甲型流感病毒H3N2诱导人子宫内膜腺癌细胞凋亡的实验研究

目的探讨甲型流感病毒H3N2对人子宫内膜腺癌细胞系(endometrialadenocarcinomacelllines,JEC)细胞的凋亡诱导作用及机制。方法取不同血凝单位的H3N2感染JEC细胞,经HE染色、琼脂糖凝胶电泳以及流式细胞术等方法检测细胞凋亡情况,并用免疫细胞化学法检测H3N2对JEC细胞Fas、FasL及TGF-β表达的影响。结果感染后的JEC在形态上呈现凋亡变化;电泳出现梯状条带;流式细胞术显示细胞凋亡率随病毒感染时间的延长而降低,且有随着病毒浓度增加而增高的趋势。免疫细胞化学法示病毒感染后JEC细胞的Fas染色增强,TGF-β染色减弱,但FasL始终没有表达。结论甲型流感病毒H3N2能够诱导JEC细胞凋亡,此作用与病毒浓度及感染时间有一定关系,其机制可能与Fas和TGF-β的表达有关。     

甲型流感病毒H3N2诱导狗肾传代细胞凋亡的研究

目的探讨甲型流感病毒对体外培养的狗肾传代细胞系(MDCK)的凋亡诱导作用.方法用不同血凝单位的甲型流感病毒感染MDCK细胞,经HE染色、琼脂糖凝胶电泳以及流式细胞术等方法检测凋亡情况.结果甲型流感病毒感染MDCK后,在细胞形态上呈现凋亡特有变化;电泳出现典型梯状条带;Annexin-V染色流式细胞仪检测出在一定范围内,细胞凋亡率与病毒的浓度呈正相关.结论甲型流感病毒能够诱导体外培养的MD-CK细胞凋亡,且在一定范围内,细胞凋亡率与病毒的浓度呈正相关.     

鱼金抑制乙型流感病毒诱导细胞凋亡研究

目的探讨鱼金注射液阻断乙型流感病毒诱导狗肾传代细胞（Madin-Darby canine kidney，MDCK）凋亡。方法采用瑞氏染色法光镜下观察细胞形态变化、原位末端标记术测定细胞凋亡率。结果病毒感染组MDCK细胞凋亡百分率显著高于其他组（P〈0.001）；试验组、药物对照和细胞对照组比较无差异（P〉0．05）；原位末端标记组细胞凋亡显著高于瑞氏组（P〈0．01）。结论该研究提示乙型流感病毒可诱导MDCK细胞凋亡，而鱼金能阻断乙型流感病毒诱导MDCK细胞凋亡。     

苦参碱诱导MDS细胞株SKM-1凋亡作用的研究

目的:研究苦参碱诱导骨髓增生异常综合征细胞株SKM-1的凋亡作用及其机制。方法:采用WST-1法检测不同浓度的苦参碱对SKM-1细胞生长的抑制作用;应用流式细胞术检测早期凋亡细胞以及线粒体跨膜电位的变化;用分光光度法检测caspase-9活性。结果:0.25～2.0mg/ml苦参碱对SKM-1细胞有生长抑制作用,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05);苦参碱处理48小时后,细胞凋亡率明显增加,并呈剂量依赖性(P<0.05);1.0mg/ml苦参碱处理后48小时内,细胞线粒体跨膜电位逐渐降低,caspase-9活性逐渐升高,呈时间依赖性(P<0.01)。结论:苦参碱可能通过降低细胞线粒体跨膜电位、激活caspase-9而诱导SKM-1细胞早期凋亡。     

全反式维A酸诱导肺癌细胞株凋亡的研究

目的: 探讨全反式维A酸(ATRA)对小细胞肺癌细胞株SH-77的治疗作用及机制,寻找肺癌治疗的新途径。方法: 采用不同浓度的ATRA处理肺癌细胞株SH-77,通过苔盼蓝拒染实验检测细胞活力、MTT法检测细胞生长抑制率和流式细胞术检测细胞周期分布、细胞凋亡和Bcl-2蛋白的表达。结果: 不同浓度的ATRA对SH-77的生长均有抑制作用,G₁/G₀期细胞比例升高,S期细胞比例降低,增殖指数(PI)降低,凋亡指数(AI)和AI/PI比值升高,诱导细胞凋亡;Bcl-2蛋白比例下降(P<0.01)。结论: ATRA对肺癌细胞株SH-77的生长有抑制作用,同时可诱导其凋亡,可能与下调其Bcl-2蛋白表达有关。     

