转化生长因子β1对香烟诱导的大鼠肺泡巨噬细胞γ-谷氨酰半胱氨酸合酶表达的影响

目的：探讨转化生长因子（TGF）-β1对香烟诱导的大鼠肺泡巨噬细胞γ-谷氨酰半胱氨酸合酶（γ-GCS）和活化蛋白(AP)-1亚单位c-fos mRNA及其蛋白表达的影响。方法:通过支气管肺泡灌洗获取大鼠肺泡巨噬细胞，随机分为对照组、香烟组和TGF-β1组。TGF-β1组加入终浓度为3 μg/L的TGF-β1,2 h后除对照组外，余2组均加入香烟烟雾提取物,对照组加入磷酸盐缓冲液。分别用逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）和免疫细胞化学方法检测肺泡巨噬细胞中γ-GCSh(重链亚单位)及c-fos mRNA和蛋白的表达。结果:香烟组γ-GCSh和c-fos mRNA及其蛋白表达水平显著高于对照组(分别P<0.05,P<0.01)。TGF-β1组γ-GCSh mRNA及其蛋白表达水平明显低于香烟组(均P<0.01)；而c-fos mRNA及其蛋白表达水平明显高于香烟组(均P<0.01)。结论:转化生长因子-β1参与香烟所致慢性阻塞性肺疾病肺氧化/抗氧化失衡的发病机制。     

红霉素对吸烟大鼠肺内TGF-β1和γ—GCS表达的影响

目的:探讨红霉素对吸烟大鼠肺内转化生长因子-β1(TGF-β1)和γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-GCS)的影响以及在慢性阻塞性肺疾病治疗中的抗氧化作用。方法:Wistar大鼠30只,随机抽取20只被动吸烟4周后,10只继续吸烟8周作为吸烟组、10只吸烟加红霉素灌胃作红霉素治疗组,另10只作对照组。测定气道阻力和肺顺应性,采用免疫组织化学法、免疫细胞化学法和原位杂交法检测气道上皮细胞TGF-β1和γ-GCS蛋白、肺泡巨噬细胞两者蛋白及其mRNA表达。结果:吸烟组大鼠气道阻力增高,肺顺应性降低,TGF-β1和γ-GCS蛋白及其mRNA表达均明显增高(P<0.05),红霉素治疗组气道阻力有所降低、肺顺应性增高,TGF-β1和γ-GCS蛋白及其mRNA表达均低于吸烟组,但高于对照组(P<0.05)。吸烟组TGF-β1与γ-GCS表达呈正相关(P<0.05),而红霉素治疗组无明显相关性。结论:红霉素干预后吸烟大鼠肺内TGF-β1和γ-GCS表达降低,提示红霉素可能在COPD治疗中发挥一定的抗氧化作用。     

红霉素对吸烟大鼠肺内TGF-β1和γ-GCS表达的影响

目的： 探讨红霉素对吸烟大鼠肺内转化生长因子-β₁（TGF-β₁）和γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶（γ-GCS）的影响以及在慢性阻塞性肺疾病治疗中的抗氧化作用。方法: Wistar大鼠30只，随机抽取20只被动吸烟4周后，10只继续吸烟8周作为吸烟组、10只吸烟加红霉素灌胃作红霉素治疗组，另10只作对照组。测定气道阻力和肺顺应性，采用免疫组织化学法、免疫细胞化学法和原位杂交法检测气道上皮细胞TGF-β₁和γ-GCS蛋白、肺泡巨噬细胞两者蛋白及其mRNA表达。结果: 吸烟组大鼠气道阻力增高，肺顺应性降低，TGF-β₁和γ-GCS蛋白及其mRNA表达均明显增高（P<0.05），红霉素治疗组气道阻力有所降低、肺顺应性增高，TGF-β₁和γ-GCS蛋白及其mRNA表达均低于吸烟组，但高于对照组（P<0.05）。吸烟组TGF-β₁与γ-GCS表达呈正相关（P<0.05），而红霉素治疗组无明显相关性。结论: 红霉素干预后吸烟大鼠肺内TGF-β₁和γ-GCS表达降低，提示红霉素可能在COPD治疗中发挥一定的抗氧化作用。     

