壳聚糖神经导管修复犬胫神经缺损的实验研究

目的:探讨壳聚糖涂层并预置引导纤维神经导管修复周围神经缺损的效果。方法:18条杂交犬,平均分成3组,无菌条件下切断左侧胫神经,制成25mm的犬胫神经缺损模型。采用壳聚糖涂层并预置引导纤维的聚乳酸和聚羟基乙酸共聚物(PLGA)神经导管作为实验组A组,以单纯PLGA神经导管为B组,自体神经移植组为C组作对照,每组6条犬。术后12周后通过一般观察,肌电图检查,HE染色和S-100免疫组化观察,再生神经图像分析等评价修复的效果。结果:术后12周各组再生神经已通过神经导管长入远端,肌电图,HE染色和图像分析结果表明A组再生神经轴突数量及再生神经质量优于B组(P<0.05);C组优于A、B组。结论:壳聚糖涂层并预置引导纤维的神经导管能有效修复周围神经缺损。     

不同浓度壳聚糖涂层PLGA材料与许旺细胞相容性研究

目的：研究不同浓度壳聚糖涂层聚乳酸／羟基乙酸共聚物（PLGA）材料与许旺细胞（sc）的生物相容性,为构建适合神经再生的导管支架提供研究基础。方法：采用双酶法培养扩增sc,用质量百分比浓度分别为1％,3％,5％,7％的壳聚糖涂层于PLGA材料。将SC与材料浸提液联合培养,并设立对照作比较,观察细胞生长增殖情况,分别在1,3,5,7天取材MTT法检测细胞相对增殖率。将sC接种在各组材料上,用相差显微镜和扫描电镜观察细胞在材料上粘附和生长情况。结果：材料浸提液对sc生长及细胞形态无明显影响,浓度为1％和3％壳聚糖涂层PLGA材料浸提液在第5天和第7天细胞相对增殖率要高于以5％和7％壳聚糖涂层。sc在壳聚糖涂层PLGA材料上粘附紧密,生长增殖良好。结论：壳聚糖涂层PLGA材料与sc生物相容性良好,采用质量浓度为1％～3％壳聚糖涂层有利于sc粘附增殖,较适合构建神经导管组织工程材料。     

甲壳素涂层PGLA神经导管修复兔面神经缺损的实验研究

目的:探讨甲壳素涂层PGLA神经导管修复兔面神经缺损的效果。方法:成年雄性新西兰兔24只,无菌条件下切断双侧面神经下颊支,制成15mm的兔面神经下颊支缺损模型。左侧用甲壳素涂层聚丙交脂-乙交脂共聚物[poly(L-lactide-co-glycolide),PGLA]神经导管修复;右侧用翻转自体神经修复作为对照。术后5周、10周和14周行大体观察、电生理检查、组织学、电镜观察评价修复效果。结果:术后5周观察到神经导管中有新生轴索通过,再生神经发育不成熟;右侧自体神经修复近段有髓神经纤维均匀疏散分布,远段未见明显再生神经束形成。术后14周左侧再生神经已通过神经导管长入远端,电生理检查结果表明自体神经修复侧再生神经质量优于神经导管修复侧,差异有统计学意义(P<0.01)。自体神经修复再生纤维密度优于神经导管修复侧,差异有统计学意义(P<0.01),但自体神经修复侧近段神经髓鞘部分空泡样变性及脱髓鞘改变,远段再生神经纤维束形成少,面肌联带运动程度较导管修复侧严重。结论:甲壳素涂层PGLA神经导管能有效修复周围神经缺损,有望替代自体神经移植。     

神经导管联合自体变性肌桥修复大鼠周围神经缺损的实验研究

目的探讨PLGA神经导管联合化学萃取的自体骨骼肌肌桥,修复大鼠坐骨神经缺损的可能性。方法SD大鼠45只,建立大鼠左侧坐骨神经缺损模型。随机分为3组．分别采用自体神经（A组）、PLGA神经导管（B组）和PLGA神经导管联合化学萃取自体骨骼肌肌桥（C组）．来修复神经缺损。术后通过大体观察、坐骨神经功能指数测定、腓肠肌湿质量恢复率测定、组织学观察和图像分析对比等,检测神经缺损修复情况。结果神经导管联合化学萃取自体骨骼肌肌桥能促进坐骨神经再生．各项指标均优于单纯神经导管移植．但是效果略差于自体神经移植。结论PLGA神经导管联合化学萃取自体骨骼肌肌桥．对大鼠坐骨神经缺损具有良好的桥梁作用和促神经生长的作用。     

