长期脑缺血再灌注大鼠脑的形态及功能行为研究

目的:观察长期脑缺血再灌注大鼠脑的形态和组织病理学的变化,探讨建立脑萎缩模型的可行性。方法:再灌注后结扎双侧颈总动脉,动态监测大鼠缺血后行为学、脑质量,同时苏木精-伊红染色观察脑的组织病理学变化。结果:大鼠脑缺血后脑萎缩出现于2～4个月,随时间延长而加重,对照组脑质量:4个月时为(2.080±0.107)g,6个月时为(2.213±0.072)g,脑缺血组大鼠脑质量逐渐减轻,6个月降至(1.834±0.059)g,较对照组差异有非常显著性意义(t=4.287,P<0.01)。苏木精-伊红染色显示脑组织变性坏死,细胞丢失严重。结论:再灌注后结扎双侧颈总动脉可建立较稳定的脑萎缩模型,较好的模拟了临床上反复脑缺血导致的脑萎缩的发展过程。     

局灶性脑缺血再灌注中c-Fos，胶质纤维酸性蛋白的表达和神经保护

目的：研究c-Fos和胶质纤维酸性蛋白(glial fibfillary acidic protein，GFAP)在局灶性脑缺血再灌注中的表达，尼莫地平脑保护作用的时机。方法：采用线栓法大脑中动脉闭塞90min加双侧颈总动脉结扎60min造模，18只SD大鼠随机等分为6组：对照组，I-R组，预防组，缺血治疗组，I-R治疗组，再灌注后治疗组。尼莫地平颈内动脉给药，再灌注后24h行脑功能障碍评分，再灌注72h处死测量脑组织梗死体积．并行苏木精一伊红染色，c-Fos，GFAP免疫组化染色。另选18只动物，I-R组9只和I-R治疗组9只各再分为再灌注后2，24和48h，行苏木精一伊红染色，c-Fos，GFAP免疫组化染色。结果：苏木精-伊红染色示预防组，I-R治疗组，再灌注后治疗组较之I-R组缺血半暗区神经元损伤明显减轻。再灌24h后神经功能障碍评分为：缺血治疗组(2．3&;#177;0．8)分≥I-R组(2．2&;#177;1．0)分&;gt;再灌注后治疗组(1．8&;#177;0．6)分&;gt;预防组(1．5&;#177;1．2)分&;gt;I-R治疗组(1．3&;#177;0．5)分&;gt;对照组(0．8&;#177;1．1)分，治疗组中除缺血治疗组外均较I-R组梗死体积小，但较对照组大，差异有统计学意义。治疗组皮质缺血半暗带，海马CA1区GFAP阳性细胞数均较I-R组少(P&;lt;0．05)．但齿状回减少程度较轻；给药后皮质缺血半暗带以及海马各区c-Fos阳性细胞数明显减少。GFAP在再灌注2h大量表达，48h达高峰，且反应性星型胶质细胞居多，72h持续表达；c-Fos 2h反应最为强烈，24h仍大量表达，48h后明显下降，72h少量表达。结论：预防性及再灌注早期尼莫地平动脉给药对局灶性脑缺血再灌注治疗效果较好；反应性胶质细胞对脑缺血后神经元存活起着重要作用；c-fos基因参与了脑缺血损伤的信号转导。     

慢性脑低灌注对大鼠学习记忆及脑海马组织中周期素依赖性激酶5表达的影响

目的：慢性脑低灌注大鼠的学习记忆能力下降，观察此过程中脑海马组织中周期素依赖性激酶5mRNA及其蛋白表达的动态变化。方法：实验于2004-03／12在解放军第二军医大学实验动物中心进行。取雄性SD大鼠60只，随机分为空白对照组18只，假手术组18只，慢性脑低灌注组24只。空白对照不进行干预，慢性脑低灌注组采用双侧颈总动脉结扎建立大鼠慢性脑低灌注模型，假手术组仅行颈前切开，不结扎颈总动脉。分别于术前、术后2，4，8周应用Y迷宫评价错误次数和全天总反应时间，苏木精-伊红染色观察脑海马组织病理变化，脱氧尿嘧啶缺口末端标记染色检测凋亡细胞数目，免疫组化法观察周期素依赖性激酶5蛋白含量的变化，反转录-聚合酶链反应法检测周期素依赖性激酶5mRNA的表达水平。结果：慢性脑低灌注组大鼠死亡3只，57只大鼠进入结果分析。①Y迷宫测试结果：与空白对照组和假手术组相比较，从术后2周开始，慢性脑低灌注组大鼠的迷宫作业错误反应次数增多[（1．00&;#177;0．59），（1．06&;#177;0．54），（2．05&;#177;0．72）次；F=4．89，P〈0．05]，全天总反应时间延长[（88．28&;#177;17．41），（90．38&;#177;15．57），（142．51&;#177;21．72）s，F=4．56，P〈0．051，且随术后时间的延长错误次数和总反应时间增加（P〈0．01）。②周期素依赖性激酶5表达：与正常大鼠和假手术组大鼠比较，慢性脑低灌注组大鼠2周时周期素依赖性激酶5阳性表达开始减少（21．68&;#177;1．22，21．32&;#177;1．38，17．32&;#177;1．11，F=3．84，P〈0．05），至术后4，8周其表达继续减少（11．59&;#177;0．76，8．49&;#177;0．42）。结论：慢性脑低灌注可诱导脑海马组织中周期素依赖性激酶5表达下调，同时伴随着大鼠学习、记忆能力下降，提示该酶可能参与了学习记忆过程。     

