亚氨乙基赖氨酸对庆大霉素所致豚鼠耳蜗损伤的拮抗作用

探讨亚氨乙基赖氨酸对庆大霉素所豚鼠耳蜗损伤的拮抗作用。将实验豚鼠分为正常对照组、实验对照组和实验组。实验对照组和实验组豚鼠皮下注射庆大霉素，同时实验组豚鼠腹腔注射亚氨乙基赖氨酸，实验对照组豚鼠腹腔注射等量生理盐水。正常对照组豚鼠皮下及腹腔均注射等量的生理盐水。用免疫组织化学的方法检测诱生型一氧化氮合成酶在各组豚鼠耳蜗中的表达。用ABR检测各组豚鼠听阈的改变，同时以扫描电镜观察耳蜗毛细胞的损伤。结果显示，诱生型一氧化氮合成酶在正常对照耳蜗的表达呈阴性，在实验对照组和实验组耳蜗的表达呈阳性，且在实验对照组的表达强于实验组。实验组ABR阈移明显小于实验对照组，且实验组耳蜗的损伤明显轻于实验对照组，研究表明，诱生型一氧化氮合成酶在庆大霉素损伤耳蜗中呈阳性表达。亚氨乙基赖氨酸对庆大霉素所致豚鼠耳蜗损伤有明显的拮抗作用，提示一氧化氮在庆大霉素所致耳蜗的损伤中起重要作用。     

＋GZ重复暴露对大鼠脑组织神经生长因子和碱性成纤维细胞生长因子基因表达的影响

目的了解＋ＧＺ重复暴露后大鼠脑组织神经生长因子（ＮＧＦ）和碱性成纤维细胞生长因子（ｂＦＧＦ）基因表达的变化,探讨两种生长因子在＋ＧＺ暴露所致脑损伤中的作用和意义。方法２４只雄性Ｗｉｓｔａｒ大鼠随机分成对照组、＋ＧＺ重复暴露后３０ｍｉｎ、６ｈ和２４ｈ四组,每组６只。对照组大鼠Ｇ值为＋１ＧＺ,实验组大鼠在动物离心机上经历了３次＋１０ＧＺ／３ｍｉｎ（两次间间隔３０ｍｉｎ）作用。分别于暴露后３０ｍｉｎ、６ｈ和２４ｈ处死大鼠取脑,提取总ＲＮＡ,用半定量反转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）检测方法检测＋ＧＺ重复暴露后大鼠脑组织ＮＧＦ和ｂＦＧＦｍＲＮＡ表达水平。结果＋ＧＺ重复暴露后３０ｍｉｎ和６ｈ,大鼠脑组织ＮＧＦ和ｂＦＧＦｍＲＮＡ明显升高,２４ｈ降至正常。结论＋ＧＺ重复暴露可诱导大鼠脑组织ＮＧＦ和ｂＦＧＦｍＲＮＡ的表达增加,这两种生长因子的表达增加可能对神经细胞具有保护和损伤修复作用,是脑的自身保护机制之一。     

碱性成纤维细胞生长因子与透明质酸对培养兔软骨细胞的作用

目的 探讨碱性成纤维细胞生长因子（ｂＦＧＦ）与透明质酸（ＨＡ）对兔软骨细胞的增殖影响及其协同作用。方法 培养兔膝关节软骨细胞,加入ｂＦＧＦ、ＨＡ,用四氮甲基唑蓝（ＭＴＴ）方法测定其对软骨增殖的影响。结果 ｂＦＧＦ在１０ｎｇ／ｍｌ即可显著促进软骨细胞增殖,当ｂＦＧＦ浓度增至５０ｎｇ／ｍｌ,其促进作用是达到最大值;单纯使用ＨＡ并不促进软骨细胞增殖;当联合应用ｂＦＧＦ与ＨＡ时,ｂＦＧＦ浓度为５０～５００     

