分泌脊髓灰质炎Ⅰ型单克隆抗体的杂交瘤细胞株E_(55)的建立(简报)

Kohler及Milstein创建的淋巴细胞杂交瘤技术,大大推动了生物医学的发展。在病毒学研究中,目前已用该技术制备出对多种病毒的单克隆抗体,并用于对相应病毒的抗原分析。但是,尚未见到脊髓灰质炎病毒单克隆抗体的报道。我们使用脊髓灰质炎Ⅰ型Branhilde株病毒感染猴肾细胞,以其组织培养液为抗原,免疫BALB/C鼠,以鼠脾制备成脾细胞悬液,并与NS-1瘤细胞混合,用聚乙二醇(PEG)作融合。融合后的细稀稀释于HAT选择     

应用特异性McAb被动免疫和治疗恒河猴实验性脊髓灰质炎病毒感染的研究

将21只健康恒河猴随机分成两组,分别用Polio病毒Ⅱ型MEF_1株小剂量(2×10~(7.5)TCD_(50))及大剂量(20×10~(7.5)TCD_(50))经腓肠肌感染。治疗组猴在感染后24小时静注10万～30万效价/公斤体重的抗Polio Ⅱ型病毒McAb(小鼠腹水)。感染前及感染后21天内定期采猴血2～3毫升,用原代猴肾细胞分离病毒及测定血清抗体效价,并作临床观察。感染后21天剖杀,进行组织病理学检查。初步实验结果:①小剂量病毒组中有2/6对照猴发生临床麻痹,治疗猴无一麻痹,大剂     

流行性出血热病毒在原代地鼠肾单层细胞上的增殖

流行性出血热病毒(EHFV)通常采用非洲绿猴肾传代细胞(Vero-E_6细胞系)或人肺癌的Ⅱ型肺泡上皮细胞的传代细胞(A_(549)细胞系)增殖,但二者均为传代细胞。且A_(549)细胞乃来源于人的肿瘤组织,不宜用来制备疫苗。我们试将EHFV培养于原代地鼠肾单层细胞,获得了成功。 将EHFV76-118株的10％乳鼠脑悬液,按营养液1/10量接种于已长成单层的地鼠肾细胞,37℃吸附2h后,奔去接种浓,加含2％小牛血清的含糖Hank's液为维持液,置37℃温箱中孵育。从第3d开始,每天用直接荧光染色法观察细胞片,持续至接种后第13d,每次检查均能在细胞浆中观察到特异性EHFV抗原。     

应用人二倍体细胞2BS株生产脊髓灰质炎活疫苗研究

脊髓灰质炎是我国广泛流行的疾病,1964年是发病最多的一年,发病率达6.21/10万,患者有5～6万人,绝大部分留有瘫痪后遗症。我国经普服脊髓灰质炎活疫苗以后,到1988年发病率降至0.05/10万,人数在500多人。60年代初,已查明制备疫苗的恒河猴肾细胞,带有90多种病毒,尤其是SV-40病毒,检出率高达70～90％,有实验证明SV-40有致癌性,虽然至今感染SV-40的儿童,未发现有致癌证据,但必竟是严重和亟待解决的问题。国外60年代已禁止用恒河猴肾细胞生产疫苗,改用非洲绿猴,国内无法解决。     

单克隆ELISA法检测麻疹IgM抗体

材料中麻疹病毒抗原、细胞对照抗原、标准血清,麻疹鼠单克隆抗体及酶结合物等均系中国预防医学中心病毒学研究所提供,邻苯二胺系北京化工厂产品,CP批号851125。洗涤液为0.05%吐温20盐水,待检血清为疑似麻疹患者7～13病日血清,接触者采自接触后1日血清,方法是应用克隆抗体ELISA法测定麻疹IgM抗体。以P/N≥(?)为阳性,≥1:200为保护水平。结果:包被IgM抗μ链抗体于37℃24小时取出。用洗涤液洗3次,每次3分钟,下称3×3洗.加待检血清37℃90′,取出3×3洗,加M,C抗原后于4℃24小时取出3×3洗.加鼠单克隆抗体37℃90′.取出3×3洗加酶结合物于37℃90′,取出3×3洗,加酶底物于37℃′,加ZN H_2SO_4。终止反应以GXM-201型酶标仪(重庆产)492nm滤光板测定OD值.16份疑是麻疹患者血清IgM Ab均阳性(P/N>2.1).3份接触者均阴性P/N<2.1),阳性对照P/N=15.6(0.78/0.05)阴性对照P/N<2.1(0.08/0.05)。单克隆抗体ELISA法测定麻疹IgM Ab帮助临床确诊区具有快速敏感,简单易行之优点,适于基层应用。     

