菝葜皂苷元对结肠癌细胞Lovo黏附和侵袭能力的影响

目的:本研究旨在探讨菝葜皂苷元体外对人结肠癌细胞Lovo增殖、黏附、侵袭的影响。方法:采用MTT法、黏附实验、Transwell小室侵袭实验,观察菝葜皂苷元对人结肠癌细胞Lovo增殖、黏附和侵袭能力的影响。结果:①菝葜皂苷元有抑制人结肠癌细胞Lovo增殖的作用,与对照组比较,随着药物浓度的增大,其对细胞的抑制率也明显增大(P<0.01)。②菝葜皂苷元作用人结肠癌细胞Lovo后,细胞的黏附能力明显降低(P<0.01)。③菝葜皂苷元作用人结肠癌细胞Lovo 24h后,侵袭的细胞数较对照组明显减少(P<0.01)。结论:菝葜皂苷元对人结肠癌细胞Lovo的增殖具有抑制作用;菝葜皂苷元能抑制人结肠癌细胞Lovo的黏附能力和侵袭能力。     

转酮醇酶1在人结肠癌细胞株LoVo增殖中的作用

目的 探讨转酮醇酶1(TKTL1)在体外培养的人类结肠癌细胞株(LoVo)生长增殖中的作用.方法 构建针对TKTL1 mRNA 的小干扰RNA(siRNA)质粒,将该质粒转染LoVo细胞;采用实时定量RT-PCR检测转染前后LoVo细胞转酮醇酶基因家族中转酮醇酶(TKT)、TKTL1、转酮醇酶2(TKTL2) mRNA表达水平的变化,通过流式细胞术和MTT法检测转染前后LoVo细胞周期和细胞增殖的改变.结果 转染组(携带有pEGFP-C1-U6/TKTL1)、质粒对照组(携带有pEGFP-C1-U6/UC)和未转染组(未转染细胞)中TKT和TKTL2 mRNA的表达水平差异无显著性意义(P>0.05).转染组细胞中TKTL1的表达水平与质粒对照组和未转染组相比,明显下调,且转染组LoVo细胞总转酮醇酶活性明显下降,细胞增殖明显被抑制,LoVo细胞被阻滞在G0/G1期.结论 TKTL1在人类结肠癌细胞(LoVo细胞系)的生长增殖中起重要作用,TKTL1可能成为肿瘤治疗的新靶点.     

猫爪草皂苷对结肠癌LoVo细胞增殖和凋亡影响的研究

目的:探讨猫爪草皂苷(Radix ranunculus ternate saponins,RRTS)对人结肠癌LoVo细胞增殖和凋亡的作用及其机制。方法:按猫爪草皂苷浓度分为1、10、100、500μg/mL4个处理组和对照组(未加猫爪草皂苷),处理LoVo细胞不同时间后,倒置显微镜观察细胞形态;采用MTT法检测细胞增殖的抑制情况;荧光染色观察细胞凋亡;流式细胞仪(FCM)进行细胞周期分析;采用细胞免疫化学检测凋亡相关基因Bax、Bcl-2、Caspase-3表达的变化。结果:与对照组比较,猫爪草皂苷可使细胞明显变圆、体积缩小、脱壁细胞增多;MTT法检测显示,猫爪草皂苷处理组随着浓度的增加和作用时间延长,LoVo细胞增殖的抑制作用增强,并呈时间、剂量依赖性(P<0.001);荧光显微镜下部分细胞发生凋亡形态学改变,对照组和4个猫爪草皂苷不同浓度处理组凋亡率分别为(3.57±1.56)%、(8.14±1.02)%、(11.11±2.30)%、(17.59±0.95)%和(25.10±1.23)%;流式细胞术显示,G1期细胞增加,而停滞在S、G2期细胞减少;细胞免疫化学检测发现,经猫爪草皂苷作用24h后,LoVo...     

