基因工程枯草杆菌生产中性蛋白酶的研究

使用一株基因工程枯草杆菌ＤＢ４０３（ｐＷＬ２６７）生产中性蛋白酶，其宿主ＤＢ４０３失去了野生菌株９９％的胞外蛋白酶生产能力，质粒ｐＷＬ２６７则带有野生菌株中性蛋白酶的全部结构基因。在分批培养中，中性蛋白酶的活性为２６２ｍｇ／ｍｉｎ·Ｌ左右，通过培养基改进达到３．２８６ｇ／ｍｉｎ·Ｌ。连续培养表明，中性蛋白酶的比生产速率在比生长速率为０．２ｈ￣（－１）时最大。在控制补加葡萄糖和其它培养基成分的补料分批培养中，中性蛋白酶活性达１７．６７０ｇ／ｍｍ·Ｌ。     

中性蛋白酶对壳聚糖的降解

用粘度测定法和还原糖测定法,研究了中性蛋白酶非专一性降解壳聚过程中温度,ｐＨ值,反应时间,酶浓度,底物浓度,金属离子及壳聚糖的脱乙酰度对中性蛋白酶降解壳聚糖反应速度的影响,确定了以壳聚糖为底物的中性蛋白酶的一些催化特性：最适温度为５０℃;最适ｐＨ值为６．０;米氏常数Ｋｍ值为１．１×１０＾－２ｇ／ｍＬ;一定浓度的Ｃｕ６２＋,Ｂａ＾２＋,Ｍｎ＾２＋抑制该酶的活性;     

COMPARISON OF FOUR METHODS TO GENERATE IMMUNOREACTIVE FRAGMENTS OF A MURINE MONOCLONAL ANTIBODY OC859 AGAINST HUMAN OVARIAN EPITHELIAL CANCER ANTIGEN

In the present study,four different proteases (pepsin,papain,bromelain and ficin) were screened with a murine monoclonal antibody OC859,in order to verify whether different digestion procedures could improve yield and stability of the F(ab‘)2 or Fab fragments.The yields of F(ab‘)2 or Fab fragments from digestion with pepsin,papain,bromelain and ficin were respectively 20.3 /-2.0%,50.5% /-5.0%,74.4 /-2.7% and 82.8 /-10.2% of the theoretical maximum.Immunoreactivity in a noncompetitive solid-phase radioimmunoassay (SPRIA) of the fragments generated by the four proteases were respectively 10 /-5%,36 /-5%,60 /-6% and 75 /-6% of the intact OC859 IgG.These results suggested that the fragmentation of OC859 with ficin gave a higher yield of superior immunoreactive fragments.     

ICE样蛋白酶与细胞凋亡

<正>细胞凋亡在维持多细胞有机体的正常发育、平衡机体内环境、抗御病毒入侵、预防细胞癌变等多方面都具有重要作用,ICE(IL-1βconverting enzyme)样蛋白酶因其与细胞凋亡的调控密切相关而越来越受到人们的广泛关注。本文仅就哺乳类ICE样蛋白酶与细胞凋亡的关系进行简要综述。     

去整合素-基质金属蛋白酶在肿瘤细胞中的作用研究进展

去整合素-金属蛋白酶(ADAM)家族是许多细胞外基质(ECM)的成分。根据其结构的不同分为膜锚定型和分泌型,这些分子在各种生物活动(如细胞黏附、细胞融合、细胞迁移、膜蛋白脱落和蛋白水解)中发挥作用。一些ADAMs成员在恶性肿瘤的病理过程中发挥作用。ADAMs的活性受基因表达、胞质和周围细胞的调控,酶原和抑制因子也参与调控。尽管现在还不清楚具体的作用机制,但是它们中大多数具有调控生长因子活性,整合、诱导细胞增殖和侵袭的作用。     

大豆蛋白酶抑制剂活性的测定

在测定胰蛋白酶活性和胰凝乳蛋白酶活性的基础上建立了蛋白酶抑制剂活性测定的方法。并用此方法测定了３种蛋白酶抑制剂的活性，即ＣＭ－ＢＢＩ、粗ＢＢＩ和豆浆晶粗ＢＢＩ，其活性（每ｍｇ抑制剂蛋白抑制酶的μｇ数）分别为１６６０９、１４４１和２２０．６。为了衡量该法的可靠性，我们还测定了Ｓｉｇｍａ厂出产的胰蛋白酶抑制剂的活性，所得结果与该厂测定的结果一致。故可利用该法选择抗癌食物。     