罗格列酮对阿霉素肾病大鼠肾组织中PPARγ、TGF-β1表达的影响

目的:探讨阿霉素肾病大鼠肾组织中过氧化物酶体增殖物激活受体(PPARγ)、转化生长因子β1(TGF-β1)表达和罗格列酮对阿霉素肾病大鼠的肾脏保护作用及其可能机制.方法:将大鼠随机分成3组,正常对照组(n=6)、阿霉索肾病组(n=7)、罗格列酮治疗组(n=7),12周后测大鼠尿蛋白、血浆白蛋白、血脂和血肌酐、尿素氮,用免疫组化检测肾组织NF-κB p65的核转位及ELISA(夹心法)检测肾组织NF-κB p65的活性,RT-PCR测肾皮质PPARγ mRNA及TGF-β1 mRNA的表达及免疫印迹检测肾皮质PPARγ、TGF-β1蛋白表达,并进行相关分析.结果:与阿霉素肾病组相比,罗格列酮治疗组大鼠24 h尿蛋白排泄减少,血清白蛋白升高,血甘油三酯和胆固醇下降,差异显著(P＜0.01),肾脏病理损害减轻;肾组织NF-κB p65活化和TGF-β1 mRNA和蛋白的表达均明显受抑制,而肾皮质PPARγ mRNA和蛋白表达显著增强,差异显著(P＜0.01);阿霉素肾病组和罗格列酮治疗组大鼠肾组织中NF-κBp65活性与PPARγ mRNA表达呈直线负相关(r=-0.8305,P＜0.01);肾组织中PPARγ mRNA与TGF-β1mRNA表达呈直线负相关(r=-0.7938,P＜0.01).结论:罗格列酮作用于阿霉素肾病大鼠后,可能通过上调PPARγ表达,部分抑制肾组织NF-κB p65活性,进而抑制肾组织中TGF-β1表达,从而使系膜基质沉积减少,肾组织病变减轻.     

地塞米松促进卵巢癌细胞系p21/WAF1和TβR-Ⅱ的表达

探讨人工合成糖皮质激素地塞米松(Dex)抑制人卵巢癌细胞系HO-8910增殖的分子机理.采用RT-PCR测定细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂p21/WAF1,转化生长因子-β1(TGF-β1)及其I型受体(TβR-Ⅰ)和Ⅱ型受体(TβR-Ⅱ)的mRNA表达水平,免疫细胞化学方法分析TβR-Ⅱ的蛋白表达水平.发现Dex能够诱导HO-8910细胞p21/WAF1 mRNA的表达,10-7mol/L Dex处理细胞8 h组比对照组p21/WAF1 mRNA表达增加2.84倍(P＜0.01).并且证明Dex亦可上调TβR-Ⅱ mRNA的表达水平,10-7mol/L Dex处理8 h使TβR-Ⅱ mRNA的表达量比对照升高1.2倍(P＜0.01);Dex也引起TβR-Ⅱ蛋白表达的增加.这些效应均可被糖皮质激素受体(GR)拮抗剂RU486逆转.而TGF-β1和TβR-ⅠmRNA的表达不受Dex的影响.以上结果提示,Dex通过GR介导而促进p21/WAF1和TβR-Ⅱ的表达,可能参与其抑制人卵巢癌细胞HO-8910增殖过程.     

地塞米松促进卵巢癌细胞系p21／WAFl和TβR－Ⅱ的表达

探讨人工合成糖皮质激素地塞米松(Dex)抑制人卵巢癌细胞系HO-8910增殖的分子机理.采用RT-PCR测定细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂p21/WAF1,转化生长因子-β1(TGF-β1)及其I型受体(TβR-Ⅰ)和Ⅱ型受体(TβR-Ⅱ)的mRNA表达水平,免疫细胞化学方法分析TβR-Ⅱ的蛋白表达水平.发现Dex能够诱导HO-8910细胞p21/WAF1 mRNA的表达,10-7mol/L Dex处理细胞8 h组比对照组p21/WAF1 mRNA表达增加2.84倍(P＜0.01).并且证明Dex亦可上调TβR-Ⅱ mRNA的表达水平,10-7mol/L Dex处理8 h使TβR-Ⅱ mRNA的表达量比对照升高1.2倍(P＜0.01);Dex也引起TβR-Ⅱ蛋白表达的增加.这些效应均可被糖皮质激素受体(GR)拮抗剂RU486逆转.而TGF-β1和TβR-ⅠmRNA的表达不受Dex的影响.以上结果提示,Dex通过GR介导而促进p21/WAF1和TβR-Ⅱ的表达,可能参与其抑制人卵巢癌细胞HO-8910增殖过程.     

