大鼠脊髓T9全横断后损伤区域超微结构观察

目的 观察大鼠脊髓全横断损伤后神经细胞及髓鞘超微结构变化特征.方法 将36只成年Wistar大鼠随机分为正常对照组及脊髓(T9)完全横断伤后8 h组、24 h组、48 h组、1周组、3周组,每组6只.分别在各时间点灌注固定后取材,制备常规HE染色切片及电镜标本,对各组动物脊髓内神经细胞及髓鞘形态变化进行观察和分析.结果 脊髓损伤后神经元和神经胶质细胞呈不同形式的死亡,髓鞘肿胀,紊乱.术后8 h,损伤中心以细胞坏死为主,损伤周围出现凋亡细胞,以少突胶质细胞为主.随着时间的延长灰质和白质内凋亡细胞增多.损伤后期胶质细胞增生明显.结论 脊髓损伤后神经细胞和髓鞘超微结构随时间变化呈多样性,凋亡是脊髓继发性损伤中细胞死亡的重要形式.     

一氧化氮、内皮素及氧自由基对大鼠酒精性胃损害的作用研究

目的研究大鼠酒精性胃损害中,一氧化氮(NO)、内皮素(ET)和氧自由基的作用,以及NO对ET-1、丙二醛(MDA)水平的影响.方法以酒精给大鼠灌胃制备急性胃粘膜损害模型,实验分为五组,应用L-NAME或/和L-Arg依不同分组行尾静脉注射.取门脉血测定NO、ET-1和MDA水平,并取出胃进行形态学观察.结果酒精灌胃后,大鼠门脉血NO含量降低,ET-1和MDA量升高,粘膜损伤加重.L-NAME组NO进一步减少,ET-1和MDA更加升高,粘膜损伤明显加重.L-Arg与L-NAME合用后NO、ET-1及MDA水平均有不同程度恢复,粘膜损伤亦减轻.NO与ET-1及MDA水平呈负相关.结论在酒精性胃损害中,ET-1与氧自由基生成增加,起损害作用,内源性NO可调节ET-1的生成,清除氧自由基而发挥保护作用.     

电针对继发性脊髓损伤后大鼠神经元自噬及相关蛋白轻链3Ⅱ和bcl-2/腺病毒E1B19000相互作用蛋白3表达的影响

目的观察电针治疗对大鼠继发性脊髓损伤(SCI)后神经元自噬及相关蛋白表达的影响。方法健康SD大鼠随机分为对照组、模型组、西药组(甲泼尼龙治疗)及电针组(电针大椎、命门穴治疗)4组;除对照组外,其他3组均采用改良的Allen打击装置(50 g/cm)复制大鼠T10~11中度SCI模型。分别于SCI后6 h、1 d、7 d取损伤局部脊髓组织,经透射电子显微镜及Western印迹法,观察各组SCI后神经元自噬的病理变化及轻链(LC)3Ⅱ、bcl-2/腺病毒E1B19000相互作用蛋白(BNIP)3的表达。结果 1SCI后1 d脊髓组织中LC3Ⅱ、BNIP3表达明显升高(P<0.01);电针组和西药组SCI后脊髓组织中LC3Ⅱ、BNIP3的表达显著降低,与模型组差异显著(P<0.01);西药组与电针组差异不显著(P>0.05)。2在透射电镜观察下,对照组脊髓组织神经元细胞核膜完整,胞质中线粒体形态分布及数目正常,未发现自噬小体,溶酶体数目也未见增多;模型组脊髓组织可见线粒体肿胀明显、空泡化,溶酶体数量增多,细胞核形不规则,可发现自噬小体;西药组和电针组可见脊髓组织神经元细胞肿胀,线粒体也略肿胀,核形规则,核内染色质欠均匀,溶酶体数目未见明显增多。结论电针可降低SCI大鼠脊髓组织中LC3Ⅱ和BNIP3的表达,抑制细胞自噬,减缓脊髓损伤后的病理损害,其作用与甲泼尼龙相仿。     

