CD自杀基因联合GM—CSF基因治疗的抗肿瘤作用及免 …

目的 研究自杀基因与粒细胞－巨噬细胞集落刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）基因联合治疗抗肿瘤作用及免疫机理。方法 小鼠皮下接种黑色素瘤Ｂ１６Ｆ１０细胞３天后,分别在肿瘤局部直接注射表达小鼠ＧＭ－ＣＳＦ的重组腺病毒ＡｄＧＭ－ＣＳＦ和表达大肠杆菌胞嘧啶脱氨酶（ＣＤ）基因的腺病毒Ａｄ－ＣＤ,然后连续１０天腹腔注射５氟胞嘧啶（５ＦＣ）Ａ（ＡｄＣＤ／５ＦＣ／ＡｄＧＭＣＳＦ组）,单用ＡｄＣＤ／５ＦＣ组,单用ＡｄＧＭ－Ｃ     

口服携带人IL-12、GM-CSF基因的减毒沙门菌抗肿瘤作用的试验

目的探讨以减毒沙门菌作为口服基因治疗载体的可行性.方法通过电转化法将真核表达载体pCMVhIL-12、pCMVhGM-CSF、EGFPN1导入减毒鼠伤寒沙门菌SL3261中,经由胃管喂给BALB/c和C57BL/6小鼠.6周后分别用4T1乳腺癌细胞和Lewis肺癌细胞进行攻击.通过流式细胞仪、共聚焦显微镜检测绿色荧光蛋白在小鼠各组织中的表达,通过PCR和ELISA法检测IL-12、GM-CSF基因的整合和表达情况.并考察肿瘤的受抑情况和小鼠的生存期.结果在小鼠的肝、脾、小肠、肾脏和肿瘤中可检测到绿色荧光蛋白的表达和相应细胞因子基因的整合.血清中相应的细胞因子水平较对照组明显升高(P<0.05),生存期远远超过对照组小鼠(P<0.05).结论减毒沙门菌可作为口服基因治疗载体,可能为肿瘤的治疗提供一条简便、安全、有效的途径.     

自杀基因治疗肿瘤的新进展

自杀基因治疗肿瘤已有肯定疗效,本着重从自杀基因作用体系、旁观效应、基因特异转录调控序列的添加、肿瘤的基因－－放射治疗、双自杀基因几个方面介绍自杀基因治疗肿瘤的最新进展。     

哮喘患者血清TNF-α、GM-CSF及HA水平测定

目的 :研究TNF -α、GM -CSF及HA三项标记物与哮喘病情变化的关系。方法 :三项标记物均采用放射免疫分析法。研究对象包括 6 6名患者及 3 0名对照组。结果 :哮喘发作组 (n =3 6 )血清TNF -α、GM -CSF及HA水平均显著高于正常对照组 (p <0 0 1 ,p <0 0 1 ,p <0 0 5 )。而哮喘缓解组 (n =3 0 )则三项标记物均显著下降 ,但与正常对照组比较差异仍有显著性 (p <0 0 5 )。结论 :三项标记物的变化与哮喘的发作关系密切 ,提示临床在抗炎治疗时应适时采用免疫调节剂     

GM-CSF基因重组腺病毒穿梭载体的构建及Xba Ⅰ甲基化位点的应用

目的构建GM-CSF基因重组腺病毒穿梭载体并探讨XbaI甲基化位点在构建中的应用,为构建GM-CSF基因重组腺病毒及更方便地利用XbaⅠ多克隆位点打下基础。方法体外分离小鼠脾细胞,经ConA刺激,用含两种不同的XbaⅠ位点毗邻碱基的引物RT-PCR获取小鼠GM-CSF基因,经XbaⅠ及XbaⅠ双酶切后分别定向克隆入pAdTrack-CMV重组腺病毒穿梭载体中,比较两种重组载体酶切鉴定的效率并通过测序验证。结果成功逆转录得到小鼠GM-CSF基因并克隆入pAdTrack-CMV中,测序结果与预期一致。酶切鉴定显示由于XbaI位点毗邻碱基的不同导致甲基化的XbaⅠ位点在克隆菌株中不能被有效切开。结论成功构建GM-CSF基因重组腺病毒穿梭载体,XbaⅠ位点对甲基化敏感。     

