FQ-PCR检测宫颈涂片剩余细胞内HPV 16、18型感染的临床意义

目的探讨实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测宫颈涂片剩余细胞内人乳头瘤病毒(HPV)16、18型感染,建立快速、灵敏的检测方法的临床意义.方法采用FQ-PCR技术检测124例异常宫颈细胞和组织标本HPV16、18型感染状况.结果细胞学诊断低度鳞状上皮内病变( LSIL) 45例,其中 FQ-PCR检测宫颈细胞标本HPV16、18型DNA阳性14例(阳性率31.1%);高度鳞状上皮内病变(HSIL) 38例,HPV16、18型DNA阳性26例(68.4%);未明确诊断意义的不典型鳞状上皮细胞(ASCUS) 30例,HPV16、18型DNA阳性10例(33.3%);鳞状细胞癌9例, HPV16、18型DNA阳性8例(88.9%).组织学检查诊断CIN Ⅰ级67例,其中 FQ-PCR检测活检组织标本HPV16、18型DNA阳性28例 (阳性率41.8%);CIN Ⅱ14例,HPV16、18型DNA阳性9例(64.3%);CIN Ⅲ级11例,HPV16、18型DNA阳性8例(72.7%);鳞状细胞癌23例,HPV16、18型DNA阳性17例(73.9%).细胞和活检组织两种标本检出的HPV16、18型DNA阳性率差异无显著性(χ2=1.54, P＞0.05). 结论FQ-PCR方法检测宫颈细胞标本HPV16、18型感染,具有快速、简便、灵敏度高、特异性强等优点,适用于大规模筛查和在临床日常工作中采用.     

妇科门诊女性HPV感染率和基因亚型分布与宫颈病变关系研究

目的 研究妇科门诊女性人乳头瘤病毒（HPV）感染率和基因亚型分布与宫颈病变之间的关系。方法 选取576例接受HPV检测、宫颈薄层液基细胞学（TCT）检查的女性病例,针对检查异常者开展阴道镜活检确诊,统计HPV感染率,对HPV亚型分布情况进行统计,分析高危型HPV分布与宫颈病变之间的关系。结果 576例患者中确定存在HPV感染者共计123例,HPV感染率为21.35%;HPV感染者的基因亚型分布中HPV 52、HPV 16、HPV 58的感染率占前3位。患者中存在宫颈病变者共计28例,占比4.86%,其中宫颈上皮内瘤变（CIN）Ⅰ病例10例,CINⅡ病例9例,CINⅢ病例6例,鳞状细胞癌（SCC）病例3例;相比CINⅠ而言,CINⅡ、CINⅢ、宫颈癌的HPV感染率更高,差异有统计学意义（P<0.05）。结论 妇科门诊女性HPV感染率相对较高,高危型HPV感染与宫颈病变等级存在密切关系,临床加强HPV感染人群的早期宫颈病变筛查极为重要。     

人乳头瘤病毒感染的宫颈上皮内瘤变中的hTERC基因分析

目的探讨人乳头瘤病毒感染的宫颈上皮内瘤变细胞中3号染色体hTERC基因扩增情况。方法对57例病理诊断为CIN（CIN18例,CIN215例,CIN334例;其中包括HPV感染46例与无HPV感染11例）患者的液基细胞学检测剩余样本应用荧光原位杂交技术检测hTERC基因,同时以20例无HPV感染正常宫颈鳞状上皮作为对照,将结果与病理诊断进行比较。结果在正常宫颈鳞状上皮中,3号染色体hTERC基因主要表现为2个杂交荧光信号,宫颈病变与HPV感染的宫颈鳞状上皮中,出现了hTERC基因拷贝数增多,在CINI～CIN3中,HPV感染率分别为12．5％、86．7％、94．1％,hTERC基因扩增的阳性率分别为25．0％、60．0%、82．3％,46例HPV感染的CIN中,hTERC基因扩增的阳性率为80．4％,而11例HPV阴性的CIN患者中,其扩增阳性率为18．2％,两组间比较,差异具有统计学意义（P〈0．05）。结论3号染色体hTERC基因的扩增与HPV感染及宫颈病变程度相关,hTERC基因的扩增可能是HPV感染致端粒酶活性增加的早期事件。     

