单环刺螠ACE抑制肽的分离、鉴定及活性评价

目的：以单环刺螠(Urechis unicinctus)为原材料,以血管紧张素转化酶(ACE)抑制活性为筛选指标,运用酶解技术和现代分离纯化技术,制备具有降压潜能的ACE抑制肽。方法：运用可控酶解技术,以ACE的抑制率为筛选指标,优化酶解条件。运用超滤、Sephadex G-15凝胶柱层析、反相高效液相色谱(RP-HPLC)及质谱测序等一系列分离纯化和鉴定技术,制备具有ACE抑制活性的生物活性肽,并通过Lineweaver-Burk法确定其抑制剂类型。结果：最佳酶解条件为：胰蛋白酶,37℃、pH 8.0、加酶量4.0%、料液比1:30、酶解时间4.0 h。通过超滤、Sephadex G-15凝胶层析和反相高效液相色谱(RP-HPLC)进行分离纯化,得到5条活性肽,经质谱和氨基酸序列分析确定其分别为：Pro-Gln-Met-Thr-Phe(DHCY1, 622.75 Da)、Pro-Tyr-Phe-Lys-His(DHCY2, 690.8 Da)、Pro-Gly-Trp-Lys-Ala(DHCY3, 557.66 Da)、Pro-Gln-Gly-Met-Ile-Val-Val(DHCY4, 742.94 Da)、Val-Met-Arg-Ile-Ile(DHCY5, 630.86 Da)。其中DHCY1、DHCY4、DHCY5表现出较好的ACE抑制活性,其抑制率分别为86.26±0.85%、92.11±1.13%、96.51±1.04%。经判断,DHCY5为竞争性ACE抑制剂。结论：胰蛋白酶酶解单环刺螠蛋白,可以产生具有显著ACE抑制活性的酶解肽,包括ACE竞争性抑制剂,具有潜在的降血压活性,可为单环刺螠酶解肽的开发利用和降血压产品的开发提供理论依据和参考。     

重组单环刺螠纤溶酶对大鼠急性心肌缺血的保护作用

目的 研究重组单环刺螠纤溶酶对大鼠急性心肌缺血的保护作用。方法 重组表达单环刺螠纤溶酶,并通过纤维蛋白平板法测定酶活力,体外抗凝试验检测抗凝效果。建立大鼠急性心肌缺血模型,观察并测定重组单环刺螠纤溶酶对大鼠心肌梗死质量比、血清学生化指标[乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase,LDH）、肌酸激酶（creatine kinase,CK）和天门冬氨酸氨基转移酶（aspartate amino transferase,AST）]、凝血指标[凝血酶原时间（prothrombin time,PT）、部分凝血活酶时间（partial thromboplastin time,APTT）、纤维蛋白原（fibrinogen,FIB）、凝血酶时间（thrombin time,TT）]、组织型纤溶酶原激活物（tissue plasminogen activator,t-PA）及组织型纤溶酶原激活物抑制因子1（tissue plasminogen activator inhibitor,PAI-1）活性的影响。结果 与模型组相比,重组单环刺螠纤溶酶能缩小心肌梗死范围,抑制AST、LDH、CK的升高,延长PT、APTT、TT,降低FIB,降低PAI-1活性,升高t-PA活性,均具有显著性差异（P<0.01）。结论 重组单环刺螠纤溶酶能明显增强纤溶活性,降低凝血时间,说明其抑制凝血系统、活化纤溶系统的作用机制之一可能是抑制血栓形成、抗心肌缺血。重组单环刺螠纤溶酶可有效预防心肌梗死,此结果可为下一步的临床应用提供一定的理论依据。     

刺松藻多糖抗凝血及抗血栓作用的研究

目的研究刺松藻多糖抗凝血作用及对血小板聚集的影响。方法采用热水浸提乙醇沉淀法制备刺松藻多糖。家兔心脏采血,取血浆检测活化部分凝血酶时间(APTT),凝血酶原时间(PT)和凝血酶时间(TT);采用红外比浊法测定刺松藻多糖对血小板聚集的影响。采用胶原蛋白-肾上腺素诱导小鼠血栓模型实验,检测刺松藻多糖抗血栓作用。结果刺松藻多糖能显著延长家兔血浆APTT、PT和TT;显著抑制由二磷酸腺苷(ADP)引起的家兔血小板聚集,对胶原蛋白-肾上腺素诱导的小鼠血栓性偏瘫及死亡率均有明显降低。结论刺松藻多糖具有抗凝血、抑制血小板聚集和抗血栓作用。     

