microRNAs与胰腺癌的研究进展

胰腺癌是恶性程度较高的肿瘤,早期诊断困难。microRNAs（miRNAs）由19～23个核苷酸所组成的小分子单链RNA。miRNAs属基因负调控因子,可在转录后水平调控靶基因的表达,从而影响肿瘤细胞的发育、分化和凋亡等。近年研究发现,胰腺癌组织、细胞株、癌前病变和血浆中均存在miRNAs表达谱异常,提示miRNAs可能在胰腺癌发生和发展机制的研究、诊断、治疗和预后判断中具有一定应用价值。本文就相关研究进展作一综述。     

粪便Alu序列的检测在胰腺癌诊断中的价值

目的 检测胰腺癌患者粪便Alu序列表达量,探讨其对胰腺癌的诊断价值.方法 收集41例胰腺癌、27例慢性胰腺炎及23例健康者的粪便样本,采用酚-氯仿方法抽提粪便中基因组DNA,应用实时定量PCR方法检测Alu重复序列的表达量.结果 胰腺癌、慢性胰腺炎、正常健康者粪便Alu重复序列表达量分别为(5.17±0.99)、(3.79 ±0.94)、(0.28±0.35) ng/g,三组间差异有统计学意义(P值均＜0.05).通过接受者操作特征(ROC)曲线分析,胰腺癌的曲线下面积为74.8％,95％可信度为0.661～0.835,诊断胰腺癌的敏感性为75.6％,特异性为67.1％.结论 胰腺癌患者粪便Alu序列表达量显著增加,对胰腺癌的诊断可能有一定价值.     

胰腺癌患者血浆miR-155检测及其诊断价值

目的 检测胰腺癌患者血浆miR-155表达量,评价其对胰腺癌的诊断价值.方法 收集62例胰腺癌、61例慢性胰腺炎(CP)及36例正常对照者的血标本,抽提血浆RNA,应用实时PCR检测miR-155表达量,并分析其与胰腺癌临床参数的关系.应用接受者操作特征(ROC)曲线下面积(AUC)评价血浆miR-155表达量对胰腺癌的诊断价值.结果 胰腺癌、CP和正常对照组的血浆miR-155表达量分别为5.41±3.14、2.59±2.49和0.77±1.17,胰腺癌血浆miR-155表达量显著高于CP及正常对照组(P＜0.01).胰腺癌血浆miR-155表达量与患者年龄、性别、肿瘤大小等均无显著相关性,而与肿瘤TNM分期呈显著负相关(r=-0.323,P=0.01).经ROC分析,胰腺癌对正常对照组的AUC为0.943(95%CI0.902～0.985),敏感性和特异性分别为87.1%和83.3%;胰腺癌对CP的AUC为0.762(95%CI0.678～0.846),敏感性和特异性分别为64.5%和73.8%;胰腺癌对正常对照组+CP组的AUC为0.829(95%CI0.767～0.892),敏感性和特异性分别为62.9%和84.5%.结论 胰腺癌患者血浆miR-155表达量显著升高,对胰腺癌的诊断可能有一定的应用价值.     

胰腺癌诊断方法的评价

在消化道恶性肿瘤中,胰腺癌的5年生存率最低(3%)。近20年来由于检测技术的进步,手术切除的5年生存率已上升至10%～18%,而直径小于2cm的小胰癌可高达30%。本文重点对胰腺癌的诊断方法作一评价。一、早期临床表现腺胰癌早期症状隐匿、或不明显,Tsuchiya分析106例Ⅰ期、Ⅱ期直径<2cm的小胰癌,分别占43.7%和42.74%,有症状的占93.4%,其中黄疸52.5%,上腹疼痛31.5%,食欲不振14.2%,其它有体重减轻,腹部不适,全身乏力,呕吐等,表明上述表现中有相当部分为早期胰癌。要作出早期诊断,临床工作者     

胰腺癌筛查及早期诊断

胰腺癌主要指胰外分泌腺腺癌，是胰腺恶性肿瘤中最常见的一种，75％胰腺癌患者在诊断后1a内死亡，胰腺癌的5a生存率低于4％，且已行肿瘤切除术后的患者5a生存率仍低于20％。早期诊断是提高胰腺癌患者生存率的最重要的方法，特别是无任何症状或肿瘤极小能够根治性切除时发现。为此，掌握筛查的对象和方法非常重要。     

