受体的提纯是对以上问题研究的关键。如何将受体从细胞膜溶解出来,是提纯受体遇到的第一个问题。本文利用MA104细胞对牛轮状病毒(BRV)受体的溶解方法进行探讨,也为其它病毒受体的研究奠定基础。     

天然(口山)酮化合物抗柯萨奇病毒B_5的作用

目的 研究天然咄酮类化合物抗柯萨奇病毒B_5(CVB_5)的作用及其机理.方法 通过改变给药途径,观察病毒引起的细胞病变效应(CPE),MTT法检测细胞活性,评价酮化合物在Hep-2细胞培养中的抗CVB_5作用.结果 酮具有抗CVB_5的活性,对Hep-2细胞的TC_(50)为54.44 μg·mL~(-1),其EC_(50)分别为26.378、25.813、25.405 μg·mL~(-1),治疗指数(TI)分别为2.064、2.109、2.143;在32 μg·mL~(-1)时,对CVB_5的抑制率达50%.结论 酮化合物通过直接杀灭病毒、阻止病毒的吸附、抑制病毒的生物合成而发挥其抗CVB_5的作用;但需对结构做进一步的修饰,以降低其毒性.     

应用细胞模型初筛抗人免疫缺陷病毒药物

目的探讨采用已建立的细胞模型初筛抗人免疫缺陷病毒(HIV)药物的可靠性。方法以齐多夫定为阳性对照,使用HIV-1急性感染系统(MT-4/HIV-1ⅢB)、HIV-1耐药性毒株系统(MT-4/3TC耐药株)、HIV-1慢性感染系统(H9/HIV-1ⅢB)和HIV-1临床分离株感染系统(PBMC/HIV-1GX02),分别测定药物的细胞毒性和抗HIV-1活性,计算药物的半数细胞毒性浓度(TC50)、半抑制浓度(IC50)和治疗指数(TI)。同时对4种药物DPC961、牛膝多糖、艾乃吉1号和痰热清注射液进行了抗HIV活性检测。结果测定了齐多夫定在4种细胞-病毒系统的TC50,IC50和TI与文献报道相近。DPC961在4种细胞/病毒培养系统的TI分别为979,5348,3912和2745;牛膝多糖分别为323,223,2777和173;艾乃吉1号仅在MT-4/HIV-1ⅢB模型上T1为2.6。结论使用本细胞模型通过检测药物的TC50,IC50及TI进行药物初筛是可靠的。药物DPC961、牛膝多糖和艾乃吉Ⅰ号具有不同程度的体外抗HIV-1活性,痰热清注射液未检测到抗HIV-1活性。     

甲基丙烯酰紫草素的抗肿瘤作用及其机制的研究

目的 研究甲基丙烯酰紫草素(MA)在体内外的抗肿瘤作用,并探讨其作用机制.方法 用MTT法和生长曲线法研究不同浓度的MA对SGC-7901细胞的生长抑制作用;应用S180荷瘤小鼠模型进行其体内抗瘤实验;免疫组化法检测凋亡相关蛋白NF-κB p50的表达.结果 MA对SGC-7901细胞具有抑制作用,且呈明显的量效和时效关系,其IC50=14.12±1.83 mg·L-1;0.375、0.750、1.500 mg·kg-1的MA对小鼠移植性肉瘤S180的抑制率分别为25.00%、41.20%、61.11%,呈剂量依赖性;随着MA浓度的增大,NF-κB p50蛋白的表达下调.结论 MA具有较好的体内外抗肿瘤作用,可能与诱导细胞凋亡和抑制NF-κB p5O的活性有关.     