自杀基因治疗与免疫研究进展

在肿瘤基因治疗中,自杀基因的作用十分引人注目,尤其是其旁杀伤效应的存在大大增强了其治疗作用。近年来的研究发现,自杀基因的作用与机体免疫功能有密切关系,正常免疫功能的机体可增强旁杀伤效应,而自杀基因的作用又可刺激免疫的发挥,自杀基因治疗与免疫治疗有协同作用。     

GM-CSF增强DNA疫苗免疫效果的研究进展

DNA疫苗因既能诱导体液免疫应答，又能诱导细胞免疫应答而受到广泛关注，但作为治疗性疫苗其免疫效果尚需进一步提高。细胞因子作为DNA疫苗免疫佐剂受到了广泛重视，特别是GM—CSF，由于在细胞因子网络中占有重要地位，在免疫反应中具有重要作用，而成为研究的热点之一。本文就GM—CSF增强DNA的免疫效果及其作用机理作一简要综述。     

肿瘤抗原触发M-CSF和IFN-γ联合基因转染的巨噬细胞抗肿瘤转移作用的研究

目的本研究探讨了肿瘤抗原触发的Ｍ－ＣＳＦ和ＩＦＮ－γ基因联合转染的巨噬细胞对黑色素瘤实验性肺转移的治疗作用及其免疫机理。方法将联合基因转染的巨噬细胞经尾静脉回输治疗黑色素瘤实验性肺转移小鼠，经治疗后于荷瘤后第１７天处死小鼠，计数荷瘤小鼠的肺部转移结节数并观察其长期存活期，用５１Ｃｒ４小时释放法检测体外诱导的ＣＴＬ活性，采用未配对计量资料的ｔ检验处理数据。结果联合基因转染后治疗组的小鼠长期存活率为１６％，加用肿瘤抗原触发后的治疗组有３３％的小鼠长期存活。小鼠脾细胞经体外诱导的ＣＴＬ对野生型Ｂ１６．Ｆ１０细胞的杀伤活性，在经肿瘤抗原触发的Ｍ－ＣＳＦ和ＩＦＮ－γ联合基因转染巨噬细胞治疗的荷瘤小鼠最高，与用未经抗原触发的联合基因转染巨噬细胞治疗组差异有显著性（Ｐ＜０．０５）。结论体外经肿瘤抗原触发的Ｍ－ＣＳＦ、ＩＦＮ－γ联合基因转染的巨噬细胞过继回输疗法是肿瘤特别是转移性肿瘤的一种有效免疫治疗手段，机体的ＣＴＬ在该疗法的抗肿瘤作用中可能发挥了重要的作用。     

自杀基因治疗肿瘤研究进展

自杀基因治疗肿瘤近年来在国内外研究较多并已取得了明显的疗效。本文就近年来有关的进展 ,从自杀基因治疗作用体系机制及其旁观者效应、增强自杀基因转导效率方面的载体应用和肿瘤特异性靶向性转导、自杀基因与免疫系统反应的关系、自杀基因与靶向性放射性核素治疗、免疫因子及自杀基因 3种方法的联合应用等进行综述     

小鼠GM-CSF基因真核表达载体的构建及其表达活性的鉴定

目的：构建小鼠GM－GSF基因的高效真核表达载体，筛选导入该载体后高水平表达GM－CSF的小鼠淋巴瘤细胞系RMA，并探讨转GM－CSF基因瘤苗治疗小鼠T淋巴细胞瘤的方法。方法：PCR扩增小鼠GM－CSF cDNA3‘端770bp的片段，将其插入真核表达载体pcDNA3；用电穿孔法将构建的载体导入小鼠淋巴瘤细胞系RNA，有限稀释法制备单个细胞克隆，经RT－PCR、骨髓祖细胞增殖实验和集落形成实验筛选相对高表达GM－CSF的RNA克隆，该克隆细胞经丝裂霉素灭活后免疫小鼠以诱导其产生抵抗RMA肿瘤细胞再攻击的能力。结果：构建的重组质粒含有预期片段，插入方向正确，核酸序列无误，且获得了高表达GM－CSF的RMA克隆，将其用丝裂霉素灭活免疫小鼠后使它们产生了抗肿瘤免疫保护力。结论：转GM－CSF基因瘤苗可能作为有效的抗T淋巴细胞瘤瘤苗。     