微小RNA-200c在胰腺癌中的研究进展

微小RNA-200c(miR-200c)是一类非编码小分子RNA,参与基因转录后水平调控,与肿瘤的发生发展密切相关。本文介绍了miR-200c对胰腺癌侵袭和转移的抑制作用,及其在胰腺癌的早期诊断、预后判断等方面的临床应用价值,提示miR-200c可作为抑癌基因及有效分子标志物和未来临床研究重点。     

循环 microRNAs 在肝胆胰肿瘤发生发展中的作用

微小 RNA（miRNAs）参与机体的生长发育及疾病的病理生理过程,尤其在肿瘤性疾病的发生发展过程中起到致瘤基因或抑瘤基因的作用,另外全身血液循环中存在与特定肿瘤组织相应的循环 miRNAs。总结了近年来国内外研究发现的与肝胆胰肿瘤相关的循环 miRNAs,并分别阐述了 miRNAs 在肝胆胰肿瘤的诊断、临床病理分型、治疗及预后方面的应用价值。提出循环 miRNAs有望成为临床肿瘤筛查、诊断、治疗以及预后评价的新的生物标志物。     

胰腺癌的CT诊断

胰腺癌的ＣＴ诊断章丘市人民医院（２５０２００）靳兆军葛林浩王家梁李侠现对我院５年来ＣＴ资料完整并经手术病理证实为胰腺癌的５０例患者进行分析，以期提高胰腺癌ＣＴ诊断率。１临床资料本组男３６例，女１４例，年龄３７～７６岁。临床表现有腹部不适、腹痛、恶心、...     

异常表达的miRNA对胰腺癌细胞增殖和凋亡的影响

下调miR-221改变细胞周期,增加G0/G1期细胞,减少S期细胞,但对细胞活性无明显影响;miR-221和miR-21共同下调后,细胞活力则明显下降.其他miR转染对细胞生长和凋亡的影响不明显.结论 部分在胰腺癌中异常表达的miRNA对胰腺癌细胞的生长有一定影响,选用一定组合的联合转染,对细胞生长和凋亡的影响比单独转染时加强.     

胰腺癌循环微小核糖核酸载体的研究

目的 寻找胰腺癌循环微小核糖核酸（miRNA）的载体.方法 常规培养、传代胰腺癌细胞SW1990、BxPC3,采集6例胰腺癌患者及6例健康体检者（对照组）的血清.应用梯度离心方法获取血清和细胞培养上清中的微囊泡（MV）.采用蛋白质印迹法检测RNA诱导沉默复合体的核心元件Ago2蛋白和MV的标志性蛋白CD63,采用荧光定量PCR方法检测MV包裹的和游离的miRNA.结果 胰腺癌细胞株培养上清的MV中含有Ago2、CD63蛋白.胰腺癌组、对照组的血清及MV中均存在miR-20a、miR-21、miR-24、miR-25、miR-191、miR-483-5p,但以MV包裹的量较多,且胰腺癌组MV包裹的miRNA量与对照组不完全一致,其中miR-20a、miR-24、miR-191分别为对照组的（2.93±0.29）、（2.73±0.46）、（2.39±0.51）倍,差异均有统计学意义（F值分别为75.97、25.80、12.94,P＜0.05或＜0.01）.结论 MV是胰腺癌循环miRNA的主要载体.     

MiR-590-3p在胰腺癌干细胞中的表达

目的 应用无血清培养基分离胰腺癌干细胞,检测其miR-590-3p的表达。方法 运用无血清培养基克隆培养ASPC-1、PANC1细胞,检测其单克隆形成、分化及细胞周期、半数抑制浓度(IC50)和表面标记物CD24+、CD44+表达。实时定量PCR法检测细胞miR-590-3p的表达。结果 经无血清培养基培养,(0.94±0.53)％的ASPC-1细胞和(0.57±0.12)％的PANC1细胞能存活,呈克隆球样悬浮生长,并可以在体外连续传代。加入血清后细胞球又重新贴壁生长。ASPC-1细胞球G0/G1期比例和CD24+、C44+、CD24+ CD44+的细胞比例及IC50分别为(75.3±5.4)％、0.96％～2.01％、27.52％～34.47％、0.35％ ～0.44％和(224.37±5.71) μg/ml,均显著高于亲本细胞的(43.7±3.8)％、0.38％～0.42％、17.65％ ～ 18.25％、0.05％～ 0.08％、(11.43±2.10) μg/ml(P值均＜0.05)。PANC1细胞球G0/G1期比例和CD24+、CD44+、CD24 +CD44+的细胞比例及IC50分别为(80.1±4.7)％、5.31％ ～9.84％、72.05％ ～93.06％、4.91％ ～5.21％、(296.58±4.27) μg/ml,均显著高于亲本细胞的(46.1±5.3)％、4.09％～4.97％、47.71％～55.66％、1.48％ ～2.63％、(26.17±3.81) μg/ml(P值均＜0.05)。ASPC-1、PANC1细胞球miR-590-3p表达分别是亲本细胞的4.67和4.52倍。结论 应用无血清培养基可以从ASPC-1、PANC1细胞系中分离出具有干细胞特性的胰腺癌细胞球,其miR-590-3p表达上调,该基因可能是胰腺癌干细胞特性维持的关键基因。     