一氧化氮在ConA诱发小鼠急性肝损害中的作用

目的：观察一氧化氮（NO）在刀豆素（ConA）诱发急性小鼠肝损害中的作用。方法：25只昆明小鼠随机分为5组，ConA(40mg/kg)自小鼠尾静脉注入复制急性肝损害，为ConA组；应用ConA前半小时，给予NO合成的抑制剂（L-NAME，5mg/只），为LN组；应用ConA前半小时，给予NO合成底物（L-精氮酸），为L-精氮酸组；单独给予L-NAME(5mg/只)者为L-NAME组；对照组只给予尾静脉注射生理盐水。各组8小时后取血分别测定丙氮酸转氮酶（ALT），取肝组织测定亚硝酸盐（NO2^-）和丙二醛（MDA）含量。结果：ConA造成肝损害后，肝组织中亚硝酸盐（NO2^-）较对照组显著升高；以L-NAME抑制NO合成，肝组织中NO2^-含量下降，肝细胞损害反而加重，且肝组织MDA增加，肝窦内血细胞淤集加重；L-精氮酸组未见明显的肝脏保护作用。结论：在ConA性肝损害中，NO通过消除氧自由基和抑制血细胞在肝窦内淤而发挥一定的保护作用。     

针灸预处理对成年和老年甲醛致痛大鼠脊髓NO分布和c-fos表达的影响

目的比较成年和老年大鼠对炎症性疼痛反应的差别,以及针灸预处理对成年和老年甲醛致痛大鼠脊髓一氧化氮(NO)分布和cfos表达的影响。方法将4月龄和21月龄雄性SD大鼠分别随机分为对照组(不做任何处理)、甲醛组(仅注射甲醛)、针灸足三里穴+甲醛组(针灸足三里穴后注射甲醛)、针灸非穴位+甲醛组(针灸非穴位后注射甲醛),每组6只大鼠。针灸处理后,除对照组外,其余各组于针灸位点同侧足底注射甲醛。观察大鼠行为学反应,记录甲醛注射后1 h内的缩足次数和舔(咬)足时间,1.5 h后灌流取脊髓第4腰髓至第5腰髓节段,采用酶组织化学染色和免疫组织化学染色法检测脊髓NO的分布和c-fos的表达。结果对照组NO数量较低,且老年大鼠脊髓背角NO数量低于成年大鼠(P0.01);Fos免疫阳性神经元基础水平较低,且在成年和老年大鼠间无差异(P0.05);成年和老年大鼠脊髓未发现NO和Fos双标阳性神经元。甲醛组老年大鼠继发疼痛时相的缩足次数高于成年大鼠(P0.05);与对照组比较,NO阳性神经元、Fos免疫阳性神经元和二者双标阳性神经元数量在成年和老年大鼠脊髓均增加(P0.01),且老年大鼠的NO阳性神经元(脊髓背角,P0.05;中央管,P0.01)和Fos免疫阳性神经元数量(P0.01)高于成年大鼠。针灸足三里穴+甲醛组成年和老年大鼠继发疼痛时相的缩足次数(P0.01)和舔(咬)足时间(成年,P0.05;老年,P0.01)低于甲醛组;成年和老年大鼠脊髓NO阳性神经元、Fos免疫阳性神经元和二者双标阳性神经元数量均低于甲醛组(P0.01);且老年组NO阳性神经元和Fos免疫阳性神经元数量较甲醛组下降的幅度高于成年组大鼠(P0.01)。针灸非穴位+甲醛组成年和老年大鼠继发疼痛时相的缩足次数、舔(咬)足时间、NO阳性神经元、Fos免疫阳性神经元和二者双标阳性神经元数量与甲醛组比较无差异(P0.05)。结论老年大鼠对炎症性疼痛的反应强于成年大鼠,针灸预处理足三里穴可以提高大鼠痛阈,减轻疼痛反应,降低脊髓NO的数量和c-fos的表达,且对老年大鼠的作用优于成年大鼠。     