人乳头状瘤病毒不同亚型感染与宫颈病变的相关性

目的 了解门诊高危人群和宫颈病变患者的人乳头状瘤病毒（HPV）感染的型别分布，探讨不同HPV亚型感染的致癌性。方法 采用导流杂交技术，对门诊就诊的1715名有性生活史妇女，进行下生殖道HPV感染分型筛查。其中463例经阴道镜下定点官颈活检，病理确诊分为官颈炎症234例、CINⅠ96例、CINⅡ80例和CINⅢ53例。分析人群HPV感染的型别分布、与宫颈病变相关性。结果 21种HPV亚型均被检出，1715名门诊妇女中HPV阳性率57．1％（978／1715），宫颈病变中为76．9％（356／463），而在CINⅢ中达98．1％（52／53）。常见的5种亚型分布：高危人群为HPV16、58、52、33和6型；宫颈病变为HPV16、58、52、33和31型；CINⅢ中为HPV16、33、58、31和52型。HPV16、33和31型与宫颈病变程度相关（P〈0．05），Logistic回归分析，高级别鳞状上皮内瘤变（HSIL，CINⅡ＋CINⅢ）的主要风险也是感染HPV16、33和3l型（OR9．59、2．99和2．52，95％CI4．805～11．989、1．231～7．296和1．174～5．429）。结论 本地区官颈病变的常见型别是HPV16、58、52、33和31型，HPV16、33和31型是HSIL的主要致病型。     

hTERC基因表达在宫颈病变诊治中的应用

目的：探讨宫颈脱落细胞中hTERC的基因表达在宫颈上皮内瘤样病变（CIN）诊断与治疗中的应用。方法：抽取行子宫颈癌筛查的724例妇女为研究对象,对其同步进行宫颈脱落细胞的液基细胞学检查、第二代杂交捕获技术（HC-Ⅱ）检测高危型HPV（HR-HPV）和荧光原位杂交（FISH）技术检测hTERC基因。对于细胞学为未明确诊断意义的不典型鳞状上皮细胞（ASCUS）及以上病变,和（或）HR-HPV阳性者均行阴道镜下宫颈四象限多点活检进行病理诊断。结果：724例中经病理确定为CINⅠ,Ⅱ,Ⅲ及子宫颈癌者分别为251例（34.67%）、17例（2.35%）、48例（6.63%）和10例（1.38%）,宫颈脱落细胞hTERC的扩增率为11.05%。①724例HPV阳性率为39.64%;hTERC扩增在HPV阳性与阴性组分别为19.86%与5.26%（χ2=37.556,P ＜0.01）。②hTERC扩增在细胞学无宫颈上皮内瘤变（NILM）组为5.19%、ASCUS为10.23%、低度鳞状上皮内瘤样病变为（LSIL）11.84%、非典型鳞状上皮细胞－不除外高度鳞状上皮内瘤变（ASC-H）为21.43%、高度鳞状上皮内瘤样病变（HSIL）为73.17%、鳞状细胞癌（SCCA）为100.00%、非典型腺上皮细胞（AGC）为50.00%;hTERC在HSIL及以上病变中的扩增率明显高于LSIL及以下病变（χ2=186.755,P ＜0.01）。③在不同组织学结果中hTERC的扩增率分别为,NILM 3.70%、CINⅠ4.38%、CINⅡ47.06%、CINⅢ58.33%、浸润癌90.00%,hTERC在CINⅡ及以上级别病变中的扩增率明显高于CINⅠ和NILM者 （χ2=144.597,P ＜0.01）。结论：hTERC的扩增与宫颈细胞学和组织学异常密切相关,hTERC扩增与否有可能作为判断有无高度病变及估计预后的指标之一。     

HPV16 18 E6蛋白在宫颈脱落细胞中的表达研究

目的 探讨人乳头状瘤病毒(human papillomavirus,HPV)16和(或)18 E6蛋白在宫颈脱落细胞中的表达与宫颈上皮内瘤变(cervical intraepithelial neoplasia,CIN)及宫颈鳞状细胞癌(cervical squamous cell carcinoma,CSCC)的关系.方法 采用免疫印迹(Western blot)方法检测2003年6月至2005年6月中国医科大学第一附属医院CSCC 30例、CIN 52例和16例正常宫颈脱落细胞中HPV16和(或)18 E6蛋白的表达.结果 在上述各组宫颈脱落细胞中HPV16和(或)18 E6表达阳性率分别76.7%(23/30)、51.9%(27/52)和12.5%(2/16);其中在CSCC宫颈脱落细胞中HPV16和(或)18 E6明显高于正常对照组的表达(P＜0.01);CINⅡ、Ⅲ组的表达也显著高于对照组(P＜0.05),而CINⅠ组与正常对照组比较差异无显著性意义(P＞0.05).结论 宫颈脱落细胞标本存在HPV16和(或)18 E6癌基因的表达.宫颈脱落细胞中HPV16和(或)18 E6癌基因的过度表达与CSCC及CINⅡ、Ⅲ密切相关.     

