肿瘤干细胞在腺样囊性癌细胞系增殖和分化中的作用

目的探讨腺样囊性癌细胞（adenoid cystic carcinoma cell，ACC）系中肿瘤干细胞的存在依据。方法采用单细胞体外培养法、免疫组化染色、免疫磁珠分离技术和动物实验等方法，分析常规培养的和经分离分群的不同细胞表型的ACC-2的体外增殖、分化特点和裸鼠体内成瘤能力的差异。结果体外培养至第8天，ACC-2单细胞仅有4．5％分裂、增殖，并非全部分裂。CD44^＋-CD24^-亚群占所有ACC-2细胞的8．1％，其中仅有25．71％的细胞长期存活和持续分裂。CD44^-和CD44^＋-CD24^＋细胞在体外培养条件下均无长期存活能力。不同表型的ACC-2体外单细胞培养实验发现，CD44^＋发生分裂的比例为8．4％，CD44^＋-CD24^-肿瘤细胞发生分裂的比例为14．7％，CD44^-和CD44^＋-CD24^＋细胞未发生分裂。裸鼠成瘤实验显示，CD44^＋-CD24^-的成瘤最低接种细胞数为1×10^3个／L，常规ACC-2最低成瘤细胞数为1×10^5个／L，CD44^-和CD44^＋-CD24^＋细胞则均无成瘤能力。免疫组化染色证实，CD44^＋-CD24^-肿瘤细胞具有分化成其他表型肿瘤细胞的能力。结论细胞表面抗原为CD44^＋-CD24^-的肿瘤细胞仅占ACC-2肿瘤细胞的极少部分，这些细胞具有极强的增殖能力和分化为其他表型肿瘤细胞的能力。ACC-2肿瘤细胞的增殖和成瘤能力源于CD44^＋-CD24^-ACC-2细胞亚群。ACC-2中存在肿瘤干细胞，而CD44^＋-CD24^-是ACC-2肿瘤干细胞必须兼备的表面标志。     

涎腺腺样囊性癌细胞生物学特性的探讨

一、材料和方法1.材料 :将正常涎腺 2 3例和腺样囊性癌 (ａｄｅｎｏｉｄｃｙｓｔｉｃｃａｒｃｉｎｏｍａ,ＡＣＣ) 2 6例常规 10 %甲醛固定 ,石蜡包埋并切成4μｍ厚 切片以备ＨＥ染色和免疫组化染色。单克隆和多克隆抗体Ｓ 10 0Ａ1、Ｓ 10 0Ａ2、Ｓ 10 0Ａ4、Ｓ 10 0Ａ6和Ｓ 10 0Ｂ均由瑞士的Ｚｕｒｉｃｈ大学的ＣＷＨｅｉｚｍａｎｎ教授馈赠。其余的抗体来源如下 :ＧＦＡＰ6Ｆ 2 (ＭｏＡｂ) ,ＧＦＡＰ(ＰｏＡｂ ) ,ＮＳＥ(ＭｏＡｂ) ,ｖｉｍｅｎｔｉｎ(ＭｏＡｂ) ,ＥＭＡ (ＭｏＡｂ)和ＣＥＡ (ＰｏＡｂ)购自Ｄａｋｏ,Ｄｅｎｍａｒｋ。ＧＦＡ…     

涎腺腺样囊性癌细胞系中DNA甲基化研究

目的探讨涎腺腺样囊性癌（adenoidcysticcarcinoma，ACC）细胞系中抑癌基因甲基化状况及其与mRNA、蛋白表达之间的关系。方法甲基化特异性PCR法检测ACC细胞系ACC-2、ACC-3、ACC-M中E-钙黏着蛋白（E-cadherin，E-cad）、p16、RASSFlA、DAPK、MGMT基因启动子区的甲基化状况。应用RT-PCR方法和免疫组织化学方法检测E-cad、p16在mRNA和蛋白水平的表达。结果3个ACC细胞系中均检测到E-cad、p16基因的甲基化，而没有RASSFlA、DAPK、MGMT基因的甲基化；mRNA和蛋白水平均未检测到E-cad的表达，均检测到p16的表达。结论ACC细胞系中，E-cad、p16基因启动子区的甲基化是常见事件，甲基化可能是E-cad基因失活的主要机制之一。     

