一氧化氮合酶在心血管内皮细胞中表达的调控

人心血管内皮细胞中的一氧化氮合酶（Nitricoxide synthase，NOS），又称为内皮型一氧化氮合酶（Endothelial NOS，eNOS），该基因定位于人类第12号染色体，由26个外显子组成，它以L-精氨酸为底物生成一氧化氮（NO）而发挥生物学作用。在eNOS结构基因的-103bp有spl住点，这个位点和位于-230bp的GAGA区是激活eNOS启动子的重要顺式作用元件。eNOS结构基因的Spl位点时转录是必需的，而GATA-2转录因子是激发eNOS转录的重要细胞因子。溶血磷脂胆碱、氧化的低密度脂蛋白、Statin、TGF—B、TNF—α和雌激素均可影响eNOS基因表达。eNOS与小凹蛋白、GPCR、Hsp90、钙／钙调素等调节蛋白之间的相互作用对翻译后的eNOS活性均有影响。eNOS可通过促进NO的生成，减少心、脑血管疾病的发生。     

猪后肢动脉生成过程中血管内皮细胞eNOS的表达

目的:研究猪后肢动脉生成过程中内皮型一氧化氮合酶(eNOS)表达及其活性.方法:猪股动脉行单侧结扎术,另一侧行假手术,两周后处死动物.应用免疫荧光组织化学技术检测侧支血管中eNOS表达,用抗磷酸化的eNOS抗体(P-eNOS)检测eNOS的活性.用Leica激光共聚焦显微镜观察并拍照,图片用Silicon Graphics Octane进行处理.结果:在正常小动脉血管中eNOS的表达非常低,呈弱阳性;在生长的侧支血管中eNOS的表达显著上调,呈强阳性.在正常血管和生长的侧支血管中eNOS的表达都定位于内皮细胞.在生长的侧支血管中,P-eNOS表达水平非常高,免疫双重染色证实eNOS和P-eNOS的表达共同定位于内皮细胞.结论:侧支血管发育过程中,eNOS的表达被上调,并具有生物活性,高水平和具有活性的eNOS可能通过调节内皮细胞的增殖、移动及对炎症的控制,从而对侧支血管的生长发挥重要作用.     

茶色素对人血管内皮细胞一氧化氮合酶表达的影响

目的：研究茶色素对人血管内皮细胞一氧化氮合酶（ｅＮＯＳ）基因表达的影响。方法：应用ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ和ＲＴ－ＰＣＲ等分子生物学方法分别从ｅＮＯＳ蛋白水平和ＲＮＡ水平研究茶色素对ｅＮＯＳ表达的影响。结果：８０、４０、ｍｇ／Ｌ的茶色素明显诱导人血管内皮细胞ｅＮＯＳ表达，并有剂量反应关系。结论：茶色素诱导人血管内皮细胞ｅＮＯＳ表达是其抗动脉粥样硬化的机制之一。     

TNFα对大鼠肺微血管内皮细胞NO的产生及NOS mRNA表达的影响

目的 阐明肿瘤坏死因子α（ＴＮＦα）对内皮细胞一氧化氮（ＮＯ）的产生及两型一氧化氮合酶（ＮＯＳ）ｍＲＮＡ表达的影响及其规律。方法 以大鼠微血管内皮细胞为材料,测定细胞培养上清液中ＮＯ２＾－水平并应用定量ＲＴ／ＰＣＲ技术检测内皮细胞ＮＯＳ ｍＲＮＡ表达水平。结果 应用ＴＮＦα（１００ｎｇ／ｍｌ）作用于内皮细胞６ｈ后,发现培养上清液ＮＯ２＾－水平较对照组显著升高（Ｐ〈０．０５）,而６ｈ以内两组无显著差     