尼妥珠单抗联合化疗药物对人结肠癌细胞株LoVo的实验研究

目的探讨表皮生长因子受体(EGFR)的单克隆抗体尼妥珠单(nimotuzumab,h-R3)与化疗药物联合对结肠癌细胞株LoVo的作用,初步探讨其可能的作用机制。方法采用MTT法测定不同药物单药、两药联合分别对结肠癌细胞株LoVo的IC50值;计算不同药物联合的q值,以确定药物联合的作用;流式细胞仪检测不同药物单药或者联合对细胞周期分布及凋亡比例的影响。结果联合h-R3能显著提高伊立替康对LoVo细胞的细胞抑制率,诱导更多肿瘤细胞发生凋亡以及产生G0/G1期、G2/M期阻滞,与5-氟尿嘧啶联合具有类似的作用,但较伊立替康不明显,而与奥沙利铂联合无明显增效作用。结论h-R3通过协同或相加作用提高伊立替康、氟尿嘧啶的细胞杀伤作用,其机制与促进细胞凋亡和影响细胞周期分布有关,奥沙利铂联合对LoVo细胞无明显增效作用。为进一步的体内及体外实验提供了一定的指导作用。     

双歧杆菌完整肽聚糖体外诱导大肠癌Lovo细胞凋亡的实验研究

目的 探讨双歧杆菌表面分子完整肽聚糖(whole peptidoglycan,WPG)的抗肿瘤作用及其机制.方法 体外培养大肠癌Love细胞,应用MTT法、流式细胞术观察WPG对大肠癌Lovo细胞的增生抑制作用及对细胞的凋亡诱导作用.结果 经WPG处理过的大肠癌Lovo细胞生长被抑制,且具有剂量和时间依赖性;早期凋亡细胞明显增加,与空白组比较有显著性差异(P<0.01).结论 WPG能够抑制大肠癌Lovo细胞的增生,其机制与诱导癌细胞早期凋亡有关.     

阿司匹林对大肠癌LoVo细胞增殖、凋亡的影响及机制

目的 观察阿司匹林对人结肠癌细胞系LoVo细胞增殖、凋亡的影响及探讨可能的作用机制.方法 用不同浓度阿司匹林处理体外培养的LoVo细胞24、48、72h,MTT法检测其对结肠癌LoVo细胞增殖的影响,倒置显微镜下观察细胞的形态学变化,阿司匹林（浓度分别为2、4、8mmol/L）分别处理LoVo细胞48h,行流式细胞仪检测细胞凋亡,分光光度计检测easepase-3相对活性,激光共聚焦显微镜检测细胞内Ca2＋浓度的变化,Western blot法检测bcl-2、bax基因表达情况.结果 阿司匹林（浓度1～10mmol/L）能显著抑制LoVo细胞增殖,呈剂量、时间依赖性;倒置显微镜下可观察到典型的细胞凋亡形态;阿司匹林处理LoVo细胞48h后,细胞凋亡率分别为11.4％、22.3％、37.1％,对照组凋亡率为2.4％;阿司匹林处理细胞48h后,casepase-3相对活性显著增加;阿司匹林能上调bax的表达并下调bcl-2表达,呈剂量依赖性.结论 阿司匹林均能抑制LoVo细胞的增殖并诱导其凋亡,其作用机制可能为增加细胞内Ca2含量、casepase-3活性及上调bax的表达并下调bcl-2表达.     

猫爪草皂苷对结肠癌LoVo细胞凋亡和细胞内Ca~(2+)浓度的影响

目的:探讨猫爪草皂苷(Radix ranunculus tenate saponins,RRTS)对人结肠癌LoVo细胞增殖和凋亡的调控作用及其机制.方法:按猫爪草皂苷浓度分为1、10、100、500 μg·ml-14个处理组和对照组(未加猫爪草皂苷),处理LoVo细胞不同时间后,倒置显微镜观察细胞形态;采用MTT法检测细胞增殖的抑制情况;流式细胞仪(FCM)进行细胞周期分析并计算凋亡率;激光共聚焦(LCSM)测定皂苷对LoVo胞内Ca2+浓度的影响.结果:与对照组比较,猫爪草皂苷处理组可使细胞明显变圆、体积缩小、脱壁细胞增多;对LoVo细胞的增殖抑制作用增强,随着浓度的增加凋亡率增加,可看出细胞阻滞在G1期,随着给药浓度的增加,细胞凋亡峰(AP峰)越来越明显.作用于LoVo细胞4 h后,胞内Ca2+明显上升,4 h.8 h时略有下降,但仍维持在较高水平(P<0.001).结论:猫爪草皂苷具有明显抑制人结肠癌LoVo细胞增殖和诱导凋亡作用,引起凋亡的途径可能与Ca2+的增加有关.     

