葛根素对过氧化氢诱导鼠晶状体上皮细胞NF-κB活化表达的抑制作用

目的：观察过氧化氢诱导鼠白内障形成过程中晶状体上皮细胞NF-κB的活化表达及葛根素(Puerarin，Pue)对NF-κB活化表达的抑制作用，探讨NF-κB在白内障发病过程中的意义及Pue对白内障的治疗作用。方法：大鼠晶状体离体培养，分成过氧化氢组(H2O2组)、对照组、Pile处理组(治疗组)，免疫组织化学方法检测三组不同时间的晶状体上皮细胞NF-κB的活化表达。结果：随过氧化氢损伤时间的延长，H2O2组晶状体上皮细胞NF-κB活化表达逐渐增强，与晶状体混浊程度正相关。培养24小时1mmolA、10mmol／l浓度的Pue处理组与H2O2组比较晶状体上皮细胞NF-κB平均阳性活化表达率和晶状体混浊程度均明显降低。结论：过氧化氢可以诱导鼠晶状体上皮细胞NF-κB的活化表达。1mmol／l、10mmol／l浓度的Pue可以有效抑制NF-κB的活化表达,有可能对抗或延缓白内障的发生。     

茶多酚对H2O2诱导大鼠晶状体上皮细胞中NF-κB表达的干预作用

目的:建立离体H2O2诱导的大鼠白内障模型,并观察茶多酚(tea polyphenols,TP)对H2O2诱导大鼠晶状体上皮细胞中NF-κB表达的影响。方法:采用离体晶状体培养技术,在一定浓度H2O2的MEM培养液中置入透明的SD大鼠晶状体,建立实验性白内障晶状体模型。设置空白对照组、H2O2组和茶多酚(0.02g/L,0.2g/L,2g/L)处理组,分别于不同时间点(6,12,24,48h)取样,应用RT-PCR检测晶状体上皮细胞中NF-κBmRNA表达,Western-blot检测晶状体上皮细胞中NF-κB蛋白表达。结果:H2O2上调晶状体上皮细胞中NF-κB的表达,且呈时间依赖性(P<0.01);不同浓度的茶多酚均可抑制晶状体上皮细胞中NF-κB的表达,茶多酚浓度为0.2g/L时抑制效果最显著(P<0.05)。结论:茶多酚可抑制H2O2诱导的晶状体上皮细胞中NF-κB的表达,并且在茶多酚浓度为0.2g/L时抑制效果最明显。     

卡配因Ⅱ在过氧化氢诱发大鼠白内障的晶状体上皮细胞中的表达

目的　探讨卡配因Ⅱ在过氧化氢 (H2 O2 )诱发大鼠白内障的离体晶状体上皮细胞中的表达改变和意义。方法　使用H2 O2 诱发实验组离体培养的大鼠晶状体发生白内障 ,用免疫组织化学方法检测卡配因Ⅱ在大鼠晶状体上皮细胞中的表达 ,与对照组正常晶状体上皮细胞中的卡配因Ⅱ表达进行比较 ,并进行统计学分析 ;观察 2个组晶状体出现混浊的时间和程度。结果　实验组大鼠的晶状体上皮细胞中卡配因Ⅱ的表达明显增高 ,与对照组比较 ,差异有显著意义 (P <0 0 5 )。卡配因Ⅱ表达的增高发生于晶状体混浊之前。结论　H2 O2 可在大鼠晶状体上皮细胞中激活卡配因Ⅱ的表达 ,从而使其在氧化损伤诱发白内障的过程中发挥作用     

过氧化氢诱导鼠晶状体上皮细胞核因子-κB mRNA表达研究

目的探讨过氧化氢诱导鼠白内障形成过程中晶状体上皮细胞NF-κBmRNA的表达及意义.方法大鼠晶状体器官离体培养后用原位杂交方法检测晶状体上皮细胞中NF-κBmRNA的表达.结果随过氧化氢损伤时间的延长,晶状体上皮细胞内NF-κBmRNA的表达逐渐增强(培养3h为24.18±8.54,12h为47.58±9.14,24h为62.48±8.22),与晶状体混浊程度正相关(r=+0.897,P＜0.001).结论过氧化氢可以诱导鼠晶状体上皮细胞NF-κBmRNA的表达,后者在白内障发病机制中占有重要地位.     