硫芥诱导大鼠小肠上皮细胞凋亡的研究

目的：观察硫茶对大鼠小肠上皮细胞（IEC－6）生长的影响及其引起的细胞死亡的方式。方法：透射电镜、DNA琼脂糖凝胶电泳定性硫芥中毒的IEC－6细胞形态变化及DNA的改变。采用Cell Death DetectionELISA试剂盒研究IEC－6细胞凋亡与硫芥浓度之间的关系。结果：0．1－1000μmol/L硫芥对IEC－6细胞的毒性作用与硫芥的深度和作用时间呈正相关。电镜观察到细胞凋亡的形态学改变。细胞膜完整,染色质固缩并聚集于核膜边缘,凋亡小体形态;DNA电泳有“DNA Ladder”出现,0．1－100μmol/L硫芥处理的细胞的凋亡量随硫芥 度的升高而增加,超过100μmol/L测凋亡量反降低。结论：硫芥可诱导大鼠小肠上皮IEC－6细胞凋亡,在低浓度时以凋亡为主,高浓度时则出现坏死。     

雄黄对Raji细胞凋亡的影响

目的：了解雄黄体外抗肿瘤的细胞谱。方法：采用MTT法测定细胞的活力,利用流式细胞仪测定细胞周期、Annexin V和bcl-2的表达。结果：雄黄体外对Raji细胞的生长有明显的抑制作用,对细胞周期的影响表现为G2/M期的阻滞,Annexin V阳性的凋亡细胞明显增加,并且可使bcl-2的表达下调。结论：雄黄有诱导Raji细胞凋亡的作用。     

姜黄素对肝癌细胞株SMMC7721凋亡的研究

[目的]探讨姜黄素对人肝癌SMMC7721细胞株的生长凋亡作用及机制。[方法]用MTT法检测姜黄素对肝癌细胞系SMMC7721增殖的影响;应用流式细胞术检测不同浓度姜黄素对SMMC7721细胞凋亡及线粒体膜电位的影响。[结果]姜黄素对SMMC7721细胞具有明显的增殖抑制作用,在6.25～50μmol/L范围内成剂量依赖性,与对照组相比差异具有显著性意义,P〈0.01。姜黄素6.25、12.5、25、50μmol/L诱导SMMC7721细胞24 h的凋亡率为6.3%、7.2%、37.3%、72.3%,线粒体膜电位下降为6.3%、13.8%、47.8%和87.9%。[结论]姜黄素可通过诱导细胞凋亡而有效抑制肝癌细胞SMMC7721增殖,并与线粒体膜电位降低相关。     

热化疗对Raji细胞体外增敏作用的实验研究

目的 观察热疗联合阿霉素对人B细胞淋巴瘤细胞系Raji细胞内的药物浓度变化及凋亡的影响.方法 MTT法确定阿霉素的工作浓度,以该浓度进行化疗或与热疗的联合,选择温度40℃、41℃及42℃,体外作用于Raji细胞.作用前及48 h采用台盼蓝拒染法检测肿瘤细胞的存活率;MTT法检测肿瘤细胞增殖的抑制作用;流式细胞仪检测肿瘤细胞的凋亡及细胞内药物浓度的变化.观察热疗联合阿霉素的抗肿瘤效果.结果 作用48 h IC50的药物浓度作为实验的工作浓度.热化疗组对Raji细胞有明显的抑制作用(P＜0.01),随着温度的增高而增强;热化疗组细胞内的药物浓度明显增加(P＜0.01).结论 热疗联合阿霉素能增加Raji细胞内的药物浓度,提高肿瘤细胞的凋亡率.     

有丝分裂阻滞剂Nocodazole诱导HL-60细胞的凋亡

目的　以细胞有丝分裂阻滞剂 Nocodazole为诱导物 ,诱导白血病细胞系 HL- 6 0细胞凋亡 ,并进行形态学和生物化学指标的检测 .方法　首先 ,观察 1nmol· L- 1 ～ 10μmol· L- 1递增浓度的 Nocodazole对 HL- 6 0细胞的作用 ,然后选取浓度 5 0 0 nm ol· L- 1 诱导凋亡 ,通过 HE染色、荧光染色、DNA片段化 (DNA fragmentation)及流式细胞仪分析研究其凋亡的特征 .结果　 5 nm ol· L- 1～ 10 μm ol· L- 1的Nocodazole都可以诱导 HL - 6 0细胞的凋亡 .在 5 0 0 nmol·L- 1 的 Nocodazole作用下 ,HE染色、荧光染色显示从 6 h开始即出现胞质嗜碱性增强、细胞核固缩断裂、凋亡小体形成等凋亡的形态学特征性改变 .基因组 DNA电泳检测显示从 8h开始出现微弱的梯状 DNA.流式细胞仪检测了不同时间点的细胞周期显示了 G2期阻滞 ,未能检测到亚二倍体峰 .结论　我们用 Nocodazole不仅诱导了典型的白血病细胞凋亡 ,而且在 G2 /M期阻滞与凋亡之间建立了联系 ,可用于凋亡机制或细胞周期调控与凋亡关系的研究     

