复方鳖甲软肝方对活化肝星形细胞细胞因子分泌的影响

目的：观察复方鳖甲软肝方药物血清对离体肝星形细胞(hepatic stellate cell，HSC)活化时分泌转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1，TGF-β1)和血小板源性生长因子(platelet derived growth factor，PDGF)的影响，以探讨其抗肝纤维化作用机制。方法：将成年健康雄性SD大鼠75只，随机分为对照组、模型组、高、中、低剂量药物组共5组，并制备各组血清。采用SD大鼠肝星形细胞分离、培养、药物血清制备，免疫组化检测各实验组血清对肝星形细胞分泌TGF-β1。PDGF的影响，并经图像分析系统作定量分析。结果：培养48h模型组TGF-β1，PDGF阳性反应物A值分别为733．58&;#177;189．73和659．45&;#177;76．56；72h分别为1509．87&;#177;77．50和1208．02&;#177;132．21。与对照组(48h：570．78&;#177;57．61和479．65&;#177;38．49；72h：1279．30&;#177;147．78和805．30&;#177;121．04)比较，差异显著有显著性意义(F=5．833～21．250，P&;lt;0．05)。培养48，72h。高、中剂量药物组与模型组TGF-β1，PDGF表达比较，差异也有显著性意义(F=5．833～21．250，P&;lt;0．05)，可显著抑制TGF-β1。PDGF表达。并呈量效关系。结论：复方鳖甲软肝方药物血清能有效抑制肝纤维化时活化肝星形细胞分泌TGF-β1和PDGF。从而达到抑制肝星形细胞增殖、活化的抗肝纤维化防治作用。     

复方鳖甲软肝方对肝星形细胞中细胞核因子κB活化的影响

目的:观察复方鳖甲软肝方药物血清对离体肝星形细胞(hepaticstellatecells,HSC)中细胞核因子κB(nuclearfactorkappaB,NF-κB)活化的影响,以探讨其防治肝纤维化作用机制与核转录因子之间的相关性。方法:实验选用成年健康雄性SD大鼠75只,随机将75只大鼠分为正常对照组、模型组、高、中、低剂量药物组共5组,并制备各组血清。采用SD大鼠肝星形细胞分离、培养,药物血清制备,免疫组化检测实验各组血清对肝星形细胞中NF-κB活化的影响,并经图像分析系统定量分析。结果:HSC培养24,48,72h,模型组NF-κB表达的速率(NF-κB阳性染色A值分别为:217.36±29.02,429.23±25.48,627.31±37.68)与正常对照组(127.30±15.31,240.65±38.49,321.27±121.04)比较,差异有显著性意义(P<0.05)。高、中剂量药物组NF-κB表达的速率与正常对照组比较,差异有显著性意义(P<0.05)。表明HSC培养24h,NF-κB即可在核内发生活化并表达;而复方鳖甲软肝方高、中剂量药物血清组均可有效抑制HSC中NF-κB的活化和表达。结论:复方鳖甲软肝方能有效抑制HSC中NF-κB的活化和表达。     

复方鳖甲软肝方对离体肝星形细胞增殖的影响

目的:观察复方鳖甲软肝方药物血清对离体肝星形细胞(hepaticstellatecells,HSC)增殖的影响,以探讨其抗肝纤维化的作用机制。方法:将成年健康雄性SD大鼠75只,随机分为正常对照组、模型组、高、中、低剂量药物组共5组,并制备各组血清。采用大鼠CCl4造模后肝星形细胞分离、培养,药物血清制备,MTT法检测法各组血清对HSC不同时相增殖的影响,酶标仪波长为450nm。结果:培养24h,各组HSC增殖比较,差异无显著性意义(P>0.05);培养48,72h,高、中、低剂量药物组HSCA值(0.47±0.02,0.55±0.07;0.46±0.02,0.58±0.08;0.51±0.03,0.69±0.07)与模型组(0.66±0.05和0.96±0.05)比较,差异有显著性意义(P<0.05);高、中剂量组药物组与对照组比较,差异有显著性意义(P<0.05)。结论:不同剂量的复方鳖甲软肝方药物血清作用48,72h后均能降低或抑制HSC的增殖,尤以高、中剂量作用明显。     