甘草酸对博莱霉素诱导的实验性肺纤维化的干预作用

目的:探讨甘草酸(GA)对博莱霉素(BLM)诱导的小鼠肺纤维化的干预作用及其可能机制。方法:将160只雄性C57BL/6J小鼠随机分为生理盐水(NS)组、BLM组、BLM+NS组和BLM+GA组。通过口咽气管吸入法吸入博莱霉素(2.5 mg/kg)建立实验性肺纤维化模型,BLM+GA组及BLM+NS组每天给予40 mg/kg甘草酸或等体积的生理盐水灌胃,于术后第3、7、14、21天取材。采用HE染色和Masson染色观察肺组织病理学变化及纤维化程度,采用流式细胞术检测循环单核细胞和肺泡巨噬细胞的亚群比例变化,采用RT-qPCR检测肺组织中转化生长因子β1(TGF-β1)mRNA的表达水平,采用碱水解法检测肺组织中羟脯氨酸(HYP)含量。结果:与NS组相比,BLM组和BLM+NS组肺组织的炎症浸润及胶原含量明显增多,实验性肺纤维化模型制备成功。与BLM+NS组相比:BLM+GA组肺组织的炎症细胞浸润及胶原纤维沉积较少;第3、7天的Ly6C~(hi)单核细胞亚群比例和第7、14天肺泡巨噬细胞M2表型比例显著降低(P0.01);肺组织TGF-β1 mRNA表达量和HYP含量显著降低(P0.01)。结论:GA可以减轻博莱霉素诱导的小鼠肺组织的炎症反应和胶原纤维沉积,可能与GA对单核巨噬细胞的表型偏移和调控以及肺组织TGF-β1的表达下调有关。     

核转录因子在二氧化硅刺激巨噬细胞产生细胞因子中的作用

目的 探讨二氧化硅(SiO2)刺激巨噬细胞生成肿瘤坏死因子(TNF)-α、转化生长因子(TGF)-β1增多的分子机制及核转录因子Egr-1和NF-κB介导的信号通路在硅肺发生发展中的作用。方法 Egr-1或NF-κB抗体和反义寡核苷酸分别处理巨噬细胞后,用ELISA法检测细胞上清液中TNF-α蛋白的含量;免疫细胞化学链霉素抗生物素蛋白-过氧化物酶(SP)法检测细胞中TGF-β1蛋白的表达;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测TNF-α和TGF-β1mRNA的表达。结果 与非抗体处理组比较,SiO2刺激下抗体处理组巨噬细胞生成TNF-α蛋白和TGF-β1蛋白减少,其mRNA表达也相应下降(P<0.05);与未转染和转染正义寡核苷酸的细胞相比,Egr-1或NF-κB反义寡核苷酸转染细胞后,在SiO2刺激下巨噬细胞生成TNF-α蛋白和TGF-β1蛋白减少,二者mRNA表达也相应下降(P<0.05)。结论 SiO2刺激巨噬细胞生成TNF-α和TGF-β1可能主要是经核转录因子Egr-1和NF-κB介导,Egr-1与NF-κB抗体和反义寡核苷酸的应用可能会导致早期肺泡炎的活动性下降,延缓或阻止肺纤维化的形成。     

