烧伤早期切痂后烧伤血清对内皮单层通透性的影响

目的探讨烧伤早期切痂对烧伤后内皮细胞损伤的防治作用。方法14例严重烧伤病人随机分为烧伤后48h内早期切痂组(A组)和烧伤后非早期切痂组(B组),于伤后1,3,7d收集烧伤血清。采用人脐静脉内皮细胞单层所构成的内皮单层通透屏障模型,应用99锝标记白蛋白,观察烧伤血清对内皮细胞活力和内皮单层通透性的影响。结果A组伤后1,3和7d烧伤血清刺激内皮细胞后,内皮细胞单层通透性较B组降低,而内皮细胞活力升高。结论严重烧伤病人血清可降低内皮细胞活力,增加内皮单层通透性;烧伤早期切痂可减轻烧伤血清对内皮细胞的损伤,从而有利于防治早期脏器损害。     

血小板激活因子对体外灌注内皮细胞单层通透性的影响

我们建立了体外灌注内皮细胞单层研究血管通透性的方法,可以测定滤过系数(Kf)以及蛋白质渗透压反射系数(σ)。用Hanks平衡盐液(HBSS)或5 g/L白蛋白HBSS灌注致密内皮单层,Kf值分别是10.1±0.75和3.6±0.75μl·min~(-1)·cm~(-2)·kPa~1(n=3,±s)、说明白蛋白可降低内皮单层对水和小分子物质的通透性。血小板激活因子(PAF)10~8 mol/L作用30 min,用HBSS或白蛋白溶液灌注时Kf值分别增加到193.1％和133.3％。对照组蛋白清除率和σ分别是8.0±3.22μl·min~(-1)·cm~(-2)和0.37±0.09,PAF组分别是12.2±2.95μl·min~(-1)·cm~(-2)和0.18±0.06,相差显著,说明PAF可增加内皮单层的通透性。计算机图像分析表明,PAF作用后内皮细胞面积减小,形状因子、细胞间距增大,提示内皮细胞发生了收缩,这可能是PAF增加血管壁通透性的重要机制。     

层流状态下高、低剪切应力对兔动脉内皮通透性的影响

目的研究层流状态下高、低剪切应力对动脉内皮通透性的影响。方法在兔(饲以普通和高脂食)甲状腺动脉分支处的头侧结扎左颈总动脉,测量两侧颈总动脉血流量,明胶灌注,测量其直径,计算剪切应力,依万斯蓝和苏丹Ⅳ动脉染色,辣根过氧化物酶法电镜观察。结果术后14d左侧颈总动脉剪切应力低于假手术组左侧的70.4%和实验组右侧的89.0%(P<0.01),实验组右侧高于假手术组右侧的156.2%(P<0.01)。实验组左侧颈总动脉蓝染区内皮连接间的完全开放型的百分率(69.4%和78.5%)明显高于右侧(36.3%和53.9%),而闭合型(6.1%和3.9%)明显小于右侧(20.5%和17.9%)(P<0.01)。左侧颈总动脉蓝染区标记HRP小胞的密度(2.09±0.77)/μm2和(2.11±0.63)/μm2明显高于右侧(1.67±0.12)/μm2和(1.89±0.33)/μm2(P<0.01)。结论层流状态下高、低剪切应力变化,尤其低剪切力更易导致内皮细胞对大分子物质通透性增高和动脉硬化形成。     

Sin-1对内皮细胞生长及细胞骨架的影响

目的：通过观察一氧化氮（Nitric oxide,NO)供体sin-1对内皮细胞生长及细胞骨架的影响,来探讨NO对内皮细胞单层通透性的可能的影响机制。方法：用不同浓度sin-1作用于培养的人脐静脉内皮细胞株ECV304细胞,观察其对细胞生长及细胞骨架蛋白f-actin的影响。结果：6.25-100μmol/L的sin-1可不同程度抑制内皮细胞的生长,50-100μmol/L浓度的sin-1可致细胞死亡。100μmol/L浓度的sin-1作用4h后,f-actin的含量明显降低。结论：在某些情况下局部或血液中NO浓度异常增高时,可能通过抑制内皮细胞的生长、直接导致内皮细胞死亡或使细胞骨架蛋白f-actin的含量下降等途径,使血管的通透性增加。     

