商陆皂苷甲对IL-1β诱导的肾小球系膜细胞ERK1/2-AP-1通路活化的影响

目的 观察商陆皂苷甲(EsA)含药血清对大鼠肾小球系膜细胞(rGMC)增殖及其对IL-1β诱导rGMC的ERK1/2-AP-1通路活化的影响.方法 用不同剂量EsA(5、10、20、40 mg/kg)将SD大鼠灌胃后获取含药血清,并设对照组(0.5％羧甲基纤维素钠灌胃);用上述各组浓度的EsA含药血清处理rGMC,并设对照组血清组.四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测各组EsA含药血清对rGMC增殖的影响;将rGMC分为空白对照组、IL-1β单独作用组、IL-1ββ+ EsA双重作用组、IL-1β+U016双重作用组、IL-1β+U0126+EsA共同作用组,同步化后培养48 h,Western Blot法检测p-ERK1/2、AP-1的表达并成像分析.结果 EsA(5～10 mg/kg)含药血清抑制了细胞增殖(P＜0.05或P＜0.01);ILqβ组促进了rGMC的p-ERK1/2、AP-1表达(P＜0.05),IL-1β+EsA组、IL-1β+ U0126组,IL-1β+U0126+EsA组作用rGMC后,其p-ERK1/2、AP-1表达均降低(P＜0.05).结论 EsA含药血清(5～10 mg/kg)显著抑制了rGMC的增殖;EsA通过下调p-ERK1/2、AP-1表达,抑制了IL-1β诱导的rGMC增殖,EsA作用于ERK1/2-AP-1通路是其抑制rGMC增殖的机制之一.     

商陆皂苷甲对白细胞介素1β诱导的肾小球系膜细胞增殖及Caspase-3的影响

目的观察商陆皂苷甲（EsA）对白细胞介素1β（IL-1β）诱导的大鼠肾小球系膜细胞（rGMC）增殖及Caspase-3表达的影响,探讨EsA治疗狼疮性肾炎等系膜细胞增殖性肾小球肾炎的可能机制。方法MTT法检测不同浓度的EsA对rGMC增殖的影响;蛋白质印迹法检测Caspase-3的表达,并成像分析。结果观察剂量中EsA对rGMC没有明显的细胞毒作用,EsA作用rGMC48h后抑制细胞增殖的有效浓度为2．5～5．0mg／L（P〈0.05或P〈0．01）;IL-1β促进了rGMC的Caspase-3的表达（P〈0．01）,与IL-1β组比较,EsA＋IL-1β组对rGMCC的Caspase-3的表达差异无统计学意义（P〉0.05）。结论在体外EsA（2．5～5mg／L）可显著抑制rGMC的增殖,GMC可能是EsA的作用靶细胞;但其促凋亡作用不明显。     

商陆皂苷甲对 IL －1β诱导的肾小球系膜细胞ERK 通路活化的影响

目的：观察商陆皂苷甲（ EsA）含药血清对大鼠肾小球系膜细胞（ rGMC）增殖及其对IL－1β诱导rGMC的ERK1／2 mRNA、p－ERK1／2表达的影响,探讨EsA治疗肾小球系膜细胞增殖性疾病的可能机制。方法将SD大鼠随机分成对照组（0.5％羧甲基纤维素钠灌胃）,EsA（5 mg／kg）组,EsA （10 mg／kg）组,EsA （20 mg／kg）组,EsA （40 mg／kg）组,药物灌胃后,获取含药血清;取6代rGMC随机分成对照血清组,EsA （5 mg／kg）血清组, EsA （10 mg／kg）血清组,EsA（20 mg／kg）血清组,EsA（40 mg／kg）血清组,MTT法检测各组对rGMC增殖的影响;将rGMC分为对照组,IL－1β组,IL－1β＋EsA组,IL－1β＋U016组,IL－1β＋U0126＋EsA组,同步化后培养48 h, RT－PCR法检测各组ERK1／2 mRNA的相对表达量,Western blot法检测p－ERK1／2的表达并成像分析。结果EsA （5～10 mg／kg灌胃）含药血清抑制了细胞增殖（ P＜0.05,P＜0.01）;IL－1β组促进了rGMC的ERK1／2 mR-NA、p－ERK1／2表达（P＜0.05）,IL－1β＋EsA组、IL－1β＋U0126组,IL－1β＋U0126＋EsA组作用rGMC后,其ERK1／2 mRNA、p－ERK1／2表达均降低（P＜0.05）。结论 EsA含药血清（5～10 mg／kg灌胃）可显著抑制rGMC的増殖,EsA（10 mg／kg）血清组作用48 h效果最佳;EsA通过下调p－ERK1／2表达,抑制了IL－1β诱导的rGMC增殖,ERK1／2通路是EsA抑制rGMC增殖通路之一。     