High dose glargine alters the expression profiles of microRNAs in pancreatic cancer cells

AIM: To investigate the effect of high dose glargine on the expression profiles of microRNAs in human pancreatic cancer cells.METHODS: Real-time polymerase chain reaction array (RT-PCR) was applied to investigate miRNAs differentially expressed in Sw1990 cells treated with or without 100 IU/L glargine. Stem-loop RT-PCR was used to confirm the results of the array assay in Sw1990 and Panc-1 cells. The effects of miR-95 on cell growth, apoptosis, invasion and migration abilities were respectively examined by CCK8 assay, apoptosis assay, Matrigel invasion and migration assay in Sw1990 and Panc-1 cells. Nude mice xenograft models with Sw1990 cells were built to investigate pancreatic cancer growth in vivo after transfection by the lentivirus pGLV3-GFP- miR-95.RESULTS: Ten miRNAs were significantly up-regulated and 2 miRNAs down-regulated in glargine treated Sw1990 cells when compared with non-treated cells (2.48-fold changes on average, P < 0.01). miR-95, miR-134 and miR-34c-3p are the top three miRNAs regulated by glargine (3.65-fold, 2.67-fold and 2.60-fold changes respectively, P < 0.01) in Sw1990 cells. Stem-loop RT-PCR confirmed that high dose glargine up-regulated the expression of miR-95 and miR-134 in both Sw1990 and Panc-1 cells. The most obvious change is the apparent increase of miR-95. Forced expression of miR-95 significantly increased cell proliferation (Sw1990: 2.510 ± 0.129 vs 2.305 ± 0.187, P < 0.05; Panc-1: 2.439 ± 0.211 vs 2.264 ± 0.117, P < 0.05), invasion (Sw1990: 67.90 ± 12.33 vs 47.30 ± 5.89, P < 0.01; Panc-1: 37.80 ± 8.93 vs 30.20 ± 5.14, P < 0.01), migration (Sw1990: 101 ± 6.00 vs 51.20 ± 8.34, P < 0.01; Panc-1: 91.80 ± 9.22 vs 81.50 ± 7.47, P < 0.01) and inhibited cell apoptosis (Sw1990: 22.05% ± 1.92% vs 40.32% ± 1.93%, P < 0.05; Panc-1: 20.17% ± 0.85% vs 45.60% ± 1.43%, P < 0.05) when compared with paired negative controls, whereas knockdown of miR-95 obtained the opposite effect. Nude mice xenograft models confirmed that miR-95 promoted the growth of pancreatic cancer in vivo when compared with negative control (tumor volume: 373.82 ± 23.67 mL vs 219.69 ± 17.82 mL, P < 0.05).CONCLUSION: These observations suggested that modulation of miRNA expression may be an important mechanism underlying the biological effects of glargine.     

超声内镜对胰腺癌诊断及评估价值

目的：探讨EUS诊断胰腺癌的敏感性，准确性及其评估肿瘤特征的价值。方法：以126例经病理确诊并在确诊前半月内先后接受EUS、US、CT检查的胰腺癌患者为研究对象，回顾性分析三种成像方法及EUS对于不同类型胰腺癌的检查结果，应用t检验或u检验评估这些检查结果的差异有无显著性，结果：EUS诊断胰腺癌准确性较US高，尤其对于小胰腺癌准确性更高，二者差异有显著性（P＜0．05）；EUS诊断敏感性，准确性与CT比较差异无显著性，联合应用EUS及CT检查，则诊断敏感性及准确性大为提高，与单独应用US、EUS或CT相比，差异均有显著性（P＜0．05）；EUS与CT显示肿瘤间接征象的准确性无显著性差异，结论：EUS对于胰腺癌是一种较好的检查方法，尤其对于怀疑为小胰腺癌者应作为常规检查，联合应用EUS和CT检查胰腺癌值得推广。     