大鼠局灶性脑缺血再灌注血浆细胞因子和内皮素对红景天干预的反应

目的：观察大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤时血浆细胞因子和内皮素含量的变化，及红景天对其变化的影响。方法：实验于2005-10／12在锦州医学院药理教研室进行。取30只SD大鼠随机数字法等分为3组：①假手术组：生理盐水按2mL／d灌胃5d后手术操作同其他组，但不夹闭右侧颈总动脉。②局灶性脑缺血再灌注模型组：生理盐水按2mL／d灌胃5d后，用10g/L戊巴比妥纳（40mg／kg）麻醉大鼠，取颈正中切口，暴露右侧颈总动脉、颈内动脉和颈外动脉，结扎颈总动脉、颈外动脉，于颈总动脉分叉下方剪一小口，将预先烧成圆头的4-0单丝尼龙缝线经该切口插入颈内动脉约（18&;#177;1）mm，将大脑中动脉起始部阻塞，1h后将栓线抽出约1cm，恢复再灌注1h。③红景天组：红景天按2mL／d灌胃给药，连续5d后与局灶性脑缺血再灌注损伤组相同。③假手术组及局灶性脑缺血再灌注损伤组、红景天组再灌注1h后均立即取血，利用放射免疫技术检测大鼠血浆细胞因子肿瘤坏死因子α、白细胞介素6、内皮素的水平。结果：30只大鼠全部进入结果分析。①脑局灶性缺血再灌注损伤组久鼠血中细胞因子肿瘤坏死因子α、白细胞介素6及内皮素含量较似丁术组明显增高[（1．40&;#177;0.14），（0.68&;#177;0.10）mg／L；（142．60&;#177;12.33），（78．60&;#177;6．42）μg／L；（168.40&;#177;3.87），（114.50&;#177;2.84）μg／L，P〈0.05]。②红景天组血中细胞因子肿瘤坏死因子α、白细胞介素6、内皮素含量较局灶性缺血再灌注组下降[（1．02&;#177;0.20），（1．40&;#177;0.14）mg/L;（121.00&;#177;13．96），（142．60&;#177;12．33）μg／L；（155．00&;#177;5．88）．（168．40&;#177;3.87）μg／L．P〈0.05]。结论：红景天显著降低局灶性脑缺血再灌注损伤大鼠血中细胞因子及内皮素水平，红景天的保护效应部分是由于减少血浆细胞因子肿瘤坏死因子α、白细胞介素6和内皮素的水平。     

促红细胞生成素对全脑缺血再灌注后神经细胞凋亡和诱导型一氧化氮合酶蛋白的影响

目的：观察促红细胞生成素(EPO)对短暂性全脑缺血再灌注后海马CA1区iNOS蛋白表达的影响，探讨其对缺血脑组织保护的可能机制。方法：应用四动脉血流阻断法制作大鼠短暂性全脑缺血再灌注模型；于再灌注开始时经腹腔注射EPO(3000U／kg)；48h灌注取脑。苏木精一伊红染色和TUNEL法染色观察海马CA1区神经细胞坏死和凋亡。应用免疫组织化学方法检测iNOS蛋白的表达。结果：短暂性全脑缺血15min再灌注后48h，苏木精一伊红染色海马CA1区存活神经元细胞数正常组(211．28&;#177;7．95)个／视野，假手术组为(209．28&;#177;11．34)个／视野，EPO治疗组海马CA1区存活神经元细胞数为(170．28&;#177;8．12)个／视野，缺血组为(146．84&;#177;8．35)个／视野。EPO治疗组与缺血组比较差异有显著性意义(P&;lt;0．01)。TUNEL法凋亡细胞测定，正常组无阳性细胞，假手术组阳性细胞(152．48&;#177;18．52)个／视野，EPO治疗组有(1797．51&;#177;151．35)个／视野，缺血组有(2250．41&;#177;180．06)个／视野，两者比较差异有显著性意义(P&;lt;0．01)。iNOS蛋白的表达测定，正常组无阳性细胞，假手术组海马CA1区阳性细胞区灰度值为5．36&;#177;1．54，EPO治疗组为31．80&;#177;6．42，缺血组为49．46&;#177;8．96。EPO治疗组与缺血组比较，两者差异有显著性意义(P&;lt;0．01)。结论：EPO可减少大鼠短暂性全脑缺血再灌注后神经元的死亡和凋亡，抑制iNOS蛋白的表达。     

