外膜蛋白SDS-PAGE对空肠弯曲菌的分型研究

用SDS-PAGE技术检测分析不同来源的41株空肠弯曲菌外膜蛋白特征。根据外膜蛋白SDS-PAGE凝胶上六条蛋白带多少的组合和外膜蛋白主带分子量的大小可将其各分为七个和九个型;根据外膜蛋白SDS-PAGE定量聚类分析可将其分为七个型(以95％相似性为水准)。结合此三种方法可更细致地鉴别不同来源的菌株,表明外膜蛋白SDS-PAGE技术是鉴别分型细菌的有效方法。     

不同人群幽门螺杆菌表型分型研究

作者报道了从各型胃病患者胃粘膜中分离的112株幽门螺杆菌，用聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS－PAGE）及Westernblots分析，可将HP菌分为Ⅰ-Ⅳ型，而其中Ⅳ型又分为Ⅳ-1至Ⅳ-5五个亚型；不同HP间存在明显的蛋白抗原差异和LPS／LOS的表达差异；为今后开展HP疫苗研究提供了重要线索。     

生猪肉与加热猪肉SDS-PAGE电泳检测方法的研究

SDS—PAGE是蛋白质分析、比较和特性鉴定的有效方法。生猪肉与加热终温度不同的猪肉经蛋白质提取后进行SDS—PAGE电泳分析，从其分离谱带与加热终温的关系可对其进行检测。     

洗必泰MIC作用下大肠杆菌和金黄色葡萄球菌 SDS-PAGE图谱的变化

[目的]探讨在洗必泰MIC(最小抑菌浓度)状态下大肠杆菌(8099株)、金黄色葡萄球菌(ATCC6538株)菌体蛋白质SDS—PAGE(十二烷基磺酸钠—聚丙烯酰胺凝胶电泳)图谱的改变，为消毒剂抑菌机理的研究和从蛋白质组角度寻找抑菌靶蛋白提供参考。[方法]以消毒试验常用的大肠杆菌、金黄色葡萄球菌标准菌株为例，收集在洗必泰作用下的菌体，SDS溶解菌体蛋白，SDS—PAGE后，对比研究洗必泰MIC、低于MIC以及无洗必泰作用下的菌体蛋白质在SDS—PAGE图谱中所表现出来的差异，并对试验的有关影响因素进行了摸索。[结果]在洗必泰MIC下，金黄色葡萄球菌的四条蛋白带(分别位于31KD左右、31KD和43KD之间、43KD左右处和大于97．4KD处)发生明显变化；大肠杆菌的一条蛋白带(位于66．2KD与97．4KD之间)发生明显变化。[结论]菌体蛋白条带在SDS—PAGE图谱中所表现出的变深或变浅的现象，提示在洗必泰MIC下菌体蛋白正常表达量的增多或减少。     

白纹伊蚊3日龄成蚊饱血前后唾液腺总蛋白谱

目的探讨3日龄白纹伊蚊雌蚊吸食糖水组和饱血组唾液腺总蛋白谱的差异。方法分别采用Pierce蛋白定量试剂盒和SDS-PAGE电泳分析白纹伊蚊3日龄吸食糖水组和饱血组成蚊唾液腺蛋白质浓度和蛋白谱。结果糖水组蚊虫单对唾液腺蛋白质质量约为（1．243Э0．460）μg,饱血组约为（0．945±0．460）μg;SDS—PAGE检测到糖水组唾液腺总蛋白有12条主带,糖水组与饱血组唾液腺总蛋白条带没有变化。结论白纹伊蚊雌蚊饱血后唾液腺总蛋白无特异条带诱导,但饱血后单对唾液腺总蛋白下降。     