涎腺腺样囊性癌预后因素的探讨

目的 探讨影响涎腺腺样囊性癌（ａｄｅｎｏｉｄ ｃｙｓｔｉｃ ｃａｒｃｉｎｏｍａ,ＡＣＣ）预后的各因素。方法 对１９６０～１９８５年间收治并随诊１０年以上的ＡＣＣ１２例进行临床病理分析,对各项指标采用乘限法（ｐｒｏｄｕｃｔ ｌｉｍｉｔ）,估计各时点的生存率,并绘制Ｋａｐｌａｎ－Ｍｅｉｅｒ生存曲线,同时序检验（ｌｏｇ ｒａｎｋ ｔｅｓｔ）各组间差异。全部资料用生存分析软件完成。结果 １０年随诊临床与病     

涎腺腺样囊性癌中基膜样物质的超微结构

目的 通过观察泛腺腺样囊性癌（ａｄｅｎｏｉｄ ｃｙｓｔｉｃ ｃａｒｃｉｎｏｍａ,ＡＣＣ）中基膜样物质的形态学改变,了解该瘤的浸润和血行转移的机制。方法 对８例ＡＣＣ的基膜样物质与２例腮腺腺泡及这的基膜进行光镜和电镜观察。结果 电镜观察基膜样物质在肿瘤闭索周围显示：多层、溶解或断裂现象。瘤细胞伸足样突起,且胞浆内含大量微泡,该处基膜消失,胶原原纤维溶解,肿瘤细胞围绕血管部位的血管基膜增厚,纤维组织增     

腺样囊性癌的临床,病理与免疫组化研究

作者对１９７７年～１９９１年经治的２０例腺样囊性癌进行了临床与病理方面的总结，并对其中组织材料完整的１５例进行了免疫组化研究。对其中五种组织学类型与组化表现，及对其治疗与预后的关系作了较全面的分析，以减少复发率，提高治愈率，改善生存率。     

全国涎腺腺样囊性癌专题研讨会会议纪要

由中华口腔医学会口腔颌面外科专业委员会涎腺疾病学组主办、中国抗癌协会头颈肿瘤协作组协办、北京大学口腔医学院承办的全国涎腺腺样囊性癌专题研讨会于 2 0 0 2年 6月 1 7～1 8日在北京召开 ,来自全国各地的专家、代表 2 0余人参加了会议。本次会议针对具有特殊生物学行为的涎腺腺样囊性癌进行了深入探讨 ,相关专家相聚在一起 ,交流各自的研究经验 ,共同商讨进一步深入研究的计划和方案 ,并准备开展协作研究。在本次会议上 ,北京大学方伟岗教授介绍了肿瘤细胞侵袭转移的最新研究动向 ;上海第二医科大学林国础教授介绍了涎腺腺样囊性癌的…     

涎腺腺样囊性癌31例临床分析

腺样囊性癌是涎腺常见的恶性肿瘤。我院从1980～1987年共诊治经病理确诊的31例,分析如下。临床资料男12例,女19例,年龄最大者72岁,最小者27岁,平均年龄为47.2岁。     

顺铂诱导人涎腺腺样囊性癌细胞多药耐药性的评价

目的:用恒定顺铂浓度、周期性作用的方法,诱导产生耐顺铂的腺样囊性癌细胞株SACC,并检测其多药耐药性。方法:用浓度为1μg/ml的顺铂作用于腺样囊性癌细胞株,每次作用时间48h,经6个月后形成在该药物浓度下生长良好的耐顺铂细胞株。用MTT法、流式细胞仪检测4种化疗药物甲氨喋呤、平阳霉素、长春新碱、丝裂霉素对2种细胞的杀伤效应和细胞周期的变化。结果:经过6个月诱导形成的耐顺铂细胞株SACC/DDP,较之SACC,对4种化疗药物均产生了不同程度的抗性,流式细胞仪检测发现其细胞周期发生变化,主要是G0/G1比例下降,且与药物浓度密切相关。结论:经顺铂周期性诱导,可以产生人涎腺腺样囊性癌多药耐药细胞株。     