miRNA-24对血管内皮细胞eNOS表达/活性及其代谢产物NO生成的影响

目的 探讨微小RNA(miRNA)-24对血管内皮细胞内皮型一氧化氮合酶(eNOS)基因表达、活性调节的分子机制及其代谢产物的影响.方法 构建miRNA-24高表达质粒,并转染人脐静脉内皮细胞(HUVEC).MTT法检测细胞的增殖情况,划痕实验检测细胞的迁移能力,RT-PCR和Western印迹法检测细胞eNOS mRNA和蛋白的表达情况,ELISA法检测eNOS的表达活性,硝酸还原法测定细胞培养上清液中NO的含量.结果 与对照组相比,转染miRNA-24后细胞增殖能力下降54.32%、迁移能力下降48.62%;转染miRNA-24后eNOS mRNA降低43.92%,蛋白表达量减少42.71%;转染miRNA-24后eNOS的酶活性降低73.20%,同时NO的合成与释放减少55.29%.结论 miRNA-24高表达抑制eNOS的表达及酶活性;miRNA-24抑制代谢产物NO的合成与释放,这可能成为心血管疾病防治的分子靶点.     

雌激素对血管内皮细胞一氧化氮合酶活性的调控

目的　观察 17β -雌二醇对大鼠血管内皮细胞一氧化氮合酶 (NOS)活性的影响。 方法　用贴壁法和无酚红 164 0培养基培养大鼠血管内皮细胞 ,在 10nmol的 17β -雌二醇作用下 ,观察一定时间内内皮细胞的NOS活性。 结果　 10nmol的 17β -雌二醇作用 8～ 2 4hNOS活性显著增强 (同对照组相比 8hP <0 0 5 ;16h ,2 4hP <0 0 1)。 结论　 17β-雌二醇能增强大鼠血管内皮细胞的NOS活性 ,这可能是雌激素降低血管阻力、抑制动脉粥样硬化作用的重要机理之一     

AMPK在内皮细胞中对血管形成的影响

在真核细胞中,腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)是细胞及全身能量稳态的一个重要调节器,受体内AMP/ATP比率调节,通常被称为代谢敏感性激酶。新近的研究发现,AMPK的激活参与了许多细胞(如骨骼肌细胞、内皮细胞)的分化、迁移和管腔形成。该文就AMPK在血管生成这一生物效应中的显像和作用机制予以综述。     

高游离脂肪酸血症对SD大鼠主动脉内皮细胞一氧化氮合酶活性及mRNA表达的影响

目的研究高游离脂肪酸（FFA）血症对大鼠血管内皮细胞一氧化氮合酶（eNOS）活性及表达的影响并探讨其可能的机制。方法雄性SD大鼠随机分成对照组和FFA组。对照组及FFA组大鼠分别经颈静脉插管输入生理盐水或20％脂肪乳＋肝素6h。输液结束后采集血清标本测定血中FFA、活性氧（ROS）、脂质过氧化产物丙二醛（MDA）、还原性谷胱甘肽（GSH）、高敏C反应蛋白（hs-CRP）以及NO水平。处死动物后取出主动脉，测定主动脉内皮细胞匀浆液中eNOS活性及eNOS mRNA水平。结果FFA组血FFA水平较对照组升高2～4倍，血清NOx水平明显降低，内皮细胞eNOS活性及mRNA水平明显低于对照组。FFA组血清ROS、MDA以及hsCRP水平明显升高，GSH水平降低。结论高FFA血症可抑制内皮细胞eNOS活性及表达，其机制可能涉及FFA所诱导的炎症反应和氧化应激。     

高游离脂肪酸血症对SD大鼠主动脉内皮细胞一氧化氮合酶活性及mRNA表达的影响

目的研究高游离脂肪酸(FFA)血症对大鼠血管内皮细胞一氧化氮合酶(eNOS)活性及表达的影响并探讨其可能的机制。方法雄性SD大鼠随机分成对照组和FFA组。对照组及FFA组大鼠分别经颈静脉插管输入生理盐水或20%脂肪乳 肝素6 h。输液结束后采集血清标本测定血中FFA、活性氧(ROS)、脂质过氧化产物丙二醛(MDA)、还原性谷胱甘肽(GSH)、高敏C反应蛋白(hs-CRP)以及NO水平。处死动物后取出主动脉,测定主动脉内皮细胞匀浆液中eNOS活性及eNOS mRNA水平。结果FFA组血FFA水平较对照组升高2~4倍,血清NOx水平明显降低,内皮细胞eNOS活性及mRNA水平明显低于对照组。FFA组血清ROS、MDA以及hsCRP水平明显升高,GSH水平降低。结论高FFA血症可抑制内皮细胞eNOS活性及表达,其机制可能涉及FFA所诱导的炎症反应和氧化应激。     