液基薄片细胞学检查在宫颈癌筛查中的应用

目的评价液基薄片细胞学检查在宫颈癌筛查中的作用。方法回顾性分析241例宫颈液基薄片细胞学异常，包括非典型鳞状上皮细胞（atypical squamous cells，ASC）121例、低度鳞状上皮内病变（low grade squamous intraepithelial lesions，LSIL）68例、高度鳞状上皮内病变（high grade squamous intraepithelial lesions，HSIL）49例，非典型腺上皮细胞（atypical gladullar cells，AGC）3例，均行阴道镜下宫颈活检病理诊断。结果病理诊断为宫颈上皮内瘤变（cervical intraepithelial neoplasia，CIN）Ⅰ42例，CINⅡ40例，CINⅢ29例，HPV感染40例，宫颈炎90例。单纯HPV感染组的平均年龄低于CIN组（P＜0．05），近半数的40岁以下CINⅢ患者有宫颈癌的高发因素。22．5％的CIN和47．5％的宫颈HPV感染者无症状。87．8％HSIL的宫颈活检病理诊断为CINⅡ、Ⅲ。结论进行宫颈癌的筛查十分必要，液基薄片细胞学检查可以提高CIN的检出。     

生殖道人乳头瘤病毒感染与宫颈病变、宫颈癌相关性研究

目的 了解生殖道人乳头瘤病毒感染与宫颈病变、宫颈癌的关系，以便早期发现和治疗宫颈上皮内瘤样变（CIN）和原位癌。方法 应用TCT液基细胞学薄片检测法对宫颈病变做阴道细胞学分析，对CIN进行分级（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ）鉴定。对高危病人（如ASCUS、CIN、宫颈原位癌）应用基因杂交捕获法（Hybrid Capture，HC-Ⅱ）分型检测HPV，同时用PCR法检测HPV—DNA，进一步做HPV分型鉴定。最后所有病人均进行阴道镜检查及病理组织学诊断。结果 2003年2月～2005年3月将标本送往广州金域医学检验中心进行TCT和HPV检测（HC—H），其中TCT检测1086例，发现不典型鳞状细胞39例、CINⅠ25例、CINⅡ3例、CINⅢ5例，原位癌3例。高危病人（如ASCUS、CIN、宫颈原位癌）进行HC—Ⅱ检测40例，阳性25例（其中原位癌、CINⅢ和CINⅡ均阳性）。结论 HPV感染与宫颈病变，特别是宫颈癌、宫颈癌前病变的发生有明显的相关性，病变越重，HPV的感染率越高。提示宫颈癌的防治重点应放在高危型HPV感染者。     

人乳头瘤病毒基因亚型与宫颈病变的关系

目的 研究不同程度的子宫颈癌前病变者感染HPV的基因亚型，以探讨不同基因型HPV感染的致癌性。方法 研究对象系3．56例宫颈HPV感染的患者。以第二代杂交捕获（HC1I）试验检测13种HPVH，同时采用核酸分子快速杂交基因分型技术进行21种HPV-DNA亚型分析；所有研究对象均行宫颈薄层液基细胞学检测（LCT）及阴道镜下宫颈多点活检。根据细胞与病理学诊断有无宫颈病变及其病变程度分组。①宫颈癌与高度鳞状上皮内瘤变（HSIL）组：包括宫颈浸润癌9例、CINⅢ57例、CINⅡ53例；②低度鳞状上皮内瘤变（LSIL）组：包括CINⅠ112例、HPV感染52例；③正常或炎症组：宫颈细胞与组织学正常或炎症者73例。通过HPV-DNA亚型分布，分析HPV感染基因型与宫颈病变程度的关系。结果 HPV-H与宫颈癌变密切相关，本组高度病变以上患者中HPV-H阳性率达98．4％；随着宫颈病变程度加重，HPV-H双重与多重感染有增加趋势，在正常与炎症组、LSIL组与HSIL组中两种以上HPV-H基因型感染者分别占13．7％、17．7％和36．6％，HSIL组明显高于其他两组，差异有显著性（P〈0．01）；本组HPV亚型感染频度由高到低依次为HPV-16（32．9％）、58（18．8％）、52（16．9％）、18（9．0％）、33（8．2％）、68（7．3％）、11（低危型，6．5％）、31（6．2％）、53（5．6％）、39（5．3％）、CP8304（5．1％）、66（3．9％）、6（2．5％）和51、56、45、35、59、43、44、82等少见型；HPV-16、58、33、52与18型在高度鳞状上皮内瘤样病变（HSIL）中感染率分别为56．4％、19．3％、16．0％、12．6％和8．4％，说明这些亚型致癌性更强；两种HPV-DNA检测技术所获结果，具有很高的一致性。结论本组宫颈病变患者感染HPV型别以16、58、52、18、33较为多见，HPV-16、58、33、52与18型致癌性较强；HPV-DNA分型检测在临床诊断与判断预后上具有重要意义。     

