蛋白质组分析中双向聚丙烯酰胺电泳技术的初步建立与优化

目的：初步建立并优化用于蛋白质组分析的双向电泳技术，提高其分辨率及重复性。方法：以ＨｅｐＧ２细胞为例，对以固相ｐＨ梯度为第一向的双向电泳的关键因素与环节，如样品处理、电泳参数和凝胶浓度进行一系列的优化。结果与结论：本研究采用增溶、排异的裂解法处理样品，选择适中的样品量，用预制固相ｐＨ梯度——ＩＰＧ胶条（ｐＨ＝３～１０）第进行第一向等电聚焦，并选用１２％～１４％的梯度胶进行第二向ＳＤＳ分离，可获得质量较好的双向电泳图谱     

一种脲梯度电泳的简便方法

目的与方法：介绍了了种应用国产ＤＹＹ－Ⅲ小型电泳槽进行脲梯度电泳的方法。结果与结论：该法操作简便,普适性好,能获得很好的样品迁移图谱。可用于蛋白质变性／复性的研究及原基因工程产品复性工艺的探索。     

蛋白质组分析中双向聚丙烯酰胺电泳技术瓣初步建立与优化

初步建立并优化用于蛋白质组分析的双向电泳技术，提高其分辨率及重复性。方法以ＨｅｐＧ２细胞为例，对以固相ＰＨ梯度为第一向的双向电泳的关键因素与环节，如样品处理，电泳参数和凝胶浓度进行一系列的优化。     

蛋白电泳银染显色法

银染显色法是一种电泳染色的新方法。作者经过反复比较,建立了一种实用的操作方法。其检测灵敏度比考马斯亮蓝法高50倍以上,重复性好,本底清晰,易于掌握,所用的试剂都易于得到。本文所介绍的方法特别适用于微量样品的电泳分离或高分辨电泳图谱的检出。     

异烟肼处理前后耻垢分枝杆菌mc2155细胞蛋白双向电泳图谱的差异分析

目的利用蛋白质组学方法,识别异烟肼处理前后耻垢分枝杆菌mc2 155细胞(SM细胞)后差异表达的蛋白质,为进一步深入探讨异烟肼抑制分枝杆菌生长的作用机制及寻找新的抗结核药物作用靶标奠定基础。方法观察不同浓度的异烟肼处理前后耻垢分枝杆菌生长曲线,确定药物处理SM细胞的最佳时间和浓度,并提取在最佳处理时间和浓度条件下的SM细胞总蛋白,采用载体两性电解质pH梯度双向凝胶电泳技术分离异烟肼处理前后耻垢分枝杆菌mc2 155细胞的总蛋白质,用PDuest7.3.1图像分析软件比较分析,以识别差异表达的蛋白质。结果在空白对照组检出159个蛋白斑点,在异烟肼处理组检出221个蛋白斑点,在相对分子质量30 000~90 000和pH值4.5~6.0范围内,异烟肼处理组蛋白斑点数均多于空白对照组。结论异烟肼处理前后耻垢分枝杆菌mc2155细胞的蛋白质组具有差异,提示异烟肼处理后促进了某些特定基因的表达。     

胃粘膜组织蛋白质组双向凝胶电泳技术的初步建立与优化

为建立并优化人类胃粘膜组织蛋白质组分析所需的双向凝胶电泳技术 ,提高其分辨率及重复性。采用刮取手术胃粘膜组织 ,对以固相pH梯度为第一向的双向凝胶电泳的关键因素与环节 ,如样品处理、上样量、电泳参数、凝胶浓度和SDS凝胶电泳染色方法等进行一系列的优化。结果以固相pH梯度———IPG胶条 (pH =3～10 )进行第一向等电聚焦 ,以SDS均一胶 (13% )的垂直电泳为第二向 ,成功地得到了胃粘膜组织的双向凝胶电泳图谱     

肝癌腹水脱落细胞端粒酶活性检测及临床意义

 目的研究肝癌腹水脱落细胞端粒酶活性.方法应用银染TRAP法检测肝癌腹水和非癌性腹水脱落细胞端粒酶活性,并将检测结果与细胞学诊断结果进行比较.结果50例肝癌腹水脱落细胞37例阳性(74.0%),29例非癌性腹水脱落细胞无1例阳性.结论结果提示端粒酶活性检测可能在癌性腹水诊断和鉴别诊断方面有重要辅助诊断价值.     