慢性支气管炎患者肺泡巨噬细胞上CD11c、CD14及胞内TGF-β1 mRNA表达的研究

目的　研究慢性支气管炎患者肺泡巨噬细胞上CD11c和CD14及其胞内TGF β1mRNA的表达情况。方法　对慢性支气管炎缓解期患者和正常对照者各 10例进行局部支气管肺泡灌洗。将支气管肺泡灌洗液中的肺泡巨噬细胞分离、纯化后 ,与藻红蛋白 (phycoerythrin ,PE)和异硫氰酸荧光素 (fluoresceinisothiocyanate,FITC)标记的CD11c和CD14单克隆抗体共同孵育 ,以流式细胞仪分析其CD11c和CD14表达的百分率 ;应用转化生长因子β1(transforminggrowthfactor beta 1,TGF β1)的cDNA探针原位杂交 ,观察肺泡巨噬细胞内TGF β1的表达。结果　 (1)慢性支气管炎组肺泡巨噬细胞上CD11c和CD14表达的百分率 (39.17%± 5 .5 6 % ,35 .73 %± 8.0 5 % )均明显高于正常对照组 (16 .2 9%±3 .78% ,15 .2 6 %± 5 .96 % ) (均P <0 .0 0 1) ;(2 )慢性支气管炎患者肺泡巨噬细胞内TGF β1mRNA的表达量明显高于正常对照者 (P <0 .0 1)。结论　慢性支气管炎缓解期患者肺泡巨噬细胞上CD11c和CD14及其胞内TGF β1mRNA的表达增加 ,上述分子可能共同参与气道内的慢性炎症的病理过程     

雷公藤甲素对2型糖尿病大鼠足细胞损伤的影响及机制

目的:探讨雷公藤甲素对2型糖尿病(DM)模型大鼠肾脏的足细胞损伤及其机制.方法:高糖高脂喂养加小剂量链脲佐菌素诱导建立2型糖尿病模型,将模型大鼠随机分为糖尿病组(DM组)和雷公藤甲素治疗组[DT组,200 μg/(kg*d)灌胃给药],另设对照组(NC组).8周末检测血压、血糖、肾重、肾肥大指数、24小时尿白蛋白(24 UAL)、Ccr及肾组织电镜改变.免疫组化染色检测肾组织ED-1表达的变化,免疫印迹法检测肾组织中Nephrin、OPN、TGF-β表达的改变.结果:DM大鼠24 UAL明显高于NC组(P＜0.05),雷公藤甲素治疗组大鼠24 UAL明显低于DM组(P＜0.05).DM组大鼠肾小球ED-1阳性细胞数明显高于NC组(P＜0.01),雷公藤甲素治疗后肾组织巨噬细胞浸润明显低于DM组(P＜0.05).DM组肾组织Nephrin表达较NC组显著降低(P＜0.01),雷公藤甲素可明显恢复肾组织Nephrin 表达(P＜0.01).与NC组比较,DM组肾组织OPN、TGF-β蛋白表达上调(P＜0.01),雷公藤甲素可显著抑制肾组织OPN、TGF-β的过度表达(P＜0.01).结论:雷公藤甲素可能通过抑制肾组织巨噬细胞浸润、炎症反应,从而减轻足细胞损伤,达到肾脏保护作用.     

rHSG对COPD大鼠小气道阻力及成纤维细胞TGF-β1表达的影响

目的 检测正常COPD大鼠小气道成纤维细胞中rHSG的表达,寻找其与小气道阻力、TGF-β1的相关性,探索rHSG调控气道重塑的机制.方法 将大鼠随机分为对照组及模型组,分别检测肺功能和肺泡灌洗液中TGF-β1含量.用组织块贴壁法培养气道成纤维细胞,用RT-PCR和Western blot检测rHSG mRNA和蛋白的表达.分析rHSG基因量与小气道阻力以及TGF-β1的相关性.结果 模型组大鼠先后出现咳嗽、气急、喘鸣和痰多等症状并伴有精神萎靡、纳少和毛发枯黄等,之后出现体质量减轻,肺体积略增大,肺顺应性明显下降,而气道阻力明显高于对照组(P＜0.01);肺泡灌洗液中TGF-β1含量均明显高于对照组(P ＜0.01);rHSG基因在对照组中表达高于模型组(P＜0.05);rHSG mRNA和蛋白与气道阻力(RI)、TGF-β1呈负相关,与肺顺应性(cydn)呈正相关.结论 rHSG可能通过调控TGF-β1水平干预气道重塑过程.     