山莨菪碱对血小板活化因子致肺微血管内皮细胞形态和骨架变化的影响

目的观察血小板活化因子(PAF)对培养肺微血管内皮细胞形态、单层通透性、肌动蛋白骨架的影响及山莨菪碱的干预作用.方法 HE染色观察PAF对体外培养大鼠肺微血管内皮细胞(RPMVEC)的形态影响;用针头式滤器观察PAF 对RPMVEC单层通透性的影响;用免疫细胞化学的方法观察PAF 对RPMVEC F-肌动蛋白(F-actin)分布的影响;并观察山莨菪碱干预后的变化.结果 PAF浓度大于0.1 mg/L作用48 h内观察到细胞脱落和破裂.10 mg/L PAF 120 min内可使RPMVEC单层通透性增高、F-actin解聚,山莨菪碱可抑制上述变化.结论 PAF引起RPMVEC脱落和破裂呈时间和剂量依赖性;PAF引起内皮单层通透性的增高的机制与F-actin解聚密切相关;山莨菪碱可抑制PAF引起RPMVEC细胞脱落、单层通透性增高和F-actin解聚,对PAF引起的RPMVEC损伤有一定保护作用.     

卡托普利、地尔硫卓、多巴酚丁胺对主动脉血管内皮细胞单层通透性的影响

目的：探讨血管紧张素转换酶抑制剂卡托普利、钙离子拮抗剂地尔硫　和β－激动剂多巴酚丁胺对大鼠主动脉血管内皮细胞单层通透性的影响。方法：大鼠主动脉内皮细胞（ＡＥＣ）培养采用陈思锋的无创性分离法分离培养；将ＡＥＣ培养在混合纤维素酯微孔滤膜上，培养８ｄ后进行通透性测定。长有ＡＥＣ的滤膜分别用卡托普利、地尔硫　和多巴酚丁胺处理４ｈ，置于灌注装置上，用含异硫氰酸荧光素标记白蛋白的高脂血灌注，测定收集液的量和白蛋白浓度，同时采用酶联法测定滤出液的总胆固醇（Ｔｃｈ）、甘油三酯（ＴＧ）、载脂蛋白Ａ和Ｂ（ａＰＡ、ａＰＢ）浓度。结果：三种药物均可降低ＡＥＣ对水、Ｔｃｈ、ＴＧ、ａＰＡ和ａＰＢ的通透性，其中多巴酚丁胺作用最为显著。而对白蛋白清除率除地尔硫　作用较显著外，其他两药均无明显作用。结论：卡托普利、地尔硫　和多巴酚丁胺可减少脂类和载脂蛋白渗入血管内皮下，从而预防和改善动脉粥样硬化。     

腺病毒介导的血管内皮生长因子体外转染心肌细胞的研究

目的:构建携带人血管内皮生长因子(VEGF)基因的重组腺病毒载体,并转染体外培养的心肌细胞,检测VEGF的表达.方法:将人源性的VEGF165cDNA正向插入到腺病毒载体PDC315,构建重组质粒,通过脂质体共转染293细胞,经同源重组获得携带人VEGF165基因的重组腺病毒,通过PCR扩增法鉴定所构建的腺病毒,扩增并测定滴度后,体外转染培养的心肌细胞,利用ELISA、Western印迹分析等方法检测VEGF在心肌细胞中的表达.结果:人VEGF165cDNA成功地正向插入到PDC315载体中,以重组病毒基因组DNA为模板,同时扩增出了610bp的VEGF165cDNA基因片段,证实了所构建病毒的正确性,病毒滴度为2.8×108 pfu/ml,Ad VEGF165体外转染心肌细胞3 d后,在培养细胞的上清液及细胞内检测到了VEGF的表达.结论:成功构建了表达人VEGF 165基因的腺病毒载体,体外转染心肌细胞后能够满意表达VEGF,为基因治疗心肌缺血奠定基础.     

Effects of PAF and PAF antagonist WEB 2170 on relaxation of vascular endothelium after brief deoxygenation and reoxygenation

ＥｆｆｅｃｔｓｏｆＰＡＦａｎｄＰＡＦａｎｔａｇｏｎｉｓｔＷＥＢ２１７０ｏｎｒｅｌａｘａｔｉｏｎｏｆｖａｓｃｕｌａｒｅｎｄｏｔｈｅｌｉｕｍａｆｔｅｒｂｒｉｅｆｄｅｏｘｙｇｅｎａｔｉｏｎａｎｄｒｅｏｘｙｇｅｎａｔｉｏｎＨａｎＹａｌｉｎｇ（韩雅玲）；Ｃｈｅ...     