空肠弯曲菌28KD～31KD外膜蛋白的初步提取及鉴定

目的：探讨空肠弯曲菌28KD-31KD外膜蛋白的提取方法及其鉴定。方法：采用改良布氏肉汤培养基培养空肠弯曲菌(Campylobacter jejuni，CJ)，用0．2mol／L、pH2．2甘氨酸-HCl缓冲液提取CJ外膜蛋白，Sephadex G-75分子筛层析法纯化28KD-31KD分子，SDS—PAGE分子量鉴定，Western blotting印迹法鉴定CJ甘氨酸提取物中外膜蛋白及纯化的28KD-31KD分子抗原性。结果：以甘氨酸提取CJ的外膜蛋白，Sephadex G-75层析纯化能够提取出CJ 28KD-31KD外膜蛋白，该蛋白分子能够与CJ兔抗血清发生特异性反应。结论：采用甘氨酸提取、Sephadex G-75纯化CJ 28KD-31KD外膜蛋白系一种稳定可靠的分离层析方法，提取的CJ28KD-31KD外膜蛋白具有良好的抗原性，为特异性的CJ 28KD-31KD外膜蛋白的多克隆抗体制备、CJ感染的血清学特异性诊断、CJ亚单位疫苗的研制打下基础。     

T7噬菌体衣壳蛋白IOA的表达、纯化及多克隆抗体的制备

目的表达纯化T7噬菌体衣壳蛋白10A,并免疫家兔得到抗10．4多克隆抗体．为研究噬菌体展示抗体技术,进而筛选致病微生物蛋白抗体奠定基础。方法37℃培养含有17噬菌体10A蛋白质粒的大肠杆菌BLT5615,用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷直接诱导表达该蛋白;SDS．PAGE鉴定表达状态,盐酸胍变性一尿素复性纯化以包涵体形式存在的蛋白并免疫家兔：辛酸一硫酸铵沉淀法纯化多克隆抗体,间接ELISA测定效价,WesternBlot鉴定特异性。结果成功表达了T7噬菌体衣壳蛋白10A。SDS—PAGE显示所表达的蛋白相对分子质量约为37kDa。主要以包涵体形式存在：复性后SDS—PAGE分析获得单一条带蛋白。利用该蛋白免疫家兔,6次免疫后抗血清的效价均达到1：160003。纯化后的多克隆抗体可以和17噬菌体衣壳蛋白10A特异结合。结论成功表达、纯化了17噬菌体衣壳蛋白10A,并制备了其多克隆抗体。     

幽门螺杆菌外膜36kDa蛋白重组表达、纯化及初步鉴定

[目的]构建幽门螺杆菌（H．pylori）NCTC11637菌株36kDa（OMP36）外膜蛋白基因原核表达系统，探索研制H．pylorl疫苗的新途径。[方法]培养和收集H．pylori NCTC11637菌株，提取基因组DNA，PCR扩增目的基因片断。将其克隆到T载体并测序，再将目的基因克隆入PET32a（＋），构建重组表达载体PET32a—OMP36。转化E．coli BL21后舢诱导表达，经SDS-PAGE鉴定、镍亲和层析纯化、Western blot检测表达蛋白。[结果]测序分析表明。插入的基因片断为987bp，表达的蛋白的相对分子质量（Mr）约为36kDa。并显示具有良好的抗原性。SDS—PAGE检测表明，表达量占细菌总蛋白的37％。镍亲和层析纯化率约92％。Western blot检测表达蛋白具有良好的抗原活性。[结论]成功克隆了外膜蛋白OMP36kDa的编码基因，其表达产物0MP36有望成为新的Hp疫苗候选分子，为H．pylori疫苗的研制和试剂盒的开发奠定了良好的基础。     