阿魏酸钠对缺血预处理后大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用

背景：缺血性脑损伤后，如何减少神经细胞的死亡促进神经功能的恢复？脑缺血预处理在一定程度上可减轻再次缺血导致的缺血性脑损伤。阿魏酸钠亦被证实能减少脑缺血后的神经元凋亡的发生。而阿魏酸钠是否能增强脑缺血预处理的神经保护作用？ 目的：探讨阿魏酸钠联合缺血预处理对脑缺血再灌注损伤的保护作用。 设计：随机对照动物实验。 单位：江西医学院第二附属医院神经外科，江西医学院生理教研室，江西医学院泌尿外科研究所。 材料：实验于2001—05／2002—04在江西医学院第二附属医院神经外科实验室完成。雄性Wistar大鼠85只，体质量250～300g。 方法：大鼠随机分为四组：①非缺血对照组（10只）：仅结扎双侧椎动脉而不夹闭双侧颈总动脉。②缺血对照组（25只）：结扎双侧椎动脉48h，夹闭颈总动脉10min。③缺血预处理组（25只）：结扎双侧椎动脉48h，夹闭颈总动脉2min后24h再次夹闭颈总动脉10min。④阿魏酸钠联合缺血预处理组（25只）：缺血预处理后，再次夹闭颈总动脉前30min，尾静脉注射阿魏酸钠（200mg／kg）。非缺血对照组分为再灌注后2，7d二个亚组（各5只）；缺血对照组、缺血预处理组及阿魏酸钠联合缺血预处理组又分为再灌注后6，12，24h，2，7d五个亚组（各5只）。各组在相应时点将大鼠断头取脑，于视交叉后2．2mm切取冠状脑片，观察阿魏酸钠联合缺血预处理在脑缺血再灌注时对皮层和海马CAl区神经元数及凋亡细胞数的影响。 主要观察指标：皮层和海马CA1区神经元数及凋亡细胞数。 结果：实验大鼠85只均进入结果分析。①大脑皮层及海马CA1神经元计数：缺血7d时，缺血预处理组和阿魏酸钠＋缺血预处理组高于缺血对照组（268&;#177;8．5，244&;#177;12．5，135&;#177;5．6，P〈0．01）。②大脑皮层及海马CAl区TUNEL阳性细胞计数：阿魏酸钠＋缺血预处理组低于缺血预处理组和缺血对照组（12h：1．2&;#177;0．8，15．5&;#177;2．1，39．8&;#177;3．9；24h：1．8&;#177;1．6，39．3&;#177;11．8，191.3&;#177;19．1；2d：2．8&;#177;1．2，68.3&;#177;13．6，328．4&;#177;24．0，P〈0．01）；缺血预处理组低于缺血对照组（P〈0．01）。 结论：缺血预处理可减少缺血区神经元凋亡细胞数，阿魏酸钠联合缺血预处理可以进一步加强此效应，对脑缺血再灌注损伤起保护作用。     

抗细胞间黏附分子1单克隆抗体对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用

目的：观察应用抗细胞间黏附分子1单克隆抗体阻断大鼠缺血再灌注后由细胞问黏附分子1介导的的炎症反应，对缺血脑组织的保护作用。方法：实验于2003—04／2004—04在徐州医学院附属医院神经病学实验室进行。将造模成功的健康雄性SD大鼠24只随机分为3组，每组8只：①脑缺血组：线栓法建立大鼠大脑中动脉栓塞模型。②再灌注组：同前造模，于缺血6h回抽尼龙线开始再灌注。⑨抗细胞间黏附分子1单克隆抗体组：处理同再灌注组，再灌注同时经颈内动脉注入抗细胞间黏附分子1单克隆抗体1mg／kg。每组随机取5只大鼠于再灌注48h在麻醉状态下处死，用免疫组织化学方法观察各组大鼠脑内细胞间黏附分子1阳性血管数，苏木精-伊红染色观察大鼠脑内白细胞浸润数，炎症反应；各组剩余3只大鼠同时间麻醉状态下处死，四氮唑红测定大鼠脑梗死体积占脑半球的百分率。结果：24只大鼠进入结果分析。①脑内细胞间黏附分子1阳性血管数：抗细胞间黏附分子1单克隆抗体组低于再灌注组，与脑缺血组无差异[（298&;#177;35），（450&;#177;73），（417&;#177;46）个／mm^2]。②脑白细胞浸润数：抗细胞间黏附分子1单克隆抗体组低于再灌注组和脑缺血组[（8．5&;#177;1．7），（28．7&;#177;5．9），（16．3&;#177;4．6）个,P〈0．05]。⑨脑梗死体积占脑半球的百分率：抗细胞间黏附分子1单克隆抗体组低于再灌注组，与脑缺血组无差异[（26．4&;#177;2．5）％，（42．5&;#177;3．5）％，（36．6&;#177;4．1）％]。结论：抗细胞间黏附分子1单克隆抗体对脑缺血后所伴发的炎症反应有抑制作用；可减轻缺血后脑组织的损伤，缩小脑梗死体积，在炎症损伤环节上可延长大鼠脑梗死的溶栓治疗时间窗。     