腺病毒介导的TRA/L基因诱导腺样囊性癌细胞凋亡研究

目的:探讨以凋亡基因TRA/L为靶基因,腺病毒(Ad)为载体的重组基因治疗载体AdCMV-TRAIL诱导腺样囊性癌细胞系ACC-2凋亡的功能.方法:用携带绿色荧光蛋白基因EGFP的AdCMV-EGFP检测 腺病毒载体对ACC-2的转染效率;将携带TRAIL基因的AdCMV-TRAIL转染ACC-2;应用RT-PCR方法检测转染后TRA/L基因表达;应用倒置显微镜和荧光倒置显微镜观察细胞形态,MTT方法检测细胞存活率,应用流式细胞仪检测肿瘤细胞的凋亡率.结果:AdCMV-EGFP在1000 p/cell时转染效率为100%:RT-PCR在实验组检测到594 bp的TRA/L基因;AdCMV-TRAIL组和AdCMV-EGFP组的细胞存活率随着时间逐渐下降,且转染AdCMV-TRAIL的肿瘤细胞比转染AdCMV-EGFP的肿瘤细胞下降快,统计学分析有显著差异(P<0.001).AdCMV-TRAIL和AdCMV-EGFP均能促进腺样囊性癌细胞凋亡,且转染AdCMV-TRAIL 引发细胞凋亡的程度明显较AdCMV-EGFP组大,统计学分析有非常显著的差异(P=0.0005).结论:Ad-CMV-TRAIL在体外能明显抑制ACC-2细胞的活性,有效促使其凋亡;AdCMV-TRAIL可以成为腺样囊性癌转基因治疗的新策略.     

姜黄素对涎腺腺样囊性癌细胞系SACC-83增殖和凋亡的影响

目的体外研究姜黄素对涎腺腺样囊性癌细胞系SACC-83增殖和凋亡的影响。方法用终浓度为2.5、5、10、15、20mg/L的姜黄素处理SACC-83。应用MTT比色试验,倒置显微镜,Giemsa染色,Annexin-V-FITC和PI双标记活细胞后流式细胞仪和透射电镜检测和观察SACC-83的生长抑制率和细胞凋亡情况。结果姜黄素对SACC-83的生长抑制率与药物浓度和作用时间具有明显的正相关性（P〈0.01）。用药组细胞明显凋亡,凋亡率随处理时间延长和药物浓度增加而上升,各组间有显著差异（P〈0.01）。结论姜黄素具有抑制涎腺腺样囊性癌细胞系SACC-83增殖和诱导其凋亡的作用,且具有浓度和时间依赖性。     

^125I粒子持续低剂量率照射对人腺样囊性癌细胞的抑制作用

目的研究125I粒子持续低剂量率照射对人腺样囊性癌细胞（SACC-83细胞）增殖的影响。方法 125I粒子（初始剂量率为6.083cGy/h）对体外培养的SACC-83细胞行2Gy、4Gy、6Gy、8Gy照射,用WST-8法检测细胞增殖。结果随着照射剂量的增加,照射组的OD值明显小于对照组。照射2Gy、4Gy、6Gy、8Gy时的细胞抑制率分别为1.5%、11.1%、15.3%及36.9%,随着照射剂量的累积增加,细胞抑制率上升,照射组的细胞明显受到抑制（P〈0.01）。结论 125I粒子持续低剂量率照射SACC-83细胞,能够抑制细胞增殖。     

腺样囊性癌细胞SACC-83细胞对雪旺氏细胞趋化移动的影响

目的：观察腺样囊性癌细胞在雪旺氏趋化移动中的作用,并探讨腺样囊性癌的嗜神经侵袭机制。方法：将雪旺氏细胞接种于Transwell小室上室,下室分别加入腺样囊性癌细胞、人舌癌细胞及成纤维细胞条件培养液,空白对照组下室中DMEM培养液无细胞条件培养液,于孵箱中孵育10h后计数移动到下室的雪旺氏细胞数。结果：与人舌癌细胞组、成纤维细胞组及空白对照组相比,腺样囊性癌细胞组中移动到下室的雪旺氏细胞数显著增加,而人舌癌细胞组、成纤维细胞组及空白对照组间移动到下室的雪旺氏细胞数无显著差别。结论：腺样囊性癌细胞产生的某种物质可促进雪旺氏细胞趋化移动,可能参与腺样囊性癌嗜神经侵袭机制。     

