急性肺损伤小鼠NF-κB的表达

目的：研究核转录因子-κB(nuclearflactor-κB，NF-κB)在急性肺损伤的动态改变，以期找到NF-κB在肺损伤中的作用。方法：25只雄性小鼠随机分为5组，正常对照及不同时间点致伤组，致伤组腹腔注射脂多糖形成急性肺损伤模型，采用免疫印迹和免疫组化法检测正常鼠及致伤鼠肺组织中NF-κB的表达。结果：脂多糖注射后1hNF-κB即开始增高，3h达高峰，随后开始下降。结论：NF-κB可能是急性肺损伤发病中的一个关键性因子。     

NF-κB与中性粒细胞凋亡的研究进展

NF-κB是由Sen等首次发现的普遍存在于胞质中的一种核转录因子。近年来人们开始关注NF-κB与中性粒细胞凋亡之间的关系。中性粒细胞(PMN)是一种终末未分化细胞参与机体防御功能,有研究证明NF-κB在中性粒细胞凋亡过程中起重要作用。本文主要介绍NF-κB在中性粒细胞凋亡的相关研究进展。     

Expression of NF-κB in hRPE Cells Stimulated by PDTC and IL-1β

The constitutive expression of nuclear-factor-κB (NF-κB) in human pigment epithelial (hRPE) cells cultivated in vitro and the possible changes when incubated with PDTC and IL-I were investigated. The synchronized hRPE cells in vitro were divided into two groups. In nonPDTC group, hRPE cells were exposed respectively to IL-1β and NS (for detecting the constitutive expressions of NF-κB in hRPE cells) ; In PDTC group, PDTC-pretreated hRPE cells were exposed respectively to IL-1β?Aand NS. (for detecting the constitutive expression of NF-κB in PDTC-pretreated hRPE cells). The expression of NF-κB in hRPE cells in two groups was detected by immunofluorescence stain and flow cytometry. The results showed that the constitutive expression of NF-κB in hRPE cells in vitro was 8.05 %, and increased to 30.26 % by IL-1β. After PDTC pretreatment, the constitutive expression of NF-κB in hRPE cells was decreased to 3.74%, and 3.66 % by IL-l,respectively. It was concluded that the expressions of NF-κB in hRPE cells could be increased significantly by IL-1βand depressed effectively by PDTC. Also, PDTC could significantly inhibit the activation of NF-κB induced by IL-1β.     

青藤碱抑制ERK/NF-κB信号通路缓解LPS诱导急性肺损伤

目的 验证青藤碱对急性肺损伤保护作用及作用机制;方法 建立脂多糖诱导的急性肺损伤小鼠模型,给予青藤碱治疗,检测血液及肺泡灌洗液的炎症指标以及ERK/NF-κB信号通路的激活情况,并通过HE和CD68免疫组化检测病理变化。结果 青藤碱提取液可以有效抑制ERK/NF-κB通路,减少炎症因子释放,减轻LPS导致的肺炎症细胞浸润及病理变化。结论 青藤碱可以通过抑制ERK/NF-κB通路缓解LPS诱导的急性肺损伤。     