丹参酮ⅡA对血管平滑肌细胞CyclinD1和CDK4的表达的影响

目的探讨丹参酮ⅡA对血管平滑肌细胞CyclinD1和CDK4的表达的影响。方法建立同型半胱氨酸(HCY)诱导的兔VSMC增殖模型,加入丹参酮ⅡA共同培养48 h,用流式细胞仪分析血管平滑肌细胞(VSMC)细胞周期变化及细胞周期调控因子CyclinD1和CDK4的表达。结果丹参酮ⅡA组和空白对照组各期细胞数比较无统计学意义(P0.05);丹参酮ⅡA组G0/G1期细胞数明显高于HCY组,S期、G2/M期细胞数明显少于HCY组(t=6.700~12.063,P0.05);丹参酮ⅡA组细胞CyclinD1、CDK4表达均显著低于HCY组(t=7.922、3.936,P0.05)。结论丹参酮ⅡA具有拮抗VSMC增殖的作用,有利于降低血管平滑肌细胞CyclinD1及CDK4的表达。     

靶向抑制Fbxw8对前列腺癌细胞增殖能力的影响

目的 探讨Fbxw8对人前列腺癌DU145细胞增殖及对增殖相关基因cyclinA、cyclinB、CDK1、p21和p27表达的影响.方法 RT-PCR和Western blot法验证Fbxw8 siRNAs的干扰效率;利用CCK-8检测法检测细胞的增殖能力;流式细胞仪检测细胞周期分布情况;Western blot法检测细胞增殖相关蛋白CDK1、CDK2、cyclinA、cyclinB、P21、P27的表达.结果 Fbxw8 siRNAs显著下调DU145细胞中Fbxw8mRNA及蛋白水平的表达(P＜0.01);Fbxw8 siRNAs显著抑制DU145细胞增殖活力,其中72 h抑制最明显(P＜0.05);流式细胞术分析显示,Fbxw8 siRNAs可阻滞细胞于G2/M期,G2/M期细胞百分数由15.32％ (control siRNA)增加到29.03％(Fbxw8 siRNA 1)和28.39％(Fbxw8 siRNA 2);Western blot结果显示,Fbxw8 siRNAs可促进周期蛋白依赖性激酶抑制剂p21、p27的表达,同时下调G2/M期调控蛋白CDK1、CDK2、cyclin A及cyclin B1的表达.结论 靶向抑制DU145细胞中Fbxw8的表达可显著抑制细胞的增殖,使阻滞细胞于G2/M期,并且可能是通过下调CDK1、CDK2、cyclin A及cyclin B1的表达,上调P21、P27的表达实现的.     

1α,25-（OH）2D3对大鼠成骨细胞周期及相关蛋白表达的影响

目的研究1a,25-（OH）2D3对SD大鼠成骨细胞增殖及相关蛋白的表达的影响。方法采用流式细胞术（FCM）检测细胞周期,RT-PCR和Westernblotting分别检测细胞G。期调节蛋白细胞周期素D1（cyclinD1）、细胞周期素依赖性激酶4（CDK4）、p21mRNA和蛋白的表达。结果与0nmol·L-1组比较,各1d,25-（OH）2D3干预组细胞周期发生改变,G0／G1期细胞数递减,而S＋G2/M期细胞比例升高,PI增加,差异显著（P〈0．05）;且1a,25-（OH）2D3可诱导细胞cyclinDl、CDK4mRNA及蛋白表达和下调p21（P〈0．05）。结论置1d,25-（OH）2D3可上调cyclinD1、CDK4表达和抑制负性调节因子p21,调节相关蛋白表达以促进成骨细胞增殖。     