复方鳖甲软肝方对肝星形细胞中细胞核因子κB活化的影响

目的：观察复方鳖甲软肝方药物血清对离体肝星形细胞(hepatic stellate cells，HSC)中细胞核因子κB(nuclear factor kappa B，NF—κB)活化的影响，以探讨其防治肝纤维化作用机制与核转录因子之间的相关性。方法：实验选用成年健康雄性SD大鼠75只，随机将75只大鼠分为正常对照组、模型组、高、中、低剂量药物组共5组，并制备各组血清。采用SD大鼠肝星形细胞分离、培养，药物血清制备，免疫组化检测实验各组血清对肝星形细胞中NF—κB活化的影响，并经图像分析系统定量分析。结果：HSC培养24，48，72h，模型组NF—κ表达的速率(NF—κB阳性染色A值分别为：217．36&;#177;29．02，429．23&;#177;25．48，627．31&;#177;37．68)与正常对照组(127．30&;#177;15．31，240．65&;#177;38．49，321．27&;#177;121．04)比较，差异有显著性意义(P&;lt;0．05)。高、中剂量药物组NF—κB表达的速率与正常对照组比较，差异有显著性意义(P&;lt;0．05)。表明HSC培养24h，NF—κB即可在核内发生活化并表达；而复方鳖甲软肝方高、中剂量药物血清物均可有效抑制HSC中NF—κB的活化和表达。结论：复方鳖甲软肝方能有效抑制HSC中NF—κB的活化和表达。     

复方鳖甲软肝方对肝星形细胞胶原表达及降解的影响

目的:观察复方鳖甲软肝方药物血清对离体肝星形细胞(hepaticstellatecell,HSC)中Ⅰ,Ⅲ型胶原及组织金属蛋白酶抑制物(tissueinhibitorofmetalloproteinases,TIMPs)表达的影响,以探讨防治肝纤维化作用机制。方法:将成年健康雄性SD大鼠75只,随机分为正常对照组、模型组、高、中、低剂量药物组共5组,并制备各组血清。采用SD大鼠肝星形细胞分离、培养,药物血清制备,免疫组化检测实验各组肝星形细胞中Ⅰ,Ⅲ型胶原及TIMPs的表达经图像分析系统定量分析。结果:培养72h,高、中、低剂量药物组Ⅲ型胶原的表达犤Ⅲ型胶原反应物吸光度(A值)为178.36±5.82,182.27±20.32,220.38±19.32犦早于Ⅰ型胶原(I型胶原反应物A值为300.23±25.80,329.37±45.98,425.38±19.32),与模型组比较,差异有显著性意义(P<0.05)。高、中剂量药物组均可有效抑制Ⅰ,Ⅲ型胶原的表达,并呈药物量效关系;培养24h,实验各组均无TIMPs的表达,培养48h后TIMPs开始表达,培养72h时,高、中、低药物组与模型组比较,差异有显著性意义(P<0.05),可显著抑制TIMPs的表达。结论:复方鳖甲软肝方药物血清能有效抑制肝纤维化时肝星形细胞中Ⅰ,Ⅲ型胶原及TIMPs的表达,其抗肝纤维化作用机制可能与减少细胞外基质生成的同时,加速已生成的细胞外基质降解有关。     

复方鳖甲软肝方对肝星形细胞结蛋白、突触素表达的影响

目的观察复方鳖甲软肝方药物血清对离体SD大鼠肝星形细胞(hepaticstellatecells,HSC)结蛋白、突触素表达的影响,以探讨其抗肝纤维化作用机制。方法将成年健康雄性SD大鼠75只,随机分为正常对照组、模型组、高、中、低剂量药物组共5组,并制备各组血清。采用大鼠HSC分离技术,将分离得到的HSC分别添加各组血清培养24,48,72h后,免疫组化检测各组HSC的结蛋白、突触素表达,并经图像分析系统作定量分析。结果培养24h正常对照组、高、中、低剂量药物组大鼠HSC结蛋白、突触素的表达(A值)(78.93±18.56,396.29±78.56;58.95±5.21,138.92±20.21;63.83±12.97,190.87±52.97;75.46±26.72,284.54±66.72)与模型组(119.69±23.84,528.79±26.84)比较,差异有显著性意义(P<0.05);培养48,72h各组结蛋白、突触素的表达(A值)与模型组比较,差异也有显著性意义(P<0.05)。除低剂量药物组外的其余各组大鼠HSC结蛋白、突触素表达与正常对照组比较,差异有显著性意义(P<0.05)。结论复方鳖甲软肝方能显著抑制HSC结蛋白、突触素的表达,其抗肝纤维化作用机制可能与药物抑制HSC活化有关。     