碱性成纤维细胞因子对面神经离断后再生的影响

实验已证实碱性成纤维细胞生长因子 (ｂＦＧＦ)对中枢和周围神经系统均有神经营养作用。面神经是颅神经中最易受损者。本实验旨在探索ｂＦＧＦ对离断的面神经再生的影响 ,进一步为临床应用提供理论依据。1　材料与方法　　选用白色红目豚鼠 ,体重 3 0 0 ｇ左右 ,精养 1周后应用。动物分 4组 :预实验组 ( 6只 ) ;单纯面神经切断建硅小室组 ( 6只 ) ,简称对照组 ;面神经切断建硅小室并用Ａｌｚｅｔ离子泵定期释放生理盐水组 ( 6只 ) ,简称盐水组 ;面神经切断建硅小室并用Ａｌｚｅｔ离子泵定期释放ｂＦＧＦ组 ( 7只 ) ,简称ｂＦＧＦ组。ｂＦＧ…     

川芎嗪和硫氮唑酮对照射后NIH/3 T3成纤维细胞增殖及bFGF表达的影响

目的　探讨川芎嗪及硫氮唑酮对照射后ＮＩＨ／３Ｔ３ 成纤维细胞增殖及ｂＦＧＦ表达的影响,为防治放射性肺纤维化的药物研究提供实验依据。方法　采用ＭＴＴ 法测定离体培养的ＮＩＨ／３Ｔ３ 成纤维细胞增殖程度并用免疫细胞化学ＡＢＣ 方法观察ｂＦＧＦ蛋白表达改变。结果　不同组ＭＴＴ法测得光密度值,对照组为０－７１ ±０－２２ ;照射组（Ⅰ） 为１－０３ ±０－２８ ;川芎嗪＋ 照射组为０－４７±０－１５ ;照射组（ Ⅱ） 为１－０５ ±０－２１;硫氮唑酮＋ 照射组为２－０２ ±０－２１;不同组ｂＦＧＦ 蛋白表达平均光密度：对照组为０－０２８±０－００５ ;照射组为０－０４４ ±０－００６ ;川芎嗪＋ 照射组为０－０２９ ±０－００１ ;硫氮唑酮＋ 照射组为０－０３６ ±０－００３。结论　川芎嗪明显抑制γ射线照射后ＮＩＨ／３Ｔ３ 成纤维细胞的增殖及ｂＦＧＦ蛋白表达,硫氮唑酮则不具有这一作用。     

碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）加速猪背部创伤修复的实验研究

实验采用猪背部创伤模型，观察重组的碱性成纤维细胞生长因子（ｂＦＧＦ）对创伤修复的作用。在无菌条件下用特制打孔器在猪背部切割皮肤，形成２．５ｃｍ２的园型创面。将１５０个创面分成５组，分别以ｂＦＧＦ（６０ｕ／ｃｍ２创面），ｂＦＧＦ（（６０ｕ／ｃｍ２创面）加ＳＤ－Ａｇ、ＳＤ－Ａｇ、生理盐水以及不治疗等方法处理，每间隔一天换药一次。实验结果表明，ｂＦＧＦ具有显著促进肉芽组织生长、加速创面再上皮化率以及增加创面愈合组织抗张力强度等作用。ＦＧＦ显著促修复效应的确切机制尚不完全清楚，可能包括直接与间接效应两方面。     

碱性成纤维细胞生长因子和内皮素在自发性高血压大鼠肾损害中的作用

为了解自发性高血压大鼠（ＳＨＲ）肾损害的程度，通过检测ＳＨＲ血浆、肾组织中内皮素（ＥＴ）和水平，碱性成纤维细胞６生长因子的表达，初步探讨ＳＨＲ肾损害的机制。将１６个月龄ＳＨＲ作为实验组，同龄ＷＫＹ大鼠作为对照组；检测ＣＣｒ、ＵＡＥ；采用放免疫射分析法大鼠血浆、肾组织中ＥＴ的水平；肾组织切片采用ＨＥ染色，ＰＡＳ染色用免疫组化检测Ⅰ、Ⅳ型胶原和ｂＦＧＦ蛋白的表达用原位杂交方法检测肾组织中ｂＦＧＦｍＲＮ     