新生大鼠脑缺氧缺血后热休克蛋白表达与KATP通道开放剂的脑保护作用

目的：观察KATP通道开放剂克罗吗啉对新生大鼠脑缺氧缺血后热休克蛋白70表达、病理学损伤变化的影响。从基础水平探讨KATP通道开放剂保护脑的作用机制，为其在实际应用上寻求依据。方法：实验选用72只7日龄新生大鼠，随机分为4组，分别为缺氧缺血组&;lt;结扎左颈总动脉后予8％氧2h)，给药组(缺氧缺血前给予克罗吗啉)，正常对照组，假手术组。每组再分为24，48，72h3个亚组，共12组，每组6只。每组分别在24，48，72h用免疫组织化学及苏木精一伊红染色方法检测缺氧缺血和克罗吗啉干预后不同时间点脑皮质热休克蛋白阳性细胞数表达情况及病理学改变。结果：干预后24，48，72h给药组大鼠脑皮质中热休克蛋白70阳性细胞数[(40．87&;#177;7．97)，(82．25&;#177;8．50)(77．75&;#177;10．35)个／视野]明显多于缺氧缺血组[(17．25&;#177;2．30)，(51．75&;#177;9．00)(44．37&;#177;6．14)个／视野](P&;lt;0．05)。干预后24，48，72h缺氧缺血组大鼠脑皮质中热休克蛋白70阳性细胞数明显多于正常组(P&;lt;0．01)。结论：KATP通道开放剂对缺氧缺血后脑损伤有保护作用，可能与其诱导神经元热休克蛋白70合成的增加，阻滞了细胞凋亡有关。     

慢性低灌注大鼠P300的变化与记忆功能

目的 观察慢性低灌注大鼠P300值及记忆功能的改变并探讨其意义。方法 采用双侧颈总动脉结扎造模法在大鼠术前及术后四周分别进行P300的测定及水迷宫试验。结果 双侧颈总动脉结扎4周后大鼠水迷宫游出时间(72．5&;#177;10．6)s较正常组大鼠(22．4&;#177;2．8)s显著延长(1=16．13，P&;lt;0．01)．进入盲端的错误次数(8．3&;#177;2.7)次较正常组大鼠(2．2&;#177;1．0)次也显著增多(1=7．36，P&;lt;0.01)；P300各组分潜伏期均显著延长。以P3波潜伏期(385&;#177;13)ms延长最为显著(t=6.6l，P&;lt;0.01)。海马CA1区锥体细胞苏木精-伊红染色显示锥体细胞肿胀坏死较正常组增多，细胞排列紊乱。结论 头皮针电极可以获得令人满意的P300图形。慢性低灌注能明显影响大鼠的认知功能，导致P300的改变。P300可作为评定血管性痴呆的可靠指标。     

慢性低灌注性脑缺血大鼠正常灌注压恢复过程中血脑屏障通透性的变化规律

目的：采用伊文思蓝荧光的敏感方法，定量分析慢性低灌注脑缺血动物模型正常灌注压恢复过程中血脑屏障通透性的变化规律。方法：实验于2003-12／2004-12在沈阳军区总医院动物实验中心进行。取30只Wistar大鼠，随机分为2组：①对照组（n=5），单纯行右侧颈总动脉和颈外静脉结扎，饲养2周后经尾静脉注入20g／L伊文思蓝生理盐水溶液（4mL／kg），2h后麻醉状态处死。②模型再灌注组（n=25）。采用右侧颈总动脉和颈外静脉端-端吻合，同时结扎上矢状窦，建立大鼠慢性低灌注压性脑缺血的动物模型。饲养2周后阻断右侧颈总动脉和颈外静脉吻合部位形成缺血再灌注，再灌注后2，3，9，24和48h麻醉后处死（每个时间点5只），处死前2h经尾静脉注入与对照组等量的伊文思蓝生理盐水溶液。采用伊文思蓝荧光定量的方法观察各组大鼠血脑屏障通透性的变化。结果：经补充后30只大鼠进入结果分析。再灌注2h时，脑组织伊文思蓝的含量即高于对照组[（0．935&;#177;0．166），（0．489&;#177;0．132）mg／g，t=3．872，P〈0．051，再灌注24h达高峰，再灌注48h趋于平稳[（5．231&;#177;1．183），（5．522&;#177;1．124）mg／g]。结论：在慢性脑缺血正常灌注压恢复过程中血脑屏障通透性的变化规率为，2h增高，24h达高峰，48h趋于平稳。     