晶状体上皮细胞凋亡与过氧化氢诱导白内障形成研究

目的 探讨晶状体上皮细胞凋亡与皮质性白内障形成的关系。方法用200μmol／L过氧化氢(H2O2)诱导离体兔晶状体白内障形成,TUNEL法检测H：0：作用1,6,18,24,48h的晶状体上皮凋亡细胞,同时测定晶状体超氧化物歧化酶(SOD)活性。结果H2O2作用1h,晶状体保持透明,未发现凋亡上皮细胞。随着作用时间的延长,凋亡上皮细胞数量逐渐增多,晶状体逐渐变混浊。SOD活性早期无变化,18h后逐渐降低。结论晶状体上皮细胞凋亡是皮质性白内障形成的细胞学基础,其发生先于晶状体抗氧化机制的变化。     

半胱氨酸天冬氨酸酶在过氧化氢诱导大鼠晶状体上皮细胞凋亡中的表达

目的 探讨半胱氨酸天冬氨酸酶（caspase3)在氧化损伤致大鼠晶状体上皮细胞凋亡过程中的表达及意义。方法 离体大鼠晶状体于MEM培养液中培养，实验组加入终浓度为2mmol/L的过氧化氢（H2O2），对照组不加H2O2，观察培养过程中两组晶状体混浊程度；透射电镜下观察晶状体上皮细胞超微结构改变；免疫组织化学方法测定细胞中caspase3表达。结果 在H2O2作用下随培养时间延长，晶状体混浊度加重，伴随晶状体上皮细胞凋亡增加；caspase3表达量随细胞凋亡及晶状体混浊度的增加而增加。结论 晶状体上皮细胞凋亡是氧化损伤诱发白内障模型的细胞学基础；caspase3可能参与晶状体上皮细胞凋亡和白内障的形成，在白内障的发病机制中占有重要地位。     

NF-κB诱导TNF-α在大鼠视网膜缺血再灌注损伤中的表达及PDTC对其表达的影响

目的 :探讨核转录因子 κB(NF κB)及肿瘤坏死因子 α(TNF α)在大鼠视网膜缺血再灌注损伤中的表达及吡咯醛二硫氨基甲酸 (pyrrolidinedithiocarbamate ,PDTC)对其表达的影响作用。方法 :建立大鼠视网膜缺血再灌注模型 ,6 0只SD大鼠随机分为缺血再灌注组和缺血再灌注 +PDTC组。每组按再灌注后不同时间段分为 1、6、12、2 4、4 8、72小时组 ,每组 5只 ,以原位杂交法检测视网膜中NF κB和TNF α的表达 ,每只大鼠处死前行视网膜电图 (ERG)检测。结果 :缺血再灌注组在 6小时开始检测到NF κB和TNF α的表达 ,在 2 4小时表达最强 ,以后逐渐减弱。缺血再灌注 +PDTC组在再灌注 6小时未能检测到NF κB和TNF α的表达 ,在第 12小时有NF κB和TNF α的表达 ,2 4小时表达最强 ,但低于缺血再灌注组 (P <0 0 5 )。缺血再灌注组在再灌注 6小时后各期ERG波幅明显低于缺血再灌注 +PDTC组 (P <0 0 5 )。结论 :NF κB及其诱导的TNF α在视网膜缺血再灌注损伤中发挥重要作用 ,PDTC可能通过抑制NF κB的活性减轻视网膜缺血再灌注损伤     

褪黑素对过氧化氢诱导晶状体上皮细胞氧化损伤的保护作用

目的：探讨褪黑素对过氧化氢诱导晶状体上皮细胞氧化损伤的保护作用。
　　方法：晶状体上皮细胞传代培养后,分别加入不同浓度褪黑素预处理12h后,加入100μmol/L H2 O2继续孵育24h, MTT比色法检测褪黑素对H2 O2诱导的晶状体上皮细胞活力的影响,流式细胞仪检测细胞凋亡率,比色法检测凋亡相关因子Caspase-3及Caspase-9的活性。
　　结果：MTT结果显示褪黑素对晶状体上皮细胞活性无影响,该药物可以抑制过氧化氢诱导的细胞活性的下降,流式细胞计数结果显示褪黑素可以抑制过氧化氢诱导的细胞凋亡,此外,褪黑素还可以减少过氧化氢所致晶状体上皮细胞内Caspase-3及Caspase-9的活性,并且,伴随褪黑素作用时间的延长其活性呈下降趋势。
　　结论：褪黑素可以明显抑制过氧化氢诱导的晶状体上皮细胞的凋亡,从而为寻求有效的防治白内障药物提供可靠的实验依据。     

