甜菜碱促进高GC含量p16基因的PCR扩增

GC含量高的DNA序列在基因组中广泛存在,它们特别容易形成二级结构干扰PCR扩增,难以得到所需目的基因。为解决此问题,采取了各种措施如增加变性及退火温度;用NaOH进行DNA模板变性;加入DMSO、甘油、甲酰胺等溶剂破坏碱基配对;加入dGTP类似物以降低熔解温度Tm等。但上述办法只对部分GC丰富DNA的扩增有效,许多情况下完全无效。近年研究发现甜菜碱能克服这个困难[1-3],我们参考国外报道在PCR中加入甜菜碱,结果成功地扩增出用标准PCR扩增失败的高GC含量的p16全长cDNA序列。1　材料与方法用淋巴细胞分层液从正常人外周血中分离出单…     

PCR基因扩增分析前的质量保证

医学检验的目的是为临床提供可靠的实验诊断依据 ,为了保证检验结果的准确性 ,必须对检测的全过程 (分析前、分析中、分析后 )进行质量控制。在实际工作中对于分析中的质量控制一般比较重视 ,但对分析前的质量控制往往有所忽视 ,例如患者标本留取时机 ,标本收集、处理、储存和运输等是否符合实验要求 ,实验室设置是否合理 ,这些均为影响实验结果的直接因素。文献报告在实验误差中分析前误差约占 70 % ,能否正确规范化收集处理标本是分析前质量保证的重要内容[1 ] ,也是减少实验误差、确保准确及时为临床提供检测结果的重要环节。本文现就临…     

差别PCR及在癌相关基因扩增和缺失研究中的进展

基因的扩增与缺失是癌基因等活化、抑制基因等失活的常见机制之一，差别－ｄ－ＰＣＲ为上述遗传学改变了提供了简便并较敏感的非同位数技术，本文简述了近年严ｄ－ＰＣＲ方法学和用于肿瘤研究的进展。     

用降解的DNA PCR扩增LDLR基因片段的观察

随着分子生物学研究的进展，基因诊断技术得到了越来越广泛的应用，特别是PCR技术，以其快速、高灵敏度及简便地检测目的DNA特异序列易迅速被推广，已应用于很多领域。     

用巢式PCR扩增ZFY基因产前诊断胎儿性别

近年来的研究表明,Ｙ染色体上锌指结构基因（ｚｉｎｃ－ｆｉｎｇｅｒ－Ｙｇｅｎｅ,ＺＦＹ）是继ＳＲＹ之后又一与性分化有关的单拷贝基因,并与精子的发生有关［１,２］。为此,我们利用巢式ＰＣＲ技术,以ＺＦＹ作为检测指标,参考有关文献自行设计内外两侧两对巢式Ｐ...     

人卵巢癌组织中C—myc基因的扩增

采用聚合酶链反应及激光扫描技术，对Ⅰ期４例，Ⅱ期１２例，Ⅲ期１８例，Ⅳ期４例的卵巢癌组织及６例正常卵巢组织的ＤＮＡ作Ｃ－ｍｙｃ基因扩增检测，分析不同临床分期，病理分化程度及淋巴结转移情况与Ｃ－ｍｙｃ基因扩增率之间相关性。     

采用基因释放剂对微量及陈旧标本进行直接PCR扩增

为简化ＰＣＲ方法和减少标本用量，利用基因释放剂不提取ＤＮＡ，比较了利用基因释放剂和不用基因释放剂，对微量肝素抗凝血、微量结肠粘膜组织和含有ＰＣＲ抑制剂的ＤＮＡ标本直接进行ＰＣＲ扩增。结果，利用基因释放剂，可扩增出目的产物，不用基因释放剂 扩增出目的产物。提示利用基因释放剂直接进行ＰＣＲ，简单快还，不用提取ＤＮＡ，适于微量，含有ＰＣＲ抑制剂的ＤＮＡ及陈旧组织标本的检测。     

应用PCR基因扩增法检测孕妇滋养细胞中沙眼衣原体感染

目的应用多聚酶链反应法(polymerase chain reaction,PCR)探讨孕妇滋养细胞中沙眼衣原体感染.方法与结果选择149例孕妇用宫颈内口冲洗法获取滋养细胞进行PCR检测沙眼衣原体感染,阳性率为30.2%,孕早、中、晚期阳性率分别为10.9%,32.7%,51.1%,P<0.05,有明显差异,然而,孕妇年龄、产次与沙眼衣原体感染,P>0.05,无明显差异.结论用PCR技术检测孕妇滋养细胞沙眼衣原体感染,具有特异性强,简便,快速等特点,结果显示,随着孕周增加其沙眼衣原体感染有明显增加趋势.     

高GC含量FMR-1基因的PCR扩增

目的　建立一种简便、快速的脆性X综合征基因筛查法。方法　联合应用二甲基亚和甜菜碱扩增FMR- 1基因的三核苷酸重复序列。结果　本方法大大提高了FMR - 1基因的扩增效率。结论　该方法简便、快速、经济 ,可用于群体普查和门诊快速筛查     

应用PCR方法直接从噬菌体原液中扩增目的基因片段

应用ＰＣＲ方法直接从噬菌体原液中扩增目的基因片段徐砺新，王凡，刘彦仿（第四军医大学病理学教研室，西京医院眼科，西安７１００３２）万大方，顾健人（上海市肿瘤研究所癌基因与相关基因国家重点实验室，上海２０００３２）当前，基因分子生物学已成为全世界研究的热...     