骨髓间质干细胞对血管性痴呆大鼠BDNF和NGF的影响

目的：观察静脉注射骨髓间质干细胞(marrow stromal cell，MSC)对血管性痴呆(vascular dementia，VD)大鼠脑组织脑源性神经营养因子(BDNF)和神经生长因子(NGF)表达的影响。方法：体外分离培养、扩增成年大鼠MSC。利用结扎双侧颈总动脉方法制备慢性前脑缺血动物模型，利用穿梭箱、水迷宫试验、ELISA方法检测注射MSC后30,60dVD大鼠认知功能以及脑组织BDNF和NGF含量变化。结果：与正常对照组相比，VD大鼠主动回避反应、游泳时间、错误次数和盲端时间，在造模后30和60d差异有显著性意义(P&;lt;0．01)。静脉注射MSC后30和60d，VD大鼠认知功能显著改善。造模后30，60d大鼠脑BDNF含量[(96&;#177;27)，(108&;#177;26)ng／g]，NGF含量[(73&;#177;22)，(89&;#177;24)ng／g]较对照组显著增高[(51&;#177;13)ng／g，(36&;#177;11)ng／g]。P&;lt;0．01；注射MSC后30，60d大鼠脑BDNF含量[(180&;#177;46)，(185&;#177;5)ng／g]，NGF含量[(115&;#177;29)，(108&;#177;34)ng／g]较模型组显著升高。结论：静脉注射MSC可显著改善VD大鼠认知功能，增加VD大鼠脑组织BDNF和NGF含量。     

电刺激迷走神经对肠缺血再灌注大鼠血浆一氧化氮和内皮素水平的影响及其意义

目的：观察电刺激迷走神经对肠缺血再灌注模型大鼠血浆中一氧化氮、内皮素水平和血压，以及小肠组织损伤程度的影响。 方法：实验于2004-10／2005-04在中山大学省级药理毒理实验室完成。①选用清洁级健康Wistar雄性大鼠40只，体质量280～300g。按随机数字表法将40只大鼠分为4组（n=10）：对照组：双侧颈迷走神经分离＋仅分离而不阻断肠系膜上动脉；肠缺血再灌注组：双侧颈迷走神经分离＋夹闭肠系膜上动脉1h后松夹再灌注2h；双侧颈迷走神经切断组：双侧颈迷走神经分离并切断＋夹闭肠系膜上动脉1h后松夹再灌注2h。迷走神经刺激组：双侧颈迷走神经干切断＋在夹闭肠系膜上动脉前及再灌注开始时均采用智能型生物信号显示处理系统以5V，2ms和1Hz强度的电流持续刺激左迷走神经干远端20min。②在大鼠肠缺血再灌注2h时，采用放射免疫分析法检测内皮素水平，用硝酸还原酶比色法检测一氧化氮水平。苏木精-伊红染色后，光镜下观察肠组织结构的变化。对小肠组织损伤程度进行判定：0～9分，分数越高表示损伤越严重。于迷走神经刺激前，夹闭0，30min，再灌注0，30，60，90，120min记录平均动脉压。③多组均数比较使用单因素方差分析，两两比较采用LSD-t检验。 结果：大鼠40只全部进入结果分析。①血浆一氧化氮水平变化：肠缺血再灌注组和双侧颈迷走神经切断组明显低于对照组和迷走神经刺激组[（22．42&;#177;9．62），（24．66&;#177;10．10），（36．34&;#177;10．81），（52．08&;#177;19．25）μmol/L，P〈0．051。②血浆内皮素水平变化：迷走神经刺激组明显高于对照组、肠缺血再灌注组和双侧颈迷走神经切断组[（270．49&;#177;75．43），（170．04&;#177;56．30），（190．73&;#177;62．85），（200．04&;#177;65．21）ng／L，P〈0．05]。③一氧化氮与内皮素比值比较：肠缺血再灌注组和双侧颈迷走神经切断组明显低于对照组和迷走神经刺激组（0．11&;#177;0．04，0．12&;#177;0．04，0.23&;#177;0．10，0．18&;#177;0．07，P〈0．05），对照组明显高于迷走神经刺激组（P〈0．05）。④小肠组织损伤程度光镜下观察结果：肠缺血再灌注组和双侧颈迷走神经切断组的肠黏膜结构受损最严重，迷走神经刺激组可减轻肠组织损伤程度。⑤肠组织病理损伤程度评分：对照组明显低于其他3组，而迷走神经刺激组明显低于肠缺血再灌注组和双侧颈迷走神经切断组[（5.3&;#177;0．9），（6．4&;#177;1.9），（7.0&;#177;1．2）分，P〈0．05]。⑥平均动脉压变化：各组大鼠在缺血期基本保持平穗。而在再灌注期，与对照组相比，其他3组随时间延长呈明显下降趋势（P〈0.05），而迷走神经刺激组较双侧颈迷走神经切断组、肠缺血再灌注组在各时间点能更明显提高平均动脉压（P〈0．05）。 结论：迷走神经刺激可能通过减轻一氧化氮与内皮素比值失衡，从而改善脏器微循环并延缓血压的下降，减轻肠缺血再灌注损伤。     

