碳青霉烯类药物非敏感肠杆菌科细菌基因型研究

摘要：目的：探讨临床分离的碳青霉烯类药物非敏感肠杆菌科细菌的基因型。 方法：收集2010年1月至2013年6月临床标本中分离的碳青霉烯类药物非敏感肠杆菌科细菌110株,K-B纸片扩散法检测细菌对临床常用药物的敏感性,纸片扩散表型确证试验检测超广谱β-内酰胺酶(ESBLs),改良Hodge试验（MHT）检测碳青霉烯酶表型,PCR、DNA测序及BLAST比对等方法确定菌株耐药基因型。 结果：110株碳青霉烯类非敏感肠杆菌科细菌中,MHT阳性77株(70.0%)。31株大肠埃希菌、1株产气肠杆菌和1株黏质沙雷菌检出bla_KPC-2基因,5株阴沟肠杆菌和1株产气肠杆菌分别检出bla_IMP-26和bla_VIM-2基因。36株32.7%菌株ESBLs表型试验阳性,主要检出bla_CTX-M-15、bla_SHV-12和bla_CTX-M-3 3种ESBLs基因型。 结论:本项研究碳青霉烯类非敏感肠杆菌科细菌以bla_KPC-2基因型为主,其次为bla_IMP-26和bla_VIM-2基因型。     

肠杆菌科细菌产碳青霉烯酶的研究进展

<正>碳青霉烯类抗菌药物是抗菌谱广、抗菌活性强、杀菌作用快的β-内酰胺类药物,其良好的细胞通透性、高度的酶稳定性及较低的毒性等特点已成为目前临床治疗严重细菌感染最主要的抗菌药物之一,但是随着碳青霉烯类抗菌药物耐药的肠杆菌科细菌的出现及不断的增多,该类药物的临床应用受到了严峻的挑战。肠杆菌科细菌对碳青霉烯类抗菌药物耐药的主要机制是产碳青霉烯酶。因此,快速、准确地检测产碳青霉烯酶的肠杆菌科细菌,对于预防和控制产酶菌株的传播具有重要意     

碳青霉烯类抗生素耐药肠杆菌科细菌中KPC酶的研究

目的了解上海部分医院肠杆菌科细菌中KPC酶的产生及耐药情况。研究KPC酶的分子生物学特性和blaKPC的转移和传播。方法在上海4所医院收集亚胺培南或美罗培南（纸片扩散法）中介或耐药的肠杆菌科菌株,PCR检测blaKPC、DNA测序、接合转移试验、质粒电泳、Southern blot。结果在上海4所医院共收集到7株对亚胺培南药敏结果（纸片扩散法）中介或耐药的肠杆菌科细菌;PCR检测显示有2株菌株携带blaKPC-2接合转移试验、质粒电泳、Southern blot试验显示blaKPC-2是由一个50kb大小的质粒携带。结论上海4所医院2006年的KPC酶的检出率还比较低;2株肠杆菌科菌株的blaKPC-2都是由1个50kb的质粒所携带。     

产碳青霉烯酶肠杆菌科细菌快速碳青霉烯灭活试验的评价

正碳青霉烯类耐药肠杆菌科细菌(CRE)所致感染病例在全球范围内日益增多,导致病死率高,并增加医疗费用。产生碳青霉烯酶是CRE最主要的耐药机制,导致对其所致感染的治疗药物极其有限。此外,碳青霉烯酶基因往往存在于可移动元件或质粒上,能在不同细菌间水平传播。为控制该类耐药菌的流行播散,实验室需要建立一种快速可靠、低成本检测菌株中碳青霉烯酶的方法。本研究对一种新的碳青霉烯酶的表型检测方法——快速碳青霉烯灭活试验(r CIM)作出评     