卡配因Ⅱ在过氧化诱发大鼠白内障的晶状体上皮细胞中的表达

目的：探讨卡配因Ⅱ在过氧化（H2O2）诱发大鼠白内障的离体晶状体上皮细胞中的表达改变和意义。方法：使用H2O2诱发实验组离体培养的大 鼠晶状体发生白内障，用免疫组织化学方法检测卡配因Ⅱ在大鼠晶状体上皮细胞中的表达，与对照组正常晶状体上皮细胞中的卡配因Ⅱ表达进行比较，并进行统计学分析，观察2个组晶状体出现混浊的时间和程度。结果：实验组大鼠的晶状体上皮细胞中卡配因Ⅱ的表达明显增高，与对照组比较，差异有显著意义（P＜0．05）。卡配因Ⅱ表达的增高发生于晶状体混浊之前。结论：H2O2可在大鼠晶状体上皮细胞中激活卡配因Ⅱ的表达，从而使其在氧化损伤诱发白内障的过程中发挥作用。     

人视网膜色素上皮细胞NF-κB的表达

目的探讨核因子κB(NFκB)在体外培养的人视网膜色素上皮(human retinal pigment epithelium,hRPE)细胞中的基础表达以及吡咯二硫代氨基甲酸乙酯(pyrolli dinedi thio carbamate,PDTC)、IL1β对NFκB表达的影响。方法体外培养的hRPE细胞经同步化后分2组分别加药:(1)无PDTC组:分别加入IL1β、生理盐水(用于检测NFκB在hRPE中的基础表达);(2)PDTC组:分别加入IL1β、生理盐水(用于检测NFκB在PDTC预处理后hRPE中的表达)。免疫荧光抗体染色、流式细胞计数法(flow cyto metry,FCM)测定上述2组标本中hRPE的NFκB的表达率。结果NFκB在hRPE中的基础表达率为8.05%,IL1β作用后表达率升高到30.26%;hRPE细胞经PDTC预处理后,NFκB的表达率下降为3.74%,加入IL1β(10μg·L-1)作用后表达率为3.66%.结论IL1β可以显著提高NFκB在hRPE细胞中的表达;PDTC可以显著降低体外培养的hRPE中的NFκB表达率,PDTC亦可显著抑制由IL1β诱导的NFκB的活化过程。     

牛磺酸抑制晶状体上皮细胞凋亡的实验研究

目的 探讨牛磺酸对过氧化氢所诱发的晶状体上皮细胞凋亡的抑制作用。方法 取兔晶状体离体培养，分为对照组、H2O2氧化损伤组、氧化损伤同时加牛磺酸共3组，每组64只晶状体，分别以不同时限观察各组晶状体混浊情况，DNA缺口末端原位检测法(TUNEL法)及DNA片段分析检测各组晶状体上皮细胞凋亡情况。结果 牛磺酸组的晶状体混浊情况和晶状体上皮细胞凋亡率均明显低于H2O2氧化损伤组，与对照组差别无统计学意义。DNA片段琼脂糖凝胶电泳：H2O2组培养24、36、48及72h各时限均呈现凋亡细胞的典型梯状条带；而培养24h的对照组、牛磺酸组均未出现此变化而仅呈现正常细胞电泳条带。结论 牛磺酸可抑制H2O2氧化损伤所诱导的兔晶状体上皮细胞凋亡，从而延缓或减轻白内障形成。     