L-硝基精氨酸甲酯对大鼠肢体缺血再灌注继发心肌损伤的影响

目的 研究L-硝基精氨酸甲酯(L-NAME)对肢体缺血再灌注(LIR)后心肌损伤的影响.方法 止血带法制作LIR大鼠模型,随机分成缺血再灌注组(A组)、L-NAME处理组(B组)、对照组.B组在再灌注前经静脉给予L-NAME 10 mg/kg,A组和对照组静注等量生理盐水.观察三组心肌组织丙二醛(MDA)、髓过氧化物酶(MPO)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、血浆磷酸激酶(CK)、磷酸激酶同工酶(CK-MB)及NO含量;心脏插管检测平均动脉压(MAP)、左心室收缩压(LVSP)、收缩期左室内压上升最大速率(DP/Dtmax)、舒张期左室内压下降最大速率(-DP/Dtmax);光镜下观察心肌组织的形态学变化.结果 A、B组心肌组织MDA、MPO和TNF-α含量增加(P<0.01,<0.05),血浆CK、CK-MB及NO水平升高(P<0.01),MAP、LVSP等血流动力学指标下降,镜下可见心肌细胞水肿等组织损伤征象.静脉给予L-NAME后,心肌组织MDA、MPO含量增加和血浆CK、CK-MB及TNF-α升高更加明显(P<0.01或P<0.05),NO、DP/Dtmax、-DP/Dtmax显著下降(P<0.01),光镜下心肌组织的损伤性表现加重.结论 L-NAME可能通过抑制体内NO生成而加重大鼠LIR继发的心肌损伤.     

大鼠脊髓损伤后IGF-1和Bcl-2表达变化的免疫组织化学研究

目的探讨大鼠脊髓损伤（SCI）后胰岛素样生长因子-1（IGF-1）和Bcl-2的表达规律，为临床治疗SCI及法医学损伤时间推断提供依据。方法自制改良Allen’S打击装置致大鼠T13段脊髓不完全损伤，免疫组化S—P法检测正常及伤后3h、6h、12h、1d、2d、3d、5d、7d、14d大鼠脊髓组织中IGF-1和Bcl-2的表达。结果正常大鼠脊髓组织内有低水平的IGF-1和Bcl-2表达。SCI后IGF-1表达即呈升高趋势，3d达高峰，阳性细胞以神经元和胶质细胞为主，14d时下降至正常水平。Bcl-2在伤后的表达呈现双峰现象，即伤后1d时Bcl-2免疫阳性细胞首次数达峰值，此后开始下降，3d时又开始升高，5d时又达高峰，并较前一峰值高。14d时与对照组无差别。达第一峰时Bcl-2免疫阳性细胞主要为脊髓神经元，而后一峰则以胶质细胞为主。IGF-1和Bcl-2的表达与正常组有统计学意义（P〈0．05）。结论SCI后IGF-1和Bcl-2基因表达开始升高，可协同发挥神经元保护作用，且IGF-1可上调Bcl-2的表达。二者可用于临床SCI的治疗以及法医学损伤时间推断。     

弥漫性脑损伤大鼠的神经功能改变及Homer1a蛋白表达

目的 探讨弥漫性脑损伤(DBI)大鼠的神经功能及其皮层组织Homer1a蛋白表达改变及意义.方法 选择成年雄性SD大鼠45只,随机分为正常对照组5只、假手术组5只、DBI组35只.DBI组采用Marmarou等方法建立DBI模型,分别于伤后30 min,3、6、12、24、48、72 h断头取脑;假手术组仅切开头皮开天窗,不致伤;正常对照组不做任何处理.对三组大鼠进行后肢抓持反射试验、触须诱发前肢定位试验、侧向垫步试验,评价其神经功能;采用HE染色观察各组皮层神经元细胞形态变化,免疫组化法观察Homer1a蛋白表达情况.结果 与正常对照组、假手术组比较,DBI组大鼠神经功能评分降低,但其伤后3、24 h评分出现高峰(P均＜0.05).DBI组皮层神经元细胞出现变性、坏死和凋亡改变;DBI伤后30 min,Homer1a蛋白开始表达,持续至伤后72 h,以伤后3、24 h最多(P均＜0.01).结论 大鼠DBI后神经功能评分降低,损伤前后皮层Homer1a蛋白表达有显著变化,提示Homer1a蛋白参与神经元的损伤过程.     