两种蝎毒多肽的分离纯化及抗血栓活性

目的 筛选出蝎毒的抗血栓成分.方法 采用反相色谱技术对蝎毒进行分离纯化,通过质谱分析及数据库检索对得到的流分进行鉴定.选取小鼠黑尾试验与大鼠体内血栓形成试验,以及斑马鱼血栓模型试验对得到的单体多肽进行抗血栓活性筛选.结果 蝎毒经色谱分离纯化得34 min和48 min两个流分,分别记为34号样和48号样.经质谱分析34...     

灵芝多糖的药效学研究Ⅰ.抗恶性肿瘤、抗血栓和抗凝血作用

本文用 1.灵芝子实体经水提、乙醇沉制得灵芝多糖 (GL PS)精品 ,用苯酚 -硫酸法测其百分含量。 2 .应用小鼠移植性恶性肿瘤瘤株 (S1 80 、U1 4 、EAC) ,观察 GL PS对荷瘤小鼠肿瘤生长的影响。 3.观察 GL PS对小鼠全血凝血时间及出血时间和大鼠血栓及血液凝固系统的影响。实验结果 1.用本方法提取 GL PS得率为 0 .5 89± 0 .135 %。2 .GL PS 40 m g/ (kg· d) .ig× 17d对小鼠肉瘤 (S- 180 )和宫颈癌 (U - 14)的平均抑瘤率分别为 43%和 5 1% ,而对艾氏腹水癌 (EAC)小鼠生命没有明显延长作用 (P>0 .0 5 )。 3.GL PS 2 0 m g/ (kg· d) .ig× 10 d或 2 0～ 40 mg· kg- 1 .iv均能明显延长小鼠的凝血时间和出血时间 (P<0 .0 1)。GL PS 40 m g/ (kg· d) .ig× 10 d能明显抑制大鼠的血栓形成 (P<0 .0 1) ,降低纤维蛋白原的含量 (P<0 .0 1) ,同时能明显延长部分凝血活酶时间 (KPTT) (P<0 .0 1)。说明 GL PS具有抗肿瘤、抗血栓和抗凝血的作用     

黑木耳多糖抗血栓作用的研究

目的研究黑木耳多糖的抗血栓作用。方法黑木耳多糖系采用热水浸提法从东北黑木耳中提取。通过动物实验,分别测定了动脉血栓的血栓长度,血栓的干、湿重,特异性血栓形成时间(CTFT)和纤维蛋白血栓形成时间(TFT),血小板黏附率及血液黏度。结果黑木耳多糖灌胃给药后可明显延长CTFT和TFT,缩短体外血栓长度,并减轻其干、湿重,降低家兔血液黏度。对血小板黏附率无明显影响。结论黑木耳多糖具有较好的抗血栓作用。     

豆豉纤溶酶的纯化及其性质研究

由发酵大豆(豆豉)分离纯化一种活性强的纤溶酶,采用硫酸铵盐析,Sephadex G-100和Sephacryl S-200色谱纯化的纤溶酶,在SDS-PAGE上呈一条蛋白带,Mr31000,等电点8.6±0.2.纯化倍数44倍,纯酶比活31020UK/mg,活性回收率68%.由于该酶具有较强的催化纤维蛋白原溶解的作用,因而有望成为一种新型抗血栓药物或预防血栓病的保健食品.     

