c-Fos对大鼠间质细胞睾酮生成的影响及其作用机理

目的　本研究拟通过反义技术观察c fosASODNs对hCG诱导大鼠睾丸间质细胞睾酮分泌及睾酮合成过 程中限速酶表达水平的变化,并探讨其作用机制。方法　(1)放射免疫方法研究c fosASODNs对hCG诱导大鼠睾 丸间质细胞睾酮分泌的影响。(2)用免疫组织化学方法观察离体大鼠间质细胞Fos蛋白的变化。(3)用RT PCR 法观察在睾酮合成过程中大鼠间质细胞P450C17mRNA表达水平的变化。结果　(1)1.2×10-2IU/mlhCG可显著 性地增加间质细胞睾酮的分泌(P<0.01),并使c Fos蛋白染色阳性的间质细胞百分率和P450C17mRNA表达水 平显著性地升高(P<0.01)。(2)c fosASODNs呈剂量依赖性地抑制hCG诱导的离体间质细胞的睾酮分泌,同时 使c Fos蛋白染色阳性的间质细胞百分率下降,而无义tatODN没有相应作用。(3)当二丁酰cAMP与c fosA SODNs作用时可明显逆转c fosASODNs对hCG诱导间质细胞睾酮分泌的抑制作用,同时c Fos蛋白染色阳性的 间质细胞百分率和P450C17mRNA表达又恢复至接近hCG刺激水平。(4)维拉帕米(10-6mol/L)对hCG诱导的 大鼠间质细胞睾酮的分泌及c Fos蛋白染色阳性的间质细胞百分率均未见明显改变。结论　c fos参与hCG诱导 大鼠间质细胞睾酮的分泌,其机制很可能是通过cAMP PKA依赖性途径使c fos癌基因表达增     

氟西汀对脑卒中后抑郁大鼠海马区c-Fos、c-Jun蛋白的影响

目的　建立脑卒中后抑郁 (post strokedepression ,PSD)的大鼠模型 ,研究氟西汀对脑卒中后抑郁大鼠自发行为和海马区c fos、c jun的影响。方法　采用双侧颈总动脉永久性结扎 (2VO)造成PSD大鼠模型 ,治疗后观察大鼠自发性行为改变 ,海马区的c fos和c jun蛋白表达变化 ,用图像分析方法对大鼠海马区c fos和c jun阳性细胞的相对切面面积比和平均目标灰度值进行分析。结果　氟西汀可增加大鼠水平自发行为 (P <0 .0 5 ) ,降低海马区c fos、c jun蛋白表达。 结论　大鼠双侧颈总动脉结扎可以为PSD的临床研究提供理想的动物模型。氟西汀可以改善脑卒中后抑郁大鼠的行为及分子生物学异常。     

米非司酮对体外培养大鼠睾丸间质细胞分泌睾酮的影响

目的 :研究米非司酮对大鼠睾丸间质细胞 (Leydigcells)睾酮的基础分泌及促性腺激素刺激的睾酮分泌的影响。方法 :将雄性大鼠处死 ,取睾丸间质细胞加药进行体外培养 ,用放射免疫分析方法测定睾酮含量。结果 :10 μmol·L-1米非司酮对睾酮基础分泌和促性腺激素刺激的睾酮分泌的抑制率分别为 65 18% (P <0 0 0 1)、 72 78% (P <0 0 5 )。结论 :本研究表明米非司酮能直接影响睾丸甾体激素的合成     