外源性雌二醇对脑缺血再灌注损伤大鼠脑源性神经营养因子和神经生长因子表达的影响

目的：观察雌二醇对脑缺血再灌注损伤后具有脑缺血神经元保护作用的脑源性神经营养因子和神经生长因子表达的影响。方法：实验于2002-06／10在郑州大学第一附属医院病理科重点实验室进行。将72只Wistar大鼠随机分为3组：①假手术组（n=8），腹腔注射消毒后的精制玉米油1．5mL，1次／d，连续7d，然后手术，仅分离血管，不栓塞。②模型组（n=32）：给药同假手术组，然后采用线栓法建立大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型。③雌二醇组（n=32）：将17β-雌二醇溶于玉米油中，按100μg／kg腹腔注射，1次／d，连续7d，然后同前造模。假手术组于术后6h，其他两组于再灌注3，6，12，24h处死动物取材（每个时间点8只），采用连续切片免疫组化法检测各组大鼠脑皮质和纹状体区脑源性神经营养因子核神经生长因子表达，以及脑源性神经营养因子神经纤维有无染色。结果：经补充后72只大鼠进入结果分析。①脑源性神经营养因子阳性细胞数：脑皮质：再灌注后6h雌二醇组高于假手术组，但与模型组比较无差异[（78．88&;#177;6．03），（53．75&;#177;3．92），（76．75&;#177;5．87）个／视野]，再灌注12h雌二醇组显著高于模型组[（86．50&;#177;4．24），（63．13&;#177;7．72）个／视野，P〈0．01]。脑纹状体：再灌注6h雌二醇组高于假手术组，但与模型组比较无差异[（63．88&;#177;5．37），（38．75&;#177;4．17），（61．63&;#177;6．39）个／视野]，再灌注12h雌二醇组显著高于模型组[（71.38&;#177;5．29），（48．00&;#177;8．32）个／视野，P〈0．01]。②神经生长因子阳性细胞数：皮质：再灌注6h雌二醇组高于于假手术组[（71．50&;#177;4．50），（45．75&;#177;7．03）个／视野，P〈0．01]，至再灌注12h，显著高于模型组[（79．20&;#177;6．39），（58．63&;#177;4．81）个／视野，P〈0．01]，再灌注24h，仍高于模型组[（69．00&;#177;4．96），（49．25&;#177;5．80）个／视野，P〈0．01]。脑纹状体：3组均为少量表达。③脑源性神经营养因子神经纤维阳性密度：雌二醇组显著高于其他两组（X^2=19．015，25．6，P〈0．01）。结论：给予外源性的雌二醇可以使脑缺血再灌注后内源性脑源性神经营养因子、神经生长因子表达上调，且在再灌注12h内，使大脑半球免于损伤，达到脑保护治疗的作用。     

电针对脑缺血再灌注大鼠海马Fos蛋白的影响

目的：探讨脑缺血再灌注后电针对大鼠海马Fos蛋白表达的影响：方法：SD大鼠18只，体质量250～280g，雌雄不限。动物随机分为3组．对照组、模型组和治疗组。采用夹闭大鼠双侧颈总动脉造成的脑缺血再灌注损伤模型，电针百会、风池、大钟及足三里穴，频率2～20Hz，强度2．0A，持续30min，4h后观察海马Fos蛋白的表达。结果：电针能明显加强脑缺血再灌注后海马各区Fos蛋白的表达：治疗组与模型组相比海马各区阳性细胞数显著增加，CA1区（236&;#177;26．126&;#177;19.P&;lt;0.05)；CA3(328&;#177;80，212&;#177;55．P&;lt;0.05)：CA4(594&;#177;104．381&;#177;92、P&;lt;0．01)：DG(621&;#177;111，341&;#177;89．P&;lt;0.01)。结论：缺血再灌注可诱导海马Fos蛋白的显著表达，电针可增强Fos蛋白的表达。     

