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甜菜碱促进高GC含量p16基因的PCR扩增 总被引:2,自引:0,他引:2
GC含量高的DNA序列在基因组中广泛存在,它们特别容易形成二级结构干扰PCR扩增,难以得到所需目的基因。为解决此问题,采取了各种措施如增加变性及退火温度;用NaOH进行DNA模板变性;加入DMSO、甘油、甲酰胺等溶剂破坏碱基配对;加入dGTP类似物以降低熔解温度Tm等。但上述办法只对部分GC丰富DNA的扩增有效,许多情况下完全无效。近年研究发现甜菜碱能克服这个困难[1-3],我们参考国外报道在PCR中加入甜菜碱,结果成功地扩增出用标准PCR扩增失败的高GC含量的p16全长cDNA序列。1 材料与方法用淋巴细胞分层液从正常人外周血中分离出单… 相似文献
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医学检验的目的是为临床提供可靠的实验诊断依据 ,为了保证检验结果的准确性 ,必须对检测的全过程 (分析前、分析中、分析后 )进行质量控制。在实际工作中对于分析中的质量控制一般比较重视 ,但对分析前的质量控制往往有所忽视 ,例如患者标本留取时机 ,标本收集、处理、储存和运输等是否符合实验要求 ,实验室设置是否合理 ,这些均为影响实验结果的直接因素。文献报告在实验误差中分析前误差约占 70 % ,能否正确规范化收集处理标本是分析前质量保证的重要内容[1 ] ,也是减少实验误差、确保准确及时为临床提供检测结果的重要环节。本文现就临… 相似文献
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薛开先 《国外医学:遗传学分册》1997,20(3):120-123
基因的扩增与缺失是癌基因等活化、抑制基因等失活的常见机制之一,差别-d-PCR为上述遗传学改变了提供了简便并较敏感的非同位数技术,本文简述了近年严d-PCR方法学和用于肿瘤研究的进展。 相似文献
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随着分子生物学研究的进展,基因诊断技术得到了越来越广泛的应用,特别是PCR技术,以其快速、高灵敏度及简便地检测目的DNA特异序列易迅速被推广,已应用于很多领域。 相似文献
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用巢式PCR扩增ZFY基因产前诊断胎儿性别 总被引:4,自引:1,他引:3
近年来的研究表明,Y染色体上锌指结构基因(zinc-finger-Ygene,ZFY)是继SRY之后又一与性分化有关的单拷贝基因,并与精子的发生有关[1,2]。为此,我们利用巢式PCR技术,以ZFY作为检测指标,参考有关文献自行设计内外两侧两对巢式P... 相似文献
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采用聚合酶链反应及激光扫描技术,对Ⅰ期4例,Ⅱ期12例,Ⅲ期18例,Ⅳ期4例的卵巢癌组织及6例正常卵巢组织的DNA作C-myc基因扩增检测,分析不同临床分期,病理分化程度及淋巴结转移情况与C-myc基因扩增率之间相关性。 相似文献
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应用PCR基因扩增法检测孕妇滋养细胞中沙眼衣原体感染 总被引:1,自引:0,他引:1
目的应用多聚酶链反应法(polymerase chain reaction,PCR)探讨孕妇滋养细胞中沙眼衣原体感染.方法与结果选择149例孕妇用宫颈内口冲洗法获取滋养细胞进行PCR检测沙眼衣原体感染,阳性率为30.2%,孕早、中、晚期阳性率分别为10.9%,32.7%,51.1%,P<0.05,有明显差异,然而,孕妇年龄、产次与沙眼衣原体感染,P>0.05,无明显差异.结论用PCR技术检测孕妇滋养细胞沙眼衣原体感染,具有特异性强,简便,快速等特点,结果显示,随着孕周增加其沙眼衣原体感染有明显增加趋势. 相似文献
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高GC含量FMR-1基因的PCR扩增 总被引:2,自引:0,他引:2
目的 建立一种简便、快速的脆性X综合征基因筛查法。方法 联合应用二甲基亚和甜菜碱扩增FMR- 1基因的三核苷酸重复序列。结果 本方法大大提高了FMR - 1基因的扩增效率。结论 该方法简便、快速、经济 ,可用于群体普查和门诊快速筛查 相似文献
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应用PCR方法直接从噬菌体原液中扩增目的基因片段徐砺新,王凡,刘彦仿(第四军医大学病理学教研室,西京医院眼科,西安710032)万大方,顾健人(上海市肿瘤研究所癌基因与相关基因国家重点实验室,上海200032)当前,基因分子生物学已成为全世界研究的热... 相似文献
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差异PCR技术检测乳腺癌C—erbB2癌基因扩增的研究 总被引:3,自引:0,他引:3