肝素和高糖对人腹膜间皮细胞合成细胞外基质的影响及可能机制

目的 探讨肝素和高浓度葡萄糖对体外培养的人腹膜间皮细胞（HMC)合成细胞外基质(ECM)的影响，肝素和高糖之间的相互作用及其可能的机制。方法 采用酶联免疫吸附法(ELISA法)检测细胞培养上清液的纤维连结蛋白(FN)、I型胶原(COLI)、转移生长因子(TGF)—β1含量；采用免疫细胞化学法检测细胞核c—fos、c—jun蛋白的表达。结果 3．86％D-葡萄糖可明显促进FN和COLI的分泌，肝素可明显降低：HMC的FN和COLI的分泌，也可降低高糖环境下FN和COLI的分泌。3．86％D-葡萄糖对TGF—β1的分泌无明显影响，肝素对高糖环境下TGF—β1的分泌亦无明显影响。3．86％D-葡萄糖可促进细胞核c—fos、c—jun蛋白表达增加，肝素可减少高糖引起的c—fos蛋白增加，但对c—jun蛋白增加无明显影响。结论 高糖通过促进活化蛋白—1(AP—1，c—fos／c—jun)表达的增加来促进ECM分泌，可能是长期腹膜透析导致腹膜硬化的一个重要因素；肝素在高糖环境下可抑制高糖所致的AP—1(c—Ios／c—jun)表达增加及ECM分泌，对保护腹膜功能可能起一定作用。     

原癌基因c-jun、c-fos与人膀胱癌耐药细胞株谷胱甘肽及其多药耐药基因表达的关系

目的　研究原癌基因c jun和c fos的表达对谷胱甘肽介导的膀胱癌多药耐药的影响。方法　应用定量逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)技术和蛋白免疫印迹法 (WesternBlotting) ,检测c jun、c fos基因在人膀胱癌细胞株BIU87及其阿霉素诱导的多药耐药亚株BIU87/A的表达 ,并分析其与两株细胞的GSH生物合成的限速酶———γ 谷氨酰半胱氨酸合成酶 (γ GCS)表达和细胞内谷胱甘肽 (GSH)水平的关系。同时还应用以上方法检测谷胱甘肽S 转移酶 π (GST π)和多药耐药相关蛋白 1(MRP1)在BIU87和BIU87/A的表达。结果　BIU87/A相对于BIU87具有多药耐药特性 ,其γ GCSmRNA的相对表达水平明显高于BIU87(1 341vs 0 95 3,P <0 0 5 ) ,与此相应 ,BIU87/A细胞内GSH水平也高于BIU87(P <0 0 1) ;c jun基因mRNA及其蛋白在BIU87/A的表达均高于BIU87,而c fos基因在BIU87和BIU87/A的表达未见明显差异 (P >0 0 5 ) ;GST π和MRP1在BIU87/A表现高表达。结论　原癌基因c jun过表达可上调BIU87/A细胞的GSH水平及其耐药相关基因的表达 ;c fos可能对BIU87/A的耐药形成并不起主要作用。     

大鼠TNF-α对大鼠睾丸Leydig细胞作用的研究

目的 探讨大鼠TNF-α对大鼠Leydig细胞分泌功能的影响。方法 Leydig细胞纯化后进行原代培养。加入不同浓度的大鼠TNF-α(0．1、1、10ng／m1),hCG(50IU／ml)处理。放免方法测定上清液的睾酮含量。结果 TNF-α在0．1、1、10ng／ml浓度时,能够以剂量及时间依赖性地抑制睾丸kydig细胞睾酮的基础分泌及hCG刺激的分泌,差异显著。结论 大鼠TNF-α对睾丸Leydig细胞睾酮的基础分泌及hCG刺激引起的分泌均具有抑制作用。     

甲状腺激素对睾丸间质细胞睾酮分泌的影响

目的：观察甲状腺激素对睾丸间质细胞（Leydig细胞）睾酮分泌的影响。方法：以不同浓度(0μg/ml、0．1μg/ml、1和10μg/ml）三碘甲状腺原氨酸（T3）刺激培养大鼠睾丸间质细胞（Leydig细胞）,观察细胞基础和应激状态时睾酮分泌的变化;同时测定不同甲状腺功能大鼠体外睾酮分泌水平。结果：直接用T3刺激培养的睾丸Leydig 细胞,睾酮分泌水平无显著变化;而将高甲状腺激素血症大鼠和低甲状腺激素血症大鼠Leydig细胞进行培养显示,无论在 基础还是在负荷情况下睾酮分泌能力均显著下降（P＜0．01）。结论：体外培养的睾丸Leydig细胞对甲状腺激素的刺激无反应。高甲状腺激素和低甲状腺激素状态时睾丸Leydig细胞分泌睾酮的能力均降低。     

