还原型辅酶Ⅰ(NADH)对PC12细胞鱼藤酮损伤的分子调控

为探讨NADH对PC12细胞线粒体鱼藤酮损伤的修复机制，采用细胞毒实验、免疫荧光和流式细胞仪检测细胞在鱼藤酮损伤前后细胞增殖基因（c-myc、c-erbB-2）、抗凋亡基因（bcl－2）、抑癌基因（p53）、细胞快反应基因（c-fos）相关蛋白和细胞增殖核抗原（PCNA）的表达。结果表明，鱼藤酮能明显抑制PC12细胞增殖，下调c-erbB-2、c-myc、bcl-2和p53基因的表达；NADH可以抑制鱼藤酮对PC12细胞线粒体的毒性作用，上调细胞bcl-2c、c-myc、c-erbB－2基因和PCR的表达，提示鱼藤酮可能通过控线粒体磷酸化过程和下调细胞增殖基因（c-rebB-2、c－myc）、抗凋亡基因（bcl-2），上调快反应基因(c-fos）表达致使细胞损伤，NADH抑制鱼藤酮对PC12细胞的损伤可能与bcl-2、c-myc、c-erbB-2和p53表达调控有关。     

辅酶NADH保护和修复细胞损伤的研究

探讨辅酶NADH增加能量代谢水平、修复细胞损伤、提高细胞应激反应的能力和降低化疗药物、放射线对正常组织的毒性损伤作用,探讨NADH细胞保护的分子调控机制,为今后临床多种疾病的细胞保护治疗提供新的防治途径。     

辅酶NADH抑制人肝细胞株L02化疗凋亡损伤的作用

为研究辅酶NADH对顺铂（DDP）诱导的肝细胞凋亡的抑制作用及其分子机制，采用透射和扫描电镜检测肝细胞超微结构改变，碘化丙啶染色流式细胞术检测细胞凋亡，RT－PCR检测p53和bcl-2基因表达变化，并用紫外分光光度法测定凋亡分子caspase-3和caspase－8活性水平的改变。结果显示，与DDP组比较，NADH／DDP组典型凋亡超微形态改变不明显，细胞凋亡明显下降，p53基因表达下降，bcl-2基因表达上升，caspase-3和caspase-8活性维持在低水平。提示NADH具有明显抑制DDP诱导肝细胞凋亡的作用。     

NADH抗肝细胞氰化物损伤的实验研究

为分析NADH在保护正常肝细胞氰化物缺氧性损伤中的作用，在L02细胞组织培养基中加入3mmol／LKCN后立即加入0－600μg/ml的NADH，培养0．5、2、4h后检测细胞凋亡和Bcl－2家族蛋白的表达。另取L02细胞发3组进行实验，实验组I为对照组，实验组Ⅱ、Ⅲ加3mmol/LKCN后分别加入不含和含有NADH（400μg/ml）的RPMI1640培养2h，检测3组Bcl-XL,Bax,Bcl-2蛋白，并取样进行透射电观察细胞形态。结果显示，NADH对氰化细胞凋亡率的抑制作用呈剂量依赖性，在浓度400－600μg/ml时达平台，并且能够上调Bcl-2及Bcl-XL蛋白表达，下调Bax蛋白表达；电镜观察可见损伤后细胞呈凋亡和坏死改变。提示NADH具有明显抗肝细胞氰化物损伤作用，其作用机制可能与Bcl-2、Bcl-XL蛋白表达的上调及和Bax蛋白表达的下调有关。     

NADH在辐射诱导的L02肝细胞凋亡损伤中的防护作用

为研究细胞辅酶NADH在细胞辐射凋亡损伤中的防护作用，将L02肝细胞经5．0Gy照射后加入不同浓度（0－600μg/ml）的NADH，培养6、12、24h，观察细胞凋亡率并检测3组Fas，Bax，Bcl－2蛋白表达，透射电镜观察细胞凋亡形态。结果表明，辐射可以诱导细胞凋亡损伤，NADH抑制细胞辐射诱导的凋亡呈剂量依赖性，并可以上调Bcl－2蛋白和下调Fas、Bax蛋白表达。提示NADH对L02肝细胞有明显的抗辐射亡损伤作用，其作用机制可能与Fas、Bcl－2和Bax的调控有关。