沙眼衣原体60kDa外膜蛋白基因的克隆与表达

目的 克隆和表达沙眼衣原体60kDa外膜蛋白(Omp2)基因。方法 D型沙眼衣原体感染McCoy细胞后，抽提基因组DNA，经PCR扩增出omp2基因片段，与pUCm—T克隆载体连接，酶切纯化后克隆到原核表达载体pQE30，构建重组表达载体pQE30／omp2，PCR、酶切及测序鉴定。IPFG诱导表达，SDS—PAGE检测有无蛋白的表达。结果 (1)获得长约1650bp的PCR产物，酶切结果显示所构建的重组质粒已成功地克隆了omp2基因，序列分析结果与已知omp2序列相同；(2)SDS—PACE检测表达产物，在相对分子量60kDa处有表达条带；(3)诱导表达之菌体超声破碎后，目的蛋白主要以包涵体形式存在。结论 获得了Ct omp2基因片段，并在E．coli M15中成功表达。     

胸腺素α1重组原核表达质粒的克隆及诱导表达

目的：构建胸腺素α1（Tα1）基因的原核表达质粒，并诱导表达。方法：根据Tα1的DNA序列设计引物，采用PCR法扩增Tα1的cDNA，将其克隆入T-vector，形成中介重组体pT—Tα1，再将其亚克隆至原核表达载体pGEX-3X，构建重组质粒pGEX-3X-Tα1，用内切酶酶切鉴定及DNA测序分析；将pGEX-3X-Tα1转入大肠杆菌，用RT-PCR方法检测宿主菌中Tα1mRNA，经IPTG诱导，用SDS—PAGE检测有无相应大小的Tα1融合蛋白表达。结果：经DNA测序和SDS—PAGE法鉴定，成功构建了Tα1重组质粒基因工程菌，表达和纯化了具有Tα1融合蛋白。结论：构建的Tα1重组质粒基因工程菌，表达和纯化了具有Tα1融合蛋白，为今后的研究打下了基础。     

淋病奈瑟菌外膜蛋白PIA基因原核表达系统的构建及序列分析

目的：分析比较5株临床分离的淋病奈瑟菌外膜蛋白PIA基因核苷酸及氨基酸序列，构建PIA基因的原核表达系统。方法：采用高保真PCR扩增5株淋病奈瑟菌全长PIA基因序列，T—A克隆后测序并与已发表的序列进行比较，用Wonderful分子生物学软件分析基因和蛋白质序列的相似性。再构建PIA原核表达系统，不同浓度IPTG诱导后，10％SDS—PAGE检测蛋白表达情况。结果：5株PIA淋病奈瑟菌均为IA6血清型。与报道的PIA基因序列（No：L19962）比较，核苷酸和氨基酸序列相似性均分别高达99．47％-100％和99．04％-100％。构建的原核表达系统pET42-PIA—Ecoli BL21DE3表达的重组蛋白PIA量占细菌总蛋白量的49．6％。结论：IA6为PIA菌株优势血清型，核苷酸和氨基酸序列相似性高，已成功构建淋病奈瑟菌PIA基因高效原核表达系统，为淋病奈瑟菌基因疫苗和临床检测试剂盒的研制打下基础。     

外膜蛋白电泳：院内感染乙酸钙不动杆菌的克隆识别

乙酸钙不动杆菌引起的院内感染和流行病学调查问题日益严重，但对其克隆识别无有效手段。本文应用外膜蛋白电泳技术对从三家医院分得的院内感染相关株进行了同源性分析，分别得到三种类型分别一致的电泳图谱；而对不同来源的无关菌株分析结果，得到各不相同的电泳谱型。说明外膜蛋白电泳谱型技术是一种适用于院内感染相关病原体中乙酸钙不动杆菌的克隆识别技术，尤其适用于无法进行生物分型的菌株     

