补骨脂素对人成骨肉瘤MG-63细胞增殖及凋亡的影响

目的 体外观察补骨脂素对人成骨肉瘤MG-63细胞的抑制增殖和促进凋亡作用.方法 将浓度为640、320、160 μmol/L的补骨脂素与MG-63细胞体外培养, 采用苔盼蓝染色法绘制细胞生长曲线,噻唑蓝(MTT)比色法测定药物的细胞毒作用,倒置相差显微镜下观察细胞的形态变化,Hoechst33258细胞荧光染色法观察细胞凋亡的形态变化.结果 细胞生长曲线表明细胞增殖数量变化与药物浓度及时间有显著依赖性;MTT测定补骨脂素在72 h对MG-63细胞抑制率分别为77.74%、71.05%、61.15%,细胞荧光染色观察到MG-63细胞形态改变.结论 补骨脂素抑制体外培养骨肉瘤MG-63细胞增殖,并可诱导其细胞凋亡.     

二膦酸盐对人骨肉瘤细胞诱导凋亡作用的实验研究

目的：探讨二膦酸盐对人骨肉瘤细胞的诱导凋亡作用及其可能的作用机制。方法将人骨肉瘤M G‐63细胞株培养、传代后将细胞分为两组：二膦酸盐400μg／m L干预组、生理盐水空白对照组,孵育72 h后,对两组人骨肉瘤M G‐63细胞株行免疫荧光检测,观察两组细胞中凋亡因子Caspase‐3、Fas的表达;行流式细胞术检测,观察两组细胞的细胞凋亡率。结果二膦酸盐作用于人骨肉瘤MG‐63细胞株72 h后,免疫荧光检测结果可见二膦酸盐400μg／mL干预组细胞中凋亡因子Caspase‐3、Fas大量表达,而生理盐水空白对照组几乎见不到凋亡因子Caspase‐3、Fas的表达;流式细胞术检测结果观察到二膦酸盐400μg／mL干预组细胞的细胞凋亡率为54．00％,远大于生理盐水空白对照组的细胞凋亡率3．10％,差异有统计学意义（ P＜0．05）,存在明显的诱导凋亡现象。结论二膦酸盐对体外人骨肉瘤M G‐63细胞株存在很强的诱导凋亡作用。     

利塞膦酸钠对原发性骨质疏松症患者骨密度和骨转换指标的影响

目的评价利塞膦酸钠对原发性骨质疏松症骨密度和骨转换指标的影响。方法采用随机双盲对照试验方法,将筛选合格的60例受试者分为两组（试验组30例：利塞膦酸钠片＋钙尔奇D;对照组30例：安慰剂＋钙尔奇D）。两组服药12个月,于试验0、3、6、9、12个月进行随访,观察腰椎骨密度（BMD）、血碱性磷酸酶（ALP）、骨钙素（BGP）、抗酒石酸酸性磷酸酶（TRACP）等相关有效指标。结果①试验组治疗12个月与基线比较,腰椎骨密度提高13．41％,与对照组相比差异有显著性（P〈0．05）。②12个月骨密度综合疗效为：治疗12个月试验组和对照组总有效率分别为93．10％和80．77％。③血骨钙素、抗酒石酸酸性磷酸酶和碱性磷酸酶治疗后6个月和12个月均降低,其中试验组血碱性磷酸酶降低的程度大于对照组,差异有显著性（P〈0．05）。结论利塞膦酸钠能提高原发性骨质疏松症患者的骨密度和降低其骨转换,从而有效防治骨质疏松。     

双膦酸盐类药物的化学研究进展

1969年Fleisch 报道了双膦酸盐类化合物可作用于羟基磷灰石结晶的过程,体内、体外均具有抑制骨重吸收作用[1].至今已合成双膦酸盐类化合物约300多个(不计盐及多晶型物),并有6个上市,临床广泛用于骨代谢性疾病的治疗.目前,双膦酸盐类药物是国际上药物研究的热点之一.本文旨在综述此类药物的研究应用概况、合成及构效关系.     