宿迁地区碳青霉烯耐药肠杆菌科细菌耐药性及碳青霉烯酶基因型分析

目的了解宿迁地区耐碳青霉烯肠杆菌科细菌(carbapenem-resistant Enterobacteriaceae,CRE)分布、耐药特点及产碳青霉烯酶的主要类型。方法收集宿迁地区3家三级综合医院2016年1月至12月临床分离的CRE非重复菌株52株,E-test法测定厄他培南、亚胺培南、美罗培南、替加环素的最低抑菌浓度(MICs),纸片扩散法检测其他抗菌药物的敏感性,PCR检测碳青霉烯酶基因。结果 CRE菌株标本来源广泛,痰液(38.5%)和尿液(28.8%)位于前两位;菌种分布以大肠埃希菌为主,其次为肺炎克雷伯菌、阴沟肠杆菌。大部分CRE菌株对碳青霉烯类药物显示高水平耐药(MICs32 mg/L),未检测到碳青霉烯酶基因的菌株中厄他培南比亚胺培南及美罗培南显示更高的MICs。CRE菌株除对阿米卡星、米诺环素和替加环素的耐药率分别为40.4%、30.8%和0外,对大多临床常用抗菌药物耐药率超过90%。49株CRE检测到碳青霉烯酶基因,产酶比例94.2%,其中blaNDM-1占主导(79.6%),blaKPC次之(22.4%)。blaNDM-1菌株主要为大肠埃希菌(66.7%)、肺炎克雷伯菌(15.4%)和阴沟肠杆菌(10.3%)。blaKPC阳性菌株中,除1株同时携带blaNDM-1为大肠埃希菌,其余均是肺炎克雷伯菌。结论宿迁地区CRE以大肠埃希菌为主,对常用抗菌药物呈高度耐药,产生碳青霉烯酶是对碳青霉烯类耐药的主要耐药机制,其中blaNDM-1是主要型别。临床应加强CRE的监测工作,采取合理的预防控制措施,防止耐药基因的传播。     

可疑产碳青霉烯酶肠杆菌科细菌的耐药基因研究

目的 分析临床分离的可疑产碳青霉烯酶肠杆菌科细菌所携带的耐药基因.方法 采用全自动细菌鉴定仪进行药敏试验,用改良Hodge试验进行碳青霉烯酶筛选,用纸片扩散试验进行ESBLs表型检查,用头孢西丁三维试验进行AmpC β-内酰胺酶的表型检查,用聚合酶链反应检测β内酰胺酶基因、外膜蛋白（OmpK35和OmpK36）编码基因、转座子tpuA和tpuU基因,并进行产物测序.结果 ①62株可疑产碳青霉烯酶肠杆菌科细菌对厄他培南和氨苄西林100％耐药,对氨苄西林/舒巴坦、头孢唑啉、头孢他啶、头孢曲松、氨曲南的耐药率达87％以上,对亚胺培南、美洛培南、丁胺卡那霉素耐药率为35％以下;②β内酰胺酶的总检出率为75.81％,主要由同时产ESBLs和AmpC引起,检出率为33.87％,其次为单产ESBLs引起,检出率为30.65％;③检出KPC,DHA,CIT,TEM,CTX M,SHV和NDM1β内酰胺酶基因的阳性率分别为8.06％,14.51％,24.19％,25.81％,27.42％,40.32％和6.45％; Ompk35,Ompk36基因缺失率为38.70％和62.90％;tnpA和tnpU检出率分别为11.29％和32.25％.结论 产碳青霉烯酶并非菌株耐碳青霉烯类药物的主要原因,可能由产ESBLs或AmpC酶引起,合并外膜蛋白缺失,尚存在其它降低碳青霉烯类敏感性的耐药机制.     

改良Hodge试验检测产碳青霉烯酶肠杆菌科细菌

摘要：目的：用改良Hodge试验检测产碳青霉烯酶肠杆菌科细菌,初步推测产碳青霉烯酶肠杆菌科细菌的流行情况。 方法：筛选出2009年4月~2010年4月对碳青霉烯类抗生素耐药以及敏感性下降或者碳青霉烯类抗生素敏感而一种以上三代头孢菌素耐药的肠杆菌科细菌23株,用改良Hodge试验检测其碳青霉烯酶。 结果：23株菌中21株（91.3%）呈多重耐药,其中5株菌改良Hodge试验阳性,分别为肺炎克雷伯菌1株、弗劳地枸橼酸杆菌1株、大肠埃希菌1株和霍氏肠杆菌2株。 结论：改良Hodge试验阳性提示所测菌株中有产碳青霉烯酶的肠杆菌科细菌的存在,因此要加强对此类细菌的院内感染管理监测。     

肠杆菌科细菌碳青霉烯酶的检测

目的调查本院肠杆菌科细菌产碳青霉烯酶的情况。方法收集2010年1～5月临床分离的肠杆菌科细菌,采用K-B纸片法进行药敏试验,以三代头孢菌素、亚胺培南、美罗培南为检测药物,筛选出可能产碳青霉烯酶的菌株120株,采用改良的Hodge试验进行确证。结果在120株耐一种或多种三代头孢菌素,提示可能产生碳青霉烯酶的肠杆菌科细菌中,通过表型确证试验确证为阳性的细菌有4株,肺炎克雷伯菌2株,大肠埃希菌1株,弗劳地枸橼酸杆菌1株。结论表型确证试验阳性的细菌中,如需准确辨别亚型,最好用分子生物学方法检测基因序列。     

肠杆菌科细菌碳青霉烯类抗生素耐药治疗的研究进展

肠杆菌科细菌是广泛存在于人类及大多数温血动物肠道中的兼性厌氧或专性需氧的革兰阴性杆菌及球杆菌,多数为正常菌群.肠杆菌科细菌是分布最为广泛的一种病原致病菌,在宿主抵抗能力下降时可转变为条件性致病菌,不仅会引发医院外部获得性感染,也会引发医院内部医源性感染.碳青霉烯类抗菌药物为有着较广的抗菌谱及较强的抗菌性的β-内酰胺类抗...     