牛磺酸对H2O2诱发的猪眼白内障的抑制作用及其晶状体中GSH含量的变化

目的研究牛磺酸对过氧化氢（R2O2）诱发的白内障的抑制作用及晶状体中抗氧化利谷胱苷肽含量的变化。方法采用猪晶状体器官培养的方法，观察牛磺酸对H2O2诱发猪晶状体白内障形成的抑制作用，同时检测对照组、H2O2组和H2O2＋牛磺酸组猪晶状体中谷胱苷肽的含量。结果随着培养时间的延长，H2O2＋牛磺酸组晶状体混浊程度明显较H2O2组轻，且H2O2＋牛磺酸组晶状体中谷胱苷肽含量明显高于H2O2组，差异有显著统计学意义（P〈0.01）。结论牛磺酸做为抗氧化剂，能抑制H2O2诱发的猪晶状体中抗氧化剂谷胱苷肽的减少，从而延迟白内障的发生和发展。     

P38有丝分裂素激活蛋白激酶信号转导通路介导过氧化氢诱导的人晶状体上皮细胞中热休克蛋白27表达的研究

目的研究P38有丝分裂素激活蛋白激酶(MAPK)在H2O2诱导的人晶状体上皮细胞热休克蛋白质27(HSP27)表达中的作用。方法使用100和200μmol/LH2O2分别以不同时间刺激培养的人晶状体上皮细胞系B3,在阻断实验中加入特异性P38MAPK阻断剂SB203580阻断P38MAPK信号转导通路。采用逆转录聚合酶链反应检测刺激不同时间的人晶状体上皮细胞HSP27mRNA的表达情况,采用免疫印迹法(Westernblotting)检测细胞中HSP27和磷酸化P38MAPK的表达情况。结果(1)H2O2刺激后的人晶状体上皮细胞中HSP27mRNA及其蛋白的表达显著增加;(2)100和200μmol/LH2O2刺激30min,人晶状体上皮细胞应激活化蛋白激酶的活性(平均灰度值)分别增强至800±081和825±050,6h后恢复至基线水平(P<001);磷酸化P38MAPK的表达随H2O2浓度的增高而增加,且在H2O2刺激后15min达到峰值,随后逐渐下降;(3)加用特异性P38MAPK阻断剂SB203580预处理后,200μmol/LH2O2刺激6h的人晶状体上皮细胞HSP27表达(平均灰度值)从3600±082降至875±126,受到显著抑制(P<001)。结论P38MAPK信号转导途径参与H2O2诱导的人晶状体上皮细胞HSP27的表达。(中华眼科杂志,2005,414751)     

七叶皂苷钠体外对大鼠紫外线所致晶状体上皮细胞NF-κB表达的影响

目的:探讨在紫外线(ultraviolet,UV)诱导大鼠白内障形成过程中晶状体上皮细胞(lens epithelial cell,LEC)中NF-κB的活化表达及七叶皂苷钠(aescinate)的抑制作用。方法:大鼠晶状体离体培养,分成UV照射A组,七叶皂苷钠处理B,C,D组,用免疫组织化学方法检测紫外线照射后在RPMI1640培养液里培养3,12和24hLECNF-κB的表达水平。结果:UV照射组LECNF-κB表达水平随时间的延长而增强,且与晶状体混浊程度呈正相关;高剂量七叶皂苷钠处理组的NF-κB表达水平较UV照射组、低、中剂量处理组明显减低(P<0.01),中剂量处理组的NF-κB表达水平与UV照射组存在统计学差异(P<0.05),低剂量处理组的NF-κB表达水平与UV照射组无统计学差异(P>0.05)。结论:紫外线可诱导鼠LECNF-κB的活化;七叶皂苷钠可以抑制LECNF-κB的活化表达并存在一定的剂量依赖性。     