INSULIN INDUCES NITRIC OXIDE PRODUCTION IN BOVINEAORTIC ENDOTHELIAL CELLS

ffeStun6. ObjeCtif Dens cette dtude nons avons ewilue l' effet de l' insuline sur ba Proliferation cellulaire, liberationd' oxide nitrique et l' expression gdrktique de synthase d' oxide nitrique dens la cellule endotheliale aortique bovine. methIn mitogdthe est evalude per la ndthae M7T. In Production de NO dans ie alga en culture est determine per la reactionGness. In technique quantitative RT/PCR est utility pour quantifier ie niveau de sWthase d' oxide nitrique mRNA dens la cellule…     

肾上腺髓质素对内皮型一氧化氮合酶在肾肿瘤细胞中表达的影响

目的 观察肾上腺髓质素（adrenomedullin,ADM）对肾肿瘤细胞中内皮型一氧化氮合酶（endothelial nitric oxide synthase,eNOS）表达的影响.方法 将肾肿瘤细胞分为对照组、ADM作用组、肾上腺髓质素受体shRNA （adrenomedullin receptor shRNA,ADMR shRNA）作用组,每组又设置24、48、72h 3个时间梯度.细胞培养完成后提取细胞总蛋白,Western-Blot检测各组细胞总蛋白中eNOS的表达,观察ADM对其影响.结果 ADM作用组各时间梯度eNOS的表达均高于同时段对照组和ADMR shRNA作用组（P＜0.05）.结论 ADM通过其特异性受体诱导肾肿瘤细胞中eNOS表达升高.     

一氧化氮、一氧化氮合酶在脑出血病人中的变化和意义

目的：探讨一氧化氮(NO)、一氧化氮合酶(NOS)在脑出血病人中的变化和意义。方法：比较49例脑出血患者及66例健废人血浆NO、NOS含量，分析上述指标在出血后三个时期的变化以及是否合并蛛网膜下腔出血和临床预后的关系。结果：与对照组相比，脑出血l～3d组NO、NOS含量明显高于4～7d组、14d组和对照组，NO变化与脑出血和(或)合并蛛网膜下腔出血有一定关系。结论：NO、NOS参与了脑出血的病理生理过程，其变化对病情的预后有一定的影响。     

口腔疾病患者唾液中一氧化氮水平的变化

采用Ｇｒｉｅｓｓ法检测了５５例健康人和４１例口腔炎症患者和口腔肿瘤患者唾液中ＮＯ的水平。结果表明，与健康人相比，上述患者唾液中ＮＯ的水平明显增高，其临床意义和ＮＯ增加的机制仍有待进一步研究     

系膜增殖性肾小球肾炎iNOSmRNA的表达及其意义

探讨诱导型一氧化氮合酶(iNOS)在系膜增殖性肾小球肾炎(MsPGN)中的表达及意 义。方法采用逆转录-聚合酶链反应方法检测36例系膜增殖性肾炎(MsPGN)、18例非MsPGN患者肾活检组织及16例正常肾组织中诱导型一氧化氮合酶(iNOS)mRNA的相对表达水平。结果MsPGN组、非MsPGN组iNOSmRNA表达分别为1.029±0.166、0.459±0.115,MsPGN组明显高于非MsIGN组(P<0.001)。中度MsPGN组(1.092±0.139)明显高于轻度MsPGN组(0.949±0.167)(P<0.01)。正常肾组织中无iNOSmRNA表达。尿蛋白>3.5g/d组与<3.5g/d组iNOSmRNA表达分别为1.098±0.137、0.922±0.156,二者有显著性差异(P<0.01)。结论iNOS在MsPGN的发病和进展机制中起重要作用     

