hp450RAI质粒转染对视黄酸诱导的HL—60细胞凋亡的影响

目的探讨细胞内细胞色素氧化酶 p45 0 (CYP)表达、视黄酸 (RA)代谢与细胞凋亡的相互关系。方法采用脂质体介导的质粒转染和逆转录 - PCR等实验技术方法做有关分析检测。结果野生型 HL- 6 0细胞 hp45 0 RAI表达微弱 ,脂质体介导的 hp45 0 RAI质粒转染可使 HL- 6 0细胞稳定表达 hp45 0 RAI;hp45 0 RAI转染对 ATRA诱导的 HL- 6 0细胞增殖能力无明显影响 ;野生型 HL- 6 0细胞有较强 Bcl- 2表达 ,ATRA处理抑制未转染细胞 Bcl- 2表达 ,但单纯 hp45 0 RAI转染、hp45 0 RAI转染 CYP抑制剂或加用 IFN- α均能增强 Bcl- 2表达 ,其中以加用 ketoconazole作用更为显著。结论 RA敏感 HL- 6 0细胞中影响 RA代谢的主要 CYP并非 hp45 0 RAI,hp45 0 RAI转染能增强 Bcl- 2表达 ,但对 HL - 6 0细胞增殖能力无明显影响 ,CYP抑制剂、IFN-α可能通过抑制细胞内 RA代谢 ,而增加 HL - 6 0细胞Βcl- 2表达。     

IFN-α和IFN-γ逆转MR2细胞维甲酸耐药的实验研究

目的:探讨IFN-α和IFN-γ与全反式维甲酸(all-trans retinoic acid,ATRA)联合逆转MR2细胞对ATRA耐药的可能性及其机制。方法:IFN-α、IFN-γ及ATRA单独或两种IFN分别与ATRA联合作用于对ATRA耐药的细胞株MR2后,采用MTT比色法检测细胞的增殖,用光镜观察、NBT还原实验及流式细胞仪检测细胞的分化,用间接免疫荧光法检测早幼粒细胞白血病(promyelocytic leukemia,PML)蛋白的表达。结果:两种IFN均能抑制MR2细胞的增殖;IFN与ATRA联合应用时抑制作用更加显著;但两种IFN无论是单独应用还是与ATRA联合应用,二者之间均无统计学意义(P>0.05)。两种IFN也能诱导MR2细胞发生一定程度的分化;二者分别与ATRA联合应用时作用更加显著,但IFN-γ ATRA组诱导MR2细胞分化的作用明显强于IFN-α ATRA组(P<0.05)。两种IFN都能诱导PML蛋白的表达。结论:IFN-γ与ATRA联合应用逆转MR2细胞对ATRA耐药的作用强于IFN-α与ATRA的联合,可能与IFN-α和IFN-γ信号传导途径的不同有关。     

IFN-α协同全反式视黄酸诱导HL-60细胞增殖分化及其机制的研究

目的:研究全反式视黄酸(ATRA)与IFN-α联合诱导HL-60细胞增殖分化的作用及其机制。方法:用5×10-7mol/L的ATRA以及2×106U/L的IFN-α单独和联合处理HL-60细胞后,采用POD-原位细胞凋亡检测试剂盒检测HL-60细胞的凋亡,通过计算细胞增殖的抑制率检测HL-60细胞增殖的抑制及诱导分化;用高效液相色谱(HPLC)检测细胞悬液中ATRA的含量;用原位杂交法检测细胞色素CYP26的表达。结果:ATRA和IFN-α均能诱导HL-60细胞分化、抑制其增殖并促进其凋亡,且二者具有明显的协同作用。IFN-α ATRA联合处理组的细胞悬液中,ATRA的水平明显高于单纯ATRA处理组(P<0.05)。ATRA处理组CYP26表达的水平明显高于IFN-α单独处理组(P<0.05)。结论:ATRA IFN-α诱导HL-60细胞的分化具有协同作用。其作用可能是由于IFN-α抑制了HL-60细胞内CYP26的表达,导致ATRA代谢速率减慢,使之保持了有效作用浓度所致。     