Raji细胞不同激活方法的比较

目的：比较不同的Raji细胞激活方法，以选择最佳EB病毒早期抗原激活途径。方法：采用正丁酸加巴豆油和5’碘脱氧尿嘧啶核苷两种不同的方法，分别对Raji细胞进行激活，通过免疫酶法检测．根据其阳性细胞表达及血清抗体几何平均滴度，比较两种方法的优劣。结果：正丁酸加巴豆油方法阳性细胞表达百分率及抗体几何平均滴度明显高于5’碘脱氧尿嘧啶核苷方法。结论：正丁酸加巴豆油方法优于5’碘脱氧尿嘧啶核苷方法，是目前Raji细胞激活较为理想的方法。     

生长抑素类似物诱导人胆管癌细胞株凋亡及对胞内游离钙的影响

目的 探讨生长抑素类似物SMS201－995（SMS）是否通过诱导人胆管癌细胞凋亡而抑制肿瘤生长,以及与细胞内游离钙的关系。方法 采用人胆管癌细胞系SK－ChA-1,应用MMT比色法,Annexin V-FITC技术及激光共聚焦显微镜技术等进行检测和观察。结果 在SMS作用下CK－ChA-1细胞生长受抑制。SMS处理SK－ChA-1细胞后,Annexin V标记的凋亡细胞增多。细胞凋亡的同时细胞内游离钙浓度升高。结论 SMS可能通过诱导SK－ChA-1细胞[Ca^2 ]i依赖性细胞凋亡,抑制胆管癌生长。     

Effect of adenovirus-mediated p27 gene expression on the proliferation and apoptosis of HL-60 and Raji cell lines

Background p27 is an essential mediator of cell cycle control,which plays a key negative role in the proliferation and tumorigenesis of certain cell types. Here, we designed this study to explore the possible effects of p27 on the proliferation and apoptosis of HL-60 and Raji cell lines. Methods HL-60 and Raji cells were transfected with p27 via an adenovirus-mediated approach. The efficiency of Adp27 infection and the expression of p27 mRNA and protein were evaluated by X-gal staining, RT-PCR, and flow cytometry. The proliferation and apoptosis of HL-60 and Raji cells were estimated by means of trypan blue staining, M‘l-r assay, Annexin V/PI, and DNA ladderelectrophoresis. Results The infection efficiencies in HL-60 and Raji cells were 40.3% and 32.0%, respectively. RT-PCR and flow cytometry showed that there was significant expression of p27 mRNA and protein in HL-60 and Raji cells infected with Adp27; on the other hand, uninfected HL-60 cells showed faint traces of p27 mRNA and protein and Raji cells showed nearly no signs of p27 mRNA and protein. As demonstrated by a cell growth curve and by an MTT assay, strong time-dependent proliferation inhibition was apparent in HL-60 and Raji cells infected by Adp27. After 72 hours of infection, the Annexin V^ /PI^- apoptotic cell rates in HL-60 and Raji cell lines were 46.9% and 35.7%, respectively, significantly higher than in the control groups (4.7% and 5.6%, respectively). Typical DNA ladder bands were detectable in HL-60 and Raji cells after 48 hours of Adp27 infection. Conclusions Adenoviral vector-mediated p27 gene transfection of HL-60 and Raji cells leads to the inhibition of cellular proliferation and the promotion of cell apoptosis. This technique may provide an approach to gene therapy for leukemia or lymphoma.     