浅谈中药有效成分的分离和纯化

目的 研究中药的分离和纯化工艺,提高有效成分含量和稳定性。方法 采用乙醇沉淀法,大孔树脂法,过滤和离心法等进行分离纯化。结果 每一种方法都各有优点和适用范围。结论 根据不同的样品选取不同的方法才能达到中药分离和纯化的目的。     

高纯度木瓜蛋白酶的分离纯化和性质研究

目的建立木瓜蛋白酶的分离纯化工艺路径。方法采用初步采集处理,20%,40%硫酸铵分级沉淀、SP-sephadex C50柱色谱、羟基磷灰石柱色谱,从番木瓜乳汁中分离纯化木瓜蛋白酶。结果获得比活为1 184 U/mg的纯酶,活力回收率为55.79%,纯化的酶经SDS-PAGE呈单一条带,高效液相色谱呈单一条带,纯度达到99.31%。该酶耐高温,最适pH值为7.2,对酪蛋白的动力学常数(Km)为3.5×10-5mol/L。结论应用此方法成功纯化了高纯度的木瓜蛋白酶。     

眼镜蛇毒L-氨基酸氧化酶分离纯化及对血管内皮细胞的抑制作用

目的从眼镜蛇毒中分离纯化L-氨基酸氧化酶(L-a-mino acid oxidase of Naja atra venom,NAV-LAAO),观察其对血管内皮细胞是否有抑制作用。方法应用阳离子交换层析和亲和层析方法分离纯化NAV-LAAO;采用MTT法、Western blot测定caspase及细胞小管形成实验观察NAV-LAAO对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)生长和血管生成的影响。结果眼镜蛇毒粗毒经两步层析法得到的LAAO,分子量约为58 ku。NAV-LAAO抑制HUVEC细胞的生长和细胞小管形成,其抑制细胞生长的IC50为21.42 mg.L-1。与对照组相比,LAAO组caspase-3、caspase-8升高。结论应用两步层析法从眼镜蛇毒中分离出的NAV-LAAO具有剂量依赖性的抑制HUVEC细胞的生长和影响细胞小管形成的作用。     

半边旗抗肿瘤有效成分5F的纯化及其体外增效作用

目的　寻找半边旗中二萜类有效成分之一 5F纯化的新方法 ,研究 5F对常用抗肿瘤药物的体外增效作用。方法　应用结合了AgNO3的普通层析用硅胶来纯化 5F ,应用台盼蓝拒染法测定药物对细胞的抑制率。结果　纯化后所得到的产品中 5F的含量达到 99%以上 ,是迄今为止纯度最高的产品。较低浓度的 5F分别与氟尿嘧啶 (5 Fu)、顺铂 (CD DP)及长春新碱 (VCR)合用可以增强它们对HL 60、K562细胞株的杀伤作用。结论　结合了AgNO3的普通硅胶可有效地分离纯化 5F。 5F可增强上述几种药物对HL 60、K562细胞的杀伤作用 ,可能与几种药物对细胞周期影响不同有关     

酵母SOD分离纯化及其酶学性质的研究

目的发酵培养Y12 酵母菌分离制备酵母SOD并研究其部分酶学性质。方法用已筛选出的一株Y12 酵母菌对其在优化培养条件下发酵培养得到湿菌体 ,破壁抽提得SOD粗酶液 ,采用硫铵盐析、丙酮沉淀、SephadexG 10 0凝胶过滤和QAE SephadexA 5 0离子交换柱层析 ,分离得到酵母SOD并测定其部分酶学性质。结果Y12 酵母菌SOD产量达 12 6 3u·g-1湿菌体 ,分离得到酵母SOD ,该酶属Cu、Zn SOD ,比活力为 10 73 5u·mg-1,活力回收率为 5 4 1% ,紫外吸收峰在2 5 7 2nm ,分子质量为 32 4 5 6u ,亚基分子质量为 16 2 2 7u。结论此酵母SOD与文献中报道的动物血红细胞Cu、Zn SOD基本相近。     