hp450RAI质粒转染对HL—60细胞功能及IFN—α表达的影响

目的探讨细胞内一种细胞色素 P45 0 (hp45 0 RAI,也称 CYP2 6 )表达、视黄酸 (RA)代谢与细胞增殖功能的相互关系。方法采用脂质体介导的质粒转染、流式细胞仪分析、逆转录 - PCR及高效液相色谱 (HPL C)分析等实验技术方法做有关分析研究。结果 12 .5× 10 - 7m ol/ L 全反式 RA(ATRA)处理 HL- 6 0细胞 3d未诱导明显的 hp45 0 RAI表达 ,脂质体介导的质粒转染可使 HL- 6 0细胞稳定表达 hp45 0 RAI;2单纯 hp45 0 RAI转染未对 HL- 6 0细胞 ATRA代谢及 ATRA诱导的 HL- 6 0细胞增殖抑制产生显著影响 ,而联合应用 P45 0酶抑制剂 Ketoconazole或 IFN- α则使 HL- 6 0细胞 ATRA代谢减慢 ,ATRA增殖抑制作用增强。结论 RA敏感 HL- 6 0细胞中影响 RA代谢的主要细胞色素 P45 0可能并非 hp45 0 RAI,P45 0酶抑制剂或IFN- α能协同 ATRA抑制细胞增殖 ,后者可能与 HL- 6 0细胞 ATRA代谢减慢及 IFN- α表达增强有关。     

反义RNA阻断Hep G2细胞FasL的表达及功能研究

应用分子克隆技术将人FasLcDNA片段反向插入逆转录病毒载体pLXSN ,构建重组质粒pL (hFasL AS )SN ,转染包装细胞PA317后获得FasL反义RNA重组逆转录病毒表达载体假病毒上清 ,经NIH3T3细胞检测其感染滴度后转染肝癌细胞株HepG2细胞并筛选建系 ,命名为HepG2 hFasL AS。半定量RT PCR检测显示HepG2 FasL AS细胞FasL的mRNA明显少于正常HepG2细胞 ;FACS检测显示HepG2 FasL AS细胞FasL的表达与HepG2细胞相比显著下降 ;同时 ,HepG2 FasL AS细胞导致HL 6 0细胞凋亡能力有所下降。表明人FasL反义RNA重组逆转录病毒表达载体能抑制转染细胞FasL的表达并下调其致凋亡功能     

Caspases在视黄酸诱导pRARE4-IFNα转染肿瘤细胞凋亡中的作用

目的探讨视黄酸(RA)及其诱导的外源性α-干扰素(IFNα)抗肿瘤作用与半胱氨酸蛋白酶(caspase)的关系。方法含视黄酸反应元件(RARE)的IFNα表达载体(pRARE4-IFNα)，转染肿瘤细胞并证实外源性IFNα基因的表达受RA的诱导后，分析了细胞增殖功能、细胞DNA梯形带，caspase-1、3基因表达，caspase-3活性以及caspase-3特异性抑制剂(DEVD-CHO)对RA和／或IFNα诱导细胞凋亡的抑制作用。结果对RA敏感的HL60细胞和caspase-3基因缺失的MCF-7细胞经RA处理后，增殖能力减弱，出现明显的DNA梯形带，caspase-1基因表达上调节，HL-60细胞caspase-3基因表达上调节，活性升高，DEVDCHO可拮抗RA引起的HL-60细胞caspase-3活性升高，并部分削弱RA引起的细胞增殖抑制和凋亡。结论Caspase-3在RA诱导的细胞凋亡中有重要作用，同时，RA可能通过其它途径诱导caspase-3基因缺失细胞的凋亡。     

视黄酸对pRARE4-IFNα表达载体转染细胞增殖与凋亡的影响及其机制研究

目的：探讨视黄酸（RA）及其诱导的外源性α－干扰素（TFNα）抗肿瘤的协同效应及其可能分子机制。方法：通过构建的含视黄酸反应元件（RARE）的IFNα表达载体（pRARE4-IFNα)，转染肿瘤细胞后，使外源性IFNα基因的表达受RA的诱导。运用MTT比色法，流式仪分析和RT－PCR等技术方法，观察RA对pRARE4-IFNα转染和未转染的HL－60和MCF－7细胞的体外增殖能力，细胞周期分布和细胞凋亡的影响，以及IRF－1，STAT1和Fas抗原表达的改变。结果：pRARE4-IFNα转染和未转染的HL－60和MCF－7细胞经RA处理后，生长减慢，细胞周期被阻滞在G1／G0期，细胞凋亡率增加，DNA片段化百分率升高，IRF－1和STAT1 mRNA水平明显增高，其中，以pARE4-IFNα转染细胞经RA处理后变化更明显，结论：RA及其诱导的外源性INFα具有协同抗肿瘤作用，上调节IRF－1和STAT1基因表面可能是其主要分子机制。     