尿毒症患者血清对大鼠肺微血管内皮细胞单层通透性和骨架蛋白的影响

目的 观察尿毒症患者血清对培养大鼠肺微血管内皮细胞(RPMVEC)单层通透性、肌动蛋白骨架(F-肌动蛋白)的影响,探讨尿毒症患者血清对肺微血管内皮细胞损伤的机制.方法 体外培养大鼠RPMVEC并鉴定;用针头式滤器观察尿毒症患者血清对RPMVEC单层通透性的影响;F-actin用流式细胞仪测定.结果 健康对照组6、12 h单层通透性系数分别为(0.0382 4±0.0022)、(0.0393±0.0016)ml·min-1·cm-2·kPa-1;尿毒症患者血清6、12 h单层通透性系数分别为(0.0687±0.0014)、(0.0772±0.0031)ml·min-1·cm-2·kPa-1;流式细胞仪测定F-肌动蛋白的值分别为:阴性对照组10.60±3.3、正常健康对照组1233.34±13.92、尿毒症血清组(6 h)712±51、尿毒症血清组(12 h)613.31±42.81;实验发现尿毒症患者血清100μl作用于RPMVEC 6、12 h可使RPMVEC的单层通透性增高(P<0.01);F-肌动蛋白解聚(P<0.01),且二者呈负相关(r=-0.927,P<0.01).结论 尿毒症患者血清作用于RPMVEC一定时间,可引起RPMVEC单层通透性的增高与F-肌动蛋白解聚.尿毒症患者血清引起内皮单层通透性的增高的机制与F-肌动蛋白解聚密切相关.     

肿瘤坏死因子对血管内皮细胞合成组织因子的影响

胎儿脐静脉内皮细胞(EC)培养。应用光镜、电镜进行鉴定。探讨人重组TNF对1～3代EC合成组织因子的调节作用。TNF与EC孵育4h,EC内组织因子的活性明显增加(P<0.05),至12h,升至峰值,随后逐渐减少。EC内组织因子的合成还随TNF浓度的增加而增多。表明TNF能促进EC内组织因子的合成,并有浓度和时间的依赖性。提示TNF在感染性休克时播散性血管内凝血的发病中可能起重要作用。     

抗血管内皮生长因子多位点核酶的合成及其体外切割作用

目的: 设计合成血管内皮生长因子多位点核酶,探讨其对靶RNA的切割作用.方法: 利用计算机辅助设计针对VEGF165的3个单位点核酶 (Rz1, Rz2, Rz3) 和联合型多位点核酶 (Rz123),构建其自剪切转录载体,观察多位点核酶对靶RNA的切割作用.结果: 构建的多位点核酶自剪切转录载体在体外转录中,顺式核酶发生了自身剪切,并释放出正确的目的核酶,多位点核酶可切割靶RNA,且效率高于单一核酶,其切割效率分别为 (37±10)% (Rz1), (51±8)% (Rz2 ), (68±15)% (Rz3) 和(88±11)% (Rz123).结论: 抗血管内皮生长因子多位点核酶体外可联合切割靶RNA,具有较高的生物活性.     

Ang-1对高糖环境中猴脉络膜-视网膜内皮细胞单层通透性的影响

目的：利用猴脉络膜-视网膜内皮细胞建立内皮细胞（EC）单层模型,观察高浓度葡萄糖及血管生成素-1（Ang-1）对该模型通透性的影响．方法：待EC于孔径0．8μm的聚碳酸酯微孔滤膜上形成致密单层后分3组进行培养：对照组（DMEM培养基含25mmol／L葡萄糖）、高糖组（DMEM培养基含30mmol／L葡萄糖）、Ang-高糖组（DMEM培养基含30mmol／L葡萄糖＋0．25mg／L Ang-1）．于1,3,5,7d4个时间点,以含白蛋白1g／L的D—Hanks液灌注滤膜,检测蛋白质渗透压反射系数（8）及滤过系数（K1）;并于5d和7d利用琼脂糖凝胶电泳检测DNAladder．结果：3,5,7d时,高糖组EC单层的通透性高于对照组（P〈0．01）;Ang-高糖组与对照组之间EC单层的通透性无差异（P〉0．05）．高糖组EC的琼脂糖凝胶电泳在5d及7d均出现DNA ladder,对照组及Ang-高糖组未见DNA ladder．结论：高糖能够促进细胞凋亡,增加EC单层通透性;Ang-1能抑制EC的凋亡,对抗高糖所致的EC单层通透性增高．     