慢性脑低灌注状态缺血再灌注后大鼠海马P21和P53蛋白的表达

目的：通过建立大鼠慢性脑低灌注模型。观察慢性脑低灌注状态下正常脑灌注压恢复过程中P21和P53蛋白的表达情况。方法：实验于2003-12／2004-12在锦州医学院动物实验中心进行。取Ⅱ级Wistar雄性大鼠60只，随机分为对照组、模型不灌注组和模型再灌注组：每组动物按正常灌注压恢复后不同时间点分组(12，24，48，72h组)，每个时间点各5只。采用右侧颈外静脉-颈总动脉端侧吻合和对侧横窦引流静脉结扎的方法，建立慢性脑低灌注动物模型，术后90d阻断颈部动静脉分流造成模型组大鼠脑组织再灌注。各组在恢复正常灌注后12，24，48，72h取材，应用免疫组化和显微图像分析方法检测慢性脑低灌注状态下正常脑灌注压恢复过程中大鼠海马P21和P53蛋白的表达。结果：P21和P53蛋白在对照组大鼠脑组织中无表达．48h灰度值分别为155．34&;#177;1．18和172．91&;#177;1．37；在模型不灌注组中弱表达，48hP21和P53蛋白分别为125.12&;#177;3．56和112.10&;#177;4．46；在模型再灌注组大鼠脑组织中P21和P53蛋白于术后12h开始有表达，48h达高峰，分别为53．32&;#177;2．84和54．12&;#177;0．34，随后逐渐降低。结论：慢性脑低灌注状态下，正常脑灌注压恢复过程中可诱导P21和州P53蛋白的表达。     

大鼠脑缺血再灌注后Fas有关的死亡区和Fas有关的磷酸酶在不同部位和不同时间的表达特征

背景：目前对Fas有关的死亡区蛋白(Fas-associated death domain protein，FADD)、Fas有关的磷酸酶(Fas-associated phosphatase-1。FAP-1)研究较少，尤其它们在脑缺血再灌注中的表达情况尚不清楚。目的：探讨脑缺血再灌注后表达的时间及表达部位。设计：随机对实验动物分组。地点和材料：本研究的地点为济南军区总医院神经内二科，健康、雄性Wistar大鼠，体重320g左右。由山东省卫生防疫站实验动物中心提供。干预：用线栓法制作大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型，用免疫组化法检测FADD，FAP-1的表达。主要观察指标：FADD，FAP-1在缺血再灌注后鼠脑中的表达。结果：脑缺血前无FADD，FAP-1的表达，缺血再灌注后即有阳性染色，缺血再灌注12h表达最多(FADD：皮层11．60&;#177;0．57，纹状体6．27&;#177;0．72，海马14．06&;#177;1．35。FAP-1：皮层6．81&;#177;1．36，纹状体4．36&;#177;0．58，海马12．35&;#177;1．21)，缺血再灌注24h阳性表达最少。海马区与皮层FADD，FAP-1的表达明显多于纹状体区。结论：大鼠脑缺血再灌注引起了FADD，FAP-1的表达，FADD。FAP-1的表达可能与凋亡有关。     

通心络对大鼠脑缺血再灌注模型微血管细胞间黏附分子1和血管细胞黏附分子1表达的影响

背景：现代医学发现通心络制剂除了具有抗凝和抑制血小板聚集作用外，对血管内皮细胞有一定的保护作用。目的：观察中药复方制剂通心络是否影响脑缺血再灌注动物模型黏附分子的表达。设计：随机对照实验。单位：解放军第二军医大学长征医院神经内科。材料：实验于2002—10／2003—01在解放军第二军医大学长征医院神经内科实验室完成。选择雄性SD大鼠25只，随机分为假手术组5只、模型组10只和通心络组10只。方法：线栓法制备大鼠大脑中动脉脑局灶性脑缺血再灌注模型，假手术组除将尼龙线插在颈外动脉接近颈内动脉分叉处外，其余同模型组。通心络组大鼠在缺血再灌注前给予通-15,络粉剂1．0g／（kg-d），溶在生理盐水中灌胃1周。模型组和假手术组灌胃等剂量生理盐水。各组大鼠麻醉后取脑制备切片．行常规苏木精-伊红染色、免疫组化及原位杂交染色。主要观察指标：①缺血再灌注后细胞间黏附分子1和血管细胞黏附分子1阳性微血管表达数目。②缺血再灌注后细胞间黏附分子1mRNA阳性微血管表达数目。结果：①假手术组手术侧大脑半球皮质和基底节区未见细胞间黏附分子1、血管细胞黏附分子1蛋白和细胞间黏附分子1mRNA阳性微血管表达。②模型组大鼠缺血2h再灌注6h后，缺血侧大脑细胞间黏附分子1、血管细胞黏附分子-1蛋白表达水平和细胞间黏附分子1mRNA表达水平显著升高。③通心络组缺血侧大脑半球皮质和基底节区蛋白和mRNA阳性微血管数较模型组显著降低[（10．42&;#177;1．98），（12．42&;#177;2．14）／高倍视野；（8．54&;#177;2．00），（11．12&;#177;1．56）／高倍视野]（P〈0．05），血管细胞黏附分子1蛋白阳性微血管表达数目无显著变化（P〉0．05）。结论：通心络可以降低大鼠脑缺血再灌注后细胞间黏附分子1的转录和翻译过程，有助于减轻脑缺血后的炎症性损伤过程。     