为探讨癌基因扩增在乳腺癌中的临床意义,应用差异PCR技术检测C-erbB2基因在75例人乳腺癌中扩增情况。结果:34.7%的乳腺癌存在该基因扩增,且以ER阴性或腋淋巴结转移〉3枚者明显,而与其它因素关系不大。通过Southern印迹杂交对原样本再次检测,结果与上述基本一致,并发现一例基因重排,表明应用差异PCR技术检测C-erbB2x扩增具有快速,简单,可靠,无放射性污染,有助于乳腺癌预后及转移潜 相似文献
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用PCR技术扩增人SRY基因,能快速,准确地检出YI杂色体,在细胞遗传学基因上进一步鉴定46,XX男性的真实性别,对进一步研究本症,探讨其发病机理有重要意义。 相似文献
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呼吸道合胞病毒G基因的扩增 总被引:1,自引:0,他引:1
用未纯化的呼吸道合胞病毒细胞混和物,采用改良胍-热酚法提取病毒mRNA,反转录合成cDNA,经PCR扩增得到大小约920bp的产物。经PstI酶切表明其中含有PstI酶切应点,证实其产物确为RSVG基因。此法简便、特异、第三、快速、。由于RSV极不稳定,RNA甚易降解,此法值得推广应用。 相似文献
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应用PCR—DGGE检测G6PD基因外显子12突变 总被引:1,自引:0,他引:1
人类红细胞葡萄糖6-磷酸脱氢酶(glucose-6-phos-phatedehydrogenase,G6PD)缺乏症是一类累及约2亿人的X连锁不完全显性遗传病,在临床上表现为新生儿黄疸、慢性非球形细胞性溶血性贫血(NSHA)、蚕豆病和药物诱导性溶血等... 相似文献
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为探讨癌基因扩增在乳腺癌中的临床意义,应用差异PCR技术检测C-erbB2基因在75例人乳腺癌中扩增情况。结果:34.7%(26/75)的乳腺癌存在该基因扩增,且以ER阴性或腋淋巴结转移>3枚者明显,而与其它因素关系不大。通过Southern印迹杂交对原样本再次检测,结果与上述基本一致,并发现一例基因重排。表明应用差异PCR技术检测C-erbB2扩增具有快速、简单、可靠、无放射性污染,有助于乳腺癌预后及转移潜力之判断,临床应用价值较大。 相似文献
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应用斑点杂交及DNA印迹杂交,对C-erbB-2基因在宫颈癌中扩增和重排进行了研究。结果表明,在15例宫颈癌中有11例具有基因扩增,占73%,圹增倍数为3~16倍,DNA杂交发现6例宫颈癌中有5例具有基因重排伴扩增,而相应癌旁组织则无扩增或重排,首次发现了C-erbB-2基因在宫颈癌中有扩增和重排。 相似文献
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目的探讨应用双标准曲线的实时荧光PCR法检测原癌基因人类表皮生长因子受体2(HER2)基因扩增在临床乳腺癌诊治中的可行性。方法收集500例乳腺癌术后新鲜组织标本,抽提组织DNA进行实时荧光PCR检测,采用双标准曲线法定量,通过计算目的基因浓度和内标基因浓度的比值来判断HER2基因的扩增情况。选择灵敏度和特异度均较高的荧光原位杂交方法作为对照方法。结果检测阳性标本72例,阴性样本419例。该方法检测的灵敏度为85.9%,特异度为98.79%,准确度为96.74。与荧光原位杂交法(FISH)检测结果相比,二者具有较好的一致性。结论双标准曲线的实时荧光PCR法用于检测HER2基因扩增相对准确可靠,有较好的临床应用前景。 相似文献
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c-erbB癌基因家族基因扩增与乳腺癌临床病理分期的相关性研究 总被引:2,自引:0,他引:2
为探讨c -erbB癌基因家族 4基因扩增与乳腺癌病人临床病理分期的关系及该家族 4基因间的相互作用 ,应用差异聚合酶链反应技术检测 70例乳腺癌组织和癌旁正常乳腺组织中c -erbB家族 4基因扩增情况。结果 70例乳腺癌组织中c-erbB - 1基因和c -erbB - 4基因在癌组织中无扩增 (P >0 0 5) ,而c-erbB - 2基因和c -erbB - 3基因存在明显扩增(P <0 0 5) ,扩增阳性率分别为 33 %和 37%。c -erbB - 2基因扩增阳性率与病理分期正相关 (P <0 0 5) ,c -erbB - 3基因扩增阳性率在乳腺癌病理I至III期中有上升的趋势。同时 ,c -erbB - 2基因扩增与c -erbB - 3基因扩增具有一致性 (P <0 0 0 1 ) ,表明c -erbB - 3基因可能也是乳腺癌发展进程中有用的分子预后指标。对乳腺癌病人检测c -erbB - 2基因与c -erbB - 3基因扩增 ,有助于乳腺癌的临床诊断和治疗 相似文献