豚鼠耳蜗微血管内皮细胞的体外通透性

目的　研究豚鼠耳蜗微血管内皮细胞的体外通透性特征。方法　 (1)用小池技术建立起内皮细胞通透性的体外模型 ;(2 )研究该体外模型耳蜗微血管内皮细胞的跨细胞电阻及对12 5I 牛血清白蛋白的通透曲线 ,并与脑及肺的内皮细胞通透性进行对照。结果　 (1) 3种内皮细胞的体外模型中加入12 5I 牛血清白蛋白后 ,贝克 时间变化图均呈抛物线型上升曲线 ,其通透性从小到大依次为脑、耳蜗、肺内皮细胞 ,各组间相差显著 (P <0 .0 1) ;(2 )耳蜗、脑及肺 3种内皮细胞在培养增殖过程中其跨细胞电阻呈动态增加过程 ,以 5× 10 4/cm2 的细胞密度接种时 ,7d左右电阻均到达峰值 ,其跨细胞电阻峰值大小分别为脑 (2 4 4 .7± 4 6 .9Ω/cm2 ) >耳蜗 (118.9± 18.5Ω/cm2 ) >肺 (4 6 .6± 5 .9Ω/cm2 ) ,且各组间相差显著 (P <0 .0 1)。结论　该模型下耳蜗微血管内皮细胞的通透性与其活体时的通透性特征基本一致。     

Effects of maternal serum on permeability of glomerular endothelial cell membrane

The mechanism of injury on the human glomerular endothelial cells(ciGENC) induced by preeclampsia serum was investigated.Concentration of maternal serum sFlt-1 protein was detected by ELISA.Fluorescently-labeled bovine serum albumin infiltrating through lower chamber of Transwell was measured by multifunction microplate reader.Morphologic change of ciGENC was observed under inverted phase contrast microscope.The concentration of sflt-1 in preeclampsia groups was significantly increased as compared with control group(P<0.01).Permeability in preeclampsia groups was significantly increased as compared with control group(P<0.01).By contrast with severe preeclampsia group,the permeability of ciGENC monolayer in mild preeclampsia group was decreased significantly(P<0.05).Intervention of exogenous VEGF significantly decreased permeability of ciGENC in preeclampsia groups.It was concluded that sFlt-1 increased ciGENC permeability by damaging integrity of endothelial barrier function.     

内皮细胞表达血管内皮细胞生长因子的研究

目的 观察体外培养的内皮细胞表达和分泌血管内皮细胞生长因子(VEGF)的情况。方法 以脐静脉内皮细胞系ECV-304为研究对象,采用RT-PCR、流式细胞仪、ELISA法分别观察佛波脂(PMA)对ECV-304合成与分泌VEGF的作用。结果 100ng／ml PMA能明显上调VEGF mRNA的表达、VEGF蛋白的合成及分泌。其对VEGF mRNA表达及细胞内VEGF合成的作用在12h最为明显;而分泌至上清液中的VEGF量则在18h达到高峰。PMA的上述作用能够被放线菌素D所抑制。结论 PMA能够诱导内皮细胞ECV-304表达、合成及分泌VEGF,该作用呈剂量和时间依赖性。其对VEGF mRNA的作用涉及核苷酸的从头合成途径。     

白细胞介素6、肿瘤坏死因子对体外培养的血管内皮细胞的损伤作用

目的：研究白细胞介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子(TNF)对人脐静脉内皮细胞（HVEC）的损伤作用。方法：以原代培养的HVEC为模型,将IL-6、TNF及其抗体与HVEC共同孵育,观察内皮细胞（EC）形态变化和培养液中血管紧张素转化酶（ACE）和乳酸脱氢酶（LDH）水平。结果： TNF和IL-6可引起细胞间隙增大,甚至细胞脱落;并且随着TNF和IL-6浓度加大及作用时间延长,培养液中ACE和LDH水平升高。结论： IL-6和TNF对血管EC有损伤作用。     