抗脊髓灰质炎病毒单克隆抗体测定糖丸疫苗中病毒含量的研究

常规免疫血清系多克隆抗体。型别之间常有交叉中和反应。采用抗脊髓灰质炎(Polio)病毒免疫血清测定三价糖丸疫苗中的病毒含量时,由于存在着型间交叉中和反应,严重地干扰了Ⅰ,Ⅲ型病毒的准确测定。本实验室采用单克隆抗体来测定Polio三价糖丸疫苗中的病毒含量,结果证明它显著优于常规的免疫血清。 实验用抗Polio病毒单克隆抗体(McAb)系本所中心实验室制备。中和病毒时使用的最终效价为1:80。常规免疫血清(SAb)系本所肠道病毒研究室用绵羊制备。中和病毒时使用的最终效价为Ⅰ型     

单克隆抗体对柯萨奇病毒A24型抗原分析

1988年北京急性出血性结膜炎(AHC)流行,用从病人眼结膜拭子标本分离出的一株柯萨奇病毒A24型变异株(CA24V),制备了单克隆抗体.结果获得5个细胞株分泌的抗体具有中和作用,但免疫荧光试验阴性,另8个细胞株分泌的抗体免疫荧光试验阳性,但对病毒无中和作用.使用这些单克隆抗体对具有代表性的10株病毒作了抗原分析.     

树鼩EB病毒有关补体结合抗体的研究

EB病毒的有关补体结合抗体(简称补结抗体)分布于各种灵长类。有人用间接免疫荧光法也检出黑猩猩和旧大陆猴的EB病毒壳抗原(EB-VCA)抗体,新大陆猴和原猴类则无此抗体。EB病毒有关抗体的来源和本质还不清楚。本文观察原猴类中树鼩的血清EB病毒有关补结抗体动态,初步探讨它的特异性及与树鼩自身疱疹病毒感染间的关系。 材料和方法 (一)血清来源 采自云南中部的树鼩(Tupaiabelangeri chinensis)。从1:5稀释度开始试验。 (二)补结试验方法 含EB病毒的B95-8细胞株(本院肿瘤所提供)和不含EB病毒的BJAB细胞株(本院病毒所提供)的粗制抗原用常规传代细胞制备,PBS洗涤并配成约10~7细胞/毫升,用液氮冻融或     

脊髓灰质炎病毒主要壳蛋白VP_1诱生的IgG抗体在ELISA和中和试验中的性质

脊髓灰质炎病毒主要以两种抗原形式存在,即D抗原和C抗原。前者含病毒RNA,能诱发产生中和抗体;后者则否。加热可使病毒D抗原转变为C抗原。本实验将未经福尔马林灭活固定的脊髓灰质炎病毒浓缩和纯化,用SDS-PAGE制备其主要壳蛋白成分VP_1,免疫动物,获得抗VP_1血清,从中提纯IgG抗体。用ELISA和常规中和试验方法测定此IgG抗体与脊髓灰质炎病毒的免疫反应性。 在ELISA试验中,抗VP_1IgG抗体与脊髓灰质炎病毒呈抗原抗体反应,IgG阳性反应的下限为1ng/ml。如果将抗VP_1IgG预先与脊髓灰质炎病毒37℃孵育2h,再包被酶标板,则不再出现阳性反应,     

应用微量中和抑制法测定脊髓灰质炎灭活病毒的抗原性

脊髓灰质炎病毒Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型Sabin疫苗株用β-丙内脂灭活后,用微量中和抑制实验测定其抗原性,所获结果与ELISA法测定D抗原含量的结果进行了比较。结果指出,Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型病毒灭活后,中和抑制效价的回收率分别是11.2%、6.7％和22.8％;而D抗原回收率分别是84％、91％和64％。可见中和抑制能力的损失较D抗原含量的损失严重得多。似用中和抑制法测定灭活疫苗的抗原性更为合理。     

登革热3型病毒单克隆抗体的产生及其特性鉴定

登革热是东南亚地区由虫媒病毒引起的急性传染病。登革热病毒按抗原性分为1～4型,各型间有明显交叉反应。因此,过去用常规动物免疫血清不易鉴别其型别,只有近年应用特异性更为专一的单克隆抗体,才为该病毒的鉴定与分型提供新的手段。1983年我们已开展登革热2型病毒单克隆抗体的研究。本文继续报道登革热3型病毒单克隆抗体的制备及其鉴定情况。一、材料与方法 1.细胞:x63-Ag8-653小鼠骨髓瘤细胞,用含15％灭活小牛血清的1640培养液,在37℃二氧化碳恒温箱培养。饲养细胞用BALb/C小鼠的腹腔细胞。检测的细胞是用白纹伊蚊C6/36细胞株,培养液含10％小牛血清Eagle液,置32℃培养。     