茶多酚对体外培养鼠晶状体抗氧化损伤作用的研究

目的:观察茶多酚(tea polyphenols,TP)对氧化损伤鼠晶状体的形态学及抗氧化系统的变化,研究其对晶状体氧化损伤的保护作用.方法:采用体外培养鼠晶状体的氧化损伤模型,设置正常对照组、氧化损伤(H2O2)组和TP(H2O2+TP)组,分别于12,24,48h后观察各组晶状体的混浊情况,并检测各组晶状体的抗氧化酶系统中的超氧化物歧化酶(SOD)及谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性以及脂质过氧化反应终产物丙二醛(MDA)的含量.结果:正常对照组晶状体均保持透明,未见白内障形成;H2O2组大鼠离体晶状体随作用时间的延长,晶状体的混浊程度逐渐明显增加;TP组的晶状体混浊较H2O2组明显减轻,白内障形成不明显.晶状体混浊相对灰度值组间比较,差异有统计学意义(P<0.05).H2O2组大鼠晶状体组织中MDA 含量较对照组明显增高(P<0.05),而GSH-Px和SOD明显下降(P<0.05),TP组与H2O2组相比,其晶状体中MDA降低(P<0.05),但仍高于对照组,而GSH-Px和ATP含量明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05).结论:TP可提高氧化损伤晶状体的抗氧化能力,降低脂质过氧化物水平,从而延缓白内障的发生和发展,为临床白内障的诊疗提供了新的理论基础.     

白细胞介素-1β诱导大鼠视网膜核因子-κB活化的研究

目的　研究白细胞介素 1β(interleukin 1β,IL 1β)对视网膜组织中核因子 κB(nuclearfactor κB ,NF κB)活化的诱导作用 ,以及四氢化吡咯 二硫代氨基甲酸酯 (pyrrolidinedithiocarbamate,PDTC)对NF κB的抑制作用。方法　将 16只Sprague Dawley (SD)大鼠随机等分为A、B两组。A组实验眼 (右眼 )玻璃体腔内 (下同 )注入 5 μl的IL 1β(5× 10 7U/L) ,对照眼 (左眼 )注入等量PSS ;B组实验眼先注入 10 μl的PDTC液 (1mmol/L) ,对照眼注入等量PSS ,1h后双眼再分别注入5 μl的IL 1β(5× 10 7U/L) ;均分别于 4h和 2 4h后处死大鼠 ,摘除眼球 ,取视网膜组织制备核提取物 ;用泳动迁移试验检测两组视网膜中NF κB/DNA结合活性。结果　SD大鼠玻璃体腔内注药 4h后 ,A组实验眼NF κB/DNA结合活性较对照眼增加 ,B组实验眼NF κB/DNA结合活性较对照眼降低 ;2 4h后 ,A组实验眼及B组对照眼的NF κB/DNA结合活性均较 4h者降低。结论　视网膜NF κB可被眼内IL 1β激活 ,NF κB在视网膜炎性反应中可能起重要调控作用     

Calpains在过氧化氢诱发大鼠晶状体上皮细胞凋亡中的机制探讨

目的 探讨calpains住过氧化氢(H2O2)诱发大鼠离体晶状体上皮细胞(LECs)凋亡中的可能机制。方法 离体培养大鼠品状体，阴性对照组培养液中不加H2O2；阳性对照组加H2O2；实验组同时加入H2O2和ealpains抑制剂PD150606。光学显微镜下观察3组品状体混浊程度的改变并行图像分析，秩和检验分析，用流式细胞术(FCM)检测H2O2对大鼠LECs凋亡的影响，单因素方差分析3组LECs凋亡数量的改变。结果 H2O2可明显诱发大鼠离体品状体产生白内障及LECs凋亡，PD150606可部分抑制H2O2诱发大鼠晶状体的混浊和LECs的凋亡，与阴性对照组和阳性对照组比较，差异有显著性意义(P=0．000，P=0．006)。结论 Calpains表达的激活并引发随之的大鼠LECs的凋亡，可能是H2O2诱发离体大鼠产生白内障的机制之。Calpains抑制剂PD150606可部分抑制H2O2诱发的大鼠LECs的凋亡，从而部分抑制大鼠白内障的产生。     