骨靶向药物表阿霉素-氧化葡聚糖-阿仑膦酸钠聚合物的制备及对骨肉瘤细胞的影响

目的 探讨合成骨靶向药物表阿霉素-氧化葡聚糖-阿仑膦酸钠聚合物对骨肉瘤细胞的影响.方法 （1）根据席弗碱原理合成聚合物.（2）红外、紫外和核磁对聚合物进行表征,测量氧化葡聚糖的分子量,醛基含量,阿仑膦酸钠-氧化葡聚糖聚合物中阿仑膦酸的含量,表阿霉素在聚合体中的载药量,体外羟基磷灰石结合实验验证亲骨性.（3）四甲基偶氮唑蓝（MTT）实验验证聚合物对骨肉瘤细胞的细胞毒性,流式细胞仪探讨聚合物对凋亡作用的影响.结果 物质各有特殊的物理表征.氧化葡聚糖重均分子量（MW）为4 251 ±68,数均分子量（MN）为2 551 ±42,分子量分布宽度为1.78.氧化葡聚糖的醛基含量为（10.41±0.2）mmol/g.合成药物中表阿霉素（EPI）的载药量为（5.28±0.23）％.醛基与阿仑膦酸钠（ALN）反应的最佳物质量比（投料比）应在5：2～3之间.ALN-Dex-EPI和EPI的羟基磷灰石（HA）吸附率分别为86.13％,13.91％.MTT实验中,ALN-Dex-EPI、EPI、ALN的IC50（单位：μg/ml）在24、48、72 h分别为0.142,0.505,0.219;0.251,0.739,0.518;45.21,27.97,18.96.在流式细胞实验中,EPI、ALN-Dex-EPI、ALN、Dex凋亡及坏死百分率（％）为80.13±4.05,97.01±2.58,31.53±6.9,14.01±2.51,组间比较差异有统计学意义.结论 成功合成的骨靶向药物具有良好的体外亲骨性外,对骨肉瘤细胞有较强的细胞毒性和促进凋亡作用.     

抗骨质疏松二膦酸盐类的构效关系

二膦酸盐 (ｂｉｓｐｈｏｓｔａｔｅｓ ,ＢＰｓ)是焦磷酸盐(ｐｈｏｓｐｈｏｎｏｐｈｏｓｐｈｉｎａｔｅ ,ＰＰｉ)的稳定类似物 ,在体外剂量依赖性地抑制羟磷灰石结晶的生长 ,在体内抑制异位钙化 ;二膦酸盐能抑制各种药物引起的骨吸收 ,并在体内对钙代谢有显著的作用 ,先后用于治疗与骨吸收增加有关的疾病 :如Ｐａｇｅｔ疾病 ,恶性高血钙 ,骨髓瘤和骨转移疾病 ,最近又用于治疗骨质疏松 ,二膦酸盐已成为研究的热点药物。目前得到批准的药物有Ｅｔｉｄｒｏｎａｔｅ ,Ｐａｍｉｄｒｏｎａｔｅ ,Ａｌｅｎｄｒｏｎａｔｅ ,Ｔｉｌｕｄｒｏｎａｔｅ和…     

双侧上颌骨二膦酸盐颌骨坏死1例报道

二膦酸盐类（bisphosphonates,BP）药物作为一种强效骨吸收抑制剂已用于临床30余年,广泛用于控制与骨代谢改变相关的疾病,如：骨质疏松症、恶性肿瘤骨转移、恶性肿瘤引起的高钙血症、多发性骨髓瘤和Paget骨病。自2003年Marx［1］首次报道二膦酸盐类药物可导致颌骨坏死的现象以来,相关病例报道逐渐增多。根据2014年美国口腔颌面外科医师协会（American Association of Oral and Maxillofacial Surgeons,AAOMS）发布的最新临床指南［2］：由于越来越多患者的颌骨坏死与使用包括二膦酸盐类药物在内的抗骨吸收药物及其他抗血管生成药物（如地诺单抗）相关,推荐把二膦酸盐相关性颌骨坏死（bisphosphonate associated osteonecrosis of the jaw,BRONJ）更名为药物相关性颌骨坏死（medication related osteonecrosis of the jaw,MRONJ）。该指南将MRONJ定义为：以往或目前正在应用抗骨吸收或抗血管生成药物;在口内骨暴露或经过口内、外瘘口可以探及骨面,骨不愈合的时间超过8周;颌骨未曾接受过放疗,或无明确的颌骨转移灶。 本文报道1例拔牙术后出现双侧上颌骨二膦酸盐相关性颌骨坏死的病例,通过手术治疗,效果满意。     

双膦酸盐治疗成骨不全研究进展

成骨不全是一组以骨骼脆性增加及胶原代谢紊乱为特征的全身性结缔组织疾病,主要由编码Ⅰ型胶原的基因发生突变所致,此病以骨脆性增加、骨关节进行性畸形、蓝巩膜、牙本质发育不全及听力下降为常见表现。目前治疗成骨不全的最理想的药物是双膦酸盐,本文复习国内外相关文献,就其治疗的最适剂量与时间、最佳给药途径、最佳药物选择以及药物与成骨不全类型和患者年龄的最适匹配等问题的研究进展作一综述。     