辣椒素敏感传入神经在电刺激室旁核减轻大鼠胃缺血-再灌注损伤中的作用

目的:观察辣椒素敏感传入神经及内源性一氧化氮(NO)在电刺激PVN减轻大鼠GI-R损伤中的作用.方法:将SD大鼠随机分为6组:GI-R组,假电刺激PVN组,电刺激PVN组,溶剂组,辣椒素预处理组及L-NAME组.采用夹闭大鼠腹腔动脉30 min去除动脉夹再灌注1 h的GI-R损伤模型.采用核团内电刺激PVN以兴奋其内神经元及大剂量辣椒素预处理使辣椒素敏感传入神经失去功能等方法,研究辣椒素敏感传入神经在PVN对GI-R损伤调控中的作用.结果:用大剂量辣椒素消除辣椒素敏感传入神经作用后,可以部分阻断电刺激PVN引起的保护效应,损伤较电刺激组加重54.85%,与对照组比较差异显著LP＜0.05);给予NO合酶阻断荆L-NAME后,能够阻断电刺激PVN的保护效应,损伤较电刺激组加重72.98%,与对照组比较差异显著(P＜0.05).结论:辣椒素敏感传入神经及内源性NO参与了电刺激PVN对GI-R损伤的保护效应.     

N-硝基-L-精氨酸甲基酯对阿霉素致大鼠心肌损伤的影响

目的 研究一氧化氮合酶抑制剂N-硝基-L-广精氨酸甲基酯（L-NAME）对阿霉素（ADM）致大鼠心肌损伤的保护作用。方法 85只雄性Wistar大鼠，随机分为ADM组、ADM＋L-NAME组及对照组。实验第30天，光镜下观察心肌形态结构病理改变；测定血清及心肌组织中的脂质过氧化物（MDA）和超氧化物歧化酶（SOD）活性；测定心肌组织中的一氧化氮（NO）及诱导型一氧化氮合酶（iNOS）的活性。结果 光镜下ADM＋L-NAME组大鼠心肌病理损害程度较ADM组轻，ADM＋L-NAME和ADM两组心肌坏死灶的检出率分别为16.7％和43.3％。二者比较差异显著意义（P〈0.05）。与ADM组比较，ADM＋L-NAME组血清、心肌组织中的MDA显著降低，而SOD活性显著增加；与对照组比较，ADM组心肌中NO和iNOS的活性均显著升高。结论 L-NAME对ADM致大鼠心肌损伤有保护作用，其机理可能与抑制iNOS活性使心肌组织NO减少有关。     

丹参多酚酸盐对健康人血小板内皮型一氧化氮合酶活性的影响

目的观察不同浓度的丹参多酚酸盐(depside salt from Salvia Miltiorrhiza)对正常人血小板内皮型一氧化氮合酶(eNOS)活性的影响。方法采集健康人外周静脉血,用凝胶色谱柱法纯化血小板,同位素二步色谱法测定血小板eNOS的活性。将收集的血小板分别与eNOS激动剂组织胺和(或)eNOS抑制剂N-ω-硝基左旋精氨酸甲酯盐酸盐(L-NAME)或不同浓度丹参多酚酸盐一起孵育30min后测定血小板eNOS活性。结果组织胺可以明显增加eNOS活性;L-NAME可以明显抑制基础状态下血小板eNOS活性以及组织胺刺激后eNOS活性的增加;丹参多酚酸盐在浓度0.1～10mg/L间呈浓度依赖性增加血小板eNOS活性(P<0·05);浓度达10mg/L时这种刺激作用达高峰,更高浓度时血小板eNOS活性反而逐渐降低。结论丹参多酚酸盐在一定剂量范围(<10mg/L)内可以明显增加血小板eNOS活性。     

丹参对原位肝脏隔离灌注区域性化疗所致细胞免疫抑制和肝脏损害的防护作用

目的:观察丹参对原位肝脏隔离灌注区域性化疗所致细胞免疫抑制和肝脏损害的防护作用。方法:用大剂量5-氟脲嘧啶原位肝脏隔离灌注技术行犬区域性化疗,观察静脉全身给药组、原位肝脏隔离灌注对照组、原位肝脏隔离区域性化疗组及丹参组等不同组别对犬外周血细胞免疫功能的影响、肝细胞损害及丹参的防护作用。结果:肝脏隔离灌注区域性化疗对实验动物的细胞免疫抑制作用明显小于同等剂量的静脉给药组,而且恢复快;丹参组细胞免疫功能(T、B、NBT、淋转等)明显高于区域性化疗组(P<0.05);丹参组犬血清MDA水于明显低于区域性化疗组(P<0.05)。结论:丹参对原位肝脏隔离灌注区域性化疗所致的细胞免疫和肝脏损害具有防护作用。     