中药金克通过G1期阻滞和诱导凋亡抑制HL-60细胞增殖

目的 研究中药金克对体外HL-60细胞系细胞周期调控方面的影响.方法 使用MTT比色法检测HL-60细胞活力,使用流式细胞术检测细胞周期和凋亡,使用Western blot检测细胞周期相关蛋白和凋亡相关蛋白的表达. 结果金克能通过G1期阻滞和诱导凋亡使HL-60细胞活性降低.金克作用于HL-60细胞引起剂量和时间依赖性凋亡.金克阻滞HL-60细胞在G1期的原因是CDKI蛋白(p19INK4,p21Cip/waf1 和 p27Kip1)表达增高,同时CDK2,CDK4,CDK6,Cyclin D1和Cyclin E表达降低.金克也引起凋亡相关蛋白Bax,Bcl-2和Caspase-3的表达.结论 首次证明了金克通过G1期阻滞和诱导凋亡抑制HL-60细胞的增殖,这表明金克是一个细胞周期特异性的抗癌药物.     

塞来昔布对大肠癌细胞株HT-29增殖和凋亡的影响

目的体外观察塞来昔布对大肠癌细胞株HT-29细胞增殖和凋亡的影响,探讨其可能的作用机制.方法采用噻唑蓝(MTT)比色法,流式细胞(FCM)、吖啶橙/溴化乙啶染色结合荧光显微镜、Western印迹法等技术,研究塞来昔布对HT-29细胞增殖的抑制和可能的机制.结果塞来昔布抑制HT-29细胞生长,呈浓度和时间依赖性.流式术检测出典型的亚二倍体"凋亡峰",凋亡率(7.31±2.37)%～(48.30±2.86)%;使G0/G1期细胞比例升高,S期和G2/M期比例缩小、细胞核固缩、凋亡小体形成等.凋亡比例呈剂量和时间依赖.塞来昔布降低细胞周期素依赖蛋白激酶CDK2和CDK4的表达、上调细胞周期素依赖蛋白激酶抑制因子p21WAF1/CIP1n蛋白表达.结论体外塞来昔布抑制HT-29细胞增殖,并诱导细胞凋亡;下调CDK2和CDK4蛋白表达,上调P21WAF1/CIPln蛋白表达.塞来昔布抑制HT-29细胞增殖、诱导凋亡可能与阻止细胞周期进展有关.     

三氧化二砷对人肝癌细胞株SMMC-7721中p27~(kip1)及其相关分子Skp2表达的影响

目的 通过检测三氧化二砷(As2O3)对肝癌SMMC-7721细胞周期素依赖性激酶抑制剂(CDKI)p27kip1及S期激酶相关蛋白2(Skp2)的影响,探讨其抗癌作用机制.方法 体外培养人肝癌细胞株SMMC-7721,用2μmol/L As2O3处理72h,流式细胞仪检测细胞周期变化及细胞凋亡率,应用Western blot方法检测p27kip1、Skp2及CDK2基因编码蛋白的表达.结果 与对照组比较,As2O3使SMMC-7721细胞周期阻滞在G2/M期.经As2O3作用的人肝癌细胞p27kip1基因编码蛋白表达增加,而p27kip1相关分子Skp2及CDK2的表达减少.结论 As2O3可干扰细胞周期的进程,抑制SMMC-7721细胞的增殖.其作用机制与上调p27kip1蛋白及下调Skp2、CDK2有关.     

曲古抑菌素A对人乳腺癌MCF-7细胞抑制作用的实验研究

目的 探讨曲古抑菌素A(TSA)对乳腺癌细胞系MCF-7细胞生长增殖、细胞周期相关基因CDK4、Cyclin D1、Rb表达的影响.方法 分别以不同浓度的TSA处理MCF-7细胞,采用流式细胞仪检测细胞周期;用RT-PCR方法检测CDK4、Cyclin D1、Rb mRNA的表达水平;用Western blotting法检测MCF-7细胞的CDK4、Cyclin D1、Rb蛋白表达.结果 各组细胞均随着药物浓度的升高,S期细胞在细胞周期中所占比例逐渐减少,G1期细胞则明显增加(P＜0.01),细胞滞留在G1期;经不同浓度TSA处理的细胞CDK4和Rb mRNA表达水平没有明显变化;Cyclin D1的mRNA表达水平显著下降.CDK4蛋白表达水平也没有明显变化,Cy-clin D1和pRb磷酸化蛋白的水平明显下降.结论 TSA抑制乳腺癌MCF-7细胞的增殖可能是通过下调Cyclin D1和Rb蛋白的磷酸化水平来实现的.     