蝮蛇毒小分子多肽的分离、纯化及其抗肿瘤作用研究

目的从长白山岩栖蝮蛇蛇毒中分离纯化1种小分子多肽Saxis,测定理化性质,研究其对肿瘤细胞的生长抑制作用。方法利用有机溶剂沉淀和Sephadex G-50S、ephadex G-25凝胶过滤色谱等方法分离纯化长白山栖岩蝮蛇蛇毒中的1种小分子多肽Saxis;采用Tricine-SDS-PAGE鉴定;利用Bradford蛋白质测定法测定蛋白质浓度;运用MTT比色法检测该小分子多肽对宫颈癌细胞Hela、肝癌细胞SMMC-7721和胃腺癌细胞SGC-7901的生长抑制作用。结果该小分子多肽Saxis的相对分子质量约为5 200,它能抑制Hela、SMMC-7721和SGC-7901细胞的增殖,并且对这3种肿瘤细胞的抗增殖作用具有药物剂量依赖关系,24 h的IC50分别为66.3,54.5,62.2μg/mL。结论利用有机溶剂沉淀和凝胶过滤色谱法可以从长白山岩栖蝮蛇蛇毒中分离纯化1种小分子多肽Saxis,其对多种肿瘤细胞的生长有抑制作用。     

珠母贝氨基多糖的分离纯化及其抗肿瘤活性的初步研究

探讨珠母贝氨基多糖的分离纯化及其抗肿瘤活性。马氏珠母贝全脏器经胰酶和枯草杆菌蛋白酶双酶水解、醇沉后得到氨基多糖粗品(CPG)．再经DEAE-52-纤维素柱纯化，并采用MTT法检测其体外抗肿瘤活性。结果表明：CPG和经DEAE-52-纤维素柱纯化级分GAG-1，GAG-2中总氨基己糖的质量分数分别为45．9％，56．5％和59.2％，级分GAG-1硫酸基的质量分数高达13.8％；体外抗肿瘤试验表明CPG，GAG-1和GAG-2具有抑制肿瘤细胞生长的作用，对HL-60细胞的抑制率分别为54．6％。50.0％和35．4％，且能显著增敏化疗药物5-Fu抑制肿瘤细胞的作用，其中GAG-1为主要的活性成分。     

替硝唑原料的精制及纯度分析

目的:研究提高替硝唑原料药纯度至99.9%以上的精制方法及相关纯度分析方法。方法:利用替硝唑在不同溶剂中溶解度的差异,研究用重结晶法来提高替硝唑原料纯度的方法,并用HPLC主成分自身对照法监测精制后的替硝唑纯度:供试品溶液(1g.L-1)的色谱图中如显示杂质峰,各杂质峰峰面积的和不大于对照溶液(1μg.mL-1)的主峰面积,即精制品的纯度达到99.9%以上。结果:确定了精制方法的最佳工艺流程及条件,使替硝唑注射液用药的纯度(不得少于99.0%)提高到99.9%以上,精制平均收率为88.81%。结论:该方法成熟可行,提高替硝唑原料纯度99.9%以上。     

蚯蚓纤溶酶的分离纯化及抗栓活性研究

目的摸索蚯蚓纤溶酶的分离纯化工艺和研究蚯蚓纤溶酶的抗血栓活性。方法采用分步盐析、透析、凝胶色谱和亲和色谱法分离纯化蚯蚓纤溶酶 ;此酶的体内抗栓活性检测采用动静脉旁路血栓形成抑制实验法。结果分离纯化得到的蚯蚓纤溶酶比活高 ,为 16 0 5IU/mg ;蚯蚓纤溶酶的体内血栓形成抑制效果比尿激酶作用显著。 结论该法分离纯化工艺简单 ,特异性好 ,纯化的纤溶酶比活高 ;体内抗栓活性比尿激酶作用显著     

玉米SOD的分离纯化与部分性质研究

目的建立1种高效而简单的玉米SOD分离纯化方法。方法采用初步提取、40%~80%硫酸铵分级沉淀、Cu2+螯合亲和色谱和DEAE-纤维素离子交换色谱处理的方法从玉米中提取SOD。结果获得了比活为1.18×104U/mg的SOD-A组分,活力回收率为11.7%;纯化后的SOD-A组分经PAGE和SDS-PAGE均为一条带;等电聚焦结果表明该组分的等电点为7.2;经鉴定,该组分属于Cu/Zn-SOD。稳定性研究表明,该组分对热、酸碱及常见变性剂(如尿素)的稳定性较好。结论利用Cu2+螯合亲和色谱和DEAE-纤维素离子交换色谱相结合的方法可以纯化得到高比活、稳定性好的玉米SOD-A组分。