The role of NF-κB in hepatocellular carcinoma cell

Objective To evaluate the role of nuclear factor-kappaB (NF-κB) and IκBα in hepatocellular cacinoma (HCC) SMMC7721 cells, the consequence of NF-κB inhibition in SMMC7721 cells transfected with mutated IκBα (mIκBα) plasmid and the effect of stable inhibition of NF-κB activity in combination with Doxorubicin.Methods Western blot was used to determine the expression of NF-κB and IκBα in SMMC7721 cells and normal liver cells. Nuclear protein was used to evaluate the binding of the 32P-labeled tandem κB sequence using electrophoretic mobility shift assay and the expression of NF-κB using Western blot between SMMC7721 cells transfected with mIκBα plasmid (SMMC7721-MT) and control cells. Furthermore, cell viability was plotted between SMMC7721-MT and control cells. The binding of κB sequence and cell viability between SMMC7721-MT and control cells at different concentrations of Doxorubicin were also investigated.Results Western blot analysis for nuclear extract showed more P50 (NF-κB1) and P65 (RelA) expression in SMMC7721 cells compared with normal liver cells. The expression of cytosolic IκBα protein in SMMC7721 cells was less than that in normal cells. SMMC7721-MT cells inhibited NF-κB nuclear translocation at 0, 24, 48 and 96 hours. Furthermore, NF-κB cannot be detected in the nuclear protein of SMMC7721-MT cells by Western blot. By calculating cell viability, the proliferation of SMMC7721-MT cells was shown to be suppressed more significantly than that of control cells. NF-κB in untransfected cells was activated by Doxorubicin in a dose-dependent manner, but that in SMMC7721-MT cells was not induced at low concentrations of Doxorubicin. Compared with untransfected cells, the viability of SMMC7721-MT cells was significantly suppressed at the same concentration of Doxorubicin (P<0.01）.Conclusions The present study demonstrates that upregulation of NF-κB and downregulation of inhibitory kappaB (IκBα) in SMMC7721 cells are related with the growth of hepatocellular cacinoma cells. Stable expression of mIκBα in SMMC7721-MT cells can inhibit NF-κB nuclear translocation and suppress cell growth. Furthermore, stable inhibition of NF-κB activity in combination with Doxorubicin can significantly inhibit cell proliferation in SMMC7721-MT cells. Thus, modulation of NF-κB may represent an improvement in the efficacy of HCC therapies and be worthy of further research and investigation.     

NF-κB的研究进展

细胞核因子κB（nuclear factor kappa B，NF-κB）作为基因表达的转录因子，近年来研究较多，本文对其生物学特点及组成，与细胞凋亡、免疫的关系，以及κB与神经胶质细胞功能，神经元的可塑性等方面给予综述，并且对其与癫痫的关系给予探讨。     

过表达NF-κB对血管平滑肌细胞增殖与凋亡的影响

目的 为了明确过表达NF-κB对血管平滑肌细胞增殖和凋亡中的作用。方法 将血管平滑肌细胞HA-VSMC分为正常对照组、NF-κB过表达组和空载组。通过构建NF-κB过表达载体,转染HA-VSMC细胞后,通过MTT检测各组HA-VSMC细胞的增殖情况,流式细胞仪检测HA-VSMC细胞凋亡情况,WB 检测各组HA-VSMC细胞NF-κB相对表达情况。结果 通过酶切验证证明NF-κB过表达载体构建正确;成功转染HA-VSMC细胞后,MTT检测结果显示NF-κB被激活可以抑制HA-VSMC细胞增殖;流式检测细胞凋亡结果也证实NF-κB激活可以促进细胞凋亡。结论 NF-κB表达升高会抑制血管平滑肌细胞的增殖并促进血管平滑肌细胞的凋亡。     

急性肺损伤大鼠肺组织NF-κB表达的研究

目的 在脂多糖（LPS）复制的急性肺损伤（ALI）大鼠模型，观察NF—κB改变。探讨NF-κB在ALI发病中的作用。方法 在LPS复制的大鼠ALI模型，观察动脉血气、肺湿／干（W／D）比值、肺组织病理。用RT-PCR法检测肺组织肿瘤坏死因子-α（TNF-α）mRNA表达，用ELISA法检测TNF-α蛋白变化。并使用Western blot方法观察肺组织NF-κB的改变。结果 在ALI大鼠，动脉血氧分压显著降低（P〈0．05），肺W／D比值均显著高于对照组（P〈0．01），MPO活性均显著高于对照组（P〈0．01），病理显示肺组织受损；肺组织TNF-α mRNA即显著升高（P均〈0．01），与此同时肺组织匀浆和血浆中TNF-α亦显著升高。2h达高峰。致伤后肺组织胞浆中P65蛋白的表达强度均较对照组显著降低（P〈0．01），而胞核中P65蛋白表达强度均较对照组显著升高（P〈0．01）。结论 LPS引起肺组织和血中TNF-α大量释放。肺组织NF-κB由细胞浆向细胞核转移而活化，提示NF-κB参与炎症的调控，在ALI中起重要作用。     