聚乳酸-聚羟基乙酸神经导管和骨髓间充质干细胞构建组织工程神经

[目的]用聚乳酸-聚羟基乙酸共聚物(poly lactide-co-glycolide acid,PLGA)为原料制备新型神经导管,同时对兔骨髓间充质干细胞与PLGA构建组织工程神经的可行性进行观察.[方法]以聚乳酸-聚羟基乙酸共聚物和壳寡糖为原料,采用静电纺丝工艺制备中空的PLGA神经导管.通过扫描电镜观察材料的微观结构,排水法测定材料的孔隙率.将兔的骨髓间充质干细胞(BMSCs)分离培养后与导管共培养,扫描电镜观察细胞在材料上的生长粘附情况,MTT方法检测细胞在材料上的增殖活性.[结果]PLGA神经导管管壁具有疏松多孔结构,管壁纤维直径为18 μm左右,孔隙率为85.4%±1.6%,MTT结果显示导管无细胞毒性.兔骨髓间充质干细胞在导管表面生长良好.[结论]PLGA神经导管具有良好的孔隙率,生物相容性好,是构建组织工程神经的良好材料.     

可降解材料对外周神经的毒性作用研究

目的 研究聚乳酸、聚羟基乙酸和壳聚糖等可降解材料对正常外周神经有无毒性作用，为研制组织工程化神经筛选相容性好的支架材料。方法 取15只SD大鼠，随机分成3组，打开坐骨神经外膜后，分别将聚乳酸、聚羟基乙酸和壳聚糖植入神经束之间。术后7周取材，观察坐骨神经组织结构的变化以及材料在神经组织内引起的异物反应。结果各组的神经干内均有纤维结缔组织轻度增生，但神经束的形态结构无明显变化；各种材料周围均有纤维假膜形成，假膜内有淋巴细胞和巨噬细胞浸润，而包裹壳聚糖的假膜最厚，细胞浸润最明显。结论 聚乳酸、聚羟基乙酸和壳聚糖对外周神经均无毒性，可作为组织工程化神经的支架材料，但壳聚糖引起的异物反应较聚乳酸和聚羟基乙酸明显。     

再造组织工程尿路移行上皮组织的实验研究

目的采用组织工程技术，将培养扩增的膀胱移行上皮细胞与可降解的聚乳酸／聚羟基乙酸共聚物（polylactical／glycolic acid copolymer，PLGA）支架材料复合并植入裸鼠体内进行培育，探讨构建尿路移行上皮组织的可行性。方法取幼兔膀胱，机械分离与酶消化法获取膀胱移行上皮细胞，并在体外行原代培养与传代扩增，将第4～5代扩增的上皮细胞接种至8个PLGA聚合材料的表面作为实验组，4个单纯支架材料作为对照组。实验组：细胞材料复合体培育4周和8周各4个，对照组：单纯支架培育4周和8周各2个，分别植入各组裸鼠体内进行培育，按各时间点取出标本后进行大体观察、组织学及免疫组织化学检测。结果实验组标本经HE和马森染色，4周显示在材料表面形成数层上皮细胞；8周移行上皮细胞进一步增殖形成上皮组织，抗角蛋白免疫组织化学染色，胞浆呈棕黄色阳性。对照组4周和8周经HE染色材料表面见少量成纤维细胞沉积，马森染色呈蓝色，经抗角蛋白免疫组织化学染色为阴性。结论采用组织工程技术可再造人尿路移行上皮组织，为尿路组织工程进一步实验研究奠定了基础。     