肝纤维化大鼠转化生长因子β1/Smad蛋白的动态表达及意义

目的 探讨转化生长因子TGF-β1/Smad信号通路在实验性肝纤维化发生中的作用.方法 50只健康雄性SD大鼠分为2组:正常组和模型组,模型组大鼠利用40％ CCl4油剂诱导形成肝纤维化模型,于6周及9周观测肝标本的病理,免疫组化法检测肝组织TGF-β1/Smad蛋白表达.结果 ①肝组织病理:与正常组比较,模型组大鼠肝组织都有不同程度的炎症和纤维化产生.模型组纤维化程度较正常对照组明显,差异有统计学意义(P＜0.05);②TGF-β1/Smad基因蛋白:免疫组织化学检测显示,与正常对照组相比,模型组大鼠肝脏中TGF-β1、转化生长因子βⅠ型受体(TβR-Ⅰ)、Smad2/3、Smad7蛋白表达均显著增强(P＜0.01),模型组大鼠肝脏TGF-β1、TβR-Ⅰ、Smad2/3和Smad7之间存在正相关关系(P ＜0.05或0.01);模型组大鼠肝脏纤维化分级与TGF-β1、TβR-Ⅰ、Smad2/3和Smad7之间存在正相关关系(P＜0.05或0.01).结论 肝组织TGF-β1/Smad蛋白表达水平与肝纤维化程度相关,TGF-β1/Smad信号的增强可能促进了肝纤维化的进展.     

罗格列酮对阿霉素肾病大鼠肾组织中PPARγ、TGF-β1表达的影响

目的：探讨阿霉素肾病大鼠肾组织中过氧化物酶体增殖物激活受体（PPARγ）、转化生长因子β₁（TGF-β₁）表达和罗格列酮对阿霉素肾病大鼠的肾脏保护作用及其可能机制。方法: 将大鼠随机分成3组，正常对照组（n=6）、阿霉素肾病组（n=7）、罗格列酮治疗组（n=7），12周后测大鼠尿蛋白、血浆白蛋白、血脂和血肌酐、尿素氮，用免疫组化检测肾组织NF-κB p65的核转位及ELISA（夹心法）检测肾组织NF-κB p65的活性，RT-PCR测肾皮质PPARγ mRNA及TGF-β₁ mRNA的表达及免疫印迹检测肾皮质PPARγ、TGF-β₁蛋白表达，并进行相关分析。 结果: 与阿霉素肾病组相比，罗格列酮治疗组大鼠24 h尿蛋白排泄减少，血清白蛋白升高，血甘油三酯和胆固醇下降,差异显著(P＜0.01),肾脏病理损害减轻；肾组织NF-κB p65活化和TGF-β₁ mRNA和蛋白的表达均明显受抑制，而肾皮质PPARγ mRNA和蛋白表达显著增强，差异显著（P＜0.01)；阿霉素肾病组和罗格列酮治疗组大鼠肾组织中NF-κBp65活性与PPARγ mRNA表达呈直线负相关（r=－0.8305, P＜0.01）；肾组织中PPARγ mRNA与TGF-β₁ mRNA表达呈直线负相关（r=－0.7938, P＜0.01 ）。结论:罗格列酮作用于阿霉素肾病大鼠后，可能通过上调PPARγ表达，部分抑制肾组织NF-κB p65活性，进而抑制肾组织中TGF-β₁ 表达，从而使系膜基质沉积减少，肾组织病变减轻。     

RhoA/Rho激酶在2型糖尿病大鼠肝脏纤维化中的作用

目的阐明RhoA/Rho激酶在糖尿病大鼠肝纤维化中的作用。方法通过高脂饮食和小剂量链脲佐菌素(STZ,30 mg/kg)腹腔注射建立2型糖尿病大鼠模型。实验分为对照组、糖尿病组和法舒地尔干预组(法舒地尔10 mg/(kg·d),分两次腹腔注射)24周末。测定血糖、血脂、谷草转氨酶和谷丙转氨酶;Masson染色和羟脯氨酸测定评估肝胶原沉积;RT-PCR测定转化生长因子β1(TGF-β1)和结缔组织生长因子(CTGF)mRNA表达;免疫组化测定TGF-β1蛋白表达;Western blot测定肝组织肌球蛋白磷酸酯酶靶点亚单位1磷酸化(p-MYPT1)水平。结果与对照组比较,糖尿病组大鼠血糖、血脂和转氨酶显著增高,肝组织大量胶原沉积,p-MYPT1水平、TGF-β1与CTGF mRNA表达显著上调(P0.01)。与糖尿病组比较,法舒地尔干预组大鼠转氨酶降低,肝胶原沉积明显减轻,p-MYPT1水平、TGF-β1与CTGF mRNA表达显著下降(P0.01)。结论高血糖激活了肝组织RhoA/Rho激酶,通过调控TGF-β1/CTGF表达,在糖尿病肝纤维化中起着重要作用。     