BDNF基因修饰的NSCs移植对大鼠脊髓损伤后轴突再生及后肢运动功能的影响

目的探讨脑源性神经营养因子(BDNF)基因修饰的神经干细胞(NSC-BDNF)移植对脊髓损伤(SCI)的可行性及效果。方法将120只SCI大鼠随机分为四组各30只,假手术组(Sham组)仅做椎板切开术,伤后3 d损伤组(SCI组)脊髓内注射生理盐水溶液5μl,NSC组髓内注射移植细胞密度为2×105/μl的NSCs悬液5μl,NSC-BDNF组髓内注射NSC-BDNF悬液5μl。采用免疫组织化法检测1、3、7、14、28 d脊髓组织BDNF、神经丝蛋白(NF200)表达;行为学评分法判断后肢运动功能恢复情况。结果 NSC-BDNF组BDNF水平明显高于其他三组,且随着时间延长而增高(P<0.05或0.01);NSC-BDNF组NF200水平、运动功能评分明显高于SCI组、NSC组,低于Sham组,且随着时间延长而增高和降低(P<0.05或0.01)。结论 NSC-BDNF在损伤脊髓内可存活、迁移,并参与SCI神经轴突的结构重建,从而促进后肢运动功能恢复。     

红花黄素对脊髓损伤大鼠的保护作用

目的探究红花黄素(SY)对脊髓损伤(SCI)的保护作用及其作用机制。方法将SCI模型大鼠分为模型(Model)组、重组高迁移率组蛋白(HMG)B1处理组(HMGB1组,8μg/kg)、SY干预组(SY组,40 mg/kg)、HMGB1+SY组(8μg/kg HMGB1+40 mg/kg SY),另设假手术(Control组),各组均12只,各组连续给药28 d。行为学运动(BBB)评分法评定运动行为;获取脊髓组织,采用苏木素-伊红(HE)染色观察脊髓组织病理形态学变化;免疫印迹法(WB)检测脊髓组织中HMG B1、Toll样受体(TLR)4、核转录因子(NF)-κB蛋白表达;制备脊髓组织匀浆液,采用酶联免疫吸附试验检测超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSHP)、过氧化氢酶(CAT)、丙二醛(MDA)水平;Tunel染色观察脊髓组织中神经元细胞凋亡情况;Western印迹法检测B淋巴细胞瘤-2蛋白(Bcl-2)、Cleaved-caspase3、Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达。结果与Control组相比,Model组BBB评分显著降低,SOD、GSHP、CAT水平显著降低,MDA水平显著升高,HMGB1、TLR4、NF-κB蛋白表达显著升高,脊髓组织神经细胞凋亡率显著升高,Bax、Cleaved-caspase3蛋白表达显著升高,Bcl-2蛋白表达显著降低(P<0.05)。与Model组相比,HMGB1组BBB评分显著降低,SOD、GSHP、CAT水平显著降低,MDA水平显著升高,HMGB1、TLR4、NF-κB蛋白表达显著升高,脊髓组织神经细胞凋亡率显著升高,Bax、Cleaved-caspase3蛋白表达显著升高,Bcl-2蛋白表达显著降低(P<0.05);SY组、HMGB1+SY组与Model组及HMGB1组比较BBB评分显著升高,SOD、GSHP、CAT水平显著升高,MDA水平显著降低,HMGB1、TLR4、NF-κB蛋白表达显著降低,脊髓组织神经细胞凋亡率显著降低,Bax、Cleaved-caspase3蛋白表达显著降低,Bcl-2蛋白表达升高(P<0.05)。结论 SY可能通过抑制HMGB1/TLR4/NF-κB信号通路,缓解SCI后氧化应激水平,减低脊髓组织神经元细胞凋亡,缓解脊髓组织、运动功能损伤。     