氯硝柳胺对人结肠癌SW480细胞生长及凋亡的影响

目的:研究氯硝柳胺对人结肠癌SW480细胞生长、周期及凋亡的影响,并探讨其可能的机制。方法:CCK-8法检测氯硝柳胺对SW480细胞生长的抑制作用,流式细胞术检测氯硝柳胺对SW480细胞周期及凋亡的影响,Western Blot法检测氯硝柳胺对SW480细胞蛋白水平的调控。结果:氯硝柳胺对SW480细胞生长有显著抑制作用,其半抑制浓度为4.6μmol/L。与对照组相比,实验组SW480细胞G0/G1期比例增加,S期细胞比例减少,凋亡率增加(P<0.05)。实验组β-Catenin蛋白的表达较对照组下调(P<0.05),Cyclin D1表达无显著差异(P>0.05)。结论:氯硝柳胺可抑制结肠癌SW480细胞的生长,将其阻滞在G0/G1期,促进细胞凋亡,抑制Wnt/β-Catenin通路,是一个具有潜力的抗结肠癌药物。     

TRAIL诱导结肠癌SW480细胞的凋亡

目的探讨TRAIL对结肠癌SW480细胞凋亡的影响。方法实验分rmhTRAIL处理组和阴性对照组。MTT法检测细胞增殖活性,流式细胞术检测细胞凋亡情况,Western Blot检测Bcl-2、Bax蛋白表达变化。结果 TRAIL能明显呈浓度依赖性地抑制结肠癌SW480细胞增殖（P〈0.05）,SW480细胞经rmhTRAIL处理后,流式细胞术分析显示其凋亡率明显上升（P〈0.01）,Western Blot检测Bcl-2、Bax蛋白表达情况,显示Bcl-2蛋白表达明显下降,而Bax蛋白的表达明显升高（P〈0.05）。结论 TRAIL可以诱导结肠癌细胞的凋亡,其机制可能与下调Bcl-2蛋白表达、上调Bax蛋白表达有关。     

多西他赛对结肠癌LoVo细胞增殖的抑制作用

目的探讨多烯他赛治疗结肠癌的作用机制。方法采用不同浓度的多烯他赛处理结肠癌LoVo细胞后,应用四唑蓝比色试验检测细胞增殖,采用端粒重复扩增一微孔板杂交法检测端粒酶活性,分别用琼脂糖凝胶电泳和TUNEL方法检测细胞凋亡,采用流式细胞仪测细胞周期。结果多烯他赛对结肠癌LoVo细胞增殖具有较强的抑制作用。多烯他赛能够抑制端粒酶活性,可诱导结肠癌细胞凋亡,均呈浓度和时间依赖性。结论多烯他赛抑制结肠癌细胞恶性增殖与抑制端粒酶活性、诱导凋亡及细胞周期阻滞有关。     

shRNA真核表达质粒介导的RNA干扰对人结肠癌LoVo细胞mTOR基因表达的抑制作用

目的探讨shRNA真核表达质粒介导的RNA干扰技术对人结肠癌LoVo细胞哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）基因表达的抑制作用。方法合成编码shRNA的特异性DNA序列，连接到质粒pGenesil-1，采用脂质体Lipofectamine^TM 2000转染LoVo细胞，G418筛选4周。根据转染质粒的不同，实验分为3组：A组（正常对照组）为未转染的正常培养LoVo细胞，B组（阴性对照组）为转染pGenesil-1空载体质粒，C组（阳性实验组）为转染质粒pGenesil-1-mTOR。采用逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）法检测LoVo细胞mTOR基因mRNA表达，免疫印迹（Western blot）法检测mTOR蛋白表达。结果双酶切产物琼脂糖凝胶电泳显示，重组质粒pGenesil-1-mTOR和空载体质粒pGenesil-1分别切出一条410、350bp大小的片段。G418筛选的转染细胞在倒置荧光照相显微镜下可观察到绿色荧光。C组LoVo细胞mTOR基因mRNA表达水平明显低于A组（P〈0.05），表达抑制率为73．0％。C组LoVo细胞mTOR蛋白表达水平明显低于A组（P〈0．05），表达抑制率为72．5％。结论shRNA真核表达质粒介导的RNA干扰可明显抑制人结肠癌LoVo细胞mTOR基因表达。     