碱性成纤维细胞生长因子和转化生长因子β1在人发育骨与软骨中的表达及意义

观察碱性成纤维细胞生长因子（ｂＦＧＦ）和转化生长因子β１（ＴＧＦβ１）在人发育骨与软骨中的表达和分布,认识这两种生长因子在人发育骨与软骨中的作用,用组织学、免疫组化及原位杂交技术,对临床经过石蜡包埋的人发育骨与软骨组织进行定位、定性检测。结果显示ＴＧＦβ和ｂＦＧＦ在人发育的骨与软骨细胞中共同表达。作者认为ＴＧＦβ和ｂＦＧＦ协同作用可能在人发育骨与软骨中起重要作用。     

低强度He—Ne激光对兴奋性神经毒素所致小鼠神经元损伤的防 …

目的 探讨低强度Ｈｅ－Ｎｅ激光对兴奋性神经素所致小鼠神经元损伤的防护作用，为低强度激光在临床上用于治疗脑功能障碍等神经系统疾病提供实验依据。方法 以兴奋性神经毒素谷氨酸（Ｇｌｕ）或谷氨酸单钠（ＭＳＧ）建立昆明系小鼠神经元损伤模型。在离体实验中观察了低强度Ｈｅ－Ｎｅ激光对原代培养的小鼠大脑皮层神经元形态结构及培养液中过氧化产物丙二醛（ＭＤＡ）浓度的影响，同时也观察了小鼠大脑皮层单个神经元内游离钙（「     

外源性bFGF对放射复合创伤伤口愈合的促进作用

采用宏观、光镜、免疫组化和原位杂交等方法，动态观察外用ｂＦＧＦ对大鼠放射复合创伤伤口愈合过程的影响。结果显示：外用ｒｈｂＦＧＦ对放射复合创伤伤口愈合有一定的促进作用。表现为：（１）ｂＦＧＦ何促进放射复合伤口内肉芽组织的形成，伤后７天见ｂＦＧＦ用药创面内芽组织含量较对照创面明显增多；（２）ｂＦＧＦ可促进血管生成，伤后７天见ｂＦＧＦ用药创面肉芽组织中较对照创面有明显增多的新生毛细血管网；（３）应用ｂＦ     

庆大霉素损伤后豚鼠前庭上皮STAT3mRNA的表达变化及意义

目的：观察庆大霉素损伤后豚鼠前庭上皮修复期细胞增殖和STAT3 mRNA的表达变化情况，探讨其生物学特性和意义。方法：采用原位杂交组织化学方法，检测庆大霉素损伤后豚鼠前庭上皮STAT3 mRNA的表达变化；采用Brdu体内标记和抗Brdu抗体免疫组化染色，检测庆大霉素损伤后豚鼠前庭上皮修复期细胞增殖情况。结果：在正常成年豚鼠前庭上皮中，STAT3 mRNA有低水平表达。庆大霉素损伤后1d组，STAT3 mRNA杂交信号最强，其后逐渐减少，21d组与正常对照组无显著差异。在正常对照组前庭上皮中无Brdu阳性细胞。各实验组均观察到Brdu阳性细胞，7d组最多。结论：庆大霉素损伤后，豚鼠前庭上皮钉AT3 mRNA表达增强，其时程变化与细胞增殖活动密切相关。STAT3在豚鼠前庭上皮损伤后的自发修复中可能起重要信号转导作用。     