腺病毒介导Gax基因对血清刺激后兔血管平滑肌细胞增殖和凋亡的影响

目的:通过腺病毒介导人生长终止特异性同源异形盒基因(Gax)转染体外兔血管平滑肌细胞(VSMCs),观察人Gax基因过表达对血清刺激后兔VSMCs增殖和凋亡的影响,为Gax基因成为理想的静脉桥再狭窄基因治疗的候选基因提供实验基础。方法:Ad5-hGax重组腺病毒载体转染兔VSMCs后,采用Western blot检测不同时间细胞中hGax蛋白的表达;MTT法检测Ad5-hGax对血清刺激后兔VSMCs的体外增殖抑制情况;转染72 h后流式细胞术检测Ad5-hGax诱导血清刺激后VSMCs的凋亡率。结果:转染后1 d、3 d、5 d,Ad5-hGax组细胞中的hGax蛋白均有明显表达;MTT法检测显示hGax基因过表达能明显抑制血清刺激后兔VSMCs的增殖;流式细胞术检测显示转染72 h后,hGax过表达能显著诱导血清刺激后兔VSMCs的凋亡。结论:hGax基因过表达能有效抑制血清刺激后VSMCs的增殖,并促进其凋亡,为腺病毒介导Gax基因治疗静脉桥再狭窄提供重要的实验基础。     

病毒介导的P53低表达HepG2细胞株的建立

目的构建干扰P53的逆转录病毒载体,建立稳定低表达P53的HepG2细胞株。方法合成干扰P53基因的寡核苷酸序列插入pMSCV-hyg-U6质粒,转化受体菌DH5α,经酶切测序鉴定后瞬时转染HepG2细胞,通过半定量RT-PCR方法检测P53 mRNA表达水平评估干扰效果;选择干扰效果最好的重组质粒转染PT67细胞进行病毒包装,获得逆转录病毒颗粒感染HepG2细胞,通过Hygromycin筛选获得多个细胞克隆,Western blot检测P53蛋白的表达情况;选择P53表达水平最低的细胞克隆。通过5-氟尿嘧啶(5-FU)诱导凋亡实验,检测P53低表达的HepG2细胞p53通路介导的细胞凋亡情况。结果经酶切和测序验证成功构建重组病毒载体;瞬时转染HepG2细胞后P53 mRNA表达下调;病毒颗粒感染HepG2细胞后P53的mRNA、蛋白表达下调;用5-FU处理后P53低表达HepG2细胞凋亡水平明显低于对照。结论成功构建了干扰P53的逆转录病毒载体,建立了P53低表达HepG2细胞株,明显阻断了P53通路依赖的细胞凋亡。     

干扰素-β转染对胶质瘤的治疗和细胞因子的调节作用

目的 探讨干扰素-β（IFN-β）基因转染对胶质瘤的生长抑制和诱导凋亡的作用,明确IFN—B在SK—MG-1细胞系中对其他细胞因子的调节作用。方法 用IFN—β基因转染和蛋白刺激胶质瘤细胞系SKMG-1,通过MTT方法检测细胞增殖情况,并运用流式细胞技术检测其对凋亡的影响,同时用RT—PCR的方法检测细胞因子的表达变化。结果 IFN—β基因转染可以明显抑制细胞增殖,转染后48h和72h对肿瘤细胞的生长抑制率达到37．3％和46．0％。IFN—β基因转染还可以诱发细胞凋亡,转染后48h和72h肿瘤凋亡率达到31．7％和48．2％。RT—PCR结果显示在胶质瘤细胞系中IFN—β上调白细胞介素-1β（IL-1β）和肿瘤坏死因子-α（TNF—α）的mRNA表达,同时一过性下调白细胞介素-6（IL-6）的mRNA表达,而后在24h后上调IL-6的表达。结论 IFN—β基因转染可以抑制胶质瘤细胞系SK-MG-1的增殖,诱发细胞的凋亡,IFN—β对胶质瘤的生长抑制作用可能与其对其它细胞因子的调节作用有关。     