AMPK激动剂AICAR通过阻滞细胞周期于G0/G1期抑制肺动脉平滑肌细胞增殖

目的 建立PDGF-BB诱导的原代大鼠肺动脉平滑肌细胞(pulmonary vascular smooth muscle cells,PASMCs)的增殖细胞模型,通过AMPK激动剂AICAR干预,探讨AICAR对PASMCs细胞周期和增殖的影响及其机制,为肺血管重构防治寻找靶点。方法 通过20ng/ml PDGF-BB刺激诱导PASMCs增殖建立细胞模型,采用AICAR(0.5mmol/L)干预PDGF-BB诱导的PASMCs增殖,Western blot法检测总的和磷酸化的AMPK, CCK-8检测PASMCs增殖,流式细胞仪分析细胞周期,实时定量PCR(RT-PCR)检测cyclinD1、cyclinE、CDK2/4/6 mRNA的表达。结果 Western blot法检测表明AICAR可以活化AMPK,CCK-8检测结果表明AICAR能够抑制PDGF-BB诱导的PASMCs增殖;流式细胞仪检测结果表明AICAR能够抑制细胞周期于G₀/G₁期,RT-PCR结果表明AICAR可以抑制cyclinD1、cyclinE、CDK2、CDK4和CDK6的mRNA的表达。结论 AICAR通过抑制cyclinD1、cyclinE、CDK2/4/6 的mRNA表达阻滞细胞周期于G₀/G₁~S期,抑制PASMCs增殖。     

曲尼司特抑制血管平滑肌增生中P27的表达

目的:探讨曲尼司特对大鼠胸主动脉球囊损伤后平滑肌细胞周期调控因子P27表达和增殖反应的干预作用。方法:建立大鼠胸主动脉球囊损伤模型。用免疫组化方法鉴定各组P27、CDK4、PCNA的表达;实验分为3组:对照组、手术组(28 d)、给药组(28 d)。另外用流式细胞术测定平滑肌细胞各期(G0+G1期,S期,G2+M期)百分比。结果:①假手术组无新生内膜形成,手术组内膜增生显著,曲尼司特组内膜增生减轻(P<0.01)②免疫组织化学染色显示手术组新生内膜处P27低表达,PCNA高表达;曲尼司特组新生内膜P27表达强烈,而PCNA表达被抑制(P<0.01)。③流式细胞术显示,与手术组相比,曲尼司特组平滑肌细胞处于增殖期的细胞比例明显降低。结论:在活体内,曲尼司特可通过影响细胞周期调控因子的表达而抑制动脉损伤后的内膜增殖反应。     

消痰散结方对人胃癌细胞周期及CDK4表达影响的实验研究

[目的]观察消痰散结方(主要由半夏、胆南星、鸡内金、全蝎等组成)对胃癌细胞周期及CDK4表达的影响,以探讨其抑制胃癌增殖的机理。[方法]将人胃癌MKN-45接种于裸鼠腋部皮下,分别给予小鼠消痰散结方、环磷酰胺或生理盐水21 d后处死小鼠,取出瘤组织,用流式细胞仪检测各组胃癌组织中处于G1、S期的细胞数,用免疫组化SABC法检测胃癌组织中CDK4的表达。[结果]中药组G1期细胞数为(66.84±1.14)％,空白组为(54.66±8.72)％,二者比较有显著性差异(P<0.01),中药组、化疗组S期细胞比例均明显低于空白组(P<0.01),中药组S期细胞数也明显低于化疗组(P<0.01)。中药组胃癌组织中CDK4表达总阳性率、中度及以上阳性率均明显低于空白组和化疗组(均P<0.05)。[结论]消痰散结方可明显抑制胃癌细胞的增殖;其机理可能是通过抑制CDK4的表达来影响细胞周期的完成。     