Expression of oncoproteins c-fos and c-jun in hypertrophic scars and chronic dermal ulcers and their regulation of basic fibroblast growth factor

目的　探讨c fos与c jun两种原癌基因产物在溃疡与增生性瘢痕创面表达的特征与规律以及与不同组织修复结局发生的关系。方法　 16例标本均取自于外科手术患者 ,其中增生性瘢痕 8例 ,溃疡创面 8例 ,另有正常对照皮肤 5例取自增生性瘢痕患者作为对照。用免疫组化法 (ABC法 )检测c fos与c jun两种癌蛋白以及bFGF在三种组织切片的分布特征。结果　在正常皮肤c fos与c jun的阳性表达主要见于表皮基底细胞和少量皮下成纤维细胞 ,但在相应部位c jun的表达较c fos为弱。在增生性瘢痕 ,c fos与c jun均出现强阳性表达 ,主要见于成纤维细胞。在溃疡组织 ,c fos与c jun的联合表达多见于毛细血管内皮细胞、部分炎症细胞以及成纤维细胞胞浆。结论　增生性瘢痕与溃疡创面c fos与c jun表达量与部位同正常皮肤存在显著差异 ,提示这两种原癌基因产物在影响和调控组织修复中有重要作用。     

地塞米松对大鼠睾丸间质细胞睾酮分泌的影响及机理研究

目的 观察地塞米松(dexamethasone，DEX)以及DEX和RU486共同作用时对hCG诱导的大鼠间质细胞睾酮分泌的影响和间质细胞中原癌基因c-myb表达的情况，从而探讨DEX的作用机制。方法 用放射免疫方法测定离体大鼠间质细胞的睾酮分泌量；用S-P免疫组织化学方法观察离体大鼠间质细胞中c-Myb蛋白表达的变化。结果 10^-8mol／L的DEX可降低hCG诱导的离体大鼠间质细胞睾酮分泌．并使间质细胞c-Myb蛋白免疫组织化学染色明显下降。上述DEX作用可被糖皮质激素受体功能阻断剂RU486(10μmol／L)所阻断。结论 DEX很可能通过降低间质细胞中c-Myb蛋白表达而抑制hCG诱导的间质细胞睾酮分泌。     

ATP50对生长激素诱导大鼠睾丸间质细胞睾酮分泌的影响

目的:研究ATP50在SD大鼠睾丸Leydig细胞中对生长激素(Growth hormone,GH)诱导睾酮合成及生长激素受体功能的影响.方法:采用离体细胞体外孵育法,观察反义ATP50寡脱氧核苷酸(Oligo deoxy nucletides,ODN)对GH诱导大鼠睾丸Leydig细胞分泌睾酮的影响及GH受体功能的影响,以睾酮放射免疫试剂盒测定睾酮合成的情况,cAMP放免试剂盒检测cAMP含量来评定GH受体的功能,免疫组织化学检测ATP50蛋白的表达.结果:反义ATP50 ODN呈剂量依赖性抑制GH诱导睾丸Leydig细胞睾酮的分泌(P＜0.05),同时使Leydig细胞中ATP50蛋白表达下降,而无义tat ODN则没有相应的作用,免疫组织化学显示ATP50蛋白阳性颗粒在Leydig细胞中中呈密集性分布,表达强度明显高于GH组(P＜0.05).结论:在SD大鼠睾丸Leydig细胞中,ATP50可能通过增强GH受体的功能,进而刺激GH诱导睾酮的合成.提示ATP50参与GH诱导大鼠睾丸Leydig细胞睾酮的分泌过程.     