HLA-B7可诱导启动子调控TNF-α和IFN-β基因协同增强抗肿瘤效应

目的　将TNF α和IFN β基因导入人肝癌细胞株Liu6和SMMC 772 1,以增强其免疫原性。方法　以腺病毒为载体 ,以IRES连接TNF和IFN基因 ,选择HLA B7可诱导启动子调控其表达。分别用Southern Northernblot和MTT法检测TNF α和IFN β基因的整合、转录与表达。流式细胞仪检测MHCⅠ类分子表达。CTL细胞毒性实验检测T细胞对转染细胞的杀伤作用。细胞增殖实验检测目的基因的表达对肿瘤细胞的抑制作用。结果　TNF α和IFN β基因可整合入转染细胞 ,并被有效转录。转染细胞MHCⅠ类分子的表达比对照组高 3～ 4倍。TNF活性 :Liu6细胞为 3 .778ng ml,SMMC 772 1为2 .0 17pg ml;2 4hIFN最高活性分别为 397.8U 10 6 个细胞和 345 .8U 10 6 个细胞。对照组与实验组在效靶比分别为 5∶1,10∶1,15∶1时 ,CTL细胞毒性实验结果差异均有显著性 (P <0 .0 5 ) ,表明T细胞杀伤作用明显增强。细胞增殖实验结果显示实验组与对照组差异有显著性 (P <0 .0 5 )。目的基因的表达对肿瘤细胞具有一定的抑制作用 ,抑制率分别为 5 .5 %(Liu6 ) ,3.7%(SMMC 772 1)。结论　人TNF α和IFN β基因导入人肝癌细胞株Liu6和SMMC 772 1可明显增加其对TNF、IFN和MHCⅠ类分子的表达 ,增强机体对转染瘤细胞的杀伤作用。     

磷酸化缺陷型RARα1受体对人多发性骨髓瘤细胞体外增殖的影响

目的: 研究磷酸化缺陷型维甲酸受体RARα1(RARαS77A)对人多发性骨髓瘤(MM)细胞增殖的影响。方法: (1)RT-PCR检测U266 细胞RARα受体亚型mRNA的表达;(2)RARαS77A过表达慢病毒载体的构建,慢病毒包装,滴度测定及MM细胞转染;(3)CCK-8检测全反式维甲酸(ATRA,0~100 μmol/L)处理或RARαS77A过表达慢病毒转染后U266 细胞的增殖;(4)Western blotting检测RARαS77A过表达慢病毒转染或ATRA处理后U266 细胞增殖相关蛋白Rb和P53的表达。结果: (1)U266为RARα1(+)、RARα2(-)细胞;(2)ATRA明显抑制U266 细胞增殖,其作用呈时间和剂量依赖性;RARαS77A过表达慢病毒转染48 h 后U266细胞增殖明显被抑制,抑制率为15.16%±3.84%;(3)RARαS77A过表达慢病毒转染及ATRA处理均可上调U266细胞Rb蛋白表达及下调其P53蛋白表达。结论: 磷酸化缺陷型维甲酸受体RARα1与ATRA均可通过上调Rb及下调P53表达抑制RARα1(+)、RARα2(-)的U266细胞增殖,提示降低维甲酸受体RARα1的磷酸化是ATRA抑制MM细胞增殖的一个重要作用途径。     

逆转录病毒载体介导人类G6PD基因在人红白血病细胞中的表达

目的：探讨逆转录病毒载体介导人类G6PD基因在人白血病细胞中的表达。方法：构建G6PD cDNA的逆转录病毒表达载体pLG6PDSN,转染包装细胞PA317，病毒上清感染人红白血病细胞K562，以PCR方法检测病毒载体是否整合于细胞基因组，定量法测定G6PD表达。t检验比较转染组与对照组间的表达差异。结果：酶切鉴定表明，G6PD cDNA准确插入pLXSN相应位点，载体构建成功。转染后PCR扩增NeoR基因，证明细胞DNA整合有逆转录病毒载体。转染组与对照组酶活性测定差异有显著性（P＜0．01）。结论：本试验所构建的重组载体pLG6PDSN为严重G6PD缺陷症的基因治疗提供了表达载体。     