B7.1、GM-CSF基因修饰的EL- 4细胞激发小鼠抗淋巴瘤免疫反应

目的 研究B7.1，GM-CSF基因修饰的淋巴瘤瘤苗进行恶性淋巴瘤免疫基因治疗的有效性。方法 用逆转录病毒载体分别将B7.1和GM-CSF基因导入小鼠淋巴瘤细胞EL-4中，得到EL-4/B7和EL-4/GM转基因瘤苗细胞，观察EL-4/B7和EL-4/GM瘤苗细胞对荷淋巴瘤小鼠的免疫治疗作用，以及预先接种过EL-4/B7或/和EL-4/GM瘤苗的小鼠，对野生型EL-4细胞致瘤性作用的影响，并检测接种EL-4/B7或/和EL-4/GM瘤苗的小鼠血浆IL-2及TNF-α的水平，及其脾淋巴细胞对野生型EL-4的细胞毒效应，另外，检测经EL-4/B7，EL-4/GM刺激后的小鼠脾淋巴细胞的增殖程度，结果 （1）经EL-4/B7、EL-4/GM细胞注射后，荷瘤小鼠的淋巴瘤生长速度变慢，生存时间延长，淋巴瘤组织中出现大量的炎症细胞；（2）接种一定数量的EL-4/B7，EL-4/GM细胞的小鼠，能抵抗野生型EL-4细胞的攻击；（3）接种瘤苗的小鼠血浆IL-2的水平明显升高，而TNF-α的水平无明显变化；（4）接种瘤苗的小鼠脾淋巴细胞，对野生型EL-4细胞有明显的细胞毒效应；EL-4/B7、EL-4/GM细胞能刺激小鼠脾淋巴细胞明显增殖。结论 B7.1,GM-CSF基因修饰的EL-4细胞，能有效地激发C57BL/6小鼠的抗淋巴瘤免疫反应，且B7.1基因与GM-CSF基因具有协同作用。     

AFP启动子驱动的yCD/TK双自杀基因靶向杀伤肝癌细胞的体内外研究

目的： 研究携带甲胎蛋白（AFP）启动子的酵母菌胞嘧啶脱氨酶/胸苷激酶（yCDglyTK）双自杀基因体内外靶向性杀伤肝癌细胞的效果和机制。方法: 构建携带AFP启动子的yCD/TK双自杀基因表达质粒。通过阳离子脂质体将携带AFP启动子的yCD/TK双自杀基因转染HepG2和SMMC7721细胞,用MTT法测定不同浓度氟胞嘧啶（5-FC）、更昔洛韦（GCV）及联合治疗的杀伤作用,用流式细胞仪检测细胞周期。建立裸鼠肝癌皮下种植瘤模型,观察自杀基因体内杀瘤效果以及细胞凋亡的情况。结果: 成功构建的携带AFP启动子的yCD/TK双自杀基因靶向性地在AFP阳性的HepG2细胞上表达,而AFP阴性的SMMC7721细胞无表达,GCV、5-FC及两者联合可有效抑制HepG2细胞生长,随药物浓度的增高而杀伤作用增强,药物间抑瘤效果比较是GCV＋5-FC＞5-FC＞GCV,而SMMC7721细胞的生长未受影响。体内实验可见GCV、5-FC及两药联合对转染后的HepG2细胞种植瘤有明显的抑制效果,并检测到明显的细胞凋亡,而对SMMC7721细胞种植瘤的生长无影响,种植瘤内极少凋亡细胞。结论: 携带AFP启动子的yCD/TK双自杀基因能有效地靶向性地杀伤AFP阳性的肝癌细胞,细胞凋亡可能是其杀伤的重要机制之一。     

