Smith-Fineman-Myers综合征的精细定位及候选基因分析

目的　精细定位 Smith- Fineman- Myers综合征 ( Smith- Fineman- Myers syndrome,SFMS)致病基因 ,缩小致病基因候选区域。方法　从原定位区域中选择了 13个新的多态位点 ,采用聚合酶链反应( polymerase chain reaction,PCR)结合变性聚丙烯酰胺凝胶电泳方法 ,分析 SFMS家系中各成员多态位点基因型。从缩小的区域中根据已知基因的功能 ,从中选择了 GPC3、GPCR2、MST4和 GL UD2作为候选基因 ,设计了扩增全部外显子和内含子外显子接头序列的引物 ,通过直接测序法对家系中的患者进行了突变检测。结果　连锁分析结果将 SFMS定位区域缩小到 10 .18Mb,所有 4个候选基因在患者中未检测到突变。结论　候选区域的缩小 ,为最终分离 SFMS的致病基因奠定了基础 ,GPC3、GPCR2、MST4和 GL UD2不是中国山东地区 SFMS的致病基因     

三个先天性长QT综合征家系的基因分型

目的　对 3个先天性长 QT综合征 ( long QT syndrome,L QTS)家族成员进行基因诊断。方法　应用位于 H ERG和 SCN5 A基因内和邻近的短串联重复序列 ( shorttandem repeat,STR)位点确定染色体单体型 ,对 3个汉族 L QTS家系进行单体型连锁分析。结果　临床诊断患者 15例 (其中 3例死亡 ) ,疑似患者 11例。单体型连锁分析结果 :L QTS患者 14例 ,排除 2例假阳性患者和 7例疑似患者。家系 1的致病基因位于 SCN5 A,家系 2和家系 3的致病基因位于 H ERG。结论　单体型连锁分析能为 L QTS基因分型和症状前诊断提供有效手段。     

X染色体上五个多态位点筛选及其多态性分析

目的从X染色体上筛选多态性较强的多态位点,为X连锁遗传病的连锁分析和基因定位奠定基础。方法利用BCMSearchLauncher程序从相关基因组序列中筛选短串联重复序列。利用Primer3设计扩增短串联重复序列的引物,采用PCR扩增技术和聚丙烯酰胺凝胶电泳方法,对所筛选出的短串联重复序列进行多态性分析。结果从X染色体相关区域中筛选出8个短串联重复序列,多态性分析表明,其中的5个短串联重复序列具有多态性,χ2检验表明,各位点的基因型分布符合Hardy-Weinberg平衡定律(P>0.05),且具有较高的杂合度。结论从X染色体上筛选出5个多态位点,可用于X染色体基因的连锁分析和基因定位。     

Smith-Fineman-Myers综合征与X连锁核蛋白基因的连锁分析

目的 明确Smith-Fineman-Myers综合征（Smith-Fineman-Myers syndrome,SFMS)与X连锁核蛋白(X-linked unclear protein,XNP）基因之间的连锁关系。方法 采用聚合酶链反应结合变性聚丙烯酰胺凝胶电泳方法，分析SFMS家系中各成员XNP基因内多态位点基因型。结果 两个多态位点中，XNPSTR1有多态，家系分析结果表明XNP基因与SFMS致病基因之间存在重组。结论 XNP基因不是导致中国山东SFMS家系的致病基因，SFMS存在位点异质性。     

IdentifierTM系统在产前基因诊断中的应用

目的评估IdentifierTM系统在产前基因诊段中的作用。方法采用IdentifierTM试剂盒对100例羊水标本和20例绒毛及其孕妇进行检测,排除母体组织污染后行相应基因检测,对于有母源性DNA污染标本进行羊水细胞培养。结果 100例羊水标本和20例绒毛中,9例羊水标本有母源性DNA污染和4例绒毛标本为母亲组织;羊水标本经培养后,再检测均无污染。2例21-三体、1例18-三体和1例13-三体。结论 IdentifierTM系统不但可对标本的采样、运送、DNA提取等过程进行了监控,还可检测胎儿性别,同时可快速诊断胎儿是否21、18和13-三体;另外对污染的羊水标本进行羊水细胞培养,达到去除污染的目的,这样可避免受检者重新取材。     