塞来昔布诱导人肝癌细胞株QGY-7701凋亡的研究

目的探讨塞来昔布体外诱导人肝癌细胞株QGY-7701凋亡的作用。方法设立空白对照组(培养液中不加任何药物)及塞来昔布5、25、50、100、150μmol.L-1 5个剂量组,作用时间分为24、48、72 h,应用四甲基偶氮唑盐(MTT)法观察塞来昔布不同浓度和作用时间对QGY-7701细胞生存率的影响,选择合适的作用时间和3个剂量再做其他凋亡方法的检测;采用Hoechst 33258染色荧光显微镜观察凋亡细胞的形态学变化;采用双荧光染色(AnnexinV-EGFP/PI)流式细胞检测、末端脱氧核苷酰基转移酶介导性dUTP切口末端标记(TUNEL)检测、DNA含量分析(检测细胞周期)等方法多指标检测细胞凋亡率。结果通过Hoechst 33258染色可以从细胞形态上看出塞来昔布诱导QGY-7701细胞凋亡,而Annexin V-EGFP/PI流式细胞检测、TUNEL检测、细胞周期及MTT检测结果显示随着塞来昔布浓度升高和作用时间延长,凋亡率升高(P<0.05,P<0.01)。结论塞来昔布有诱导肝癌细胞QGY-7701凋亡,抑制其生长的作用,具有治疗肝癌的潜在功能。     

爱迪诱导U251细胞凋亡及相关基因表达的实验研究

目的　以人类成神经胶质瘤细胞系U2 5 1为实验对象 ,研究爱迪 (AD)诱导细胞凋亡的规律 ,并初步探讨了其内在的分子机制。方法　将爱迪分为 7 5mg/ml(A组 )、15mg/ml(B组 )、30mg/ml(C组 )、6 0mg/ml(D组 ) 4个浓度组 ,以顺铂 (DDP) 0 .4μg/ml为阳性对照组 (E组 ) ,另设一阴性对照组 (F组 ) ,观察光镜下细胞的形态变化 ,采用An nexinV PI双标记流式细胞仪凋亡检测法 ,观察爱迪诱导细胞凋亡的情况 ;采用ABC免疫组化法检查p5 3、Bcl 2和PCNA基因的表达。结果　爱迪对U2 5 1细胞具有诱导凋亡的作用 ,在 2 4h和 48h范围内 ,爱迪诱导U2 5 1细胞凋亡率与作用时间无明显关系 (P >0 .0 5 ) ,与药物浓度密切相关 (P <0 .0 1)。在爱迪浓度为 30mg/ml时 ,其凋亡率最大 ,2 4h和 48h分别为 2 0 87%和 2 0 0 9%。但爱迪浓度为 15mg/ml以上时 ,p5 3、Bcl 2、PCNA基因表达均与对照组有明显差异 ,在爱迪浓度为 30mg/ml时 ,p5 3表达高达 73 3 % ,Bcl 2降低为 2 0 9% ,随着药物浓度的增加 ,PCNA表达下降。结论　爱迪有诱导U2 5 1细胞凋亡的作用 ,其诱导凋亡依赖于p5 3基因 ,并伴有Bcl 2、PCNA基因的下调     

bcl-xS基因诱导人大肠癌细胞凋亡

目的 研究bcl-xS基因对体内大肠癌细胞生长的影响及作用机制。方法 将bcl-xS基因稳定转染的人大肠癌LoVo细胞接种于裸鼠体内并使其生长,然后取移植瘤标本原位末段标记并进行电镜观察,同时将neo基因转染的及未经转染的LoVo细胞分别接种于裸鼠体内,作为对照。结果 经bcl-xS转染的LoVo细胞移植瘤有明显的散在或成团的凋亡细胞,而经neo转染的LoVo细胞则无明显的细胞凋亡。结论 本研究结果提示bcl-xS基因在体内有诱导细胞凋亡的作用。     

Microwave induces apoptosis in A549 human lung carcinoma cell line

Background  Microwaves have other biological effects on cancer as well besides killing tumor cells by coagulation. Some studies showed that microwaves may induce apoptosis in some tumor cells. The apoptotic effect of microwaves may help in clinic to remove residual malignant cells nearby the primary lesion and avoid relapse subsequently. However, there is little evidence on this subject from lung cancer. We studied the effect of microwaves on inducing apoptosis in the human lung carcinoma cell line A549 cells, aiming to identify its effect on apoptosis.

Methods  A549 cells were radiated by various intensities and durations of microwaves. Apoptosis induction in A549 cells was analyzed by morphological observations, tetrazolium blue color method (MTT) assays, flow cytometery, immunohistochemistry, and image analyses.