非小细胞肺癌MMP-s和TIMP-s的表达与转移及预后分析

目的检测138例非小细胞肺癌(NSCLC)组织中MMPs及其抑制剂TIMPs蛋白及mRNA水平的表达,探讨其与NSCLC生物学因素的关系。方法运用SP免疫组化技术检测MMP-2、MMP-9、TIMP-1、TIMP-3在138例NSCLC中的表达。RT-PCR检测14例NSCLC中MMP-9、TIMP-3的mRNA表达。结果NSCLC中MMPs和TIMPs的阳性表达率均显著高于正常肺组织及增生及不典型增生上皮,MMPs和TIMPs阳性表达率与TNM分期、淋巴结的转移有关,但与NSCLC分化程度、分类、肿瘤的大小无关;MMP-9、TIMP3的mRNA的表达与淋巴结转移相关;MMP-2的表达与NSCLC患者生存时间呈负相关,而TIMP3表达与生存时间呈正相关。结论MMPs和TIMPs与肺癌的浸润、转移有关,是NSCLC转移、TNM分期、预后的重要指标。     

基质金属蛋白酶和组织金属蛋白酶抑制剂与脑血管病的关系

细胞外基质（ECM）是一种多能蛋白和糖蛋白的复合体，基质金属蛋白酶（MMP）是一种降解基底膜（ECM）成分的锌依赖性酶，该酶与脑缺血和再灌注有密切关系。组织金属蛋白酶抑制剂（TIMP），可减轻缺血和再灌注损伤。本就MMP和TIMP在脑缺血时表达和作用进行系统概述 。     

Calpains活化与细胞凋亡的相关研究进展

Calpains是一种胞内半胱氨酸蛋白酶,主要由胞内钙离子浓度的升高所激活。近年来的研究发现calpains与细胞凋亡有关。相关试验表明,活化后的calpains可通过剪切有关凋亡分子蛋白如Bcl-2,Bax,Bid和p53等,以及直接剪切并活化caspase-3、caspase-7等方式,从而参与调控细胞凋亡的病理过程。     

Cystatin C与恶性肿瘤的关系

浸润及转移是恶性肿瘤的特征性表现,肿瘤细胞能产生多种水解酶(如半胱氨酸蛋白酶,无花果蛋白酶等)降解细胞外基质,破坏宿主黏膜屏障。近年来,研究人员发现半胱氨酸蛋白酶抑制剂C(Cystatin C)能有效的抑制细胞内外的半胱氨酸蛋白酶的活性,从而间接抑制肿瘤的浸润转移,因此有望成为肿瘤检测及治疗的分子指标。     

基质金属蛋白酶及金属蛋白酶组织抑制剂在肺纤维化中的变化

观察基质金属蛋白酶（MMPs）及金属蛋白酶组织抑制剂（TIMPs,MMPs特异性抑制剂）在鼠肺纤维化中的变化,以探讨MMPs与肺纤维之间的关系。采用气管内灌小博莱霉方法复制鼠肺纤维化模型,并进行以下研究;①HE染色、Masson染色,②羟脯氨酸含量测定,③MMP-2,TIMPs免疫组织化学分析,④MMPs蛋白电泳,⑤肺组织溶胶原活性测定。结果显示：实验组大鼠在肺泡炎阶段MMP-2的蛋白表达增强、活性增加,TIMPs的蛋白表达相对减弱,肺组织溶胶原活性升高;在肺纤维化阶段,MMP-2较炎症时减弱,而TIMPs增强,肺组织溶胶原活性下降。提示MMPs/TIMPs失衡影响肺纤维化的形成与发展。     