川芎嗪对顺铂诱导豚鼠耳蜗毛细胞模型中JNK/c-JUN信号转导通路调控及Caspase-3表达影响

目的通过观察川芎嗪对顺铂诱导豚鼠耳蜗毛细胞中JNK、c-JUN及Caspase-3蛋白表达水平的影响,探讨其抗凋亡的机制。方法将60只听力正常的健康白毛红目豚鼠按照随机字数表法分为空白组与模型组,空白组豚鼠正常饲养,模型组豚鼠腹腔注射顺铂,诱导药物性耳聋模型。造模成功后,将空白组及模型组分别随机分为两组,即空白对照组、空白+川芎嗪组、模型对照组、模型+川芎嗪组。空白+川芎嗪组、模型+川芎嗪组豚鼠腹腔注射川芎嗪注射液进行干预,2周后处死豚鼠,采用Western-blot法对各组豚鼠耳蜗组织中c-JUN、JNK及Caspase-3蛋白表达水平进行检测。结果与空白组相比,模型组豚鼠听性脑干反应(ABR)阈值显著提高,差异有统计学意义(P<0.01);空白组豚鼠耳蜗毛细胞排列整齐、均匀,无缺失及坏死细胞出现;模型组豚鼠耳蜗毛细胞变形明显,排列不均,溶解破坏的毛细胞较多。与空白对照组和空白+川芎嗪组比较,模型对照组豚鼠耳蜗组织中c-JUN、JNK、Caspase-3蛋白表达水平均显著升高,差异有统计学意义(P<0.01)。与模型对照组比较,模型+川芎嗪组豚鼠耳蜗组织中c-JUN、JNK、Caspase-3蛋白表达水平降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论川芎嗪可通过调控JNK/c-JUN信号通路的活化,进而调控Caspase-3来抑制细胞凋亡途径,进而发挥其抗凋亡作用。     

庆大霉素对豚鼠耳蜗柯替器毛细胞凋亡作用的影响

目的 研究庆大霉素对于豚鼠耳蜗柯替器毛细胞的凋亡作用。方法 将豚鼠分为生理氯化钠溶液对照组和庆大霉素组,连续给药14d,利用TUNEL法原位检测动物耳蜗柯替器毛细胞的凋亡情况。结果 生理氯化钠溶液对照组豚鼠耳蜗未见凋亡柯替器毛细胞,庆大霉素组中耳蜗基底回柯替器内外毛细胞均消失,第三回中第1排外毛细胞消失,第2、3排外毛细胞均呈阳性表达,第二回中第1、第2排外毛细胞呈阳性表达。结论 庆大霉素作用于豚鼠耳蜗时可引起柯替器毛细胞凋亡,细胞凋亡是豚鼠耳蜗柯替器毛细胞损伤的一条途径;庆大霉素耳毒性的产生可能与其引起耳蜗柯替器毛细胞凋亡有关。     

胆碱能激动剂引起的前庭毛细胞内钙离子浓度升高及庆大霉素对它的影响

目的 通过观察胆碱能受体激动剂对离体前庭毛细胞内钙离子浓度的影响,以探讨前庭毛细胞膜所存在的胆碱能受体分型及庆大霉素对钙离子通道的阻断作用。方法 用胶原酶消化后机械分离法,分离豚鼠前庭毛细胞（VHC）,钙敏荧光探针Fluo-3染色,用激光扫描共聚焦显微镜记录VHC的钙荧光图像及细胞内游离钙离子浓度（[Ca^2 ]i）的动态变化。结果 ①胆碱能M和N型受体激动剂乙酰胆碱（ACh）、氨甲酰胆碱（CCh）均可引起离体VHC内[Ca^2 ]i的升高;N型受体激动剂化乙酰胆碱（ACh-Br)仅在高浓度（10mmol/L）时引起部分（4／5个）离体CHC内[Ca^2 ]i升高,在低浓度（1mmol/L）时影响不明显;②阿托品对ACh、CCh引起的VHC内[Ca^2 ]i的升高有抑制作用;加入0．1mmol/L阿托品可使1mmol/LACh或CCh引起的VHC内[Ca62 ]i升高的峰值明显减小（P＜0．01）;③0．1mmol／LACh引起VHC内[Ca^2 ]i升高之后,再加入0．5mmol／L庆在霉素,VHC内[Ca^2 ]i出现显著下降,至低于静息时的水平。结论 豚鼠壶腹嵴前庭毛细胞膜上存在M型和N型两种受体,M型受体激动剂引起VHC内[Ca^2 ]i的升高较N型明显。阿托品对M型受体激动剂引起的[Ca^2 ]i升高有抑制作用大;庆大霉素对前庭毛细胞膜的钙离子通道可能有阻滞作用。     