TNF-α及TGF-β1mRNA在妊娠期间腹腔巨噬细胞中的表达及其意义

目的探讨TNF-α和TGF-β1 mRNA在正常妊娠腹腔巨噬细胞中的表达及其意义。方法采用RT-PCR 方法研究10例正常足月妊娠病例和10例子宫肌瘤病例腹腔巨噬细胞TNF-α及TGF-β1 mRNA的表达。结果 (1)足月妊娠组腹腔巨噬细胞TNF-α mRNA与子宫肌瘤组相比表达显著增强(P<0．01)。(2)TGF-β1 mRNA在足月妊娠孕妇腹腔巨噬细胞中的表达增强,两者比较有非常显著性差异(P<0．001)。结论妊娠可以刺激机体巨噬细胞活化,妊娠期间非特异性免疫功能增强。TNF-α及TGF-β1参与了妊娠期间免疫平衡的建立和稳定。     

猪苓多糖对M1型巨噬细胞细胞因子表达的调节作用

目的通过诱导构建M1型巨噬细胞模型研究猪苓多糖对白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)和转化生长因子β(TGF-β)、IL-10 mRNA的表达影响,探讨猪苓多糖对巨噬细胞的免疫调节机制。方法实验分为空白对照组、γ干扰素(IFN-γ)诱导的M1型巨噬细胞模型组、猪苓多糖高中低剂量组,浓度分别为200μg/mL、100μg/mL、50μg/mL。用IFN-γ诱导RAW264.7巨噬细胞,用流式细胞术检测M1型巨噬细胞特异性指标CD16/CD32、CD86的表达,实时荧光定量PCR检测IL-1β、IL-10、iNOS、TNF-α、TGF-β的mRNA表达,观察不同剂量猪苓多糖对M1型巨噬细胞的影响。结果与空白组比较,IFN-γ的诱导RAW264.7巨噬细胞分化M1型巨噬细胞的特异性标志物CD16/CD32、CD86的表达明显升高。100μg/mL猪苓多糖组在3、6、9、12、24 h,IL-1β、iNOS、IL-10、TGF-β、TNF-α的mRNA表达升高,不同剂量猪苓多糖给药6 h后各因子的表达量升高(P0.01)。结论 IFN-γ单独作用于巨噬细胞,可以有效的诱导RAW264.7巨噬细胞极化为M1型巨噬细胞;猪苓多糖促进M1型巨噬细胞IL-1β、iNOS、IL-10、TNF-α的mRNA表达。     

TGF-β对缺氧环境下HepG2细胞表达VEGF的影响

目的探讨转化生长因子β1(TGF-β1)和低氧(CoCl2)对肝癌细胞血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法体外培养肝癌细胞系HepG2细胞,实验分为对照组、不同浓度TGF-β1和CoCl2的分别处理组、TGF-β1(100 pmol/L) CoCl2(200 μmol/L)组;用免疫细胞化学法检测VEGF蛋白表达;半定量RT-PCR技术检测细胞中VEGFmRNA相对表达量。结果各处理组VEGF蛋白表达均为阳性;TGF-β1或CoCl2组中VEGF mRNA相对表达量明显高于对照组(P<0.01),并且呈浓度依赖性;TGF-β1 CoCl2组中VEGFmRNA表达高于单因素刺激组(P<0.05)。结论TGF-β1能够刺激HepG2细胞表达VEGF,并且可以协同CoCl2增加VEGF的表达。     