细胞块技术检测宫颈脱落细胞p16INK4A表达对评价宫颈病变的意义

目的探讨将细胞块技术应用于宫颈细胞学诊断并检测宫颈脱落细胞p16INK4A表达,对评价宫颈病变的意义.方法采用链霉素抗生物-过氧化物酶(SP)法,检测79例细胞块上的宫颈脱落细胞及相应的宫颈活检组织中p16INK4A表达.结果在宫颈脱落细胞中,p16INK4A在正常、未明确意义的不典型鳞状细胞(ASCUS)、低度鳞状上皮内病变(LSIL)、高度鳞状上皮内病变(HSIL)、鳞状细胞癌(SCC)阳性表达率分别为0%、18.18%、46.43%、89.66%、100%.在相应活检组织中,p16INK4A在宫颈炎、CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ、SCC中阳性表达率分别为0%、61.90%、87.50%、100%、100%.p16INK4A在宫颈脱落细胞和组织中表达的符合率为87.34%,宫颈脱落细胞p16INK4A免疫组化染色使检出宫颈高度病变的敏感性提高了21.95%.结论细胞块技术可用于宫颈细胞学诊断,检测宫颈脱落细胞p16INK4A表达可以提高宫颈高度病变的检出率,减少漏诊率.     

上推膀胱直肠后再次宫颈环形电切术对保留生育功能的价值

目的:探讨上推膀胱直肠后再次宫颈环形电切术(LEEP)在宫颈疾病治疗中的可行性,评价其对年轻患者保留子宫及生育功能的价值。方法:回顾性分析2010年1月至2014年4月在复旦大学附属妇产科医院就诊,因宫颈LEEP术后切缘阳性或术后随访复发、无法在门诊行常规LEEP而行上推膀胱直肠后再次LEEP的38例患者的临床资料。结果:38例患者均顺利完成了上推膀胱直肠后再次LEEP,术中均未出现膀胱、直肠损伤等并发症。手术时间38±7分钟,术中出血量20±5 ml,住院天数2.7±0.6天;其中1例患者术前病理检查为宫颈高度鳞状上皮内瘤变,术后升级为原位鳞癌合并原位腺癌行全子宫切除术,37例患者(97.4%)成功保留子宫,随访至今1例术后12个月低度鳞状上皮内瘤变行宫颈激光治疗,余均未见宫颈病变复发。12例患者有生育意愿,7例患者已成功妊娠,6例已分娩。结论:上推膀胱直肠后再次LEEP安全可行,可实现未生育妇女及年轻妇女保留子宫及生育能力的意愿。     

Responsiveness of gynecologic tumors to chemotherapeutic agents in the 6-day subrenal capsule assay

Various gynecologic malignancies have been tested in the 6-day subrenal capsule assay, which is an in vivo test of human tumor responsiveness to drug therapy. Fresh surgical explants of ovarian, endometrial, and cervical tumors were implanted as 1-mm³ fragments under the renal capsule of normal mice and tested against a spectrum of clinically active agents. Regardless of the site of origin, human tumors showed variations in growth rate when implanted under the renal capsule that appeared to reflect both the growth potential characteristic of each tumor as well as the heterogeneity of the cell populations comprising each tumor. An average of 60% of tumors showed positive growth and 11% demonstrated no measurable change in size. The response rates of 18 ovarian, 28 endometrial, and 20 cervical carcinomas to clinically active chemotherapeutic agents were determined. A range of responses, in terms of drugs indicated to be active and of the degree of responsiveness to active agents, was obtained with each histologic type. Response rates varied from 6% to tamoxifen in cervical carcinomas to 80% to 5-fluorouracil in ovarian carcinomas. The results of this study support the variability in chemotherapy responsiveness observed clinically with gynecologic tumors and suggest the feasibility of using the subrenal capsule assay as a predictive test.