三个新的PAH基因短串联重复序列多态性及其在苯丙酮尿症产前诊断中的应用

目的提高经典型苯丙酮尿症的产前诊断的成功率。方法在苯丙氨酸羟化酶（phenylalanine hydroxylase，PAH）基因附近选择了3个新的短串联重复序列（short tandem repeat，STR）位点（PAH26、PAH32和PAH9），进行扩增长度片段多态性分析，确定它们在中国人群的分布及在诊断中的应用价值。结果3个新的STR位点的多态信息含量分别为0．518（PAH26）、0．413（PAH32）和0．362（PAH9）。这3个位点之间，PAH9与第3内含子中的STR位点（TCTA）n之间存在连锁不平衡，其他位点组合不存在连锁不平衡。联合第3内含子中的STR位点（TCTA）n和2个新的位点，可以对家系中突变基因标记进行95％N断，并成功地用于4例产前诊断中。结论选择性地应用PAH基因中的3个STR位点组合，可以95％地区分经典型苯丙酮尿症家系中父母的两个基因，从而准确地进行快速产前诊断。     

一个2型糖尿病家系致病基因的定位

目的：探讨2型糖尿病的分子遗传机理，确定2型糖尿病致病基因染色体定位。方法：利用微卫星标记，对所收集到的2型糖尿病家系进行全基因扫描和基因分型，并用LINKAGE和GENEHUNTER等软件包对基因分型结果进行分析，探讨该2型糖尿病家系致病基因可能的染色体定位。结果：发现在2号染色体长臂上存在着连锁，最大Lod值是1．80，非参数连锁Lod值是5．06。结论：该2型糖尿病家系致病基因定位于2号染色体长臂上。     

用短串联重复序列诊断唐氏综合征

目的　建立一种准确、快速、简便的唐氏综合征 (Down's syndrome,DS)基因诊断技术。方法选择 10个位于 2 1号染色体上唐氏综合征关键区域内 (2 1q2 2 .1～ 2 1q2 2 .2 )或附近的短串联重复序列 (shrottandem repeats,STR)位点 ,应用 PCR与聚丙烯酰胺凝胶电泳或荧光 PCR(ABI 310 )进行 STR分型 ,根据STR位点出现 3条带图谱诊断 DS,荧光半定量的 2∶ 1带型可辅助诊断 ,并用细胞遗传学染色体核型分析进行证实。结果　在 2 0例可疑患者外周血中有 5例 DS阳性结果 ,其中 1～ 6个 STR位点呈 3条带图谱 ,其余为强度 2∶ 1的两条带型。 2 6例 DS的高危孕妇羊水细胞均未检出 3条带图谱和 2∶ 1图谱。基因诊断结果与细胞染色体核型分析一致。结论　联合进行 2 1号染色体上 10个 STR位点的基因分型 ,可准确、快速、简便地作出 DS的基因诊断 ,促进 DS产前诊断的开展 ,降低发病率。     

利用短串联重复序列产前基因诊断唐氏综合征

目的探索用STR-PCR方法进行唐氏综合征产前基因诊断的可行性。方法收集经羊水细胞培养、核型分析已确诊为唐氏综合征的孕妇羊水标本,提取其中的胎儿DNA,并利用聚合酶链反应扩增21号染色体上4个STR位点（D21S11、D21S1411、D21S2039、D21S2055）,根据扩增产物聚丙烯酰胺凝胶电泳分型结果诊断唐氏综合征患者。结果与核型分析结果对比。结果运用STR-PCR电泳分型技术对10例唐氏综合征孕妇的羊水进行诊断,结果与染色体核型分析一致。结论联用4个位点对唐氏综合征标准型患者进行诊断结果准确度高,适宜产前诊断临床应用。     

间期FISH技术和短串联重复序列快速诊断21三体综合征

目的利用间期FISH技术和短串联重复序列PCR相关技术快速诊断21三体综合征,两者进行比较,以筛选出更适合基层医院推广的技术。方法一是对患者外周血淋巴细胞进行间期FISH检测21三体综合征,二是对患者外周血进行短串联重复序列PCR检测21三体综合征。结果两种诊断21三体综合征的准确性均无显著性意义,但从经济、技术要求、出结果时间比较,短串联重复序列PCR更适合于基层医院推广。     