涎腺腺样囊性癌细胞凋亡的动物实验

目的　检测不同剂量的重组人肿瘤坏死因子α(rhTNF -α)对涎腺腺样囊性癌细胞凋亡的体内诱导。方法　利用人涎腺腺样囊性癌细胞株 (SACC - 83)建立裸鼠移植瘤动物模型 ,局部肿瘤内直接注射rhTNF -α,选用两个不同剂量 (1 0 0× 1 0 4 IU/kg和 1 0× 1 0 4 IU/kg) ,观察对肿瘤的抑制作用 ,并采用流式细胞术定量检测体内细胞凋亡及细胞周期的变化情况。结果　①A实验组的抑瘤率为 52 .1 6 % ,B实验组的抑瘤率为 73 .0 1 %。②用药后三组瘤体体积的变化有显著性差异。③三组流式细胞周期的变化及凋亡率有显著性差异。结论　①rhTNF -α可抑制裸鼠SACC移植瘤生长 ,使细胞增殖在G1 期发生阻滞。这种抑制主要通过细胞凋亡来实现的。②本文低剂量的rhTNF -α诱导凋亡的效果优于高剂量的rhTNF -α ,为临床SACC治疗提供了参考剂量     

趋化因子受体5在唾液腺腺样囊性癌中的表达及意义

目的探讨趋化因子受体5(CCR5)在唾液腺腺样囊性癌的表达及其与临床病理分型和嗜神经性的关系。方法运用免疫组织化学的方法(SP法)检测CCR5在人唾液腺腺样囊性癌标本及正常唾液腺标本中的表达。结果 CCR5在唾液腺腺样囊性癌标本中的阳性表达率为93.8%(30/32),与在正常唾液腺组织的表达有显著性差异(P<0.05)。CCR5在唾液腺腺样囊性癌不同的临床病理分型中的表达差异无统计学意义(P>0.05)。在30例阳性表达的腺样囊性癌标本中,可见嗜神经现象组与未见嗜神经现象组中CCR5的表达有统计学差异(P<0.05)。结论 CCR5可能与唾液腺腺样囊性癌的发生相关,其表达水平与腺样囊性癌的临床病理类型无相关性,与侵袭神经有相关性。     

GSTP1在唾液腺腺样囊性癌中的表达及意义

目的:研究谷胱甘肽S-转移酶P1(glutathione S-transferase P1,GSTP1)在唾液腺腺样囊性癌(salivary adenoidcystic carcinoma,SACC)中的表达,探讨其与SACC的临床病理特征及肿瘤发生的关系。方法:采用免疫组化法检测51例SACC和18例瘤旁腺体中GSTP1的蛋白表达,分析GSTP1表达与SACC临床病理特征之间的关系。采用SPSS13.0软件包对数据进行统计学分析。结果:GSTP1在SACC肿瘤组织中的表达显著高于瘤旁腺体(P<0.05)。在SACC肿瘤组织中,GSTP1表达的高低与组织学分级显著相关(P<0.05),在组织学3级中的表达高于1、2级。在组织学1级中,GSTP1主要在胞核表达,但随着组织学分级的升高,GSTP1在胞质中表达显著增加(P=0.022)。结论:GSTP1的高表达及在肿瘤细胞不同部位表达与SACC的发生、肿瘤细胞分化相关。     

Dermo-1在涎腺腺样囊性癌中的表达及其临床意义

目的探讨转录因子Dermo-1在涎腺腺样囊性癌中的表达水平及其与各临床病理因素的关系。方法采用免疫组化方法检测40例涎腺腺样囊性癌组织中Dermo-1蛋白的表达情况,分析Dermo-1表达与腺样囊性癌临床病理因素的关系,以20例正常涎腺组织作对照。结果 Dermo-1在涎腺腺样囊性癌组织中的表达水平明显高于正常涎腺组织（P〈0.05）。Dermo-1表达与腺样囊性癌的病理分型、嗜神经侵袭、术后复发及远位转移有关（P〈0.05）。结论 Dermo-1蛋白表达可能与涎腺腺样囊性癌的分化调节、嗜神经侵袭及远位转移有关系,检测Dermo-1的表达水平对判断腺样囊性癌患者的预后有一定的参考价值。