血管化人工神经导管修复大鼠坐骨神经缺损的实验研究

目的 研究血管化人工神经导管修复SD大鼠坐骨神经缺损的效果.方法 将成年雌性SD大鼠18只,制成14 mm的大鼠坐骨神经缺损模型,随机分为3组,用不同的材料修复缺损.A组:自体神经修复组;B组:普通PGLA神经导管修复组;C组:血管化人工神经导管修复组.术后行大体观察;术后6、12周行肌电图和再生神经轴突检测,评价神经修复效果.结果 术后6、12周,C组与B组相比,神经传导速度快,动作电位振幅大,再生神经轴突数量多且质量高,差异有显著的统计学意义(P<0.05).结论 血管化人工神经导管能促进神经再生,有效地修复长段神经缺损.     

脉冲等离子体涂层神经导管修复周围神经缺损实验研究

目的:探讨经脉冲等离子体涂层并固定睫状神经营养因子(CNTF)的聚羟基乙酸和聚乳酸共聚物(PGLA)神经导管修复周围神经缺损的效果.方法:应用脉冲等离子方法对PGLA膜片或神经导管表面进行处理,然后固定CNTF.该膜片表面种植人胚胎视神经细胞,经处理的神经导管修复SD大鼠坐骨神经1.5 cm缺损.观察人胚胎视神经细胞在经处理的膜片上生长情况,并用电生理和轴突计数法评价经处理的神经导管内神经再生质量.设立未固定CNTF的PGLA膜片组和未经过脉冲等离子体涂层的神经导管组作为对照组比较.结果:在经处理的PGLA膜片上,人胚胎视神经细胞生长较对照组密集,且发现有轴突延伸相接现象.经处理的PGLA修复大鼠坐骨神经缺损,在1个月和3个月时,均发现神经导管内神经传导速度和再生神经轴突均明显大于对照组(P＜0.05).结论:经脉冲等离子体涂层并固定睫状神经营养因子(CNTF)的PGLA神经导管可能通过CNTF的接触诱导和持续缓释作用,促进周围神经再生.     

用组织工程方法桥接周围神经缺损的实验研究

目的 寻找修复周围神经缺损的新的有效替代材料。方法 将体外培养扩增的许旺细胞接种在生物可吸收材料聚羟基乙酸纤维支架上培养２周,形成一种新的神经桥接物,并对其进行了观察和动物移植试验。结果 发现接种的许旺细胞可在聚羟基乙酸纤维上良好吸附、迁移形成一种新型的、非管状的、具有三维纵向细胞排列和导层粘蛋白通道的组织工程化神经桥接物,用其修复近交的Ｗｉｓｔａｒ大鼠１５ｍｍ坐骨神经缺损时,取得了接近自体神经移     

几丁质桥接周围神经缺损的实验研究

采用几丁质桥接大鼠坐骨神经缺损10mm,通过显微解剖观察、神经电生理测试、组织学检查和具有特异性HRP逆行示踪法鉴定,研究结果用几丁质桥接的大鼠坐骨神经功能恢复满意。     

几丁质室内植入雪旺氏细胞对神经再生影响实验研究

采用生物材料几丁质制成的管道作为神经再生室，对大鼠坐骨神经缺损１２ｍｍ进行桥接。在几丁质室内植入粗品雪旺氏细胞（ｒｓｃ）和不植入ｒｓｃ，并与骨骼肌桥接进行了比较。术后４、８、１２周进行大体观察、显微解剖、神经电生理测试、辣根过氧酶（ＨＲＰ）逆行示踪、组织学检查和电镜观察。结果：植入和不植入ｒｓｃ在术后８周近端再生神经纤维均与远端纤维连接，但不植入ｒｓｃ再生神经的形态、方式和大鼠肢体功能的恢复明显优     

含神经生长因子的几丁质管桥接兔面神经缺损的实验研究

目的 探讨含神经生长因子（ＮＧＦ）的几丁质管在修复兔面神经缺损中的作用。方法 将１６只新西兰兔的两侧面神经上颊支分别造成８ｍｍ的缺损,左侧用管腔内注入ＮＧＦ的几丁质管修复,右侧用自体神经移植修复作对照。术后８、１６周,分别取８只兔进行电生理和超微结构研究。结果 实验侧术后８周,再生神经中有髓和无髓神经纤维排列整齐,有髓神经的髓鞘厚,板层结构清晰;术后１６周,再生神经中有髓和无髓神经纤维数量增加,形     