分泌粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子的重组痘苗病毒转染的瘤苗裂解物抗肿瘤作用

将小鼠粒细胞－巨噬细胞集落刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）基因经过同源重组得到表达ＧＭ－ＣＳＦ的重组痘苗病毒，用此痘苗病毒转染小鼠黑色素瘤细胞，制备黑色素瘤瘤苗裂解物（ＧＭ－ＣＳＦＶＭＯ），Ｃ５７ＢＬ／６小鼠皮下接种Ｂ１６－Ｆ１０细胞３天后在注射部位注射瘤苗裂解物，一周后再注射一次。结果发现ＧＭ－ＣＳＦＶＭＯ能够显著地抑制荷瘤小鼠肿瘤结节的生长并明显延长荷瘤小鼠的存活期。用此瘤苗裂解物免疫小鼠两次，间隔一周，免疫一周后给Ｃ５７ＢＬ／６小鼠皮下接种Ｂ１６－Ｆ１０细胞，结果肿瘤结节出现时间明显延长，部分小鼠肿瘤不再生长。经ＧＭ－ＣＳＦＶＭＯ治疗或免疫后小鼠的外周血和脾淋巴细胞对肿瘤细胞杀伤活性明显升高，ＮＫ活性变化不明显。本结果提示，诱导机体特异性细胞免疫可能是瘤苗裂解物的抗肿瘤作用机理之一。     

结核杆菌Ag85A/GM-CSF嵌合表达质粒的构建及表达

目的：探讨对结核病DNA疫苗进行基因修饰的新方法。方法：以结核杆菌H37Rv株基因组DNA为模板，通过PCR扩增获得结核杆菌Ag85A抗原蛋白基因的成熟肽编码区，以经PHA诱导后的小鼠脾组织总RNA为模板，通过RT－PCR获得小鼠粒细胞－巨噬细胞集落刺激因子的cDNA，将二者定向克隆入质粒pBK-CMV中构建含嵌合目的基因的重组质粒，转染培养的COS7细胞后检测嵌合目的基因的表达。结果：成功构建了小鼠粒细胞－巨噬细胞集落刺激因子cDNA与结核杆菌Ag85A抗原基因的真核嵌合表达质粒，重组质粒能在COS7细胞中进行稳定表达。结论：本研究首次将细胞因子基因与结核杆菌免疫保护性抗原基因嵌合构建嵌合DNA疫苗，为进一步研究其在动物体内的免疫原性和免疫保护性奠定了基础。     

激光心肌血运重建术结合转VEGF基因对缺血心肌侧枝循环的影响

为明确激光心肌血运重建术 (Transmyocardiallaserrevascularization ,TMLR)与转血管内皮生长因子 (Vascularen dothelialgrowthfactor,VEGF)基因相结合能否促进侧枝循环建立 ,我们在猪的急性心肌缺血模型上 ,用冠脉造影观察了TMLR、TMLR +VEGF对缺血心肌侧枝循环的影响。结果显示 ,与术后即刻或单纯缺血组相比 ,TMLR(Rentrop记分 1 4± 0 9)、TMLR +VEGF(Rentrop记分 2± 0 5 )均能显著促进侧枝循环建立 (P均 <0 0 5 ) ;TMLR +VEGF组较TMLR组侧枝有增多的趋势。分时间点统计显示 ,TMLR +VEGF组 4周为 2± 0 8,8周为 2± 0 0 ,TMLR组 4周为 2± 0 0 ,8周为 1± 1 0。其中TMLR +VEGF组 4周、8周和TMLR组 4周结果无差异 ,而TMLR组 8周与其他各组相比均呈下降的趋势。提示与TMLR相比 ,TMLR结合转VEGF基因在一定程度上有助于侧枝循环的稳定     

Serum concentrations of GM-CSF and G-CSF correlate with the Th1/Th2 cytokine response in cystic fibrosis patients with chronic Pseudomonas aeruginosa lung infection