SV_(40)的对流免疫电泳及其在脊髓灰质炎活疫苗生产检定中的应用

SV_(40)(Simian Virus)系一种致肿瘤DNA病毒,生产脊髓灰质炎活疫苗必须对培养疫苗的猴肾培养物进行SV_(40)检测,这是世界卫生组织(WHO)法定的重要项目。WHO推荐的检测SV_(40)的方法,如用敏感细胞分离、中和试验,以及其它方法,如蚀斑滴定、免疫荧光、快速荧光病灶试验和免疫过氧化物酶技术等,均需要对SV_(40)敏感的非洲绿猴肾原代或传代细胞。我国无非洲绿猴,进口传代细胞往往代次较高,易失去对SV-(40)的敏感性,这是我国长期不能对脊髓灰质炎活疫苗进行SV_(40)检定,使该种疫苗未能全面达到国际水平的主要障碍。国内虽然建立了中和试验和免疫电镜技术,但前者需要敏感     

猕猴B病毒相关抗体调查

以人疱疹病毒Ⅰ型为抗原,用酶免疫法(EIA)比较了在不同生活环境中,猕猴B病毒相关抗体阳性率的差异:野外捕获猴组的阳性率为65.5％;自繁雌雄分笼群养猴组阳性率为26.7％;野外捕获后单只笼养组阳性率为33.1％。野外捕获组与其它两组之间的B病毒相关抗体阳性率差异极显著(P<0.01)。在野外捕获组中,B病毒相关抗体阳性率与动物年龄的增长成正相关(r=0.951,P<0.05)。在同一组标本上,用EIA技术检查确定的B病毒相关抗体阳性猴,与用DIA试剂盒检查确定的B病毒抗体阳性猴一致,表明用EIA检查的结果,可反映B病毒在猴群中的流行情况。作者还就建立无B病毒感染繁殖群提出初步意见。     

抗脊髓灰质炎Ⅰ型病毒Brunhilde株的单克隆抗体

近两年来,应用杂交瘤技术制备抗脊髓灰质炎(Polio)病毒的单克隆抗体(McAb),国内外均有报道。我们继1981年建立7株分泌抗Polio Ⅱ型病毒McAb的杂交瘤细胞系后,又进行了抗PolioⅠ型病毒McAb的研究,获得阳性杂交癌细胞19株。 材料与方法 (一)病毒株 PolioⅠ型的Brunhilde、Mahoney、LSc2ab和中Ⅰ_0株,Ⅱ型MEF_1株和Ⅲ型Saukett株,均为本所保存毒株。     

微量酶联免疫吸附试验检测疟疾抗体

1978年以食蟹猴疟原虫(Plasmodium cynomolgi)可溶性抗原和硷性磷酸酶抗人IgG结合物进行了疟疾酶联免疫吸附试验(ELISA),发现此种抗原与健康成人血样产生较高的假阳性反应。因此改用培养的恶性疟原虫作抗原进行试验。 材料与方法 1、抗原的制备:虫种由本所病原室从海南岛恶性疟病人分离获得。培养液由RPMI-1640(SERVA Feinbiochemica厂)、HEPES缓冲液、谷氨酰胺和碳酸氢钠配成。用前以含12％AB型血清的上述培养液配制2％的“O”型红细胞悬液,用蜡烛缸法培养至原虫达8～10％,当以裂殖体为主时收集原     

登革Ⅱ型病毒（D2V）空斑的快速滴定法

病毒空斑滴定法,是了解病毒含量的一种重要方法。过去的传统滴定法费时,耽误结果观察。目前,一些实验室致力于快速法而加以改进。益继鸿等报道,采用HeIa等细胞株对脊髓灰质炎病毒Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型等病毒进行了速成空斑测定,认为结果满意。登革Ⅲ型病毒(D_2V)空斑的滴定,通常亦需于24小时前预先制备C_6/36白纹伊蚊细胞板,误时较     