一氧化氮及一氧化氮合酶在遗传性癫痫易感大鼠惊厥发作中的作用

目的：探讨一氧化氮、一氧化氮合酶在遗传癫痫易感大鼠惊厥发作中的变化及作用。方法：选择惊厥评分在30－40的P77PMC大鼠35只，均分A－G7组，A组为对照组、G组预先30min腹腔注射一氧化氮合酶抑制剂L－NAME，分别于铃声刺激致惊后0．5、1、2、4,12h断头处死，取出脑组织分离双侧大脑皮层、海马等组织匀浆，测定一氧化氮及一氧化氮合酶，分别统计并进行t检验。结果：惊厥后0．5－1h皮层、海马一氧化氮、一氧化氮合酶逐渐升高，2h达峰值，4－12h恢复正常，应用L－NAME后，一氧化氮、一氧化氮合酶升高被抑制，但大鼠惊厥评分增高并致1例惊厥后死亡和明显延长惊厥持续时间。结论：惊厥后大鼠体内一氧化氮、一氧化氮合酶合成增加，给予合成酶抑制后能明显下降，但能加重惊厥程度和延长持续时间，提示一氧化氮于惊厥后升高，可能作为内源性抑制性性质，在惊厥发作自行终止机制中具有重要作用。     

哮喘患儿血清——氧化氮,一氧化氮合酶的变化及意义

目的：探讨哮喘患儿血清一氧化氮（ＮＯ）、一氧化氮合酶（ＮＯＳ）的变化及意义。方法：采用化学比色法测定６１例哮喘患儿及２０例正常健康儿童血清ＮＯ、ＮＯＳ水平。结果：哮喘急性发作期患儿血清ＮＯ、ＮＯＳ均显著高于正常对照组,其中ＮＯ以单纯哮喘组较哮喘并肺炎组升高更著。缓解期ＮＯ、ＮＯＳ均降至正常。结论：ＮＯ、ＮＯＳ在哮喘发病过程中起重要作用。     

细胞因子刺激下PC12神经细胞中诱导型NO合酶及精氨酸循环相关酶的表达

①目的 研究PC12神经细胞在炎症因子的刺激下，一氧化氮合酶(NOS)底物精氨酸的来源，探讨减轻一氧化氮(NO)介导的炎症反应途径。②方法 用神经生长因子(NGF)处理PC12细胞使之分化成神经细胞，用IFNγ／TNFα激活，利用Northern及Western方法检测诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、精氨酸代琥珀酸合成酶(AS)、精氨酸代琥珀酸裂解酶(AL)、正性氨基酸转移酶1和2(CAT-1、CAT-2)mRNA及其酶蛋白的表达。同时检测地塞米松或dibutyryl cAMP对上述各种酶表达的影响。③结果 iNOSmRNA、AS mRNA和其酶蛋白明显被诱导；AL mRNA和其酶蛋白少量被诱导，同时产生大量的NO；CAT-1和CAT-2没有被诱导。地塞米松或dibutyryl cAMP抑制iNOS的诱导及NO的合成，两者共同作用时，其抑制作用更明显。④结论 在细胞因子活化的PC12神经细胞中iNOS被诱导，产生大量的NO；此时其底物精氨酸主要来源于精氨酸的再生系——瓜氨酸-NO循环。     

eNOS基因多态性与老年射血分数保留心力衰竭相关性

目的探讨内皮型一氧化氮合酶(eNOS)基因多态性与老年射血分数保留心力衰竭(HFPEF)的相关性。方法应用聚合酶链反应(PCR)、基因芯片技术等方法,检测230例老年HFPEF病人及200例健康者(对照组)基因型及基因频率,应用Logistic回归分析年龄、体质量指数(BMI)、血脂、血糖及基因型对老年HFPEF的影响。结果 HFPEF组eNOS基因G894T中GT+TT基因型频率及T等位基因频率与对照组比较差异均有显著性(χ2=8.341、3.654,P<0.05);Logistic回归分析显示,年龄、BMI、糖尿病、高血压、血总胆固醇、eNOS基因型是HFPEF发病的危险因素,OR值分别为3.252、1.223、1.434、1.845、4.008、1.378。结论年龄、BMI、糖尿病、高血压、血总胆固醇是HFPEF的危险因素;eNOS基因G894T可能是HFPPEF发病的易感基因。