碱性成纤维细胞生长因子结合静脉套接法修复周围神经缺损的实验研究

目的 探讨碱性成纤维细胞生长因子（ｂＦＧＦ）与静脉套接法修复神经缺损的作用。方法 新西兰大白兔５４只,分成三组,切断兔一侧坐骨神经,用自体静脉桥接。Ａ组于静脉段内注入ｂＦＧＦ溶液０．２ｍｌ（浓度４０００Ｕ／ｍｌ）,Ｂ组注入等量的生理盐水,Ｃ组不注入任何物质。分别于术后１０、３０及１００天取标本行ＨＥ染色,光镜检查。其中１００天组先做传导速度测定,远端再生神经做髓鞘染色,轴突断面做图像分析并与健侧比     

翻转静脉桥接修复周围神经缺损的实验研究

目的：探寻静脉翻转后对引导神经再生的影响，为周围神经缺损的修复提供一种新方法。方法：静脉段取出后，先将其内外翻转成一外膜在内，内膜在外的翻转静脉。然后再用此翻转静脉段桥接修复大鼠自体坐骨神经１０ｍｍ缺损（ＩＯＶＧ）并与常规静脉桥接修复方法（ＣＶＧ）进行对比研究。术后５个月，进行神经电生理及组织形态学检测。结果：与ＣＶＧ相比，ＩＯＶＧ组再生神经纤维的数目、髓鞘厚度、纤维直径以及运动神经传导速度均有提高。结论：翻转静脉桥接修复周围神经缺损是一简单而有效的新方法。     

几丁质及几丁糖与雪旺氏细胞相容性的实验研究

为了观察几丁质及几丁糖对雪旺氏细胞生长的影响，用新生Ｗｉｓｔｅｒ鼠坐骨神经及臂丛神经的雪旺氏细胞接种于几丁质膜片及几丁糖液上，在培养１，３，７天时用光镜及扫描电镜进行观察。发现，几丁质及几丁糖上生长的雪旺氏细胞占９４％，成纤维细胞占６％；对照组雪旺氏细胞占７１％，成纤维细胞占２９％。几丁糖内的细胞数多于几丁质膜片上的细胞数。认为，几丁质及几丁糖与雪旺氏细胞有着良好的组织相容性，几丁糖液优于几丁质膜片，两者均可抑制成纤维细胞的生长。     

细胞治疗促进周围神经再生的实验研究

目的研究注射异体不同细胞于大鼠失神经靶肌肉,对神经再生的促进及防止运动终板变性、促进肌肉功能恢复的作用。方法取1周龄SD乳鼠400只,体重20.0±2.3g,制备雪旺细胞、成肌细胞和肾内皮细胞。将SD成年雌性大鼠36只,体重120～150g,随机分为四组,每组9只。无菌条件下切断左侧坐骨神经,一期神经外膜缝合。术后即于小腿三头肌处注射相应细胞,每7天注射1次,共4次。A组注射1×106/ml单纯雪旺细胞1ml,B组注射1×106/ml雪旺细胞加成肌细胞1ml（雪旺细胞∶成肌细胞为1∶1）,C组注射1×106/ml混合细胞提取液1ml（雪旺细胞∶成肌细胞∶肾内皮细胞为1∶1∶1）,D组注射无血清培养液1ml作对照。术后行大体观察,术后3个月取材行靶肌肉的组织形态学观察,行单位面积运动终板个数检测、单位面积靶肌肉Actin阳性肌纤维个数检测,以及酶组织化学观察。于神经缝合口近、远端检测神经鞘细胞密度和再生神经纤维面积的观察。结果术后1~3个月A、B、C组大鼠患肢由不同程度的足踝部溃疡逐渐愈合,肿胀消退,恢复正常行走;D组患侧下肢肌肉萎缩,足踝溃疡、肿胀,足趾挛缩明显,拖行。术后3个月,单位面积靶肌肉运动终板个数、Actin阳性细胞数、失神经肌肉各种酶活性和再生神经的组织学改变,C组优于A、B组（P〈0.01）。A、B、C组实验结果均明显优于D组（P〈0.01）。结论雪旺细胞、雪旺细胞加成肌细胞、混合细胞提取液均有促进神经再生及防止运动终板变性、促进肌肉功能恢复的作用,混合细胞提取液作用优于雪旺细胞及雪旺细胞加成肌细胞移植。     