复方鳖甲软肝方对肝星形细胞胶原表达及降解的影响

目的：观察复方鳖甲软肝方药物血清对离体肝星形细胞(hepatic stellate cell，HSC)中Ⅰ，Ⅲ型胶原及组织金属蛋白酶抑制物(tissue inhibitor of metalloproteinases，TIMPs)表达的影响，以探讨防治肝纤维化作用机制。方法：将成年健康雄性SD大鼠75只，随机分为正常对照组、模型组、高、中、低剂量药物组共5组，并制备各组血清。采用SD大鼠肝星形细胞分离、培养，药物血清制备，免疫组化检测实验各组肝星形细胞中Ⅰ，Ⅲ型胶原及TIMPs的表达经图像分析系统定量分析。结果：培养72h，高、中、低剂量药物组Ⅲ型胶原的表达[Ⅲ型胶原反应物吸光度(A值)为178．364-5．82，182．274-20．32，220．38&;#177;19．32]早于Ⅰ型胶原(Ⅰ型胶原反应物A值为300．23&;#177;25．80。329．37&;#177;45．98，425．38&;#177;19．32)，与模型组比较，差异有显著性意义(P&;lt;0．05)。高、中剂量药物组均可有效抑制Ⅰ，Ⅲ型胶原的表达，并呈药物量效关系；培养24k实验各组均无TIMPs的表达，培养48h后TIMPs开始表达，培养72h时，高、中、低药物组与模型组比较，差异有显著性意义(P&;lt;0．05)，可显著抑制TIMPs的表达。结论：复方鳖甲软肝方药物血清能有效抑制肝纤维化时肝星形细胞中Ⅰ，Ⅲ型胶原及TIMPs的表达，其抗肝纤维化作用机制可能与减少细胞外基质生成的同时，加速已生成的细胞外基质降解有关。     

复方鳖甲软肝方对离体肝星形细胞向肌成纤维细胞转型的影响

目的:观察复方鳖甲软肝方药物血清对离体肝星形细胞(hepaticstellatecells,HSC)转型的影响,以探讨该药物血清防治肝纤维化作用的机制。方法:将成年的健康雄性SD大鼠75只随机分为对照组、模型组、高、中、低剂量药物组共5组,并制备各组血清。采用大鼠HSC分离技术,将分离得到的HSC分别添加各组血清培养24,48h后,免疫组化ABC法检测各组HSC的α-平滑肌肌动蛋白(α-smoothmuscleactin,α-SMA)表达,经图像分析系统定量分析。结果:培养24,48h各药物血清组血清对HSC中α-SMA阳性染色不同时相吸光度(A值)(24h:高、中、低剂量分别为110.95±45.21,243.82±62.97,417.46±126.72;48h分别为:333.71±57.90,345.08±51.85,675.35±202.20)与模型组(24h:778.93±190.26;48h:1032.69±106.64)比较,差异有显著性意义(P<0.05);模型组、高、中剂量药物血清组与正常组比,差异有显著性意义(P<0.05)。结论:高、中剂量复方鳖甲软肝方药物血清能抑制HSC的α-SMA表达,其抗肝纤维化作用机制可能与药物能抑制HSC向α-SMA的转型有关。     

复方鳖甲软肝方对离体肝星形细胞向肌成纤维细胞转型的影响

目的：观察复方鳖甲软肝方药物血清对离体肝星形细胞(hepatic stellate cells，HSC)转型的影响，以探讨该药物血清防治肝纤维化作用的机制。方法：将成年的健康雄性SD大鼠75只随机分为对照组、模型组、高、中、低剂量药物组共5组，并制备各组血清。采用大鼠HS分离技术，将分离得到的HSC分别添加各组血清培养24，48h后，免疫组化ABC法检测各组HSC的α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin，α-SMA)表达，经图像分析系统定量分析。结果：培养24，48h各药物血清组血清对HSC中α-SMA阳性染色不同时相吸光度(A值)(24h：高、中、低剂量分别为110．95&;#177;45．21，243．82&;#177;62．97，417．46&;#177;126．72；48h分别为：333．71&;#177;57．90，345．08&;#177;51．85，675．35&;#177;202．20)与模型组(24h：778．93&;#177;190．26；48h：1032．69&;#177;106．6_4)比较，差异有显著性意义(P&;lt;0．05)；模型组、高、中剂量药物血清组与正常组比，差异有显著性意义(P&;lt;0．05)。结论：高、中剂量复方鳖甲软肝方药物血清能抑制HSC的α-sMA表达，其抗肝纤维化作用机制可能与药物能抑制HSC向α-SMA的转型有关。     