应用D21S11、D21S1440和Penta D短串联重复序列诊断唐氏综合征

目的 探讨应用短串联重复序列(short tandem repeat,STR)诊断唐氏综合征(Down's syndrome,DS)的可行性,为建立一种快速、准确诊断DS的技术提供依据.方法 用定量荧光聚合酶链反应扩增719份样本(包括外周血389例、羊水282例和绒毛48例)21号染色体上D21S11、D21S1440和Penta D STR基因座,通过对扩增产物条带的分析达到诊断DS的目的.结果 核型正常的652份样本中,635份表现为荧光强度为1∶1的2条带或1条带,17例表现3条带,为假阳性.67份DS样本均得到了诊断,53份样本出现1∶1∶1的3条带(峰),14份样本出现2:1的2条带(峰).D21S11、D21S1440和PentaD STR基因座诊断DS的灵敏度和特异度分别为76.12％和98.62％、71.64％和98.93％、89.55％和99.85％.联合应用3个基因座诊断DS的灵敏度为100％(67/67),特异度为97.39％(635/652).结论 用定量荧光聚合酶链反应扩增STR基因座具有灵敏度高、特异度强、简便、快速等优点,在临床上有广阔的应用前景,是大规模产前筛查DS的理想工具.     

Tentative assignment of gene for oto-palato-digital syndrome to distal Xq (Xq26–q28)

Detailed physical mapping of oto-palato-digital (OPD) syndrome gene on the X-chromosome was attempted on a family of 3 generations with 2 affected men. Although the result remains statistically non-significant, it indicates that the OPD-I gene might be located on the distal Xq.     

核型为48,XXXY的异常核型一例起源分析

目的对一例核型为48,XXXY的Klinefelter综合征患者的异常核型起源进行分析,探讨其发病机制。方法选择DXS7593和DXS8064位点,对患者及其父母进行X染色体的短串连重复序列分析。结果 DXS7593位点检测提示患者的1条X染色体源自父亲,另2条X染色体源自母亲的同源染色体;DXS8064位点没有提供信息。结论患者异常核型发生机制为母亲的生殖细胞X染色体第二次减数分裂不分离导致携带XX卵子与父亲生殖细胞第一次减数分裂不分离携带XY精子相结合,形成核型48,XXXY的胚胎。     

MLPA联合遗传连锁分析在假肥大型肌营养不良症产前诊断中的价值

目的 探讨多重连接依赖探针扩增技术(multiplex ligation-dependent probe amplification,MLPA)联合短串联重复序列(short tandem repeat,STR)基因连锁分析用于Duchenne型假肥大型肌营养不良症(Duchenne muscular dystrophy,DMD)产前诊断的价值.方法 通过检测Y染色体性别决定基因(Y chromosome sex-determining gene,SR Y)判断胎儿性别;MLPA检测45个DMD家系中先证者、孕妇以及胎儿Dystrophin基因突变情况,并对家系成员和胎儿进行第45、49、50内含子以及5′和3 ′端STR的连锁分析.结果 45个进行产前诊断的家系中,SRY阳性31例,其中6例为DMD患病胎儿;阴性14例,其中4例为携带者,余未见异常.结论 MLPA能检测胎儿Dystrophin基因外显子突变情况,STR连锁能分析胎儿是否继承母源性风险X染色体,因此,STR连锁分析能发现MLPA技术检测不到的外显子突变胎儿.将两种方法结合起来用于DMD的产前诊断准确性更高.     

Genetic structural differences between responders and non-responders to interferon therapy for chronic hepatitis-B patients

Interferon-α therapy has become a main stay of treatment for hepatitis-B patients. The sustained remission rates are around 30%, and the factors determining response are poorly defined. Our study aimed to search for the genetic differences between responder and non-responder patients. We have found 13 short tandem repeat markers (STR) that display different allele and/or genotype frequency between the two patient groups. Eleven out of 13 STR markers were selected to perform principal component analysis and hierarchical clustering. The study subjects could be further divided into six groups based on their genetic similarity, which correlated with the drug response rate. In conclusion, this pilot study has developed a new approach to identify genetic markers that allows us to predict the drug response in hepatitis B patients. Our study utilizing STR markers may provide an alternative approach to the utilized SNP markers in pharmacogenetic study.     

Angelman综合征的遗传学诊断

目的 探讨Angelman综合征(Angelman syndrome,AS)的遗传学诊断,为临床诊断和遗传咨询提供信息.方法 应用甲基化特异性PCR(methylation-specific PCR,MS-PCR)对16例临床疑似AS病例进行基因诊断,并选择15号染色体特定区域内、外的短串联重复序列作为遗传标记对MS-PCR诊断阳性的AS核心家系进行连锁分析,以进一步确定其分子病理学类型.结果 应用MS-PCR技术诊断10例AS患儿,家系连锁分析显示10例AS患儿中有9例为15q11-13片段缺失型,1例为印记缺陷型.结论 MS-PCR检测能够诊断大部分AS,家系连锁分析可进一步区分其具体的分子病理学类型.开展相关的遗传诊断对临床诊断、遗传咨询以及产前诊断都具有积极的作用.     