银杏苦内酯B对急性肺损伤小鼠肺组织NF-κB表达的影响

目的 研究银杏苦内酯B(BN52021)对脂多糖(LPS)诱发的急性肺损伤小鼠肺组织中核转录因子κB(NF-κB)蛋白质表达的影响.方法 健康昆明小鼠50只,随机分为2组:LPS组和BN52021预处理组.每组又根据不同的观察时间点(0、1、3、9 h和12 h)随机分为5个业组,每组5只小鼠.通过检测肺湿质量/干质量值(W/D)初步判断肺功能,普通光镜观察HE染色肺组织的病理变化,Western blot检测NF-κB p65在蛋白水平上的表达差异,ELISA法测定肺组织匀浆中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及白细胞介素-10(IL-10)浓度.结果 LPS注射后,LPS组W/D显著升高,提示存在肺水肿;BN52021预处理组在不同时间点的W/D均低于LPS组(P<0.05,P<0.01).LPS注射后1 h即有明显炎症反应的病理变化:两组光镜下均显示肺泡出血及中性粒细胞浸润,但BN52021预处理组明显轻于LPS组.LPS组NF-κB p65呈双峰表达,峰值分别为LPS注射后1 h和9 h;BN52021预处理组NF-κB p65呈单峰表达,峰值出现于9 h,除9 h外,各时间点BN52021预处理组NF-κB 065的表达均低于LPS组(P<0.05).与LPS组相比,BN52021预处理组可以明显降低TNF-α的表达(P<0.05),但2组IL-10峰值无统计学意义.结论 BN52021通过抑制NF-κB的早期活化抑制炎症反应,减轻肺组织损伤.     

miR-519d-3p通过调控TLR4/NF-κB通路促进脂多糖诱导的肺上皮细胞凋亡

目的 探讨miR-519d-3p对脂多糖LPS诱导的肺上皮细胞A549细胞凋亡的影响,并研究其具体作用机制。方法 LPS处理A549细胞构建急性肺损伤体外细胞模型,细胞内转染miR-519d-3p拮抗剂或miR-519d-3p激动剂构建miR-519d-3p下调或者上调的细胞模型。NF-κB抑制剂 Bay 11-7082预处理用来抑制细胞内NF-κB通路活性。qRT-PCR检测A549细胞内miR-519d-3p水平,流式细胞仪检测细胞凋亡,Western blot法检测凋亡相关蛋白和TLR4/NF-κB通路相关蛋白表达,细胞免疫荧光检测 NF-κB p65蛋白细胞核移位情况。结果 LPS处理A549细胞后,细胞内miR-519d-3p水平上升,并呈浓度依赖性;上调miR-519d-3p能够促进A549细胞凋亡,而下调则降低细胞凋亡;进一步分子机制研究表明miR-519d-3p通过影响TLR4/NF-κB通路相关蛋白表达及其磷酸化,诱导NF-κB蛋白细胞核移位而影响细胞凋亡;NF-κB抑制剂可缓解miR-519d-3p上调引起的细胞凋亡。结论 miR-519d-3p通过调控TLR4/NF-κB通路影响LPS诱导的肺上皮细胞凋亡。     

内毒素诱导的肺脏病变及中性粒细胞在其损伤过程中的作用

应用光镜、电镜图像分析仪观测了大鼠注射内毒素和氮芥＋内毒素后１、３、５、１２、２４、４８、７２ｈ个时相点的肺脏病理变化。发现Ｌ组肺组织充血，出血，水肿，肺萎陷；毛细血管内大量中性粒细胞和血小板滞留、嵌塞、崩解脱粒、内皮细胞肿胀、坏死；肺泡上皮退变，继而Ⅱ型肺泡上皮细胞增生等。病变过程表现为循环障碍、变性坏死和损伤修复３个阶段。先注射氮芥使大鼠外周血ＰＭＮ减少，再注射内毒素，发现肺脏病变延迟发生，且     