二膦酸盐作用的细胞学研究进展

二膦酸盐(bisphosphonates,BPs)是焦磷酸盐(pyrophosphate,PPi)的稳定类似物,二膦酸盐能抑制各种药物引起的骨吸收,并对体内钙代谢有显著的作用,用于治疗与骨吸收增加有关的疾病:如Paget疾病、恶性高血钙、骨髓瘤和骨转移疾病,最近又用于治疗骨质疏松,二膦酸盐目前已成为研究的热点药物.有关二膦酸盐的作用机制,最初认为它能结合到羟磷灰石结晶上,并抑制其生长和溶解,但这种解释不足以说明它们的各种作用.有些作者根据二膦酸盐细胞内移生化作用研究二膦酸盐作用,根据其方式不同分成2类:与PPi最类似的二膦酸盐归于毒性的ATP类似物;而将活性更强的含氮二膦酸盐,能干扰甲戊二羟酸途径而产生凋亡的归于另一类.     

二膦酸盐药物治疗乳腺癌骨转移发生颌骨坏死的临床特点

目的：乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一,骨转移在该类患者中较为常见。二膦酸盐药物是预防和控制恶性肿瘤骨转移的一线化学治疗药物,长期应用可以发生颌骨坏死。本研究旨在深入了解应用二膦酸盐药物治疗乳腺癌骨转移后患者发生颌骨坏死的临床特点。方法：回顾分析自2011年1月至2015年8月于北京大学口腔医院就诊并明确诊断为二膦酸盐颌骨坏死的患者,筛选出其中的乳腺癌患者,分析其临床症状、影像学特征及治疗情况。结果：共纳入14例乳腺癌患者,平均年龄60.21岁,平均罹患肿瘤时间9.77年,平均出现骨转移时间为5.67年,平均应用二膦酸盐药物的时间为3.29年。患者均无系统应用激素治疗史,无糖尿病史。9例患者曾经拔牙,口腔内颌骨坏死症状的平均时间为8.58个月,发生在下颌骨者10例,上颌骨3例,上、下颌骨1例。10例经手术治疗的患者中,3例治愈,6例好转,而4例经保守治疗的患者中2例临床症状明显加重。结论：乳腺癌患者自开始应用二膦酸盐药物至发生颌骨坏死的用药时间较长,多数患者没有糖尿病及应用激素治疗史。拔牙本身与颌骨坏死的严重程度没有直接关系,下颌骨是最常受累的部位,手术治疗可以在一定程度上缓解乳腺癌患者发生二膦酸盐相关性颌骨坏死的临床症状。     

缩宫素对人骨肉瘤细胞系MG-63增殖及成骨活性的影响

目的：研究缩宫素（OT）对人成骨细胞系MG-63增殖及成骨活性的影响,阐明其在骨代谢调节方面的作用。方法：用含OT 10、50和100 nmol/L的培养基孵育MG-63细胞1、3、5和7 d采用MTT法检测OT作用下细胞增殖活性的变化,选择其中最低有效浓度进一步检测OT作用下MG-63碱性磷酸酶（ALP）活性的变化。结果：MTT法检测显示,50和100 nmol/L OT作用1、3、5和7 d后MG-63细胞的增殖活性明显高于对照组（P<0.05）;10 nmol/L作用7 d后MG-63细胞增殖活性明显高于对照组（P<0.05）。ELISA检测显示,50 nmol/L　OT作用3、5和7 d后MG-63细胞ALP活性明显高于对照组（P<0.05）。结论：OT对MG-63细胞增殖有调节作用,能够正向促进成骨细胞的增殖和分化。     

双歧杆菌粘附素对脂多糖和H2O2调节肠上皮细胞增殖和凋亡的影响

目的研究双歧杆菌分泌型粘附素对脂多糖(LPS)和H2O2体外调节肠上皮细胞增殖和凋亡的影响。方法用3H-TdR掺入法、流式细胞仪和荧光染色等方法观察肠上皮细胞增殖和凋亡的情况。结果100 μg/L LPS对细胞增殖和凋亡均有促进作用,200 μmol/L H2O2可抑制肠上皮细胞增殖,促进凋亡。丫啶橙荧光染色见细胞核染色质致密浓染或裂解成碎片。预先经双歧杆菌分泌型粘附素处理后,LPS组细胞增殖和凋亡率均显著下降,H2O2组细胞凋亡明显减少。结论在体外,双歧杆菌分泌型粘附素能抑制LPS和H2O2对肠上皮细胞的损害作用,维持肠上皮细胞增殖与凋亡的平衡。     