CDK2干扰RNA对人肝癌细胞HepG_2细胞周期和增殖的影响

目的:探讨CDK2 siRNA对人肝癌细胞株HepG2细胞CDK2 mRNA表达及其对HepG2细胞周期和增殖的影响.方法:利用脂质体转染法将特异性的携带绿色荧光蛋白的CDK2干扰RNA的重组质粒PGenesil-1-CDK2导入HepG2细胞,同时设立阴性对照空载体转染组PGenesil-1-HK.G418筛选稳定表达细胞株扩增培养.并用倒置荧光显微镜观察转染细胞的绿色荧光蛋白.反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和流式细胞术(FCM),分别检测转染后的HepG2细胞CDK2 mRNA和细胞周期的变化,噻唑蓝(MTT)法检测癌细胞生长增殖率.结果:经1mo的G418筛选得到稳定表达细胞株,与阴性对照组及空白对照组相比,转染组CDK2 mRNA 水平明显下降,细胞周期明显改变,细胞从G1期到S期发生阻滞.结论:RNA干扰技术可明显抑制CDK2基因的表达,引起 HepG2细胞周期阻滞及肿瘤细胞生长抑制作用,为CDK2介导的肿瘤基因沉默疗法提供实验依据.     

CyclinE,P27KIP1与白血病

CyclinE是G1期细胞周期的正调控因子，是G1／S转换过程中主要的限速因子之一，可促使细胞进入S期．P27^KIP1是一个非特异性CKI，是G1期负调控因子，可通过抑制G1期激酶复合物(cyclinE—CDK2，cyclinD—CDK4)而使细胞停滞在G1期．这两者在白血病细胞株及白血病患者中均有异常表达，并具有判断预后的意义．现就cyclinE,P27^KIP1与白血病的关系作一综述．     

白藜芦醇诱导肺癌细胞凋亡和细胞周期阻滞的分子机制

目的探讨白藜芦醇对肺癌细胞系A549和H1299细胞增殖与细胞周期阻滞及细胞凋亡之间的联系。方法采用MTT法检测白藜芦醇对A549和H1299细胞增殖的影响;用Western印迹法检测白藜芦醇作用后A549和H1299中凋亡相关蛋白cleaved-caspase-3、cleaved-caspase-7、cleaved-caspase-9、cleaved-PARP及细胞周期相关蛋白cyclin D1、cyclin D3和CDK2、CDK4、CDK6、p53、p18、p21、p27的表达情况;通过流式细胞仪技术检测白藜芦醇诱导A549和H1299细胞凋亡率以及细胞周期阻滞的影响。结果白藜芦醇对A549和H1299的生长均有抑制作用,呈浓度依赖性;经白藜芦醇处理后,A549和H1299的周期蛋白cyclin D1、cyclin D3和CDK2蛋白的表达水平上调,而周期蛋白CDK4、CDK6、p53、p18、p21、p27的表达水平下调;A549和H1299的凋亡相关蛋白cleaved-caspase-3、cleaved-caspase-7、cleaved-caspase-9、cleaved-PARP的表达水平上调;流式细胞仪检测A549和H1299的细胞凋亡率随白藜芦醇的浓度上升而增加,流式细胞仪检测细胞周期即可观察到随白藜芦醇的浓度的增加,细胞周期明显阻滞于G1/S期。结论白藜芦醇可能是通过促进caspases通路的活化,从而促进细胞凋亡;周期蛋白cyclin D1、cyclin D3和CDK2蛋白的表达水平的上调和CDK4、CDK6、p53、p18、p21、p27的表达水平的下调可能是白藜芦醇诱导人肺癌细胞发生G1/S期阻滞的关键机制。     