非酶糖基化终末产物介导的ERK1/2信号转导通路在大鼠睾丸间质细胞睾酮分泌中的作用

目的：探讨非酶糖基化终末产物(AGEs)对大鼠睾丸间质细胞睾酮分泌的影响及其潜在机制。方法首先,原代培养大鼠睾丸间质细胞,采用3β-HSD免疫细胞化学方法对间质细胞进行鉴定;其次,MTT法测定不同浓度的AGEs (25μg/mL、50μg/mL、100μg/mL、200μg/mL)及200μg/mL BSA作用Leydig细胞后的细胞活力;最后,用不同浓度的AGEs及200μg/mL BSA预处理Leydig细胞12 h,之后更换含相应浓度AGEs或BSA的培养基并加入终浓度为4 U/mL的hCG,其中对照组不含AGEs和BSA,ELISA法和Western blot分别检测睾酮分泌量和p-ERK1/2的表达量。结果 MTT法表明AGEs (≤200μg/mL)对Leydig细胞的活力在本实验所研究的时间内没有影响;ELISA法和Western blot结果显示,不同浓度AGEs处理后,hCG诱导的Leydig细胞睾酮合成量和ERK1/2蛋白的磷酸化都呈现浓度依赖性下降,与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.01)。结论 AGEs通过抑制ERK1/2的磷酸化降低大鼠Leydig cells睾酮的分泌。     

The effects of 2-Bromopropane on Viability and Testosterone Production Ability of Rat Leydig Cells in Primary Culture

Epidemiological surveys and animal experiments have shown that 2-bromopropane induces oligozoospermia in exposed workers and inhibits spermatogensis in laboratory animals. However, the mechanism by which 2-bromopropane exerts its effects is unknown. To this end, we examined the formation of testosterone by the Leydig cells and their survival of these cells in the presence of different concentrations of 2-bromopropane in vitro. Leydig cells were isolated following vascular perfusion, enzymatic dissociation and Percoll gradient centrifugation techniques. The cells were cultured in culture dishes. After 8 h, different cultures were exposed to 2-bromopropane at concentrations of 0.01 mmol/L, 0.10 mmol/L and 1.00 mmol/L. In order to stimulate Leydig cells to secrete testosterone, human chorionic gonadotropin (hCG) was also added. Cell viability was determined using the trypan blue dye exclusion test and cell numbers were counted by hemocytometer. Testosterone secretion was detected by radioimmunoassay. The cell viability decreased after exposure to 2-bromopropane in a dose-dependent way, but no morphological change was observed. The cell number decreased in the 2-bromopropane-treated cultures. The secretion of testosterone did not manifest detectable changes in the culture treated with 0.10 mmol/L and 0.01 mmol/L of 2-bromopropane; however, it decreased significantly (P<0.02) in the presence of 1.00 mmol/L. Therefore, our results strongly suggest that 2-bromopropane may exert its cytotoxic effects on Leydig cells in vitro. We speculate that the decrease in the numbers of Leydig cells caused by 2-bromopropane was mediated by a feedback mechanism resulting from a lower testosterone concentration.     

The effects of 2—Bromopropane on Viability and Testosterone Production Ability7 of Rat Leydig Cells in Primary Culture

Epidemiological surveys and animal experiments have shown that 2-bromopropane induces oligozoospermia in exposed workers and inhibits spermatogensis in laboratory animals. However, the mechanism by which 2-bromopropane exerts its effects is unknown. To this end, we examined the formation of testosterone by the Leydig cells and their survival of these cells in the presence of different concentrations of 2-bromopropane in vitro. Leydig cells were isolated following vascular perfusion, enzymatic dissociation and Percoll gradient centrifugation techniques. The cells were cultured in culture dishes. After 8 h, different cultures were exposed to 2-bromopropane at concentrations of 0.01 mmol/L, 0.10 mmol/L and 1.00 mmol/L. In order to stimulate Leydig cells to secrete testosterone, human chorionic gonadotropin (hCG) was also added. Cell viability was determined using the trypan blue dye exclusion test and cell numbers were counted by hemocytometer. Testosterone secretion was detected by radioimmunoassay. The cell viability decreased after exposure to 2-bromopropane in a dose-dependent way, but no morphological change was observed. The cell number decreased in the 2-bromopropane-treated cultures. The secretion of testosterone did not manifest defectable changes in the culture treated with 0.10 mmol/L and 0.01 mmol/L of 2-bromopropane; however, it decreased significantly (P < 0.02) in the presence of 1.00 mmol/L. Therefore, our results strongly suggest that 2-bromopropane may exert its cytotoxic effects on Leydig cells in vitro. We speculate that the decrease in the numbers of Leydig cells caused by 2-bromopropane was mediated by a feedback mechanism resulting from a lower testosterone concentration.     