Results  Morphological changes in A549 cells, including cell shrinking and nuclear pycnosis, were observed after microwave radiation. Microwaves significantly inhibited metabolic activities and induced apoptosis in A549 cells. The results of the MTT assay showed a significant decrease of cell activities in all the radiation groups compared with the normal control (P <0.01). The low point of cell activities often appeared at 6–12 hours after radiation. Apoptosis was also confirmed by flow cytometery. The early stage apoptotic rate reached 6.10%–17.98% and the advanced stage apoptotic rate + necrosis rate reached 8.04%–44.06% at 6 hours after microwave irradiation, in contrast to 2.32% and 4.10% in the respective control groups. Down-regulation of Bcl-2 expression and up-regulation of p53 expression were observed by immunohistochemistry after radiation. In most treated groups, the down-regulation of Bcl-2 expression reached its lowest level at 3–6 hours after radiation (integrated optical density (IOD)-6 hours: 2.13±0.08–5.14±0.13 vs. control: 5.79±0.10, P <0.01) and the up-regulation of P53 expression peaked at about 3 hours (IOD-3 hours: 2.61±0.13–8.07±0.11 vs. control: 1.29±0.07, P <0.01). Cell damage, apoptosis, and protein expression levels in the samples differed depending on the radiation intensity and duration.

Conclusions  Microwaves can promote apoptosis in A549 cells. The effect depends on the duration and dosage of microwave radiation. Bcl-2 and p53 proteins may be involved in the apoptotic process of A549 cells induced by microwaves.

     

中国甲型流感病毒血凝素基因进化分析

目的 探索甲型流感的暴发规律及毒株血凝素（hemagglutinin,HA）基因的进化.方法 通过分析中国采集并公布的甲型流感病毒基因数据,对中国大陆所有宿主为人、禽类和哺乳动物的HA基因氨基酸序列进行多序列比对,并用于构建HA的系统发育树,同时对中国香港地区的HA基因蛋白序列同样处理;分析不同宿主的HA基因的受选择压力.结果 选择中国大陆1 252个HA基因和香港485个HA基因,对其分析发现,自2002年以来,禽流感的暴发次数和频率多于历史记录;系统发育树结果显示中国大陆和香港地的HA基因邻接树的拓扑结构一致;宿主为人的HA基因受选择大于禽类宿主的HA基因.结论 不同宿主的HA基因受选择有差异,提示HA基因的快速进化可能会对人类健康产生潜在威胁.     

醋酸棉酚对Raji细胞增殖和凋亡的影响

目的 观察醋酸棉酚对人Burkitt淋巴瘤细胞株Raji细胞增殖和凋亡的影响.方法 采用台盼蓝染色和噻唑蓝(MTT)法观察醋酸棉酚对Raji细胞生长存活的影响,瑞氏染色法观察药物处理后细胞形态学变化,琼脂糖凝胶电泳和Annexin V-FITC标记流式细胞仪检测细胞凋亡,流式细胞仪分析细胞周期、检测细胞凋亡率及Bcl-2蛋白表达水平变化,比色法测定Raji细胞Caspase-3样蛋白酶活性.结果 5 μmol/L以上浓度醋酸棉酚能抑制Raji细胞生长增殖并诱导其凋亡,效应与药物浓度及给药时间呈正相关.醋酸棉酚作用后,Raji细胞被阻滞于G_0/G_1期.比色法显示Caspase-3样蛋白酶活化.流式细胞仪检测到Bcl-2蛋白表达下调,且与Caspase-3活化在时间上存在同步趋势.结论 醋酸棉酚能抑制aaji细胞增殖并诱导凋亡,其原因可能与调节细胞周期及下调Bcl-2蛋白表达有关.     

转染的FasL基因诱导GRC-1细胞凋亡的形态学观察

目的：构建含FasL基因的腺病毒载体,转染肾癌GRC－1细胞株的影响,方法：以腺病毒作载体,把FasL基因克隆入腺病毒载体,构建成含FasL基因的转基因载体并酶切鉴定,用脂质体包裹法把含FasL基因的腺病毒载体转染GRC－1细胞株,用RT－PCR方法证实转染后有无FasL基因表达,采用电镜观察GRC－1细胞形态学变化。结果：酶切鉴定证实含FasL基因的转基因载体构建成功;RT－PCR显示转染后GRC－1细胞株FasL基因表达水平显著高地未转染细胞株（P＜0．01）;肾癌细胞株GRC－1细胞FasL基因72h后,在光镜下可见细胞体积缩小,生长不良,染色质浓缩,密度增高,胞核中出现颗粒样物质,生长不良,染色质浓缩,密度增高,胞核中出现颗粒样物质,电镜下可见凋亡小体。结论：成功构建了FasL基因的转基因载体,转染FasL基因可诱导肾病GRC－1细胞凋亡。