常春藤皂苷元对结肠癌细胞LoVo增殖、粘附、侵袭和迁移能力的影响

目的 常春藤皂苷元体外对人结肠癌细胞LoVo增殖、粘附、侵袭和迁移能力的影响.方法 采用MTT法、粘附实验、Transwell小室侵袭实验、划痕实验,观察常春藤皂苷元对人结肠癌细胞LoVo增殖、粘附、侵袭和迁移能力的影响.结果 ①常春藤皂苷元有抑制人结肠癌细胞LoVo增殖的作用,与对照组比较,随着药物浓度的增大,其对细胞的抑制率也明显增大(P＜0.01),呈浓度依赖性.②常春藤皂苷元作用人结肠癌细胞LoVo后,细胞的粘附能力明显降低(P＜0.01),随着浓度的增大和时间的推移,呈现抑制率递增的结果.③常春藤皂苷元作用人结肠癌细胞LoVo后,侵袭的细胞数较对照组明显减少(P＜0.01),浓度越高,侵袭的细胞数量越少.④常春藤皂苷元作用人肠癌LoVo细胞后,细胞愈合的程度有明显的分组差别,浓度越高,愈合度越差,表明迁移能力受到很大影响.结论 常春藤皂苷元对人结肠癌细胞LoVo的增殖具有抑制作用;常春藤皂苷元能抑制人结肠癌细胞LoVo的粘附能力、侵袭能力和迁移能力.     

麝香保心丸对人结肠癌细胞LoVo释放碱性成纤维细胞生长因子和细胞周期的影响

目的探讨麝香保心丸对培养的人结肠癌细胞LoVo分泌碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)和细胞周期的影响。方法分别用含药血清和药液培养细胞,用酶联免疫吸附法检测上清液中bFGF含量,流式细胞仪测细胞周期。结果除G2／G1小牛血清组高于其他组以外,各组之间其余指标无显著差异。结论麝香保心丸对人结肠癌细胞LoVo分泌bFGF和细胞周期无影响。     

澳洲茄胺诱导肠癌HCT-116细胞凋亡的实验研究

目的?通过研究中药灌肠方中的有效成分澳洲茄胺对肠癌HCT-116细胞凋亡及相关基因表达的影响,探讨澳洲茄胺抑制肠癌细胞增殖的作用机制。方法?通过实时无标记细胞分析仪检测澳洲茄胺对HCT-116细胞增殖的影响;流式细胞仪检测HCT-116细胞凋亡;qPCR法检测凋亡相关基因Bax、Survivin的mRNA表达水平;Western blot实验检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Bcl-xl、Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9、PARP以及PI3K/Akt信号通路蛋白PI3K、Akt表达情况。结果?实时无标记细胞分析检测法证实澳洲茄胺对肠癌HCT-116细胞的生长有抑制作用,且随药物浓度、给药时间的增加而增强;流式检测发现随药物浓度的增加,其凋亡增多;qPCR法证实澳洲茄胺能上调Bax、下调Survivin的mRNA表达;Western blot法检测证实澳洲茄胺上调Bax蛋白,促进Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9、PARP蛋白活化,下调Bcl-2、Bcl-xl蛋白表达,升高Bax/Bcl-2表达比值,并且抑制PI3K、Akt蛋白活化。结论?澳洲茄胺抑制肠癌HCT-116细胞增殖,通过抑制PI3K/Akt信号通路及调控Caspase家族、Bcl-2家族、Survivin、PARP的表达,诱导细胞凋亡,对凋亡的2条途径均有作用,即线粒体途径和死亡受体途径。      