催乳素对原代培养恒河猴睾丸间质细胞睾酮合成的影响

目的 研究催乳素对睾丸间质细胞睾酮生成的调节作用. 方法 采用无血清培养方法 分析催乳素时原代培养恒河猴睾丸间质细胞睾酮合成的影响. 结果 催乳素可增强恒河猴睾丸间质细胞对猴绒毛膜促性腺激素(mCG)刺激的反应,睾酮分泌量显著高于mCG和催乳素单独作用时的总和.在mCG存在下,催乳素可调节不同的睾酮前身物孕烯醇酮、孕酮和17α-羟孕烯醇酮转化为睾酮.低剂量的催乳素(10～100 ng·mL-1)可使一定剂量的睾酮前身物转化为睾酮的量明显增加,而高剂量的催扎素(300～1000 ng·mL-1)却明显地抑制睾酮前身物为睾酮,其中以17α-羟孕烯醇酮的作用最为显著. 结论 催乳素对睾丸间质细胞睾酮合成的作用,可能部分是通过其促进17α-羟孕烯醇酮转化为睾酮来实现的.     

Annexin5对大鼠睾丸间质细胞睾酮分泌过程中StarD7表达的影响

目的先前研究发现annexin 5刺激大鼠睾丸间质细胞后,3β-羟类固醇脱氢酶(3βbeta-hydroxysteroid dehydro-genase,3β-HSD)及睾酮水平都增加,推测annexin 5和睾酮之间可能存在某种内在联系。文中旨在研究annexin 5对大鼠睾丸间质细胞睾酮分泌过程中的StarD7(START domain containing 7)表达的影响,探讨annexin 5影响睾酮分泌的机制。方法原代培养大鼠睾丸间质细胞,1nmol/L的annexin 5处理间质细胞24h,分别提取细胞总mRNA和总蛋白。RT-PCR检测StarD7的mRNA表达改变。Western blotting方法分析睾丸间质细胞中StarD7的蛋白表达变化。收取细胞爬片,利用免疫细胞化学的方法对StarD7在睾丸间质细胞中进行定位。结果与对照组相比,在mRNA水平上,加药组StarD7 mRNA的表达增加了44.5%(1.10±0.02 vs 1.59±0.09,P<0.05)。在蛋白水平上,加药组StarD7蛋白的表达增加了44.3%(1.49±0.10 vs 2.15±0.16,P<0.05)。StarD7主要定位在大鼠睾丸间质细胞的胞浆内,加药组的染色强度明显强于对照组。结论 StarD7在基因和蛋白水平均受annexin 5的调控,结合先前发现annexin 5可调控睾丸间质细胞睾酮合成的结果,提示annexin 5调控睾酮合成可能是通过调控StarD7的表达来实现的。     

雷公藤内酯醇抑制血管内皮细胞生长因子的表达与合成

目的 探讨雷公藤内酯醇对血管内皮细胞生长因子（VEGF）mRNA表达及VEGF合成与分泌的影响,进一步探讨雷公藤内酯醇降低肾小球肾炎患者尿蛋白的作用机制。方法 以人内皮细胞系ECV－304为研究对象,利用逆转录－聚合酶链反应（RT－PCR）、流式细胞仪、酶联免疫吸附法（ELISA）检测不同剂量雷公藤内酯醇对佛波脂（PMA）诱导的内皮细胞VEGF mRNA表达及VEGF合成与分泌的影响,并采用RT－PCR检测雷公藤内酯醇对内皮细胞c-jun/c-fos mRNA表达的影响。结果 雷公藤内酯醇可以抑制PMA诱导的内皮细胞VEGF mRNA表达及VEGF合成与分泌,并呈剂量依赖性。同样,雷公藤内酯醇剂量依赖性抑制PMA诱导的内皮细胞c-jun/c-fos mRNA的表达。结论 雷公藤内酯醇抑制内皮细胞VEGF mRNA表达及VEGF合成与分泌可能是其雷公藤内酯醇降低肾小球肾炎患者尿蛋白的作用机制之一。雷公藤内酯醇可能通过影响转录因子AP－1的形成而影响内皮细胞VEGF的表达与合成。     