高糖对体外培养人脐静脉内皮细胞通透性及肌球蛋白轻链磷酸化的影响

目的：探讨高糖对人脐静脉内皮细胞（HUVECs）通透性及肌球蛋白轻链（MLC）磷酸化的影响。方法：分别以不含、含dnRhoA或Y27632的常规M199培养基（对照组、dnRhoA组、Y27632组）,以及不含、含dnRhoA或Y27632的高糖M199培养基（高糖组、高糖＋dnRhoA组、高糖＋Y27632组）培养HUVECs,在transwell系统中使其生长为单层内皮结构,观察该结构葡聚糖跨内皮转移率和THP-1跨内皮迁移细胞数,测定细胞MLC磷酸化水平。结果：高糖组葡聚糖跨内皮转移率和THP-1跨内皮迁移细胞数较对照组增加（ P＜0．05）。 dnRhoA组、Y27632组和高糖＋dnRhoA组、高糖＋Y27632组葡聚糖跨内皮转移率、THP-1跨内皮迁移细胞数及MLC磷酸化水平均较高糖组降低（ P均＜0．05）。结论：高糖刺激可能通过激活RhoA-ROCK信号转导通路,上调MLC磷酸化水平,增加内皮通透性。     

TNFα在血管内皮细胞凋亡中的作用

目的探讨TNFα引起的血管内皮细胞（VEC）凋亡在皮肤撕脱伤早期血栓形成中的作用. 方法分2组,实验组:内皮细胞(EC)+TNFα,拮抗组：用EC+TNFα+TNFα抗体处理. 采用流式细胞仪分别测定实验组TNFα不同时间、不同浓度以及拮抗组EC凋亡率. 结果 EC凋亡率随TNFα作用时间增加,0～48 h EC凋亡率为(2.6±0.42)%～(40.5±8.3)%;EC凋亡率也随TNFα浓度而增加,0～3000 u*mL-1 EC凋亡率分别为(2.6±0.42)% ～(13.7±2.6)%;TNFα抗体明显拮抗TNFα诱导的EC凋亡（P<0.01）. 结论 TNFα可引起EC的凋亡和死亡,具有时间依赖性和浓度依赖性,人重组TNFα单抗可消除因TNFα引起的毒性作用.     

Effects of platelet activating factor antagonist (BN50739) on gut mucosal injury in acute severe pancreatitis in pigs

Objective To study the role of platelet activating factor (PAF) in the pathogenesis of intestinal mucosal injury and endotoxin/bacterial translocation in acute severe pancreatitis (ASP) in pigs.
Methods ASP was induced by intraductal injection of a mixture of sodium taurocholate and trypsin. BN50739, a specific antagonist of PAF, was given 30 min prior to the induction of ASP. Mucosal blood flow, mucosal myeloperoxidase (MPO) and malondialdehyde (MDA) were determined. Intestinal injury was observed microscopically. Portal blood endotoxin levels and the bacterial counts in the portal blood, intestinal lymph nodes and the pancreas were determined.
Results Prior antagonism of PAF by BN50739 reduced intestinal injury, increased intestinal mucosal blood flow, and reduced blood levels of endotoxin and bacterial counts in the portal blood, mesenteric lymph nodes and pancreas.
Conclusions Intestinal mucosal injury developed in ASP. PAF is responsible for the injury. Antagonism of PAF by BN50739 can improve intestinal microcirculation and reduce the severity of intestinal mucosal injury, which may decrease endotoxin/bacterial translocation.     

血小板活化因子对颈髓损伤后血脊髓屏障的影响

探讨血小板活化因子对颈髓损伤后血脊髓屏障的影响。采用蛛钢膜下腔注射ＰＡＦ及静脉注射ＰＡＦ受体拮抗剂ＢＮ５２０２１，观察其对颈髓损伤后伤区信邻近脊髓组织ＰＡＦ含量，血脊髓屏障，颈髓水肿的影响。颈髓损伤后颈髓伤区及邻近脊髓组织ＰＡＦ含量，伊文思蓝含量，水含量均明显增加，蛛网膜下腔注射ＰＡＦ可使伤后ＰＡＦ含量，伊文思蓝含量，水含量增加更为显著。