药代动力学研究用蛋白质多肽药物的放射性标记、分离纯化和鉴定

药代动力学研究用蛋白质多肽药物的放射性标记、分离纯化和鉴定柴彪新刘秀文汤仲明为保证药代动力学研究的可靠性，要求标记蛋白质多肽的放化纯度＞９５％，保持标记多肽的生物活性和高比活度。为此，笔者重点研究了标记蛋白质多肽分离纯化方法，标记混合物中杂质的来源、...     

自组装多肽用于药物递送的研究进展

近年来,自组装多肽（SAP）因具有良好的生物相容性、灵敏的响应性及特定的生物功能而备受关注。SAP在特定情况下能形成规则有序的纳米结构,表现出不同于单分子的优势和特性,已广泛应用于细胞培养、组织工程和药物递送等领域。该文主要对多肽自组装形成的纳米类型及其在药物递送方面的应用进行综述,包括化学小分子及核酸、多肽、蛋白质等生物大分子,总结了SAP作为药物递送载体所面临的挑战,并展望其发展前景。     

低剂量电离辐射诱导小鼠胸腺细胞蛋白的早期表达

采用双向电泳方法检测低剂量Ｘ射线全身照射诱导小鼠胸腺细胞核、细胞浆蛋白的早期表达。结果表明７５ｍＧｙＸ射线照射后４小时细胞核出现４个新蛋白点；５个增强蛋白点；ｌ个减弱蛋白点。胸腺细胞浆出现３个新蛋白点和３个增强蛋白点。这些早期基因表达产物可能参与细胞增殖、分化中的细胞信息传递过程和基因表达调控。     

制备电泳中蛋白质区带定位与染色方法的比较

制备电泳中蛋白质区带定位与染色方法的比较张津辉蒋中华陈惠鹏军事医学科学院放射医学研究所北京１００８５０制备型聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）和非解离聚丙烯酰胺凝胶电泳（非解离ＰＡＧＥ）在实验室中常用于制备少量天然或重组蛋白质以供研究其理化性质和...     

蜡样芽孢杆菌总蛋白双向电泳方法的建立和优化

目的探索建立有效的蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)蛋白质组双向电泳体系,为进一步揭示其促进氧化葡萄糖酸杆菌(Gluconobacter oxydans)产酸的作用机制奠定基础。方法以培养的B.cereus为材料,比较蛋白质制备超声破壁时间、新型细胞裂解液、pH梯度和不同上样量对B.cereus蛋白双向电泳结果的影响。结果与结论采用15 min超声破壁提取B.cereus总蛋白,选用新型蛋白质裂解,用长24 cm、pH 4～7的IPG胶条,采用80μg上样量进行等电聚焦,于60 V 15 min、120 V 6 h条件下进行SDS-PAGE垂直电泳,可以获得背景清晰、重复性好的双向电泳图谱,建立一套用于B.cereus蛋白质组分析的双向电泳方法。     

高效毛细管电泳（HPCE）的分析应用进展

目的：综述毛细管电泳的定量分析应用。方法：通过总结毛细管电泳在蛋白质，核酸等生命物质及各种药物，离子方面的分析应用，展望毛细管电泳的广泛前景。结果与结论：毛细管电泳在分析方面具有以往分析方法无法比拟的优越性。     

甲型副伤寒沙门菌外膜蛋白质组学参考图谱的建立

目的建立甲型副伤寒沙门菌外膜蛋白的蛋白质组学参考图谱。方法甲型副伤寒沙门菌CMCC 50973培养至对数生长末期,收集菌体并破碎提取细菌的外膜蛋白,然后利用双向电泳（2-DE）将蛋白分离。分离后取蛋白点做MALDI-TOF-MS鉴定,根据质谱得到的肽指纹图谱在Mascot数据库中查询出匹配的蛋白。结果在2-DE考马斯亮蓝染色凝胶上取77个蛋白点,鉴定成功了54个点,对应29种蛋白。29种蛋白中定位于外膜为13种,定位未知的有11种,胞质中有5种。结论成功建立了甲型副伤寒沙门菌外膜蛋白的蛋白质组学参考图谱,为进一步筛选疫苗抗原打下了基础。     