褪黑素对NB4细胞作用的研究

目的观察褪黑素对人早幼粒细胞白血病细胞株NB4凋亡、分化及细胞周期的影响。方法以不同浓度的褪黑素(0.1、0.5、1mmol/L)加入NB4细胞中,继续培养24、48、72h,利用流式细胞术检测细胞凋亡率,细胞膜表面抗原CD33和CD11b的表达阳性率,及细胞周期的变化情况。结果MLT有促进NB4细胞凋亡的作用,且呈时间和浓度依赖性增加(P<0.05);CD33的细胞阳性率没有变化(P>0.05),CD11b的细胞阳性率在浓度为1mmol/L,48h和72h有轻度增加(P<0.05);细胞周期检测则显示随着浓度和时间的增加,G1期细胞增多,S期细胞减少(P<0.05)。结论褪黑素有促进NB4细胞凋亡,影响细胞生长周期的作用,诱导分化作用则不明显。     

N-(3-三氟甲基苯基)维甲酰胺对人肺腺癌A549细胞增殖及凋亡的影响

目的研究新合成的全反式维甲酸(ATRA)衍生物[N-(3-三氟甲基苯基)维甲酰胺]对人肺腺癌A549细胞株体外增殖及凋亡的影响。方法3种浓度的ATRA衍生物和ATRA(1、5、10mg/L)分别处理A549细胞1、2、3、7d,应用MTT法和流式细胞技术分别观察该ATRA衍生物对A549细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响;Western blot分析凋亡相关蛋白表达的变化。结果ATRA衍生物处理组A549细胞增殖抑制率随药物浓度的增加而提高,分别为9.1%、17.8%、47.0%;抑制率亦随药物作用时间的延长而提高,分别为18.1%、20.6%、40.4%、83.4%。10mg/LATRA衍生物可明显诱导A549细胞凋亡,凋亡率达到40.9%,G0～G1期细胞比例明显下降,细胞凋亡峰较对照组明显提前,凋亡过程伴随Bcl-2表达下降,而Bax、Bak、酶原形式的Caspase-3、p53、NF-κB的表达无明显变化。结论ATRA衍生物对A549细胞的增殖抑制作用呈浓度和时间依赖性;并诱导细胞凋亡,可能与Bcl-2蛋白的表达下调有关。     

M007介导的光动力疗法对人成骨肉瘤MG63细胞增殖的影响

目的观察新型光敏剂M007介导的光动力疗法(PDT)对体外培养人成骨肉瘤MG63细胞增殖能力的影响。方法取1mL含人成骨肉瘤MG63细胞1×106/mL的单细胞悬液加至培养皿中,分为实验组(M007-PDT组)、空白对照组(B组)、光照对照组(L组)和光敏剂对照组(M007组),按分组加入不同浓度M007(0,2,4,8,16μmol/L),分别用多光源红光光照系统或暗反应处理10min。采用AnnexinⅤ-FITC/PI染色的流式细胞分析法,检测各组的细胞残存率及死亡方式;四甲基偶氮唑盐比色(MTT)实验和细胞集落形成实验评估不同组残存细胞的增殖能力。实验组和对照组同步进行,每组重复6次。结果 M007浓度为2～16μmol/L时,其介导的光动力疗法能使超过90%的MG63细胞以晚期凋亡/坏死,或成为裸核的方式被灭活,在4～16μmol/L时,维持残存率小于1%;2～8μmol/L M007-PDT组中的残存细胞生长曲线低平,其光吸收值未随培养时间延长而增加(P>0.05),并且不能形成细胞集落,但2μmol/L M007-PDT组偶见一次16个活细胞。结论 M007浓度大于4μmol/L后,其介导的光动力疗法能完全灭活人成骨肉瘤MG63细胞,该技术应用于肿瘤术野血液回收有着良好的前景。     

白三烯D4在体外对A549肺泡上皮细胞增殖及迁移的影响

目的：观察炎症介质白三烯D4（LTD4）对人肺泡上皮细胞株A549细胞增殖及迁移的影响。方法：以免疫荧光染色鉴定A549细胞上半胱氨酰白三烯（CysLT）受体的表达;以不同浓度（001～100 nmol/L）的CysLT受体激动剂LTD4处理A549细胞不同时间后,以MTT还原法检测细胞活性反映细胞增殖,以改良的划痕法观察细胞迁移的变化。结果：A549细胞表达CysLT1受体及CysLT2受体。001～100 nmol/L LTD4处理A549细胞24～72 h,细胞增殖无明显变化（均P>005）;100 nmol/L LTD4处理A549细胞24、48、72 h后,细胞活性分别为不加LTD4处理的A549细胞的（103.00±446）%、（107.00±945）%、（105.00±902）%,差异均无统计学意义（均P>005）。虽然001～100 nmol/L LTD4处理的第1个24 h内A549细胞的修复速率远高于第2个及第3个24 h内的细胞修复速率,但同一时间段组间差异无统计学意义（均P>005）。100 nmol/L 的LTD4处理A549细胞24、48、72 h后,细胞迁移率分别为不加LTD4处理的A549细胞的115、121、106倍（均P>005）,说明LTD4处理后细胞迁移亦无明显变化。结论：在体外给予001～100 nmol/L LTD4处理72 h,不影响A549细胞的增殖及迁移。     