核因子-κΒ在眼内炎症反应及视网膜增生性病变中作用的初步实验研究

目的 :探讨核因子 (nuclearfactor,NF) κB活性对眼内炎症反应以及视网膜增生性病变发病的影响。方法 :10只健康新西兰大白兔 ,右眼造成视网膜裂孔后随机等分两组 ,对照组右眼玻璃体内注入白细胞介素 (interleukin ,IL) 1β 10 0ng/10 0 μl,治疗组右眼于注入等量IL 1β前 1小时先注入NF κB的特异性抑制剂二硫代氨基甲酸乙酯 (pyrrolidinedithiocarba mate,PDTC) 10nmol/ 10 μl。裂隙灯和间接眼底镜观察兔眼 1个月。 1月后取右眼行光镜检查。结果 :观察期间对照组 2只兔眼玻璃体中度混浊、3只重度混浊 ,治疗组 3只兔眼玻璃体轻度混浊、2只中度混浊。 1个月时 ,对照组 4只眼视网膜前有增生物形成 ,治疗组无类似改变。组织学检查证实对照组视网膜前增生物形成。结论 :NF κB参与视网膜损伤和IL 1β诱导的兔眼眼内炎症反应及视网膜增生性病变的发生 ;抑制NF κB活性可能对葡萄膜 -视网膜炎、视网膜增生性病变等炎症相关性视网膜疾病有治疗意义     

维生素C抑制晶状体上皮细胞凋亡的实验研究

目的　探讨抗氧化剂维生素C对氧化损伤所诱发的的晶状体上皮细胞凋亡的抑制作用。方法　分别以不同时限观察对照组、H2 O2 氧化损伤组、氧化损伤同时加VitC共 3组的晶状体混浊情况 ,并用TUNEL法及DNA片段分析检测各组各时晶状体上皮细胞凋亡情况。结果　晶状体混浊情况显示随培养时间延长VitC组晶状体混浊度明显轻于氧化损伤组 (P <0 0 1) ;TUNEL检测发现 ,VitC组各时限凋亡率均明显低于H2 O2 组 (P <0 0 1) ;DNA片段分析显示H2 O2 组2 4、3 6、48及 72h各时限均呈现凋亡细胞典型梯状条带 ,而培养 2 4h的对照组和VitC组均未出现此变化而仅呈现正常电泳条带。结论　抗氧化剂VitC可抑制H2 O2 氧化损伤所诱导的兔晶状体上皮细胞凋亡并减轻或延缓白内障形成。     

吡咯烷二硫代氨基甲酸酯对TGF-β2诱导人晶状体上皮细胞EMT的抑制作用

目的：探究吡咯脘二硫代氨基甲酸酯(PDTC)对转化生长因子-beta2(TGF-β2)诱导人晶状体上皮细胞(LECs)上皮-间充质转化(EMT)的逆转机制。

方法：TGF-β2诱导人晶状体上皮细胞EMT,并给予不同浓度PDTC处理TGF-β2诱导的LECs。CCK-8、划痕试验检测细胞增殖与迁移,Western Blot检测EMT标志物E-cadherin、α-SMA和NF-κB信号传导通路相关蛋白表达,以及凋亡相关蛋白BAX、BCL-2、Caspase-3、细胞周期蛋白D₁的表达。

结果：TGF-β2处理组细胞增殖和迁移活力明显高于未添加TGF-β2的实验组; E-cadherin表达下调,α-SMA表达上调。在TGF-β2的作用下NF-κB p65和磷酸化的NF-κB p65表达增加(P<0.05)且在TGF-β2 10 ng/mL刺激浓度时LECs表现出较强的增殖活力和迁移能力。PDTC逆转EMT和诱导细胞凋亡的机制研究表明,PDTC干预处理后细胞活力和迁移能力都显著降低,PDTC抑制IκB的磷酸化进而抑制NF-κB核移位,NF-κB信号通路中NF-κBp65/p-NF-κB p65、Iκκ-α/p-Iκκ-α表达下调(P<0.05),诱导促凋亡蛋白BAX/Caspase-3表达上调、抑凋亡蛋白BCL-2、细胞周期蛋白Cyclin D₁表达下调,NF-κB/IκB mRNA表达下调,凋亡相关mRNA BAX表达上调BCL-2表达下调。

结论：PDTC可显著逆转由TGF-β2诱导的LECs细胞EMT过程,可能与抑制NF-κB信号通路活化使NF-κB p65/IκB/Iκκ-α表达降低以及激活凋亡相关蛋白表达有关,PDTC可通过抑制NF-κB信号通路达到逆转EMT的进程并使异常增殖的细胞发生凋亡,这将为后发性白内障的治疗提供新的潜在的治疗药物。