复方鳖甲软肝方对肝星形细胞结蛋白、突触素表达的影响

目的：观察复方鳖甲软肝方药物血清对离体SD大鼠肝星形细胞(hepatic stellate cells，HSC)结蛋白、突触素表达的影响，以探讨其抗肝纤维化作用机制。方法：将成年健康雄性SD大鼠75只，随机分为正常对照组、模型组、高、中、低剂量药物组共5组，并制备各组血清。采用大鼠HSC分离技术，将分离得到的HSC分别添加各组血清培养24，48，72h后，免疫组化检测各组HSC的结蛋白、突触素表达，并经图像分析系统作定量分析。结果：培养24h正常对照组、高、中、低剂量药物组大鼠HSC结蛋白、突触素的表达(A值)(78．93&;#177;18．56，396．29&;#177;78．56；58．95&;#177;5．21，138．92&;#177;20．21；63．83&;#177;12．97，190．87&;#177;52．97；75．46&;#177;26．72，284．54&;#177;66．72)与模型组(119．69&;#177;23．84，528．79&;#177;26．84)比较，差异有显著性意义(P&;lt;0．05)；培养48，72h各组结蛋白、突触素的表达(A值)与模型组比较。差异也有显著性意义(P&;lt;0．05)。除低剂量药物组外的其余各组大鼠HSC结蛋白、突触素表达与正常对照组比较，差异有显著性意义(P&;lt;0．05)。结论：复方鳖甲软肝方能显著抑制HSC结蛋白、突触素的表达，其抗肝纤维化作用机制可能与药物抑制HSC活化有关。     

复方鳖甲软肝方对自发性高血压大鼠心肌纤维化的抑制作用

目的:评价复方鳖甲软肝方对自发性高血压大鼠(SHR)心肌纤维化、左室重构及血浆中血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)、醛固酮的效应。方法:实验选用12周龄SHR50只,随机将其分为5组,即空白对照组、依那普利组、小、中、小剂量复方鳖甲组(小、中、大剂量药物组),每组各10只。另取正常SD大鼠10只作为正常对照组。测定治疗10周后各组大鼠收缩压、心脏质量指数(heartweightindex,HWI)、左室质量指数(leftventricularmassindex,LVMI)、胶原蛋白含量,血浆中血管紧张素Ⅱ、醛固酮含量,心肌胶原容积分数(collagenvolumefraction,CVF)和血管周围胶原面积(perivascularcircuferentialarea,PVCA)。结果:治疗10周后,空白对照组大鼠收缩压,HWI,LVMI,胶原蛋白含量犤(195±9)mmHg,(5.38±0.25),(3.81±0.09),(6.13±0.93)mg/g,1mmHg=0.133kPa犦均明显高于正常对照组犤(127±10)mmHg,(3.88±0.28),(2.57±0.17),(4.19±0.72)mg/g犦(P<0.01)。依那普利组大鼠收缩压明显低于与空白对照组(P<0.01),而复方鳖甲软肝方各组收缩压比较,差异无显著性意义(P>0.05);依那普利组大鼠HWI,LVMI明显低于空白对照组(P<0.01),而复方鳖甲软肝方各组差异无显著性意义(P>0.05);依那普利组,复方鳖甲软肝方中、大剂量组大鼠心肌组织胶原蛋白含量     