微小RNA-1180转染对肾癌细胞生长的影响

目的 探讨微小RNA-1180(miR-1180)转染对肾癌细胞系786-O和ACHN生长的影响.方法 肾癌细胞分为两组:dsControl组和miR-1180组.实时定量(qRT)-PCR检测p21 mRNA的表达变化.Western blot检测p21、细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK)4、CDK6和CyclinD1蛋白的表达变化.流式细胞术(FCM)检测细胞周期变化,使用多靶扫描法(MTS)和集落形成实验检测细胞活力和增殖能力.结果 qRT-PCR结果显示,与对照组相比,转染miR-1180后786-O和ACHN细胞中p21 mR-NA水平分别上调2.54倍(P＜0.01)和2.49倍(P＜0.01).p21蛋白表达趋势与qRT-PCR结果相符,CDK4、CDK6和CyclinD1蛋白的表达明显下调.FCM结果显示,转染miR-1180后,位于G0/G1期的细胞比例明显增大,而位于S期和G2/M期的细胞比例明显下降,表明细胞周期被阻滞在Go/G1期.MTS结果显示,与dsControl组相比,转染miR-1180后,两种肾癌细胞活力明显降低.集落形成实验显示,miR-1180组的集落数数量明显较少,表明细胞增殖能力降低.结论 miR-1180能显著激活肾癌细胞中p21蛋白的表达,并抑制肾癌细胞786-O和ACHN的生长.     

辣椒素诱导人膀胱癌RT4细胞细胞周期阻滞的实验观察

目的 了解辣椒素对膀胱癌RT4细胞生长的影响及可能机制.方法 采用细胞计数kit-8(CCK-8)试剂盒观察辣椒素(50、100、150、200、250μmol/L)对膀胱癌RT4细胞生长的影响,以辣椒素(0 μmol/L)为对照组;流式细胞术检测细胞周期和凋亡;逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)和免疫荧光检测瞬时受体电位香草酸亚型1(TRPV1)的表达;Western印迹检测细胞周期蛋白P53、P21、细胞周期依赖性激酶(CDK)2表达水平.结果 100 μmol/L辣椒素明显抑制RT4细胞生长,细胞成活率为82.0%±6.2%,低于对照组(100.0%±12.4%,P=0.036),且生长抑制呈剂量依赖性,250μmol/L时细胞成活率仅为7.8%±2.9%(P=0.000).辣椒素能诱导RT4细胞G0/G1期阻滞,同样呈剂量依赖性,对照组G0/G1期细胞比例为37.4%±5.6%,而250 μmol/L时达到72.4%±5.3%(P=0.000).RT4细胞表达TRPV1受体mRNA和蛋白.与对照组比较,辣椒素处理后48 h,P53、P21表达上调,而CDK2表达下调.结论 辣椒素可以通过TRPV1受体调节P53、P21、CDK2表达以诱导人膀胱癌RT4细胞G0/G1期阻滞而抑制其生长.     

β-榄香烯对肿瘤细胞上清夜诱导的大鼠骨髓来源的内皮祖细胞增殖、管腔形成能力及细胞周期的影响

目的探讨β-榄香烯对内皮祖细胞(EPCs)参与肿瘤血管形成的抑制作用。方法原代培养大鼠骨髓来源内皮祖细胞,胃癌细胞株SGC-7901培养上清液刺激与β-榄香烯干预,四唑氮蓝还原反应(MTT)法检测内皮祖细胞增殖;碘化丙啶(PI)标记流式细胞仪检测细胞周期,Matrigel检测细胞管腔形成能力。结果β-榄香烯抑制肿瘤细胞上清液诱导的内皮祖细胞的增殖,并呈剂量和时间依赖性。细胞周期检测结果显示,β-榄香烯干预后,G1期细胞增多,进入S期及G2期细胞减少,细胞周期被阻滞于G1期;接种于Matrigel的内皮祖细胞形成管腔数目减少。结论β-榄香烯可抑制内皮祖细胞的增殖,阻滞其从G1期进入S期,并降低其形成管腔的能力。     

葛根素对人小细胞肺癌H446细胞周期和相关周期蛋白表达的影响

目的观察葛根素诱导人小细胞肺癌H446细胞周期的阻滞作用,进一步探讨其作用机制。方法采用MTT法测定葛根素对H446细胞生长的影响;采用流式细胞术检测处理后H446细胞周期分布和周期蛋白cyclinD1、CDK4和P27表达水平。结果MTT法表明葛根素对H446细胞生长有较强的抑制作用;流式细胞仪检测结果发现细胞周期阻滞在G0/G1期,量效关系良好,并检测到细胞周期蛋白cyclin D1、CDK4表达减弱,P27表达增强。结论葛根素可通过诱导细胞周期阻滞而发挥体外抗肺癌作用,其机制可能涉及细胞周期相关蛋白cyclin D1、CDK4和P27表达的调控。