尖音库蚊复组不同地理株蛋白质的比较研究

采用PAGF和薄层IEF技术,对镇江、青岛、济南及烟台等不同纬度地区尖音库蚊复组成蚊的蛋白质进行比较研究。结果表明:不同地理株及其不同亚种或型的蚊蛋白虽有所区别,但基本特征相似。从PAGE结果来看,尖音库蚊复组内不同地理株的蚊蛋白电泳带相似;除青岛外,各地淡色库蚊蛋白电泳带的扫描图形亦基本相似;青岛地区该蚊较特异,与其特殊的生境密切相关。此外,镇江地区致倦库蚊及其中间型的蛋白电泳带扫描曲线亦有所不同,这主要是由不同基因所决定的。从TEF结果来看,济南和烟台地区的淡色库蚊之间蛋白电泳的差异仅为14.29%。经分析,尽管上述蚊虫蛋白电泳扫描图形的基本特征略有差异,但蛋白电泳区带无明显不同,故差异仍未超过亚种阶元。薄层IEF分辨率高,明显优于PAGE,是值得推广的简便电泳分析技术。     

脉冲场凝胶电泳技术对成都市两起细菌性痢疾暴发的分型研究

目的 运用脉冲场凝胶电泳技术(PFGE)和聚合酶链反应(PCR)技术对成都市两起细菌性痢疾暴发分离株进行分析.方法 利用PCR检测志贺菌分离株ipaH基因和ial基因.用PFGE对菌株进行分型,所得结果用BioNumeries V 4.0软件UPGMA方法进行聚类分析.结果 所试54株分离菌ipaH基因均为阳性,48株为ial阳性.以Xba Ⅰ酶切后PFGE分型,崇州可分为4个带型,有26株型别一致,占实验菌株(36株)的72%,为优势菌株.自凉拌白肉中分离的菌株带型与优势菌株相同.大邑县可分为8个带型,有10株型别一致,占实验菌株(18株)的56%.崇州和大邑县的优势菌株带型差异较大.结论 利用PFGE能够有效地鉴别细菌性痢疾的暴发和传播来源.     

水痘-带状疱疹病毒糖蛋白I基因在昆虫细胞中的表达及纯化

目的 将北京水痘-带状疱疹病毒(VZV)84-7株克隆糖蛋白I(gpI)基因在杆状病毒-昆虫细胞表达系统中表达,并对其表达产物进行纯化。方法 采用PCR方法从VZVDNA中扩增gpI全基因序列,并将其插入杆状病毒转移质粒pBacPAK9中,获得重组转移质粒pBacVZVgpI,对pBacVZVgpI中的插入基因进行测序。重组转移质粒与线性杆状病毒BacPAK6DNA(Bsu36Idigested)共转染Sf9昆虫细胞,获得重组病毒BacPAK-gpI。通过亲和层析纯化重组蛋白,并检测其抗原性。结果 PCR扩增得到gpI基因,测序结果表明克隆的外源基因正确。经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS—PAGE)、免疫印迹(weotem-blot)方法证明gpI基因在昆虫细胞中获得表达,表达产物在培养72h达到高峰,重组蛋白的相对分子质量约为58000和70000,与理论值相符,蛋白质加工与天然蛋白类似。动物实验结果表明,重组蛋白具有较好的免疫原性,可刺激小鼠产生中和抗体。SDS—PAGE检测纯化的重组蛋白,纯度达80％。纯化蛋白经western-blot和ELISA检测后显示,具有特异的抗体结合活性。结论 应用昆虫细胞表达水痘-带状疱疹病毒gpI基因,可为水痘-带状疱疹病毒抗原定量分析、糖蛋白ELISA的研制和制备亚单位疫苗提供基础。     

SDS对组蛋白与DNA共振散射光谱影响

目的研究十二烷基磺酸钠（SDS）对组蛋白与DNA共振光散射强度的影响，探讨三者相互作用规律。方法pH7.5的Tris-HCl缓冲液体系中，将组蛋白与DNA及SDS混合。在入射光波长和荧光波长相同条件下，用荧光分光光度计测定混合液的共振光散射强度。结果扫描光谱显示最大光散射波长为302nm，最佳pH值为7．5，SDS浓度在0．02-0．15mmol／L范围内，体系共振光散射强度达到最大值且趋于稳定。结论小剂量SDS能增强组蛋白-DNA共振光散射体系的光散射强度，反之，大剂量SDS促使组蛋白与DNA分离，使光散射强度大大减弱。     