18β-Glycyrrhetinic acid inhibits the apoptosis of cells infected with rotavirus SA11 via the Fas/FasL pathway

Context18β-Glycyrrhetinic acid (18β-GA), a pentacyclic triterpenoid saponin metabolite of glycyrrhizin, exhibits several biological activities.ObjectiveWe investigated the effects of 18β-GA on MA104 cells infected with rotavirus (RV) and its potential mechanism of action.Materials and methodsCell Counting Kit-8 was used to assess tissue culture infective dose 50 (TCID₅₀) and 50% cellular cytotoxicity (CC₅₀) concentration. MA104 cells infected with RV SA11 were treated with 18β-GA (1, 2, 4, and 8 μg/mL, respectively). Cytopathic effects were observed. The virus inhibition rate, concentration for 50% of maximal effect (EC₅₀), and selection index (SI) were calculated. Cell cycle, cell apoptosis, and mRNA and protein expression related to the Fas/FasL pathway were detected.ResultsTCID₅₀ of RV SA11 was 10^−4.47/100 µL; the CC₅₀ of 18β-GA on MA104 cells was 86.92 µg/mL. 18β-GA showed significant antiviral activity; EC₅₀ was 3.14 μg/mL, and SI was 27.68. The ratio of MA104 cells infected with RV SA11 in the G0/G1 phase and the G2/M phase decreased and increased, respectively, after 18β-GA treatment. 18β-GA significantly induced apoptosis in the infected cells. Furthermore, after 18β-GA treatment, the mRNA and protein expression levels of Fas, FasL, caspase 3, and Bcl-2 decreased, whereas the expression levels of Bax increased.Discussion and conclusionsThe study demonstrates that 18β-GA may be a promising candidate for the treatment of RV SA11 infection and provides theoretical support for the clinical development of glycyrrhizic acid compounds for the treatment of RV infection.     

洋葱挥发油抗肿瘤作用的实验研究

目的:研究洋葱挥发油离体对人肝癌细胞株(QCY-7703)、人胃癌细胞株(MGC-803)、人宫颈癌细胞株(Hela)、人肺腺癌细胞株(SPC-A-1)的增殖抑制作用和在体对小鼠肉瘤S180及小鼠艾氏腹水癌的抑制作用。方法:采用MTT法检测不同剂量的洋葱挥发油对4种肿瘤细胞增殖的影响,复制小鼠肉瘤S180和小鼠艾氏腹水癌模型,检测不同剂量(1000、500、250mg·kg-1)的洋葱挥发油对小鼠肿瘤的抑制作用,比较其抑制率。结果:洋葱挥发油离体和在体实验中对肿瘤细胞均具有较强的增殖抑制作用。结论:洋葱挥发油能抑制多种肿瘤细胞的增殖,对肿瘤细胞有明显的细胞毒性作用。     

艾叶不同组分发挥镇痛作用的安全范围研究

目的明确艾叶发挥镇痛作用的物质基础和剂量范围,确定相应的安全范围,为临床用药提供依据。方法采用热板法进行艾叶水提组分和挥发油小鼠镇痛作用考察,采用经典的急性毒性方法进行小鼠毒性数据考察,并通过Bliss法计算相关指标。结果艾叶水提组分和挥发油发挥镇痛作用的的半数有效量(ED50)分别为2.0978 g.kg-1.d-1、0.302 mL.kg-1.d-(1折合生药量为39.7 g.kg-1.d-1)ED5095%可信区间为(1.5555~2.7917)g.kg-1.d-1、(0.213~0.429)mL.kg-1.d-1折合生药量为(28.0~56.4)g.kg-1.d-1。艾叶水提组分小鼠镇痛作用的治疗指数(TI)为38.2、安全系数(SF)为10.9,其ED95和LD5分别相当于药典规定的人日用量的46.40和505.60倍。艾叶挥发油的TI为5.53、SF为1.06,其ED95和LD5分别相当于药典规定的人日用量的1086.70和1151.60倍。结论艾叶水提组分和挥发油均是其镇痛物质基础,发挥镇痛作用的剂量范围分别为(1.5555~2.7917)g.kg-1.d-1、(28.0~56.5)g.kg-1.d-1,明确了水提组分较挥发油对小鼠热刺激的反应更灵敏,治疗效果更佳,挥发油较水提组分安全范围较窄、安全性低。     