全反式维甲酸及银杏提取物对神经干细胞分化的影响

目的探讨全反式维甲酸(ATRA)、银杏提取物(Egb)对体外培养的神经干细胞(NSCs)分化为胆碱能神经元和多巴胺能神经元的作用。方法取第3代NSCs诱导分化,试验分为4组:ATRA组(10-8mol/L)、Egb组(2mg/L)、ATRA(10-8mol/L)+Egb组(2mg/L)和空白对照组;免疫细胞化学染色检测神经微管相关蛋白(MAP2)、乙胆碱酯酶(AchE)和酪氨酸羟化酶(TH)的表达,并计算阳性染色细胞的百分率。结果ATRA组诱导神经干细胞分化为AchE阳性和TH阳性神经元的百分率分别为26·32%±3·62%和12·02%±2·78%;Egb组分别为42·93%±3·08%和18·13%±1·74%;ATRA+Egb组分别为43·32%±5·60%和13·03%±2·54%;空白对照组分别为27·68%±2·51%和5·74%±1·81%。结论ATRA和Egb均可促进NSCs向TH阳性神经元分化,Egb还可促进NSCs向AchE阳性神经元分化,ATRA和Egb联用无协同效应。     

SiRNA沉默Livin基因促骨肉瘤MG-63细胞凋亡的实验研究

目的:研究特异性小分子干扰RNA(siRNA)沉默骨肉瘤MG-63细胞Livin基因对细胞凋亡的影响?方法:设计针对人源Livin基因的siRNA,转染至对数生长期的人骨肉瘤MG-63细胞株;RT-PCR检测转染后骨肉瘤MG-63细胞Livin基因表达的变化,Western blot检测转染后骨肉瘤MG-63细胞Livin蛋白表达的变化,PI染色后流式细胞仪检测转染后细胞凋亡的变化?结果:Livin特异性siRNA转染骨肉瘤MG-63细胞后,Livin基因表达较空白对照和阴性对照显著减少(0.195 ± 0.019 vs 0.539 ± 0.031?0.438 ± 0.029)?Western blot检测结果显示Livin蛋白质水平较空白对照和阴性对照显著减少(0.165 ± 0.022 vs 0.632 ± 0.034?0.625 ± 0.035)?流式细胞仪检测见siRNA组骨肉瘤MG-63细胞凋亡率较对照组明显增加?结论:RNA干扰能有效沉默骨肉瘤MG-63细胞Livin基因表达,促进骨肉瘤MG-63细胞凋亡?     

顺铂诱导凋亡耐受胃腺癌细胞坏死性死亡

目的了解顺铂诱导胃腺癌细胞死亡的方式,并进一步探讨Puma、Noxa的表达水平和胃腺癌细胞凋亡敏感性的关系。方法四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测细胞生存率;Annexin V-FITC流式细胞术检测细胞凋亡;PI流式细胞术检测细胞膜的完整性;半定量RT-PCR法检测p53、Puma、Noxa的mRNA水平。结果顺铂诱导胃腺癌细胞死亡具有剂量和时间依赖性,48h时IC50为3mg／L;3mg／L顺铂诱导0、8、16、24、32、40、48h后BGC-823细胞凋亡率分别为3．5％、4．1％、4．9％、5．5％、7％、9．3％、12％;非凋亡性死亡率分别为0％、17．6％、21％、25．4％、29．8％、32．9％、37．7％;PI阳性细胞率分别为6．7％、20．6％、24．9％、29．9％、36．3％,41．2％、48．6％;顺铂诱导前后细胞p53、Noxa的mRNA表达水平变化不显著（P〉0．05）,Puma可能不表达。结论顺铂诱导凋亡耐受胃腺癌细胞发生非凋亡性死亡,推测其可能为细胞坏死;胃腺癌细胞的凋亡耐受可能和顺铂不能诱导细胞p53及其转录靶点Puma和Noxa表达增加相关。