全身炎性反应综合征时中性粒细胞凋亡的异常

[目的]研究中性粒细胞即多形核白细胞(polymorphonuclear neutrophil,PMN)凋亡的异常在全身炎性反应综合征(systemic inflammatory response syndrome,SIRS)中的意义。[方法]SIRS患者8例(均为急性胰腺炎患者)为SIRS组,正常人6例为对照组。采用流式细胞仪和TUNEL方法定量检测外周血PMN的凋亡情况,采用ELISA法检测血清IL-6、IL-8的水平。[结果]流式细胞仪检测:SIRS组外周血PMN的细胞凋亡率为(42±8)%,低于对照组的(63±9)%,P<0.05;TUNEL法检测:SIRS组外周血PMN的凋亡指数(apoptosis index,AI)为25±7,低于对照组的37±10,P<0.005。SIRS组外周血血清IL-6水平为(8.2±2.2)pg/mL,高于对照组的(2.1±1.3)pg/mL,P<0.001;SIRS组外周血血清IL-8的水平为(38±12)pg/mL,高于对照组的(12±4)pg/mL,P<0.001。[结论]SIRS患者存在PMN的凋亡延迟,其在SIRS的发生、发展中有着重要的意义。     

Molecular basis of the adhesive process of polymorphonuclear neutrophils to vascular endothelial cells under endotoxin condit

ＭｏｌｅｃｕｌａｒｂａｓｉｓｏｆｔｈｅａｄｈｅｓｉｖｅｐｒｏｃｅｓｓｏｆｐｏｌｙｍｏｒｐｈｏｎｕｃｌｅａｒｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌｓｔｏｖａｓｃｕｌａｒｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌｓｕｎｄｅｒｅｎｄｏｔｏｘｉｎｃｏｎｄｉｔｉｏｎＺｈｏｕＸｉａｎｇｄｏｎ...     

重组腺病毒IκBαM在人肝癌细胞HepG2中的表达及对NF-κB活性的抑制

目的　检测重组腺病毒IκBαM (AdIκBαM)在肝癌细胞HepG2 中的表达及TNF α诱导下IκBαM变化情况 ,并观察此超级抑制物对NF κB活性的抑制作用。方法　利用GFP及有限稀释法测定病毒滴度和感染靶细胞的效率 ,Western印迹法检测 2 93细胞和HepG2 中重组腺病毒介导IκBαM的表达及TNF α诱导下IκBαM变化情况 ,EMSA观测感染AdIκBαM前后经TNF α处理的HepG2 细胞核中NF κB活性水平的变化。结果　扩增AdIκBαM的滴度为 2× 10 8pfu/ml,MOI为 2 0 ;AdIκBαM在HepG2 中能稳定高效表达且不因TNF α的诱导而降解 ,未感染细胞基础水平的IκBα及转入的AdIκBα对照则随诱导时间延长而呈现先逐渐降低后升高的趋势。EMSA显示 ,感染AdIκBαM的细胞在处理前后均无NF κB活化迹象 ,而未感染及感染AdIκBα的细胞经TNF α诱导后则有NF κB过度活化情况。结论　AdIκBαM能高效扩增并有效感染靶细胞HepG2 ,能在HepG2 细胞中稳定高水平表达 ,且不会被TNF α诱导而降解 ,能稳定有效的抑制HepG2 细胞中NF κB的过度活化 ,上述结果初步表明 ,通过IκBαM超级抑制物抑制NF κB的活性 ,再辅以常规的抗肿瘤治疗 ,有望成为一种十分有效的肿瘤基因治疗方法。     