Mapping a gene for 46,XY gonadal dysgenesis by linkage analysis

46,XY gonadal dysgenesis was transmitted as an autosomal-dominant trait in a large family with multiple affected members. Expressivity of the trait was highly variable, ranging from pure to partial gonadal dysgenesis associated with normal female genitalia or sexual ambiguity, to mild hypospadias in otherwise normal males. The phenotypic features of this trait appeared to be confined to the genitourinary system. Multipoint parametric analysis using markers D5S664, D5S633, and D5D2102 yielded an LOD score of 4.47, assuming sex-limited, autosomal-dominant inheritance with a penetrance of 0.6. Because mutation in testis-determining genes leads to gonadal dysgenesis in 46,XY individuals, we postulate that the gene mapped by this study normally plays a role in gonadal differentiation.     

应用PCR-STR分型技术快速产前基因诊断Down综合征

目的探讨应用PCR-STR分型技术,快速产前基因诊断Down综合征(Down syndrome,DS)方法.方法选择21号染色体上的4个短串联重复序列D21S2055、D21S1244、D21S1435和D21S1809,进行PCR扩增,尿素非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳,银染分型.根据谱带的条数及浓度判断是否为21三体,根据父母基因型判断额外21号染色体的亲代来源,选择30例高危孕妇进行21三体的产前基因诊断.结果应用此方法可检出所有的由核型分析确诊的单纯型21三体,并可判定额外染色体的亲代来源.30例产前诊断筛出2例21三体患儿.结论该方法不用细胞培养,避免放射性标记,并可进行早期产前诊断.该方法比传统的方法操作简单、速度快,是一种产前诊断和大规模筛查21三体的良好的方法.     

Neurogenetic diseases: molecular diagnosis and therapeutic approaches

A neurogenetic disorder is defined as a clinical disease caused by a defect in one or more genes which affect the differentiation and function of the neuroectoderm and its derivatives. Genetic findings in various neurogenetic disorders are discussed. Huntington disease, spinobulbar muscular atrophy, and the autosomal dominant cerebellar ataxias are examples of autosomal dominant disorders caused by the expansion of trinucleotides (CAG) within disease genes. The CAG expansions appear to result in a gain of gene function. Prenatal, presymptomatic, and differential diagnostic tests are based on the detection of the repeat expansions. Point mutations within disease genes result in many additional neurogenetic disorders. An autosomal dominant form of amyotrophic lateral sclerosis and various types of craniosynostotic syndromes are described. The mutations in the disease genes also appear to result in a gain of gene function. Molecular diagnosis in these disorders is based on the direct examination of the mutated gene by methods such as single-strand conformation polymorphism analysis, denaturing gradient gel electrophoresis, and direct DNA sequencing. In many neurogenetic disorders the disease gene has not yet been identified. Here molecular diagnosis relies on indirect approaches based on methods such as the analysis of linkage and of allelic association. Hereditary forms of dystonia are presented as examples. Common sporadic neurological disorders such as Alzheimer and Parkinson diseases frequently have multifactorial causes. Investigations into the molecular basis and the development of diagnostic tests in these two important diseases are discussed. At present no curative therapies exist in neurogenetic disorders. Gene therapeutic approaches, however, provide promise for a cure in at least some of these diseases. Basic principles of gene therapy are explained and attempts at gene therapy in Alzheimer and Parkinson diseases are described. Finally, some of the many obstacles are summarized that must be overcome before gene therapy becomes feasible in most monogenic neurological diseases.Abbreviations AD Alzheimer disease - ALS Amyotrophic lateral sclerosis - apoE Apolipoprotein E - APP Amyloid precursor protein - AR Androgen receptor - DGGE Denaturing gradient gel electrophoresis - DRPLA Dentatorubral pallidoluysian atrophy - HD Huntington disease - MJD Machado-Joseph diseas - NGF Nerve growth factor - PCR Polymerase chain reaction - PD Parkinson disease - SBMA Spinobulbar muscular atrophy - SCA Spinocerebellar ataxias - SSCP Single-strand conformation polymorphism