复方肠泰对人结肠癌SW480细胞凋亡caspase3途径的影响

目的:;考察复方肠泰(FFCT)对人结肠癌细胞SW480的凋亡作用与主要作用途径。方法:;建立人结肠癌细胞SW480 裸鼠种植瘤模型,观察FFCT对移植瘤瘤质量和凋亡的影响和 SW480 结肠癌细胞内 caspase3 的活性,并考察抑制剂AcDEVDCHO 对 SW480 凋亡的影响。结果:; FFCT可以明显提高移植瘤的早期凋亡率和晚期凋亡率（P<0.05,P<0.01）;经不同时间的FFCT培养液作用后的SW480 结肠癌细胞caspase3 酶活性均有显著性增加,呈先增高而后逐渐降低的趋势;加了caspase3抑制剂的 FFCT 各浓度及不同时间组结肠癌细胞SW480的早期凋亡率与空白组比较均有所增加,细胞的死亡率与晚期凋亡率的总和也有所增加,呈一定的量效、时效关系。结论:;caspase3 途径是 FFCT 促进人结肠癌细胞SW480凋亡的重要途径,但不是唯一途径,其它的作用途径有待进一步的研究探讨。      

Hrs对结肠癌细胞凋亡及增殖作用的研究

目的：研究在结肠癌细胞系中Hrs与凋亡及增殖的关系。方法在结肠癌细胞系HCT?116和SW?480中下调Hrs蛋白表达,通过Incucyte、MTT法、软琼脂试验、FACS检测细胞凋亡与增殖情况。结果下调Hrs表达后,结肠癌细胞系HCT?116和SW?480凋亡明显增加,增殖及细胞活性均显著受到抑制。结论 Hrs与结肠癌细胞凋亡密切相关。     

用转染m2胆碱受体基因的CHO细胞观察知母皂甙元的作用

目的 观察知母甾体皂甙元(sarsasapogenin,SAR)对M2受体亚型的调节作用。 方法采用转染了m2胆碱受体基因的CHO细胞为模型,以非选择性的3H-QNB作单点放射配基结合分析。 结果CHO m2细胞受体密度在培养48h达顶峰,以后呈进行性下降。SAR对下降的CHO m2细胞M2受体密度有明显的上调作用,这一作用有一定浓度依赖性。结论SAR对下降的M2受体密度具有上调作用。     

米非司酮对体外培养子宫肌瘤细胞的作用

目的了解米非司酮对体外培养子宫肌瘤细胞的作用。方法采用MTT法检测应用米非司酮前后子宫肌瘤细胞的体外生长情况。结果米非司酮对子宫肌瘤细胞的抑制作用仅在达到一定浓度(10-5mol/L)时才表现出来，并且随着浓度的增加，其抑制作用呈线性增强。结论此结果可为临床应用米非司酮治疗子宫肌瘤时的剂量选择提供参考依据。     

结肠肿瘤细胞株体外培养过程中的自发性凋亡的观察

研究了Ｖ２３５Ｅ、Ｖ２３５Ｌ、Ｖ４１１三个结肠肿瘤细胞株的细胞凋亡现象。ＤＮＡ电泳分析和ＡＯ／ＥＢ荧光染色形态学检查表明，这三个肿瘤细胞株均存在自发性凋亡。提示肿瘤细胞，包括恶变的癌细胞仍可保留与增殖相对立的凋亡过程。肿瘤细胞存在自发性细胞凋亡的观察，有助于更好地认识肿瘤的发生和发展过程。此外，这些细胞株也为进一步研究细胞凋亡的诱导及其调控提供了有用的细胞模型。     

用转染m2胆碱受体基因的CHO细胞观察知母皂甙元的作用

目的 观察知母甾体皂甙元（ｓａｒｓａｓａｐｏｇｅｎｉｎ,ＳＡＲ）对Ｍ２受体亚型的调节作用。方法 采用转染了ｍ２胆碱受体基因的ＣＨＯ细胞为模型,以非选择性的＾３Ｈ－ＱＮＢ作点放射配基结合分析。结果 ＣＨＯｍ２细胞受体密度在培养４８ｈ达顶峰,以后呈进行性下降,ＳＡＲ对下降的ＣＨＯｍ２细胞Ｍ２受体有有显的上调作用,这一作用有一定浓度依赖性。结论 ＳＡＲ对下降的Ｍ２受体密度具有上调作用。