山莨菪碱对耳蜗电离辐射损伤防护作用的实验研究

目的 观察电离辐射对耳蜗毛细胞的损伤情况,探讨山莨菪碱对耳蜗辐射损伤的防护作用。方法 将健康豚鼠50只随机分成3组,健康对照组10只,单纯照射组和药物防护组各20只,每组观察20耳。各组豚鼠行听觉脑干反应(ABR)阈值测定后,对药物防护组和单纯照射组豚鼠的耳颞部用直线加速器所产生的6 MeV电子线予以分次放射(2 Gy/d),每次照射前30 min于药物防护组豚鼠的股部肌肉注射山莨菪碱,单纯照射组在同一部位注射等量生理盐水,总剂量达到60 Gy后,各组豚鼠行ABR检测听功能。并通过光镜、透射电镜及扫描电镜观察耳蜗毛细胞的形态学变化。结果 放射后单纯照射组的平均ABR阈值为(52.27±2.42)dB peSPL,较药物防护组(37.65±1.92)dB peSPL明显提高 ( t =2.01, P<0.05);耳蜗基底膜铺片外毛细胞计数,单纯照射组为(54.75±7.71)个/视野,较药物防护组(144.50±7.30)个/视野明显减少( F =135.362, P<0.05)。透射电镜观察见单纯照射耳蜗外毛细胞边界不清,细胞肿胀变形,细胞器和细胞核明显异常;防护组耳蜗外毛细胞病变明显减轻;健康对照组外毛细胞完好。扫描电镜观察见单纯照射组耳蜗外毛细胞的纤毛明显倒伏、缺失、排列紊乱;药物防护组耳蜗外毛细胞的纤毛排列基本整齐,偶见倒伏现象;健康对照组耳蜗外毛细胞的纤毛排列整齐无倒伏、缺失。 结论 分割剂量60 Gy对豚鼠耳颞部放射可造成耳蜗毛细胞损害,山莨菪碱对耳蜗辐射损伤具有保护作用。     

豚鼠耳蜗毛细胞静纤毛连接桥的超微结构观察

目的观察豚鼠耳蜗毛细胞静纤毛连接桥的超微结构和功能。方法借助单宁酸样品处理技术，用扫描电镜观察了豚鼠耳蜗毛细胞静纤毛的超微结构。结果豚鼠耳蜗外毛细胞的静纤毛之间存在着侧面连接桥，这些连接桥呈水平走向，将每一个毛细胞上的同一排和不同排的静纤毛连接起来。第1圈到第4圈外毛细胞静纤毛上均可观察到侧面连接桥。排列整齐，结构完整的静纤毛之间的连接桥就比较多。静纤毛排列紊乱时，这些连接桥就比较少。第1圈和第4圈毛细胞静纤毛的侧面连接桥多一些，而第2圈和第3罔毛细胞静纤毛的连接桥就少一些。静纤毛表面的小泡状结构多时，静纤毛之间的连接桥也就多一些，静纤毛表面的小泡状结构少时，静纤毛之间的连接桥也就少一些。结论耳蜗毛细胞静纤毛的侧面连接桥是一个独立的形态学结构，它在维持耳蜗毛细胞静纤毛束的结构和功能的完整性方面起重要作用。     