基质金属蛋白酶-9及其组织金属蛋白酶抑制剂与大肠癌侵袭和转移的关系研究

目的 研究基质金属蛋白酶（MMP-9）及组织金属蛋白酶抑制剂（TIMP-1）与大肠癌侵袭和转移的关系.方法 对30例大肠癌患者的手术切除之癌组织和癌周正常组织,应用Western blot分析的方法检测MMP-9和TIMP-1的表达情况,探讨这些因子表达与大肠癌侵袭和转移的关系.结果 大肠癌组织中MMP-9的表达量明显高于正常组织（P＜0.05）;TIMP-1的表达量则明显低于正常组织（P＜0.05）;伴淋巴结转移的大肠癌组织中MMP-9和TIMP-1的表达量均明显高于无淋巴结转移者（P＜0.05）;随着肿瘤Dukes分期的进展,MMP-9和TIMP-1的表达量均逐渐升高.结论 大肠癌中MMP-9、TIMP-1的表达,可能是癌肿发生、生长和浸润转移的重要因素,可作为判断肿瘤恶性程度和预后的重要指标. 纤维支气管镜检查慢性咳嗽63例 目的 探讨纤维支气管镜（纤支镜）在胸部X线检查正常的慢性咳嗽患者病因诊断中的作用.方法 回顾分析2003年7月-2006年7月胸部X线检查正常的63例慢性咳嗽患者纤支镜所见,镜下活检,刷检和肺泡灌洗术的病理及细菌学检查结果.结果 63例患者中,镜下观察到鼻息肉2例（3.2%）,鼻甲肥厚2例（3.2%）,鼻腔粘膜暗红、增厚3例（4.8%）,咽隐窝和咽后壁较多粘液附着3例（4.8%）,咽后壁滤泡增生呈鹅卵样观4例（6.3%）,鼻窦口见脓液、充血肿胀2例（3.2%）,声带结节1例（1.6%）,支气管粘膜轻度充血8例（12.7%）,局部支气管粘膜充血肿胀4例（6.3%）,局部管腔狭窄4例（6.3%）,新生物3例（4.8%）,小结节2例（3.2%）,局部见白色附着物1例（1.6%）,未见异常24例（38.1%）.找到抗酸杆菌4例（6.3%）,找到革兰阳性或革兰阴性细菌6例（9.5%）,其中细菌培养出菌株5株,找到真菌2例（3.2%）,找到癌细胞4例（6.3%）.结论 纤支镜对胸部X线检查正常的慢性咳嗽患者的病因诊断有重要意义,可提高诊断的准确性,减少误诊. 纤维支气管镜;慢性咳嗽;病因;诊断 基质金属蛋白酶-9、组织金属蛋白酶抑制剂-1在喉癌中的表达及其临床意义 目的 探讨基质金属蛋白酶（MMP-9）及组织金属蛋白酶抑制剂（TIMP-1）二种蛋白在喉癌中的表达及其临床意义.方法 应用流式细胞术检测50例原发喉癌患者新鲜手术切除癌组织及50例相应癌旁组织（距肿瘤边缘0.5cm）与16例非喉部疾病患者的正常喉粘膜组织中MMP-7、MMP-9及TIMP-1的表达.结果 MMP-9在喉癌组织中的表达量（FI=1.24±0.15）及阳性表达率（100%）明显高于癌旁组织（FI=1.05±0.12）（72%）和正常粘膜组织（FI=1.0±0.02）（0%）,比较差异均有统计学意义（P＜0.01）.TIMP-1在喉癌组织中的表达量（FI=0.85±0.16）及阳性表达率（56%）明显低于癌旁组织中的表达量[FI=0.97±0.18,（84%）]和正常喉粘膜组织[FI=1.0±0.13,（88%）],比较差异均有统计学意义（P＜0.01）;MMP-9及TIMP-1在癌旁组织和正常喉粘膜组织间的表达差异无统计学意义（P＞0.05）.结论 在喉癌组织中,MMP-9的高表达和TIMP1低表达在喉癌的发生、发展、转移过程中有重要作用,二者联合检测对喉癌的预后评估可能更有价值,并且为临床治疗提供理论指导. 喉癌;基质金属蛋白酶-9;组织金属蛋白酶抑制剂-1;流式细胞术;细胞外基质 肝切除联合纤维胆道镜辅助治疗肝内胆管结石 目的 探讨肝切除联合纤维胆道镜治疗肝内胆管结石的疗效.方法 回顾性分析2001-2006年经肝切除并配合术中及术后胆道镜处理的105例肝内胆管结石病例.结果 105例患者均行相应的肝叶（段）切除和术中胆道镜取石,31例（29.5%）术后有残余结石,术后胆道镜残余结石总取净率为80.6%,105例患者总治愈率为94.3%（99/105）,总残石率为5.7%（6/105）.结论 肝切除联合纤维胆道镜是治疗肝内胆管结石的一种有效方法,纤维胆道镜在处理肝内胆管结石中起到了重要作用. 肝切除;纤维胆道镜;胆结石     