神经移植段对神经再生影响的实验研究

为了探讨神经移植段的方向对神经再生的影响，采用硅胶管桥接Ｗｉｓｔａｒ大鼠双侧坐骨神经，一侧硅胶管远端套接顺行神经移植段，另一侧套接逆行神经移植段，术后２，４及６周取材。     

周围神经端侧动脉套接后神经再生的研究

目的研究周围神经端侧动脉套接后神经再生的可能性及其特点. 方法取SD大鼠75只,在股骨中下段切断腓神经,将近断端逆转90度包埋于肌肉中.随机分为5组.A组:将截取的左颈总动脉套接于右侧正常胫神经侧方与腓总神经远端2 mm距离之间,缝合部胫神经外膜不予切除;B组:在胫神经套接部外膜开窗1.0 mm;C组:腓总神经切断14天后再予动脉套接,余同B组;D组:同B组,且于动脉套接部注入神经生长因子(neural growth factor, NGF)1 ml;E组:将腓总神经远端以端侧缝合形式直接缝合于胫神经的一侧,外膜开窗1.0 mm.术后4、8和12周分别行组织学、电镜和神经纤维计数等检查. 结果 4周时C、D及E组周边区域有神经纤维轴突和髓鞘再生,A组则无神经纤维生长; 8周时C、D及E组再生神经纤维较B组多,E组神经纤维较C、D组多,差异有统计学意义(P<0.05); 12周时C、D及E组神经纤维多于B组,差异有统计学意义(P<0.05);C组及D组有较丰富的神经再生,与神经端侧直接吻合的E组差异无统计学意义(P>0.05). 结论神经端侧2 mm距离动脉套接可作为修复周围神经损伤的一种可行方法.     

雪旺细胞和生物蛋白胶构建组织工程神经的初步研究

目的研究雪旺细胞-生物蛋白胶复合物构建组织工程神经,修复周围神经缺损的效果。方法取4周龄新西兰兔瓦勒变性坐骨神经,采用组织块反复种植培养法培养雪旺细胞,分离纯化,并用S-100蛋白免疫组织化学染色鉴定。收集已纯化的雪旺细胞,配制成1×10^6/ml的细胞悬液,加入生物蛋白胶制成雪旺细胞-生物蛋白胶复合物,倒置相差显微镜观察雪旺细胞生长情况。将雪旺细胞-生物蛋白胶复合物填充于硅胶管（A组）和生物膜（B组）内,构建组织工程神经,分别移植桥接修复2月龄新西兰大白兔左侧10mm胫神经缺损（n=8）;C组（n=8）作自体神经移植。术后10周,行实验动物大体观察、神经电生理检测、移植体大体解剖和组织学观察。结果所有动物均存活至实验完成。术后3～4周A组所有动物左侧足底均出现溃疡,B、C组小部分动物出现足底溃疡。10周,神经电生理检测发现A组所有神经移植体未能传导电刺激;B、C组所有移植体均能传导电刺激引起腓肠肌的动作电位,两组动作电位振幅和神经传导速度分别为4.21±0.82mV、33.40±5.40m/s和4.80±1.15mV、36.55±6.43m/s,差异均无统计学意义（P〉0.05）。A组所有神经移植体内未见神经纤维长入,两端均有神经瘤形成;B、C组无明显神经瘤形成,B组整段神经移植体内有神经纤维长入。组织学观察示B、C组再生神经的新生轴突形态无明显区别,均接近正常神经组织。结论用生物膜包裹雪旺细胞-生物蛋白胶复合物,构建组织工程神经,能够促进神经再生,其修复效果接近于自体神经移植,具有临床应用前景。