柴胡桂枝汤挥发油的GC-MS分析及对人肺腺癌A549细胞体外增殖的抑制作用研究

目的:研究复方柴胡桂枝汤挥发油的组成成分,并评价其对人肺腺癌A549细胞体外增殖的抑制作用。方法:根据2015年版《中国药典》(四部)通则2204挥发油测定法中甲法提取柴胡桂枝汤中的挥发油。采用气相色谱-质谱联用法(GC-MS)结合Kováts指数分析其挥发油成分,并采用峰面积归一化法计算各成分的相对含量。以不同质量浓度顺铂(4、8、16、32、64 mg/L)为阳性对照,采用MTT法检测不同质量浓度柴胡桂枝汤挥发油(25、50、100、200、400 mg/L)作用48 h后对A549细胞体外增殖的抑制作用;另设阴性对照组(加细胞但不加药物)。结果:从挥发油中共分离出71个成分,鉴定出其中59个成分,其峰面积之和占总峰面积的84.99%。其中,相对含量较高的成分为芳姜黄烯(17.65%)、β-甜没药烯(9.57%)、β-罗勒烯(7.05%)、α-姜黄烯(5.35%)、2,5-二甲基苯甲醛(4.24%)、异丁酸芳樟酯(2.70%)、α-雪松烯(2.48%)、δ-杜松烯(2.07%)。与阴性对照组比较,4~64 mg/L顺铂组和25~400 mg/L柴胡桂枝汤挥发油组细胞的增殖率均显著降低(P<0.05);顺铂和柴胡桂枝汤挥发油对A549细胞体外增殖的半数抑制浓度分别为10.150、73.526 mg/L。结论:柴胡桂枝汤挥发油中主要以芳姜黄烯、β-甜没药烯、β-罗勒烯、α-姜黄烯等成分为主,其对A549细胞的体外增殖具有一定的抑制作用。     

GC-MS法分析肿节风茎和叶中挥发油化学成分

目的:分析肿节风茎和叶中挥发油的主要化学成分。方法:采用水蒸气蒸馏法分别对肿节风的茎和叶进行提取,将提取物的化学成分经气相色谱-质谱(GC-MS)法进行分离鉴定;用归一化法计算各组分的相对百分含量。结果:共从肿节风茎挥发油中鉴定出29种化合物,其含量占总挥发油的75.88%;从肿节风叶挥发油中鉴定出64种化合物,其含量占总挥发油的87.98%。结论:肿节风茎和叶中挥发油成分的最大区别在于低分子量化学成分的含量不同,茎挥发油中几乎不含此类成分。本研究所获数据可为肿节风的进一步开发提供科学依据。     

In vitro antiviral activity of marine sponges collected off Brazilian coast

This paper describes the in vitro antiviral evaluation of 27 different marine sponges (Porifera) collected off Brazilian coastline in the search for novel drug leads. With these sponges aqueous and organic extracts were prepared and tested for anti-herpetic (HSV-1, KOS strain), anti-adenovirus (human AdV serotype 5) and anti-rotavirus (simian RV SA11) activities. The evaluation of the cytotoxicity and potential antiviral activity of these extracts were performed by using MTT assay. Results were expressed as 50% cytotoxicity (CC50) and 50% effective (EC50) concentrations, respectively, in order to calculate the selectivity indices (SI=CC50/EC50) of each extract. From the 40 sponge extracts tested, 17 extracts showed antiviral action in different degrees. The results concerning the antiviral activity were obtained by using three different strategies: (1) simultaneous assay, when sponge extracts were added to the cells at the same time of the viruses; (2) pre treatment assay, when sponge extracts were added to the cells 15 h prior to the viruses infection; and (3) post treatment assay, when the viruses were added to the cells and remained during 2 h prior to the addition of sponge extracts. The antiviral assays with HSV-1/KOS and AdV-5 showed more promising results when the pre treatment test was employed. In relation to the RV-SA11 virus, only the simultaneous assay showed antiviral activity. The extracts presenting the most promising results were the aqueous extracts of Cliona sp., Agelas sp.2, Tethya sp., Axinella aff corrugata, Polymastia janeirensis and Protosuberites sp., and these extracts deserve special attention in further studies.     