局灶性脑缺血再灌注后脑腺苷含量和烯醇化酶的动态变化

目的：研究大鼠局灶性脑缺血再灌注后脑组织腺苷含量、烯醇化酶表达的动态变化及桂哌齐特对此的影响。方法：采用大鼠局灶性脑缺血再灌注模型。应用反相离子对高效液相色谱法和免疫组织化学法分别检测脑腺苷含量及烯醇化酶表达的动态变化。并进行神经功能评分。结果：模型组大鼠脑缺血及再灌注后4个时间点脑腺苷含量均较基础水平(1．01&;#177;0．14)μmol／g增高(P&;lt;0．05)；桂哌齐特组缺血后20min为(3．26&;#177;0．30)μmol／g，60min时为(1．91&;#177;0．20)μmol／g，较模型组[分别为(2．40&;#177;0．38)μmol／g，F=92．572，P&;lt;0.05；(1．27&;#177;0．17)μmol／g]显著升高(F=92．572，43．051，P&;lt;0．05)，再灌注后15min及60min呈现增高的趋势(P&;gt;0．05)。烯醇化酶的表达在脑缺血再灌注后各时间点均明显降低(P&;lt;0．05)，桂哌齐特组均明显高于模型组(P&;lt;0.05)，且神经功能评分有明显改善。结论：脑缺血再灌注后脑组织腺苷含量急骤升高，但持续时间短暂。桂哌齐特对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤神经元有保护作用，可能与其增加内源性腺苷含量从而增强腺苷的脑保护作用有关。     

丹皮酚对大鼠脑缺血再灌注后细胞间黏附分子-1表达的影响

目的：观察丹皮酚对大鼠脑缺血再灌注后细胞间黏附分子-1(intercellular adhesion molecule-1，ICAM-1)蛋白表达的影响。方法：利用线栓法制备大鼠大脑中动脉缺血2h再灌注24h模型，治疗组缺血时腹腔注射丹皮酚。行苏木精-伊红染色计数缺血区中性粒细胞浸润及坏死神经元的数目，应用免疫组化方法检测ICAM-1蛋白的表达情况。结果：丹皮酚治疗组坏死神经元百分率[(25．85&;#177;3．93)％]低于对照组[(31．13&;#177;4．58)％，t=2．770，P&;lt;0．05]。中性粒细胞的浸润数治疗组[(15．40&;#177;2．59)个／视野]较对照组[(19．10&;#177;2．81)个／视野]显著减少(t=3．063，P&;lt;0．01)。ICAM-1的表达治疗组[(13．90&;#177;2．18)条／视野]较对照组[(16．20&;#177;2．30)条／视野]下调(t=2．290，P&;lt;0．05)。结论：丹皮酚可能具有抑制大鼠脑缺血再灌注后ICAM-1蛋白表达的作用，从而减轻了神经元损伤。     

内给氧改善缺血再灌注后脑组织能量代谢的实验研究

目的：探讨内给氧改善大鼠脑组织缺血再灌注后能量代谢障碍，起到脑保护作用的机制。方法：30只Wiatax大鼠随机分成3组：假手术组、缺血组、治疗组，制备大鼠脑缺血再灌注损伤模型，予内给氧治疗后，分别测定各组大鼠脑组织中的三磷酸腺苷(ATP)、二磷酸腺苷(ADP)、单磷酸腺苷(AMP)，乳酸含量及Na^+-K^+-ATPase活性，计算能量负荷值。结果：内给氧治疗组的ATP含量(2．3309&;#177;0．0866)mg／L、能量负荷值为0．0960&;#177;0．0052，Na^+-K^+-ATPase活性为(0．903&;#177;0．117)μkat／g，均高于缺血组[(0．8199&;#177;0．0591)mg／L，0．1663&;#177;0．0044，(0．465&;#177;0．064)μkat／g]差异存显著性意义(P&;lt;0．05)，乳酸含量(16．0342&;#177;1．0136)mmol／g低于缺血组(24．2513&;#177;4．3571)mmol／g，差异有显著性意义(P&;lt;0．05)。结论：内给氧可明显改善大鼠脑缺血再灌注后能量代谢，具有脑保护作用。