西尼罗河病毒前膜蛋白- E蛋白结构域Ⅲ融合蛋白特异性单克隆抗体的制备以及应用分析

制备了针对西尼罗河病毒preM/EⅢ融合蛋白特异性单克隆抗体,并分析了其在临床检测中的应用价值。方法 采用原核表达系统表达西尼罗河病毒preM/E融合蛋白,作为抗原,免疫BALB/c小鼠,按常规单克隆抗体技术将免疫后小鼠脾细胞与SP2/0 细胞融合,采用有限稀释法筛选能稳定分泌抗preM/EⅢ单抗的杂交瘤细胞株。接种杂交瘤细胞于小鼠腹腔,抽取腹水纯化单克隆抗体。采用间接ELISA和Western blot对抗体特异性和效价进行分析,并对临床样本进行检测。结果 获得了1株能稳定分泌preM/EⅢ蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,命名为ME1。纯化后抗体效价为10-6,其亚类为IgG1。ME1单抗均能与西尼罗病毒preM/EⅢ蛋白以及西尼罗病毒发生特异性反应,而与日本脑炎病毒(JEV)、圣路易斯脑炎病毒(SLEV)、黄热病毒(YFV)和登革热病毒(DENV)无交叉反应。临床诊断准确率为97.78%。结论 ME1单克隆抗体具有较高的特异性,临床诊断准确性较高,具有临床应用价值。     

西尼罗河病毒preM/EⅢ融合蛋白特异性单克隆抗体的制备以及应用分析

目的制备针对西尼罗河病毒preM/EⅢ融合蛋白特异性单克隆抗体,并分析其在临床检测中的应用价值。方法采用原核表达系统表达西尼罗河病毒preM/E融合蛋白,作为抗原,免疫BALB/c小鼠,按常规单克隆抗体技术将免疫后小鼠脾细胞与SP2/0细胞融合,采用有限稀释法筛选能稳定分泌抗preM/EⅢ单抗的杂交瘤细胞株。接种杂交瘤细胞于小鼠腹腔,抽取腹水纯化单克隆抗体。采用间接ELISA和Western blotting对抗体特异性和效价进行分析,并对临床样本进行检测。结果获得了1株能稳定分泌preM/EⅢ蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,命名为ME1。纯化后抗体效价为10-6,其亚类为IgG1。ME1单抗能与西尼罗病毒preM/EⅢ蛋白以及西尼罗病毒发生特异性反应,而与日本脑炎病毒(JEV)、圣路易斯脑炎病毒(SLEV)、黄热病毒(YFV)和登革热病毒(DENV)无交叉反应。临床诊断准确率为97.78%。结论 ME1单克隆抗体具有较高的特异性,临床诊断准确性较高,具有临床应用价值。     

脊髓灰质炎病毒继发感染诱导细胞病变

目的 :脊髓灰质炎 (脊灰 )病毒是引起脊髓灰质炎 (小儿麻痹 )的病原体。脊灰病毒 (PV)通过和敏感细胞表面的脊灰病毒受体 (PVR)结合而感染细胞。脊灰病毒感染后 ,细胞出现显著形态学改变 ,即细胞病变。本文的研究目的是探讨PV诱导的细胞病变机制。方法 :用PV野毒或光敏感株感染人神经细胞株(SK -N -SH) ,观察细胞病变发生的动态变化。同时用蚀斑实验和间接免疫荧光实验法检测病毒滴度和病毒抗原的分布。结果 :病毒感染 4小时后 ,细胞开始出现病变并释放子代病毒。感染后 4小时内 (即子代病毒释放前 )用抗PV或抗PVR单克隆抗体处理细胞则可以预防PV感染诱导的细胞病变。抗体处理前用野毒株再次攻击感染的细胞同样诱导细胞病变。相反 ,抗体处理前用光敏感病毒再次攻击感染的细胞后则减少细胞病变的发生。结论 :本研究结果显示 ,脊灰病毒引起的细胞病变由感染后产生的子代病毒的继发感染引起。     

猴T淋巴细胞趋向性病毒1型双抗原夹心ELISA检测试剂盒的研制

目的研制灵敏度和特异性高的检测实验猴血清中T淋巴细胞趋向性病毒-1型（STLV-1型）／E体的双抗原夹心ELISA（dsELISA）检测试剂盒。方法采用经原核表达系统表达并纯化的人T淋巴细胞白血病病毒-1型（HTLV-1型）的Env蛋白作为包被用抗原，建立了检测STLV-1的dsELISA诊断方法。通过优化反应条件和筛选试剂，确定了dsELISA诊断试剂盒的相关条件，并经敏感性、特异性和重复性试验考查该试剂盒质量。结果试剂盒特异性好，批内重复试验变异系数（CV）〈7％，批间重复试验CV〈10％。对200份猴血清进行随机检测，与国际公认的诊断试剂盒（美国BioReliance公司）的符合率为97％。结论本试剂盒可初步应用于临床上实验猴STLV-1型抗体的检测。