hCG调节原代培养小鼠睾丸Leydig细胞Atrn mRNA和Atrn蛋白的表达及与睾酮分泌的相关性

目的探讨hCG刺激的Leydig细胞睾酮分泌与Atrn mRNA和Atrn蛋白表达的关系。方法将原代培养的Leydig细胞分为5组,分别在培养液中加入0、0．1、1、10、100ng／mLhCG,培养24h后吸取培养液用于测定睾酮分泌量。同时提取细胞mRNA和总蛋白,用实时定量RT—PCR和Westernblot方法分别检测Leydig细胞中AtrnmRNA和Atrn蛋白表达量。结果刺激24h后,与0ng／mLhCG剂量组相比较,0．1,1,10,100ng／mLhCG剂量组睾酮生成量都明显增加,统计学差异较大（P〈0．01）。Leydig细胞AtrnmRNA表达量增加（0．1ng／mLhCG组P〈0．05,其余剂量组P〈0．01）。睾酮生成量与Atrn蛋白表达量（r=0．987,P〈0．01）和AtrnmRNA表达量（r=0．982,P〈0．01）呈正相关。结论原代培养的Leydig细胞在hCG刺激下,睾酮生成量、AtrnmRNA和Atm蛋白表达量都呈现hCG剂量依赖性的增加。     

去势大鼠睾丸间质细胞移植的实验研究

目的：探讨对去势大鼠动物模型行睾丸间质细胞（Leydig细胞）移植的可行性。方法：随机选择SD大鼠离体睾丸进行Leydig细胞的体外培养及同种异体去势鼠大腿内侧肌群Leydig细胞移植，并进行绒毛膜促性腺激素（hCG)激发试验，监测其血清睾酮分泌情况的变化，结果：体外培养的Leydig细胞对hCG的刺激敏感，能分泌大量睾酮，而一旦进入机体后虽然短期内仍然成活，但分泌功能明显受阻，结论：通过施行同种异体睾丸Leydig细胞移植以提高血清睾酮含量的前景值得商榷。     

胰岛素样生长因子-I和人绒毛膜促性腺激素对成年大鼠Leydig细胞葡萄糖转运蛋白基因表达调控

目的:研究胰岛素样生长因子I(IGF I)和人绒毛膜促性腺激素(hCG)对成年大鼠睾丸Leydig细胞中葡萄糖转运蛋白(GLUT)基因表达的影响,为进一步探讨Leydig细胞中睾酮的合成、分泌与葡萄糖代谢的关系提供依据。方法:采用改良的Klinefelter方法从成年大鼠睾丸中分离获得Leydig细胞;用反转录聚合酶链技术检测IGF I和hCG对原代培养的Leydig细胞中GLUT基因表达的调控作用。结果:分离得到纯度为98%的大鼠Leydig细胞,并与对照组比较,hCG可显著增加Leydig细胞中GLUT8基因mRNA的表达水平(P<0.001),且此作用具有剂量依赖性与时效性。当在试验组细胞中单独加入IGF I或IGF I和hCG作用于细胞后,发现IGF I(100ng mL)可显著增加Leydig细胞中GLUT8基因mRNA的表达(P<0.01),也可与hCG协同作用显著提高GLUT8基因的mRNA表达,该结果与IGF I(100ng mL)和hCG(10ng mL)能协同作用极显著增加睾酮合成水平(P<0.001)的结果是相吻合的。在大鼠Leydig细胞中,无论10ng mL或100ng mL还是两者同时作用于细胞,都不能影响GLUT1和GLUT3基因的mRNA水平。结论:在成年大鼠Leydig细胞中,IGF I和hCG对细胞中的GLUT8基因表达的调节作用具有特异性,其协同作用能显著提高细胞中GLUT8基因mRNA水平,增强细胞摄取葡萄糖的能力,给细胞提供更多的代谢能源,最终增加Leydig细胞睾酮的合成与分泌。