Dilinoleoylphosphatidylcholine decreases hepatic stellate cell activation

The prevention of cirrhosis in alcohol-fed baboons by the administration of a soybean extract-43% to 50% of which was dilinoleoyl-phosphatidylcholine (DLPC) and 24% of which was 1,palmitoyl 2,linoleoyl-phosphatidylcholine (PLPC)-was associated with a significant reduction in the number of stellate cells transformed to myofibroblast-like cells. To study whether these two major phospholipids affect the similar transformation that occurs by culturing stellate cells on uncoated plastic, we assessed their effects on proliferation (by (methyl-3H)-thymidine incorporation into DNA), expression of alpha-smooth muscle actin and type I procollagen (by densitometry of Western blots), and collagen synthesis (by incorporation of tritiated proline into collagenase-digestible proteins). These manifestations of stellate cell activation were decreased by 10 micromol/L DLPC but not by 10 micromol/L PLPC when compared with controls incubated either with 17 mmol/L ethanol (used as solvent for the phospholipids) or without addition. These agents did not affect cell viability, contamination with other cells, or the capacity of stellate cells to synthesize protein. Thus DLPC specifically decreases the in vitro activation of stellate cells, as judged by the decreases in proliferative activity, alpha-smooth muscle actin and procollagen I expressions, and collagen synthesis, whereas PLPC did not show such effects. alpha-Procollagen (type I) mRNA was not affected by DLPC, suggesting a post-translational effect. The reduction in the activation of hepatic stellate cells by DLPC may be responsible for, or at least contribute to, the prevention of fibrosis by the polyenylphosphatidylcholine mixture administered in vivo.     

姜黄素对肝星状细胞株CTGF表达的影响

目的:研究姜黄素(curcumin)体外对肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC)的作用,以研究curcumin抗肝纤维化作用的可能机制.方法:MTT法测定curcumin对肝细胞株HSC-T6的抑制率,用RT-PCR检测curcumin对肝细胞株结缔组织生长因子(connectivetissue growth factor,CTGF)mRNA表达的影响,用Western blot法检测对其蛋白质表达的影响.结果:Curcumin对肝细胞株HSC-T6的增殖有抑制作用,且呈时效和量效关系,以10 μmol/L的效果最佳;通过RT-PCR和Western blot法的检测发现curcumin能抑制CTGF的mRNA和蛋白质的表达.结论:Curcumin能在体外抑制HSC的生长,而且可以抑制细胞的CTGF的表达,可能这就是curcumin抗肝纤维化的一个作用机制.     

紫外线照射对皮肤细胞因子分泌功能的影响

目的观察紫外线( Ultraviolet, UV)对体外培养的角质形成细胞株( HaCaT细胞)细胞因子分泌的影响. 方法 UV照射佛泊脂和脂多糖( PMA/LPS)刺激的 HaCaT细胞,用 ELISA法检测细胞培养上清液中细胞因子 IL 1α ,IL 2,IL 6和 IL 8的含量. 结果 正常 HaCaT细胞有 IL 1α ,IL 2,IL 6和 IL 8的自发性分泌. PMA和 LPS刺激 HaCaT细胞,其 IL 1α分泌量下降( P< 0.05), IL 6和 IL 8分泌量明显增加( P< 0.01).正常 HaCaT细胞经 UV照射, IL 1α ,IL 2,IL 6的分泌无明显变化( P >0.05), IL 8分泌量升高( P< 0.05). PMA和 LPS刺激的 HaCaT细胞经 UV照射,其 IL 1α ,IL 6和 IL 8的分泌量明显增加( P< 0.01). 结论 UV对不同状态下 HaCaT细胞的作用是不同的.     

HBx蛋白对人T细胞抗炎性细胞因子分泌的影响

目的探讨HBx蛋白对人T细胞抗炎性细胞因子分泌的影响。方法构建HBx蛋白的绿色荧光蛋白真核表达载体HBx-pEGFP-C1,双酶切(HindⅢ和KpnⅠ)、DNA测序鉴定。利用脂质体转染技术将质粒HBx-pEGFP-C1瞬时转染人T细胞系Jurkat细胞株,荧光显微镜检测报告基因表达产物EGFP,RT-PCR方法检测X基因的表达情况。PHA(10μg/ml)刺激活化预转染的Jurkat细胞6h、24h和48h后,采用RT-PCR技术在mRNA水平检测Jurkat细胞分泌IL-4、IL-10、IL-13和IL-14等抗炎性细胞因子的变化。结果成功构建HBx-pEGFP-C1真核表达载体,并成功转染Jurkat细胞;与对照组相比,转染HBx蛋白组Jurkat细胞分泌IL-4、IL-10、IL-13和IL-14均明显降低(P<0.05)。结论 HBx蛋白即时高表达可降低人T细胞抗炎性细胞因子的表达。