基质金属蛋白酶与组织金属蛋白酶抑制剂及其在肿瘤临床的应用前景

伴有细胞外基质破坏的肿瘤细胞浸润是肿瘤转移这一复杂机制的最主要过程。在基底膜和结缔组织等胞外基质破坏过程中 ,具有基质特异性的基质金属蛋白酶和组织金属蛋白酶起重要作用。因此 ,通过抑制金属蛋白酶的内在活性或合成抑制剂来达到抑制肿瘤转移的目的 ,已成为肿瘤临床诊断和治疗研究的重要内容。本文对基质金属蛋白酶和组织金属蛋白酶抑制剂的最新研究进展做一综述。1　基质金属蛋白酶细胞外基质 (extracellular m atrix,ECM)代谢的许多生物学过程同基质金属蛋白酶 (matrix metalloproteinases,MMPs)的表达密切相关 [1 ]。MMPs是…     

基质金属蛋白酶2与肿瘤的侵袭和转移

肿瘤组织中基质金属蛋白酶2(MMP-2)的表达与细胞分级、淋巴结转移及临床病理分期和预后有关,MMP-2表达水平及MMP-2与TIMP-2的失衡在肿瘤侵袭和淋巴结转移中发挥重要作用。MMP-2表达水平及MMP-2与TIMP-2的平衡状况可作为评估肿瘤预后的指标,并能为探寻新的治疗方法提供线索和依据。     

大鼠烫伤创面愈合过程中MMP-2和TIMP-1表达的相关性

目的：探讨烫伤创面愈合过程中MMP-2和TIMP-1表达的相关性。方法：在8只大鼠背部制成20%TBSA深Ⅱ度烫伤模型,烫伤后分别在24小时,4,7,14,20,29,35,62天时切取每只大鼠背部创面标本,采用免疫组化方法检测标本中MMP-2及TIMP-1的表达情况;在实验中取2只正常大鼠皮肤标本,同样检测标本中MMP-2及TIMP-1的表达情况。结果：MMP-2和TIMP-1在正常大鼠皮肤中几乎无表达;在大鼠烫伤后不同时期表达强度不同,24小时后开始表达,以后逐渐增强,大约到第20天达到高峰,持续约15天后减弱;到创面愈合后仍有表达。MMP-2的表达水平与TIMP-1的表达水平呈正相关。结论：MMP-2和TIMP-1的表达水平在创面愈合过程中有一定规律,与烫伤创面的愈合和瘢痕的形成可能有密切关系。     

基质金属蛋白酶与脑缺血研究进展

基质金属蛋白酶与缺血性脑血管病的发生,脑缺血后脑损伤及再灌注关系密切,基质金属蛋白酶抑制剂可能成为防治缺血性脑血管病的新靶点。     

基质金属蛋白酶抑制剂的研究

基质金属蛋白酶家族（MMPs）是细胞外基质（ECM）降解过程中的重要酶类,与多种病理过程尤其是细胞的侵袭和转移有重大关联。基于MMPs的种类、结构和作用方式,已经发现了多种抑制剂,均处于临床前或临床研究阶段。MMPs抑制剂正被开发为一种新型的抗血管生成剂,已成为研究的焦点。     

MMP-2与肿瘤的研究进展

目的探讨MMP-2与多种肿瘤侵袭和转移间的关系。方法查阅大量国内外文献。结果 MMP-2通过降解细胞外基质、促进新生血管形成、调节细胞间的粘附等机制,促使肿瘤发生侵袭和转移;不同肿瘤中MMP-2有不同程度的增加,且与肿瘤的进展和预后相关。结论 MMP-2可以作为特异性的分子标志物,被用于各种癌前病变和肿瘤的筛查。本文就MMP-2和肿瘤的相关研究进展作一综述。