青藏铁路沿线鼠疫菌外膜蛋白种类的研究

目的研究并分析青藏铁路沿线鼠疫菌外膜蛋白种类及相对分子质量。方法鼠疫菌经破碎后采取超高速离心法提取外膜蛋白，利用十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）系统分离鼠疫菌外膜蛋白。结果在10％的SDS-PAGE上，37℃条件下的培养物可表达26条外膜蛋白带，28℃培养物可表达36条外膜蛋白。结论试验用鼠疫菌株可分泌标准的外膜蛋白，属YOP1型。     

留置导尿患者医院感染铜绿假单胞菌的分子流行病学研究

目的探索留置导尿患者医院感染铜绿假单胞菌（Ｐａ）的感染途径和传播机制。方法从患者小便、脓液、痰液和患者相关环境公用拖帕和洗涤池中共分离出Ｐａ５１株，应用血清学、细菌素、质粒图谱、质粒限制性内切酶图谱、外膜蛋白图谱等方法进行了研究。结果５１株Ｐａ的血清学分型率为８０．４％，细菌素分型率为７７．１％，质粒携带率为６８．６％，呈４种流行模式；来源不同的Ａ、Ｂ、Ｃ三型质粒代表株经用ＥｃｏＲⅠ和ＨｉｎｄⅢ酶切，呈现相同限制性内切酶图谱。９株不同质粒图谱模式菌株，得到两种不同类型外膜蛋白图谱。结论患者与患者之间通过床头柜、床单、导尿管等为媒介，相互交叉感染是导致Ｐａ医院感染的重要因素；一种血清型的细菌可能被分成几种菌素型，同种菌素型也不一定对应于一种血清型；同种血清型的菌株可用质粒图谱分成几种亚型；Ｐａ的外膜蛋白图谱呈高度相似性，图谱模式同血清型无明显联系     

抗日本血吸虫Sjp40鸡卵黄抗体的制备及其生物学特性鉴定

目的制备抗日本血吸虫蛋白（sjp40）鸡卵黄抗体（eggyolkimmunoglobulinY,IgY）,以期为日本血吸虫病的免疫学诊断提供一种特异性强、灵敏度高的优势抗体。方法以纯化的sjp40抗原免疫健康SPF级产蛋鸡,初次免疫2周后开始每日收集的鸡蛋为样本,采用水稀释硫酸铵沉淀法从鸡蛋中初步提取抗sjp40IgY,进一步经透析袋、DEAE-FF阴离子交换柱纯化IgY。用SDS—PAGE、WesternBlot及ELISA对纯化后的抗sjp40IgY进行分析鉴定。结果纯化的特异性抗Sjp40IgY,抗体效价1：10。。相对分子质量为180kDa,SDS．PAGE可见有2条主要蛋白带,分别约为66kDa和35kDa。并可被sj040特异性识别。结论成功制备具有良好免疫反应性、特异性强、灵敏度高的抗Sip40特异性IgY抗体。     

湖南省脊髓灰质炎病毒型内抗原研究

目的为掌握我省脊髓灰质炎（脊灰）病毒型内抗原特征。方法应用脊灰单克隆抗体（ＭｃＡｂ）中和法进行型内抗原分析。结果湖南省１９８９～１９９１年有１０个地（市）为脊灰Ⅰ型野病毒传播，根据对ＭｃＡｂ反应的不同可分为４个类别，以ＰＩ—１最多，占７７．２７％（１７／２２），抗原性质属类强毒株。结论Ｐ１—１型为我省脊灰流行的主要型别，脊灰Ⅱ、Ⅲ型均为疫苗相关株病毒。方法能从抗原表位水平分析研究毒株的性质，鉴别疫苗株和野毒株，具有敏感特异，简单等特点