MG132抑制TGF-β1诱导的人肺成纤维细胞活化

目的探讨泛素-蛋白酶体抑制剂MG132对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导人肺成纤维细胞活化的影响及机制。方法体外培养人胚肺成纤维细胞(MRC-5),随机分为对照组、TGF-β1组(10μg/L)和MG132(0.5μmol/L)处理组。Western blot法检测细胞α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和Ⅰ型胶原α1(COL1A1)的表达;RT-PCR和Western blot法分别检测细胞Smad7、核转录共抑制因子SnoN、TGF-βI型受体(TβRI)、Smad2和Smad3 mRNA及蛋白的表达。结果与对照组比较,TGF-β1促进了α-SMA和COL1A1蛋白表达(P0.05),MG132抑制了TGF-β1的上述作用(P0.05)。TGF-β1组Smad7和SnoN mRNA表达较对照组增加(P0.05)。TGF-β1组Smad7和SnoN蛋白表达较对照组减少(P0.05),而MG132组Smad7和SnoN蛋白水平较TGF-β1组增加(P0.05)。结论 MG132可能通过阻止Smad7和SnoN蛋白泛素化降解,抑制TGF-β1诱导人肺成纤维细胞活化。     

Ghrelin对脓毒症肺损伤大鼠肺泡巨噬细胞及肺组织iNOS表达的影响

 目的： 观察ghrelin对脓毒症肺损伤大鼠肺泡巨噬细胞及肺组织诱导型一氧化氮合酶（inducible nitric oxide synthase, iNOS）表达的影响。方法： SD雄性大鼠分为假手术组、脓毒症组及ghrelin治疗组,前2组各设术后6 h、12 h和20 h亚组。通过盲肠结扎穿孔术（cecal ligation and puncture, CLP）建立脓毒症模型,ghrelin治疗组于术后3 h及15 h腹腔注射ghrelin,术后20 h取材。各组按术后既定时间行支气管肺泡灌洗收集肺泡巨噬细胞,RT-PCR检测肺泡巨噬细胞中iNOS mRNA的表达水平。另一部分大鼠则在术后20 h采集右肺,行肺病理学检查及Western blotting检测肺组织iNOS蛋白表达。结果： 脓毒症组在CLP术后6 h、12 h和20 h肺泡巨噬细胞iNOS mRNA的表达水平分别为1.33±0.05、1.44±0.08和1.57±0.11,均高于假手术组（P＜0.05）,并不随时间延长而升高;但在术后20 h却低于ghrelin治疗组（2.27±0.37;P＜0.05）。Ghrelin治疗组CLP术后20 h肺组织iNOS蛋白表达水平（0.87± 0.03）低于脓毒症组（P＜0.05）。Ghrelin治疗组肺组织病理学评分（5.83±0.477）较脓毒症组（7.83±0.75）低,2组均高于假手术组（P＜0.05）。结论： CLP术后6～20 h,大鼠肺泡巨噬细胞iNOS mRNA的表达水平升高,但无时间依赖性。Ghrelin对脓毒症大鼠肺泡巨噬细胞iNOS mRNA表达起上调作用,而对肺组织iNOS蛋白表达起抑制作用,减轻肺损伤程度。     

长期烟雾暴露对大鼠肺血管重塑及转化生长因子-β1表达的影响

目的:观察长期吸烟对大鼠肺血管重塑及转化生长因子-β1(TGF-β1)的影响,探讨其发生的可能机制。方法:将36只健康SD雄性大鼠随机分为对照组、烟雾暴露2周(S-2W)和烟雾暴露12周(S-12W)组。苏木精-伊红染色和α-平滑肌肌动蛋白染色切片观察肺血管重塑的程度,免疫组化法检测增殖细胞核抗原(PCNA)和TGF-β1在肺动脉的相对表达;RT-qPCR检测肺动脉TGF-β1的mRNA表达。结果:随烟雾暴露时间延长,模型组血管壁厚度和血管直径比值(WT%)和完全肌化血管比例均较对照组明显增大,差异具有统计学显著性(P0.01)。模型组的PCNA及TGF-β1蛋白表达水平均较对照组增大,且两模型组之间差异有统计学显著性(P0.01)。与对照组比较,模型组TGF-β1的mRNA表达均显著增加(P0.05),其中S-2W组和S-12W组之间的差异亦有统计学显著性(P0.05)。TGF-β1的mRNA表达与WT%和完全肌化血管比例呈显著正相关(P0.01);TGF-β1的mRNA表达与PCNA蛋白表达呈显著正相关(P0.01)。结论:长期烟雾暴露可导致大鼠肺血管重塑的形成,其机制可能与吸烟上调大鼠肺血管TGF-β1的mRNA表达,诱导肺血管平滑肌细胞增殖有关。