硒酸酯多糖对人食管鳞癌Eca109细胞增殖及凋亡的影响

目的研究硒酸酯多糖(KSC)对人食管鳞癌Eca109细胞增殖及凋亡的影响,并初步探讨其作用机制。方法甲基噻唑基四唑(MTT)法检测不同浓度KSC对Eca109细胞增殖的影响;流式细胞术观察KSC对Eca109细胞凋亡的影响;Westernblot技术检测KSC对Eca109细胞核转录因子-κB(NF-κB)蛋白表达水平的影响。结果 KSC可明显抑制Eca109的增殖(P<0.05),并呈时间及浓度依赖性;经KSC作用后,Eca109细胞的凋亡率随KSC作用时间的延长(24、48、72h)及KSC浓度的增加(30、60、120μg/mL)而明显升高(P<0.01);KSC(60、120μg/mL)显著下调Eca109细胞核中NF-κB蛋白水平(P<0.01)。结论 KSC对Eca109细胞具有抑制增殖、诱导凋亡作用,其作用机制可能与抑制NF-κB信号通路有关。     

吸烟的慢性阻塞性肺病患者外周血中性粒细胞Bak mRNA的表达

 目的 探讨吸烟的慢性阻塞性肺病（chronic obstructive pulmonary disease,COPD）患者外周血Bak基因表达异常及其与COPD发病的关系。方法 入选者包括健康对照组（不吸烟者10例、吸烟者14例）和轻中度吸烟COPD患者9例。使用Percoll非连续密度梯度沉降法分离人外周血中性粒细胞,使用real-time PCR来检测外周血中性粒细胞中Bak mRNA的表达水平。结果 相对于健康对照组,轻中度COPD患者外周血中性粒细胞中的Bak mRNA水平（0.88±0.38）明显降低,差异有统计学意义（P<0.05）;吸烟健康者外周血中性粒细胞中Bak mRNA水平（1.23±0.29）低于不吸烟健康者（1.33±0.38）,但差异无统计学意义;Bak mRNA水平与FEV1/预计值%、FEV1/FVC%均呈正相关,相关系数r分别为0.438 8（P<0.05）和0.432 1（P<0.05）。结论 Bak基因表达异常可能与COPD发病有一定关系。Bak mRNA水平与临床肺功能之间有明显相关性,推测可能与COPD的严重程度相关。     

热应激反应对IL-6所致中性粒细胞凋亡障碍的影响

目的观察体外诱导热应激反应对IL-6所致中性粒细胞凋亡障碍的影响。方法将14例健康人的中性粒细胞分成6份，其中1份作为对照组，其余5份应用热休克或氯化镉诱导热应激反应后与培养液或IL-6共同孵育，分为热休克组、氯化镉组、IL-6组、IL-6 热休克组及IL-6 氯化镉组。各组于热应激反应诱导后3、20h分别测定中性粒细胞热休克蛋白(HSP70)的表达及凋亡率。结果热休克与氯化镉均可诱导热应激反应，细胞内HSP70表达增加；热应激反应促进凋亡，IL-6导致中性粒细胞凋亡抑制，IL-6不影响热应激反应对中性粒细胞的促凋亡作用。结论热应激反应促进凋亡并可逆转IL-6对其凋亡的抑制作用，提示热应激反应可能参与机体的抗炎作用机制。     

大鼠内毒素血症时外周血及肺泡内PMN死亡方式及呼吸爆发的检测

目的 观察大鼠内毒素血症时肺组织中及外周血中性粒细胞（PMN）凋亡,坏死及功能改变的差异。方法 Wistar大鼠25只,腹腔注射内毒素（LPS）（O55：R5,5mg/kg)造成内毒素血症,分别在给予LPS前（对照）及给予LPS后2、4、8、12h（每组5只动物）取血及支气管肺泡灌洗,密度梯度法分离PMN,用流式细胞仪测定凋亡和坏死比例以及呼吸爆发功能的改变。结果 内毒素血症时,外周血和支气管肺泡灌洗液中PMN凋亡细胞比例相似,但与对照相比,外周血PMN坏死比例明显增加,呼吸爆发能力明显受抑,而支气管肺泡灌洗液PMN坏死比例显著减少,呼吸爆发能力显著增强。结论 在内毒素血症时,扣押于肺组织中的PMN在凋亡和坏死上表现出与外周血PMN不同的改变,其结果是组织中PMN存活PMN增加,并持续处于活化状态,这与PMN造成组织损伤有关。