超临界CO_2萃取紫苏叶挥发油及其成分分析

目的:采用超临界流体萃取技术提取紫苏叶挥发油,并用GC-MS对挥发油进行化学成分分析。方法:通过单因素实验和正交实验法确定超临界CO2流体萃取紫苏叶挥发油的最佳条件,考察萃取压力、温度、动态萃取时间及CO2流量对挥发油得率的影响;利用GC-MS分析最佳萃取条件下所得挥发油的化学成分,面积归一化法测定其百分含量。结果:紫苏叶超临界CO2萃取最佳条件为:萃取压力20 MPa,温度35℃,萃取时间150 min,CO2流量10 kg.h-1;挥发油的得率3.2%,从中鉴定出了16个化合物,其含量占出峰物质总量的97.68%。结论:紫苏叶挥发油中富含醚、萜类化合物、酯、酮和醇等组分。     

吴茱萸不同组分镇痛作用及安全范围研究

目的研究吴茱萸不同组分发挥镇痛作用的治疗指数和安全范围。方法采用经典的急性毒性试验方法,进行吴茱萸不同组分的急性致死量试验;采用经典的小鼠热板法,进行吴茱萸不同组分的镇痛药效实验。采用Bliss法,计算各组分的急性毒性试验的LD50和LD5以及发挥镇痛药效的ED50和ED95,求得不同组分发挥镇痛作用的治疗指数(TI),安全系数(SF)。结果吴茱萸挥发油LD50值为2.6995mL.kg-.1d-1,LD5值为1.9853m.lkg-.1d-1;ED50值为0.4625mL.kg-.1d-1,ED95值为0.9996 mL.kg-.1d-1;计算得TI为5.837,SF为1.986。吴茱萸水提组分无法作出LD50,MTD试验结果按含生药量计算为80.0 g.kg-.1d-1;ED50值为1.3515 g.kg-1.d-1,ED95值为4.3435 g.kg-1.d-1。结论吴茱萸水提组分和挥发油组分均有一定的镇痛作用,并呈现一定的量效关系,且吴茱萸水提组分发挥镇痛作用的安全范围大于挥发油组分。     

朱砂七总蒽醌体外抗单纯疱疹病毒的研究

目的研究朱砂七总蒽醌(ZSQ)体外对单纯疱疹病毒的抑制作用。方法运用单纯疱疹病毒I型(HSV-Ⅰ)和Ⅱ型(HSV-Ⅱ),以非洲绿猴肾细胞(Vero细胞)为宿主细胞,通过观察感染病毒后的细胞变性反应(CPE)和MTI比色法,检测ZSQ对单纯疱疹病毒的抑制作用。结果与病毒对照组相比,朱砂七总蒽醌各质量浓度组均能有效地保护感染HSV-I和HSV-Ⅱ病毒的Vero细胞,抑制单纯疱疹病毒的复制,使病毒导致的细胞病变减弱。ZSQ抗HSV-I病毒作用IC50为0.004 7g.L-1,抗病毒有效率达90.83%,治疗指数(TI)为16.62;总蒽醌抗HSV-Ⅱ病毒作用IC50为0.006 7g.L-1,抗病毒有效率达90.06%,治疗指数(TI)为11.66。结论 ZSQ在体外显示出明显的保护宿主细胞、抵抗单纯疱疹病毒感染的活性。