全反式维甲酸对人胚肺成纤维细胞增殖及α-SMA表达的影响

目的: 研究全反式维甲酸(ATRA)对人胚肺成纤维细胞(HFL-I)增殖与分化的影响。方法: 体外培养HFL-I, MTT法检测不同浓度ATRA(0.1 μmol/L、1 μmol/L、10 μmol/L)作用3 d对HFL-I增殖能力的影响。5 μg/L 转化生长因子β₁(TGF-β₁)刺激0 h、6 h、12 h、24 h、48 h、72 h后,RT-PCR法检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA) mRNA表达,刺激0 d、1 d、3 d、5 d后,Western blotting法检测α-SMA蛋白表达。不同浓度ATRA干预,24 h后RT-PCR方法检测α-SMA mRNA表达,3 d后用Western blotting方法检测α-SMA蛋白表达。结果: (1) MTT法检测显示不同浓度ATRA以浓度依赖性方式抑制HFL-I细胞的增殖(P<0.05)。(2)5 μg/L TGF-β₁诱导后,HFL-I细胞中α-SMA mRNA和蛋白表达均上调(P<0.05)。(3) ATRA以浓度依赖性方式下调TGF-β₁诱导的α-SMA mRNA和蛋白的表达(P<0.05)。结论: ATRA能够抑制HFL-I细胞的增殖和TGF-β₁诱导的分化,该作用可能是通过下调α-SMA mRNA和蛋白的表达实现的。     

腺病毒介导HLA-B7可诱导启动子调控双细胞因子基因在人肝癌细胞中表达

目的：使外源性TNF、IFN基因和内源性主要组织相容性复合物Ⅰ类(MHCⅠ)分子基因表达呈“正反馈”式放大效应。方法：以腺病毒为载体，以IRES连接TNF和IFN基因，选择HLA-B7可诱导启动子调控其表达。分别用RT-PCR、抗体中和实验和MTT法检测转导基因的转录及蛋白表达，流式细胞仪检测MHCⅠ类分子表达。结果：TNFα和IFNβ基因在人肝癌细胞中可有效转录，转染细胞(SMAdBTI、SMAdCTⅠ)的MHCⅠ类分子表达高于SMAd对照组，且SMAdBTI组明显高于SMAdC-TI组。TWF最高活性：SMAdBT1和SMAd分别为1．059ng/ml、415pg／ml；IFN最高活性分别为298．57U／24h/10^6个细胞和262．26U／24h/10^6个细胞。抗TNFα多抗、抗IFNβ多抗对SMAdBTI、SMAdCTI上清均具有中和活性。结论：腺病毒介导的HLA-B7可诱导启动子调控的人TNFα和IFNβ基因导入人肝癌细胞株SMMC-7721，可明显增加其对TNF、IFN和MHCⅠ类分子的表达。     

抑癌基因PTEN在肝癌组织中的突变及其对肝癌细胞增殖和凋亡的调控作用

目的 探讨抑癌基因PTEN在人原发性肝癌组织中的突变及其对肝癌细胞增殖和凋亡的调控作用。方法 （1）聚合酶链反应（PCR）-单链构象多态性（SSCP）法和序列分析法检测42例人原发性肝癌组织中抑癌基因PTEN第5、8外显子的突变。（2）脂质体介导的基因转染法将野生型PTEN基因、突变型PTEN基因的真核表达载体pEGFP-wt-PTEN、pEGFP-PTEN;G129R分别转染不表达内源性PTEN蛋白的人肝癌细胞系HHCC,G418筛选稳定表达PTEN蛋白的克隆,MTT比色实验分析测定细胞的增殖能力。以未转染基因的HHCC细胞和转染空载体pEGFP-C1的HHCC细胞为对照。（3）TNF-α诱导上述细胞凋亡,流式细胞仪测定凋亡细胞比例;Western印迹法检测细胞内磷酸化Akt（Ser473）的表达。结果 （1）在4例肝癌组织中检测出PTEN基因第5外显子的异常突变条带（9．5％,4／42）。（2）转染野生型PTEN基因的HHCC细胞生长明显抑制,而转染突变型PTEN基因的HHCC细胞的增殖能力与对照组比较差异无统计学意义。（3）TNF-α诱导分别转染野生型、突变型PTEN基因、空载体的HHCC细胞和未转染基因的HHCC细胞凋亡,细胞凋亡率分别为13．8％、8．1％、4．6％、3．3％,与转染空载体的HHCC细胞比较,转染野生型PTEN基因的HHCC细胞凋亡率增高（P〈0．05）;而转染突变型PTEN基因的HHCC细胞凋亡率差异无统计学意义（P〉0．05）。Western印迹检测显示未经基因转染的HHCC细胞内源性Akt水平较低;HHCC细胞经TNF-α作用,其内源性Akt水平增高;转染野生型PTEN基因,可降低TNF-α诱导的肝癌细胞内信号分子Akt（Ser473）的磷酸化水平。结论 （1）首次发现原发性人肝癌组织中抑癌基因P1EN发生突变;（2）野生型PTEN基因可抑制肝癌细胞增殖,而突变型PTEN基因丧失对肝癌细胞增殖的调控作用;（3）野生型PTEN基因可降低TNF-α诱导的肝癌细胞内重要的信号分子Akt（Ser473）的磷酸化水平,即野生型PTEN基因通过抑制TNF-α诱导的肝癌细胞Akt磷酸化（活化）而抑制细胞增殖,促进细胞凋亡。     