DNA甲基转移酶3b和microRNA-29b在胰腺癌细胞株中的表达及其相关性

目的 明确胰腺癌细胞株甲基转移酶( DNMT)3b和microRNA-29b(miR-29b)的表达,分析两者的相关性.方法 应用实时定量PCR法检测人胰腺癌细胞株PANC1、BxPC3、CFPAC、AsPC-1、Capan-2的DNMT3b mRNA和miR-29b表达.采用Pearson直线相关分析法分析两者表达量的相关性.结果 PANC1、BxPC3、CFPAC、AsPC-1、Capan-2的DNMT3b mRNA相对表达量分别为0.497±0.184、0.420±0.168、0.439±0.217、0.122 ±0.111和0.731±0.387;miR-29b的相对表达量分别为0.745±0.596、0.464±0.430、0.797±1.000、1.836±1.623和0.216 ±0.335,DNMT3b mRNA的表达量和miR-29b的表达量呈负相关关系(r=-0.922,P=0.026).结论 DNMT3b和miR-29b均参与了胰腺癌的发生发展,两者呈负相关关系.     

胰腺癌280例诊断与预后分析

目的 探讨影响胰腺癌早期诊断及生存预后的因素.方法 收集2002年1月至2007年1月有完整随访资料的胰腺癌患者280例,对所有病例进行病史采集及随访.Kaplan-Meier及寿命表计算生存率,log-rank检验进行影响预后的单因素分析,符合条件的纳入Cox比例风险模型进行多因素分析.结果 本组病例中,91.8%患者的年龄＞40岁,高峰年龄在50～73岁.多以腹痛和黄疸就诊.影像学检查以B超和CT为主,敏感性分别为70.6%、95.3%.89.3%患者联合进行B超和CT检查.CA19-9敏感性为81.1%.中位生存期为(7.0±0.5)个月,1～5年生存率分别为28%、9%、6%、2%、1%.单因素分析提示,年龄＞65岁、CA19-9＞均数、TNM Ⅲ或Ⅳ期、有淋巴结或血管浸润以及2个以上脏器转移、非手术治疗、KPS评分＜60分、体重下降≥15 kg等都是预后不良的因素;Cox多因素分析结果表明,治疗方式、年龄、TNM分期、KPS评分和有无腹水是影响患者预后的独立危险因素.结论 患者年龄、有无腹水、肿瘤分期及治疗方式是影响本组胰腺癌预后的高风险独立因素.早期诊断与治疗是提高胰腺癌患者生存时间的关键.     

粪便弹力蛋白酶1在胰腺疾病中的检测及其作用评估

目的确定中国正常人粪便弹力蛋白酶1(fecalelastase1,FE1)的平均浓度及其范围并进行定量;FE1检测胰腺外分泌功能的敏感性与特异性;探讨其在胰腺疾病诊断与鉴别诊断中的意义。方法应用FE1检测试剂盒(ELISA),前瞻性地对73例不同年龄组的正常成年人进行FE1的检测;对24例非胰腺消化疾病、30例慢性胰腺炎、17例胰腺癌病人同时检测FE1和尿苯甲酰酪氨酰对氨基苯甲酸(BT PABA)。结果(1)正常人FE1浓度范围为136～1380(966.93±256.17)μg/g,各年龄组FE1浓度的差异无统计学意义。(2)慢性胰腺炎的FE1平均值为(208.80±197.72)μg/g,范围为15～900μg/g;胰腺癌组的FE1为(175.00±172.25)μg/g,范围为15～460μg/g;前两组FE1值均明显低于非胰腺疾病组[(502.63±210.28)μg/g](P<0.05)。(3)胰源性腹泻组FE1值[(166.11±192.35)μg/g]明显低于非胰源性腹泻组[(444.50±212.91)μg/g](P<0.01)。FE1检测胰源性腹泻的敏感性为77.8%,特异性为89.5%。尿BT PABA检测胰源性腹泻的敏感性为50.0%,特异性为42.9%。(4)FE1诊断慢性胰腺炎的敏感性为63.3%,特异性为97.3%。结论中国正常人的FE1浓度为(966.93±256.17)μg/g,不同年龄组正常人FE1浓度无明显差异。FE1诊断慢性胰腺炎的特异性较高,并对胰源性和非胰源性腹泻具有鉴别诊断价值。