术前介入治疗对非小细胞性肺癌细胞凋亡的影响

目的：研究介入治疗对非小细胞肺癌细胞凋亡的影响，探讨介入治疗术前应用的疗效。材料和方法：采用流式细胞仪与免疫组化方法检查介入治疗后行手术35例标本和单纯手术31例标本的细胞凋亡率、p53和bcl-2蛋白表达。结果：介入治疗组的细胞凋亡率明显高于单纯手术组（P＜0．05）；介入治疗组的p53蛋白阳性表达明显低于单纯手术组（P＜0．05）；介入治疗组的bcl-2蛋白阳性表达与单纯手术组相比略有升高，但无显著性差异（P＞0．05）。结论：介入治疗可促进细胞凋亡，近期疗效较好，同时术前介入治疗可诱导肿瘤细胞的多药耐药性产生，疗程不宜过长。     

表阿霉素脂质体的制备与质量评价

目的:制备盐酸表阿霉素脂质体,建立HPLC含量测定方法并优选包封率测定方法.方法:采用薄膜分散-pH梯度法制备盐酸表阿霉素脂质体;采用HPLC测定药物含量;采用葡聚糖凝胶色谱、超滤及透析3种分离方法测定脂质体的包封率.结果:制备的表阿霉素脂质体粒径较小、分布较窄;3种方法测得盐酸表阿霉素脂质体的包封率分别为96.1%,98.4%,92.9%;结论:薄膜分散-pH梯度法适于制备盐酸表阿霉素脂质体,含量测定方法可靠.超滤法可以准确、快速地测定脂质体包封率.     

标记免疫分析在心血管疾病中的临床价值及其进展

放射免疫分析的最大缺陷是放射性污染和不易自动化,现在逐步为非放射性的酶免疫分析、荧光免疫分析和发光免疫分析所取代。为此,综述了标记免疫分析检测甲状腺激素、内皮素、细胞因子、胶原、肌红蛋白(Mb,肌酸激酶同功酶、心肌肌钙蛋白I)、生长激素、C-反应蛋白、肿瘤坏死因子、CA125和神经肽Y等在心血管疾病中的临床价值及其进展。     

用自由电泳法浓集LAK细胞

本文介绍了用细胞自由电流法浓集LAK细胞,实验结果证实确为一种快速、有效的浓集LAK细胞的方法.经细胞自由电泳分离浓集后的LAK细胞活性由分离前的1.9Lu/10~6细胞上升到0.2Lu/10~6细胞,浓集指数为4.8.     

小鼠不同发育阶段脑蛋白质组学初步研究

目的:本研究为国际脑蛋白质组计划(HUPO BPP)的预实验部分,旨在获得可靠的小鼠脑蛋白质组数据库,比较和评估小鼠不同发育阶段的脑蛋白质组,为下一步进行神经系统疾病的蛋白质组学研究奠定基础。方法:样品来源于国际脑蛋白质组委员会所提供的胚胎16 d、出生后7 d及生后60 d等3个发育时期的C57/B l6雌性小鼠脑组织。常规方法提取组织总蛋白,采用固相pH梯度的二维电泳分离和串联质谱分析等进行鉴定,使用M ascot软件搜索Un iProt数据库,鉴定蛋白种类。结果:获得3个不同发育时期小鼠脑组织蛋白质表达谱,完成国际脑蛋白质组计划的预实验所要求的质量控制,鉴定出各发育阶段均有稳定表达的4个蛋白点,包括α烯醇酶、磷蛋白质P19及2个肌动蛋白。经进一步评估后鉴定出随年龄增大而丰度减低的C14orf166同源蛋白、28×103热/酸稳定的磷蛋白、3-巯基丙酮酸硫基转移酶、40S核糖体蛋白S3 a等4个蛋白。其中α烯醇酶及C14orf166同源蛋白曾有文献报道与神经发育及组织发生密切相关。结论:蛋白质组学的方法为脑发育研究提供了有参考价值的数据,其差异蛋白的发现可促进对神经发育机制的了解,并将为后续启动神经系统疾病蛋白质组学研究提供参考。     

电离辐射诱导PC12细胞分化的蛋白质组学分析

目的探索辐射诱导PC12细胞分化的分子机理，筛选神经系统辐射损伤的分子靶标。方法16Gyγ射线照射PC12细胞，照射48h，提取正常与照射后细胞总蛋白，进行双向电泳分析，并对部分差异表达蛋白质进行质谱鉴定。结果电泳中共发现差异表达蛋白质位点876个。鉴定出表达水平增高的蛋白泛素羧端水解酶L1，表达水平降低的蛋白HP1α类似蛋白。结论应用蛋白质组技术鉴定出部分辐射后差异表达蛋白质，为辐射诱导PC12细胞分化的分子机理研究提供了线索。