差异PCR技术检测乳腺癌C—erbB2癌基因扩增的研究

为探讨癌基因扩增在乳腺癌中的临床意义，应用差异ＰＣＲ技术检测Ｃ－ｅｒｂＢ２基因在７５例人乳腺癌中扩增情况。结果：３４．７％的乳腺癌存在该基因扩增，且以ＥＲ阴性或腋淋巴结转移〉３枚者明显，而与其它因素关系不大。通过Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交对原样本再次检测，结果与上述基本一致，并发现一例基因重排，表明应用差异ＰＣＲ技术检测Ｃ－ｅｒｂＢ２ｘ扩增具有快速，简单，可靠，无放射性污染，有助于乳腺癌预后及转移潜     

PCR扩增人SRY基因在46，XX男性鉴定中的应用

用PCR技术扩增人SRY基因,能快速,准确地检出YI杂色体,在细胞遗传学基因上进一步鉴定46,XX男性的真实性别,对进一步研究本症,探讨其发病机理有重要意义。     

呼吸道合胞病毒G基因的扩增

用未纯化的呼吸道合胞病毒细胞混和物，采用改良胍－热酚法提取病毒ｍＲＮＡ，反转录合成ｃＤＮＡ，经ＰＣＲ扩增得到大小约９２０ｂｐ的产物。经ＰｓｔＩ酶切表明其中含有ＰｓｔＩ酶切应点，证实其产物确为ＲＳＶＧ基因。此法简便、特异、第三、快速、。由于ＲＳＶ极不稳定，ＲＮＡ甚易降解，此法值得推广应用。     

应用PCR—DGGE检测G6PD基因外显子12突变

人类红细胞葡萄糖６－磷酸脱氢酶（ｇｌｕｃｏｓｅ－６－ｐｈｏｓ－ｐｈａｔｅｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ，Ｇ６ＰＤ）缺乏症是一类累及约２亿人的Ｘ连锁不完全显性遗传病，在临床上表现为新生儿黄疸、慢性非球形细胞性溶血性贫血（ＮＳＨＡ）、蚕豆病和药物诱导性溶血等...     

差异PCR技术检测乳腺癌C－erbB_2癌基因扩增的研究

为探讨癌基因扩增在乳腺癌中的临床意义，应用差异ＰＣＲ技术检测Ｃ－ｅｒｂＢ２基因在７５例人乳腺癌中扩增情况。结果：３４．７％（２６／７５）的乳腺癌存在该基因扩增，且以ＥＲ阴性或腋淋巴结转移＞３枚者明显，而与其它因素关系不大。通过Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交对原样本再次检测，结果与上述基本一致，并发现一例基因重排。表明应用差异ＰＣＲ技术检测Ｃ－ｅｒｂＢ２扩增具有快速、简单、可靠、无放射性污染，有助于乳腺癌预后及转移潜力之判断，临床应用价值较大。     

C—erbB—2基因在宫颈癌中扩增和重排的研究

应用斑点杂交及ＤＮＡ印迹杂交，对Ｃ－ｅｒｂＢ－２基因在宫颈癌中扩增和重排进行了研究。结果表明，在１５例宫颈癌中有１１例具有基因扩增，占７３％，圹增倍数为３～１６倍，ＤＮＡ杂交发现６例宫颈癌中有５例具有基因重排伴扩增，而相应癌旁组织则无扩增或重排，首次发现了Ｃ－ｅｒｂＢ－２基因在宫颈癌中有扩增和重排。     

实时荧光PCR法检测HER2基因扩增方法的建立

目的探讨应用双标准曲线的实时荧光PCR法检测原癌基因人类表皮生长因子受体2（HER2）基因扩增在临床乳腺癌诊治中的可行性。方法收集500例乳腺癌术后新鲜组织标本,抽提组织DNA进行实时荧光PCR检测,采用双标准曲线法定量,通过计算目的基因浓度和内标基因浓度的比值来判断HER2基因的扩增情况。选择灵敏度和特异度均较高的荧光原位杂交方法作为对照方法。结果检测阳性标本72例,阴性样本419例。该方法检测的灵敏度为85.9%,特异度为98.79%,准确度为96.74。与荧光原位杂交法（FISH）检测结果相比,二者具有较好的一致性。结论双标准曲线的实时荧光PCR法用于检测HER2基因扩增相对准确可靠,有较好的临床应用前景。     

c-erbB癌基因家族基因扩增与乳腺癌临床病理分期的相关性研究

为探讨c -erbB癌基因家族 4基因扩增与乳腺癌病人临床病理分期的关系及该家族 4基因间的相互作用 ,应用差异聚合酶链反应技术检测 70例乳腺癌组织和癌旁正常乳腺组织中c -erbB家族 4基因扩增情况。结果　 70例乳腺癌组织中c-erbB - 1基因和c -erbB - 4基因在癌组织中无扩增 (P >0 0 5) ,而c-erbB - 2基因和c -erbB - 3基因存在明显扩增(P <0 0 5) ,扩增阳性率分别为 33 %和 37%。c -erbB - 2基因扩增阳性率与病理分期正相关 (P <0 0 5) ,c -erbB - 3基因扩增阳性率在乳腺癌病理I至III期中有上升的趋势。同时 ,c -erbB - 2基因扩增与c -erbB - 3基因扩增具有一致性 (P <0 0 0 1 ) ,表明c -erbB - 3基因可能也是乳腺癌发展进程中有用的分子预后指标。对乳腺癌病人检测c -erbB - 2基因与c -erbB - 3基因扩增 ,有助于乳腺癌的临床诊断和治疗