比较复方丹参滴丸与丹参片治疗冠心病心绞痛的疗效

目的 :比较复方丹参滴丸与丹参片治疗冠心病心绞痛的疗效。方法 :复方丹参滴丸组 3 8例 ,用复方丹参滴丸10粒 ,tid;丹参片组 3 4例 ,用丹参片 3片 ,tid。两组疗程均为 4周。结果　复方丹参滴丸组对症状改善的总有效率为 95 % ,心电图 ST-T改善总有效率为 71% ;丹参片组分别为 76% ,5 0 % ,两组差别有显著意义 （P<0 .0 5 ） ,复方丹参滴丸组并能有效地降低血粘滞度。结论 :复方丹参滴丸是一种安全有效治疗冠心病心绞痛的药物 ,较丹参片疗效好。     

鼻嗅黏膜固有层移植及神经节苷脂治疗脊髓损伤的实验研究

目的 将从大鼠嗅黏膜中获取的鼻嗅黏膜固有层(OLP)组织薄片移植到大鼠脊髓横断区,同时应用神经节苷脂(GM1)治疗,观察其对损伤脊髓的修复作用.方法 采用SD大鼠胸脊髓半切损伤模型,随机分为5组:OLP+GM1组、GM1组、OLP组,单纯损伤组、空白对照组.术后应用电生理学及病理学检查,观察大鼠神经功能恢复情况.结果 OLP+GM1组部分大鼠出现刺激右后肢的逃避反应,其余各组运动功能无明显改善.组织学检查显示,OLP+GM1组嗅组织在移植区成活,并沿着一定路线辐射,核转录因子阳性纤维穿行于移植区.与GM1、OLP,单纯损伤组比较,术后4周OLP+GM1组N1波潜伏期(4.71±0.72)ms(P<0.01);术后8周OLP+GM1组核转录因子(NF)密度(7.31±0.26)×104个/mm2(P<0.05).结论 鼻嗅组织移植及GM1联合治疗脊髓损伤,具有明显的协同作用.     

Melatonin regulates matrix metalloproteinases after traumatic experimental spinal cord injury

Abstract:  The matrix metalloproteinases (MMPs) are important enzymes that regulate developmental processes, maintain normal physiology in adulthood and have reparative roles at specific stages after an insult to the nervous system. MMPs, particularly MMP-9/gelatinase B, promote early inflammation and barrier disruption after spinal cord injury (SCI). Recently, we have reported that the pineal secretory product melatonin exerts important anti-inflammatory effects in an experimental model of SCI induced by the application of vascular clips (force of 24 g) to the dura after a four-level T5–T8 laminectomy. However, no reports are available on the relationship between the activity of MMPs and melatonin's anti-inflammatory effects. The aim of the present study was to evaluate whether the protective effect of melatonin observed in SCI is related to the regulation of MMP-9 and MMP-2 in mice. Biochemical and zymographic methods were used to analyze MMP-9 and -2 expression and activities in spinal cord tissue from SCI-treated mice at 24 hr after the trauma. Our studies reveal that melatonin reduced SCI and lipid peroxidation in spinal cord at 24 hr after SCI. Melatonin also diminished proMMP-9 and -2 activities that were induced in the spinal cord tissues at 24 hr after SCI. The reduced activities of MMP-9 and -2 were associated with depressed expression of TNF-α. We propose that melatonin's ability to reduce SCI in mice is also related to a reduction in MMP-9 and MMP-2 activity and expression.     

酒精性肝损伤大鼠肠道屏障功能改变及丹参的保护作用

[目的]观察酒精性肝损伤大鼠肠道屏障功能（IBF）的改变,并探讨丹参对IBF的保护作用。[方法]36只SD大鼠随机分为正常对照（A）组、模型（B）组、丹参治疗（C）组,每组12只,分别于实验12周末处死动物,检测肠道细菌易位率、肠黏膜通透性,同时观察肝脏生化、肝脏和末段回肠黏膜病理学改变。[结果]大鼠血清丙氨酸氨基转移酶、天冬氨酸转氨酶、肠道细菌易位率B组显著高于A、C组（均P〈0．05）,A、C组之间差异无统计学意义（P〉0．05）;肠黏膜通透性A组显著低于B、C组（均P〈0．05）,C组显著低于B组（P〈0．05）;末段回肠病理损伤B组显著重于A、C组（均P〈0．05）,C组显著重于A组（P〈0．05）。[结论]大鼠酒精性肝损伤伴有IBF改变,丹参对大鼠酒精性肝损伤及IBF具有双重保护作用。