The inflammation in cystic fibrosis (CF) patients with chronic Pseudomonas aeruginosa lung infection is dominated by polymorphonuclear neutrophils (PMNs). There seems to be a relationship between the PMN-dominated inflammation, pronounced antibody production and a Th2-dominated response. Apart from mobilizing monocytes and PMNs from the bone marrow, GM-CSF, G-CSF and IL-3 select subsets of dendritic cells, which subsequently induce distinct Th responses. Therefore, the present study examines the correlation between the mobilizing cytokines in serum and the Th responses. The IFN-gamma and IL-4 production by peripheral blood mononuclear cells, and the concentrations of GM-CSF and G-CSF in serum as well as lung function, were determined in 37 CF patients with and 6 CF patients without chronic P. aeruginosa lung infection. The GM-CSF/G-CSF ratio correlated both with the IFN-gamma production and good lung function. In addition, an inverse correlation between IL-3 and IFN-gamma was observed. The results indicate involvement of endogenous GM-CSF, G-CSF and IL-3 in the skewed Th response in CF, and change to a Th1-dominated response might be achieved with GM-CSF treatment.     

T-bet基因转染对哮喘小鼠气道炎症的影响

目的： 观察气道内T-bet基因转染对哮喘小鼠气道炎症的影响。方法: C57BL/6小鼠40只,随机分为4组,每组10只,分别为正常对照组（A组）、哮喘模型组（B组）、空质粒干预组(C组) 和T-bet质粒干预组(D组)。卵白蛋白(OVA) 抗原溶液腹腔注射致敏,滴鼻造模。正常对照组用生理盐水代替OVA,空质粒干预组和T-bet质粒干预组OVA激发48 h前,分别经鼻滴入50 μg空质粒和重组T-bet质粒。观察各组实验小鼠的肺组织炎症以及BALF中各类炎症细胞以及IL-4、IFN-γ水平的变化。 结果: Western blotting检测发现,小鼠气道转染pcDNA3-T-bet质粒48 h后肺组织T-bet蛋白表达显著增加。pcDNA3-T-bet质粒转染能较好抑制给药后48 h OVA激发的哮喘小鼠气道炎症（包括炎症细胞浸润,上皮细胞损伤、黏液分泌、血管壁水肿及管腔缩窄）;下调小鼠BALF中Th2因子IL-4并上调Th1因子IFN-γ水平。 结论: 气道内转染T-bet质粒能有效改善哮喘小鼠的气道炎症。     

mIL-21基因治疗小鼠肿瘤及其机制的初步研究

建立小鼠Sp2/0皮下肿瘤模型,以我们构建并鉴定过的真核表达质粒peDNA3.1/mIL-21在瘤体内直接注射,考察mIL-21基因治疗对小鼠Sp2/0肿瘤的疗效。结果显示pcDNA3.1/mIL-21质粒治疗对小鼠皮下Sp2/0肿瘤有一定的生长抑制作用,CTL和NK细胞毒活性明显增强,IFN-γ分泌升高显著,但抗体无明显升高。表明mIL-21基因治疗的抗肿瘤效应,可能和细胞免疫功能增强有关。     

When aspiration fails: A study of its effect on mental disorder and suicide risk

Background

The Strain Theory of Suicide postulates that psychological strains usually precede suicide mental disorders including suicidal behavior. The four sources of strain are basically (1) differential value conflicts, (2) discrepancies between aspiration and reality, (3) relative deprivation, and (4) lack of coping skills. This paper focuses on the effect of perceived failed life aspiration on the individual's mental disorder and suicide risk.

Method

Data for this study were from a large psychological autopsy study conducted in rural China, where 392 suicides and 416 community living controls were consecutively recruited. Two informants (a family member and a close friend) were interviewed for each suicide and each control. Major depression was assessed with HAM-D and the diagnosis of mental disorder was made with SCID.

Results

It was found that individuals having experienced failed aspiration were significantly more likely than those having not experienced a failed aspiration to be diagnosed with at least one disorder measured by the SCID and major depression measured by HAM-D, and to be a suicide victim, which is true of both suicides and controls.

Conclusion

This study supports the hypothesis that the discrepancies between an individual's aspiration and the reality is likely to lead to mental disorder including major depression and suicidal behavior. Lowering a patient's unrealistic aspiration can be part of the of psychological strains reduction strategies in cognitive therapies by clinicians' and mental health professionals.