淫羊藿甙抑制肿瘤细胞端粒酶活性及其调节机制的研究

目的 :探讨中药单体淫羊藿甙 (ICA)抑制肿瘤HL 6 0细胞端粒酶活性及作用机制。方法 :采用MTT法 ,NBT染色法 ,TRAP PCR ,RT PCR法和流式细胞术。结果 :ICA显著抑制HL 6 0细胞端粒酶活性 ,且端粒酶活性下降与细胞表面粒细胞分化抗原CD11b表达率呈负相关 ;诱导HL 6 0细胞向粒细胞方向分化 ;改变HL 6 0细胞周期各时相的分布 ,表现为G0 /G1期细胞逐渐增多 ,S期细胞逐渐减少 ;上调分化相关基因p2 1、下调增殖相关基因c mycmRNA和蛋白表达水平。结论 :阐明了ICA显著抑制HL 6 0细胞端粒酶活性 ,并从基因 蛋白 细胞效应水平揭示了其调节端粒酶活性的可能机制。     

携带酪氨酸羟化酶基因的质粒和逆转录病毒在大鼠成纤维细胞和脑胶质细胞中表达效率的比较

目的　为提高体外转基因 (exvivo)治疗帕金森病大鼠模型的疗效 ,本实验拟比较两种基因表达载体介导的外源基因在两种不同运载细胞的瞬时表达效率。　方法　分别将酪氨酸羟化酶 (TH)基因的重组表达质粒和重组逆转录病毒导入原代培养的大鼠成纤维细胞和脑胶质细胞 ,用免疫组织化学检测TH的表达效率 ;Westernblot法检测样品中TH特异性条带并转换成A值 ,以比较其在不同细胞中表达的相对含量。　结果　免疫组织化学检测表明 ,表达质粒的转染率为 5 %～ 7% ,逆转率病毒的感染率为 18%～ 2 0 % ;根据GDNF标准品蛋白条带含量与Westernblot结果的相应A值的标准曲线 ,推断出质粒转染和逆转率病毒感染的成纤维细胞中单个阳性细胞表达的TH相对平均含量分别为 4 76× 10 - 2 A和 4 35× 10 - 2 A ,质粒转染和逆转率病毒感染的脑胶质细胞分别是 5 4 5×10 - 2 A和 5 0 5× 10 - 2 A。　结论　不论是质粒载体还是逆转录病毒载体所携带的外源基因在两种细胞的单个阳性细胞中的表达无显著性差异。但由于逆转录病毒载体的感染率高于质粒载体 ,对于原代培养的成纤维细胞和脑胶质细胞 ,逆转率病毒载体是一种更好的表达载体。     

抑制mel18表达增强桂皮醛诱导的HL60细胞分化

目的:研究下调mel18基因表达对桂皮醛(CA)诱导HL60细胞分化的影响。方法:用低浓度CA和反式维甲酸(ATRA)处理HL60细胞。用shRNAmel18质粒及对照质粒shRNALuc包装慢病毒,用病毒感染HL60细胞。低浓度CA和ATRA作用于病毒感染的HL60细胞,流式细胞术检测细胞周期和细胞表面分化抗原表达,Western blot法检测MEL18蛋白、cyclin D1、p27的表达和Akt的磷酸化水平。结果:低浓度CA和ATRA增加HL60细胞的粒细胞分化抗原CD11b表达,MEL18蛋白表达下降。shmel18病毒感染的HL60细胞(shmel18-HL60细胞)MEL18蛋白表达下降,而对照病毒感染的HL60细胞(sh Luc-HL60细胞)MEL18蛋白表达无明显变化。shmel18-HL60细胞的CD11b表达率明显增高,细胞阻滞于G1期;经低浓度CA处理后,shmel18-HL60细胞的CD11b表达率进一步增高。shmel18-HL60细胞Akt的磷酸化水平及cyclin D1表达明显下降,而p27表达则显著升高。结论:抑制mel18基因表达导致HL60细胞向成熟粒细胞方向分化,mel18基因可能通过PI3K/Akt信号途径调控cyclin D1和p27的表达,影响HL60细胞分化。而CA可能通过抑制mel18基因表达从而通过PI3K/Akt途径促进HL60细胞分化。