CO_2激光镫骨足板造孔术后内耳超微结构的实验研究

目的　探讨以CO2 激光行镫骨足板手术对内耳感受器超微结构的影响。方法　 9只白色红目豚鼠分 3组 ,每组 3只 ,分别以功率 2、4、6W的CO2 激光对左耳进行内耳镫骨足板造孔 ,以右耳为对照。术后动物断头处死 ,利用扫描电镜技术观察激光照射对内耳感受器毛细胞的影响。结果　以功率 2W的CO2 激光行内耳镫骨足板造孔术时 ,豚鼠内耳毛细胞未见损伤 ;功率 4W时 ,外毛细胞之间出现云雾状渗出物 ,并有散在的外毛细胞倒伏 ,内毛细胞部分融合 ,表面有球状物附着 ;功率 6W时 ,内耳毛细胞及壶腹嵴毛细胞均被损伤 ,并出现外毛细胞严重缺失、破坏 ,壶腹嵴纤毛广泛损伤、脱落 ,失去原有的形态。结论　应用CO2 激光行镫骨足板手术应注意功率的选择 ,以免造成内耳感受器的损伤。所得实验数据可供激光治疗耳硬化症选择适当的功率参考。     

负载VEGF 、bFGF的聚乳酸-羟基乙酸纳米微囊复合体对放射性损伤创面愈合的作用

 目的 探讨负载VEGF、bFGF的聚乳酸-羟基乙酸共聚物(poly lactic-co-glycolic acid,PLGA)纳米微囊复合体对放射性损伤创面愈合的影响。方法 以PLGA为支架联合应用bFGF、VEGF构建纳米微囊,作用于小鼠放射性损伤创面作为实验组,单纯应用PLGA为支架,未用bFGF、VEGF的作为对照组,观察两组创面愈合率、创面的病理改变;于伤后不同时间点检测创面新生血管细胞数目、毛细血管截断面积及成纤维细胞数量;RT-PCR检测创面VEGF mRNA 、bFGF mRNA的表达水平;观察其对放射性创面愈合的影响。结果 实验组创面愈合率明显高于对照组;实验组创面组织中VEGF mRNA、bFGF mRNA的表达均高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);对创面组织进行HE染色,发现实验组肉芽组织增多增厚,成纤维细胞数量及密度均高于对照组;伤后第8天、第15天,实验组的新生毛细血管数量及毛细血管横截面积均较对照组有所增加,实验组的成纤维细胞计数也明显高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 采用负载VEGF、bFGF的PLGA纳米微囊复合体可以促进小鼠放射性损伤创面的愈合。     

耳石再生机制的实验研究

目的探讨耳石再生的机制。方法模拟飞行中气压的变化刺激豚鼠前庭耳石器,引起耳石的前体——球状物大量生成。其后１天和７天,电镜观察球状物和感觉上皮的变化,并用原位杂交技术观察感觉上皮各种细胞中ｃ－ｆｏｓｍＲＮＡ、ＢＭＰ１ｍＲＮＡ和ＢＭＰ２ｍＲＮＡ的表达情况。结果损伤后１天,电镜可见前庭椭圆囊斑表面布满球状物,支持细胞内充满囊泡,并见到支持细胞正在分泌球状物,ＢＭＰ２基因在囊斑的支持细胞及毛细胞中表达量增加,ｃ－ｆｏｓ基因在支持细胞、移形细胞及基底膜细胞中表达量明显增强。损伤后７天,ｃ－ｆｏｓ基因在囊斑中表达减弱,而ＢＭＰ１和ＢＭＰ２基因在囊斑各种细胞中的表达量均明显增加。结论支持细胞可分泌球状物。在耳石再生过程中,ｃ－ｆｏｓ、ＢＭＰ１和ＢＭＰ２基因在前庭囊斑感觉上皮中的表达量发生变化,提示它们参与了耳石再生。