宿迁地区碳青霉烯类耐药肠杆菌科细菌耐药性及碳青霉烯酶基因型分析

目的了解宿迁地区耐碳青霉烯肠杆菌科细菌(carbapenem-resistant Enterobacteriaceae,CRE)分布、耐药特点及产碳青霉烯酶的主要类型。方法收集宿迁地区3家三级综合医院2016年1月至12月临床分离的CRE非重复菌株52株,E-test法测定厄他培南、亚胺培南、美罗培南、替加环素的最低抑菌浓度(MICs),纸片扩散法检测其他抗菌药物的敏感性,PCR检测碳青霉烯酶基因。结果 CRE菌株标本来源广泛,痰液(38.5%)和尿液(28.8%)位于前两位;菌种分布以大肠埃希菌为主,其次为肺炎克雷伯菌、阴沟肠杆菌。大部分CRE菌株对碳青霉烯类药物显示高水平耐药(MICs32 mg/L),未检测到碳青霉烯酶基因的菌株中厄他培南比亚胺培南及美罗培南显示更高的MICs。CRE菌株除对阿米卡星、米诺环素和替加环素的耐药率分别为40.4%、30.8%和0外,对大多临床常用抗菌药物耐药率超过90%。49株CRE检测到碳青霉烯酶基因,产酶比例94.2%,其中blaNDM-1占主导(79.6%),blaKPC次之(22.4%)。blaNDM-1菌株主要为大肠埃希菌(66.7%)、肺炎克雷伯菌(15.4%)和阴沟肠杆菌(10.3%)。blaKPC阳性菌株中,除1株同时携带blaNDM-1为大肠埃希菌,其余均是肺炎克雷伯菌。结论宿迁地区CRE以大肠埃希菌为主,对常用抗菌药物呈高度耐药,产生碳青霉烯酶是对碳青霉烯类耐药的主要耐药机制,其中blaNDM-1是主要型别。临床应加强CRE的监测工作,采取合理的预防控制措施,防止耐药基因的传播。     

产碳青霉烯酶肠杆菌科细菌的研究进展及治疗策略

近年来,耐碳青霉烯类抗菌药物的肠杆菌科细菌已在很多国家被发现,其主要耐药机制是产生碳青霉烯酶,特别是产A类肺炎克雷伯菌碳青霉烯酶(KPC)或依赖锌离子的B类金属酶(MβL)的肠杆菌科细菌在全球许多地区已出现暴发流行。产碳青霉烯酶肠杆菌科细菌(CPE)感染可导致患者死亡,但目前治疗方案非常有限,因此及早发现并监控CPE的定植或感染对控制细菌耐药性的出现和传播至关重要。     

肠杆菌科细菌碳青霉烯酶耐药基因分析

目的研究耐碳青霉烯类抗生素的肠杆菌科细菌所产碳青霉烯酶的型别及其流行情况。方法收集重庆医科大学附属第一医院2009年11月～2010年4月临床分离的肠杆菌科细菌,用Vitek 2 Compact进行细菌鉴定、药敏试验,从中筛选出11株对碳青霉烯类抗生素耐药或中介的菌株。PCR检测blaKPC、blaIMP、blaVIM基因,阳性结果用DNA测序和BLAST比对确定基因型。结果 11株对碳青霉烯类抗生素耐药或中介的菌株均为多重耐药,除1株来自眼科外均来自ICU。PCR结果3株肺炎克雷伯菌和3株阴沟肠杆菌携带blaIMP,DNA测序比对均为blaIMP-8,未扩出blaKPC、blaVIM基因条带。结论本次筛检的11株肠杆菌科细菌产碳青霉烯酶的主要型别IMP-8,且已在外科ICU中局部流行。     

碳青霉烯类非敏感肠杆菌科细菌分子流行病学研究

摘要：目的：调查碳青霉烯类抗生素非敏感肠杆菌科细菌的流行情况,并研究其耐药性传播方式。 方法：收集本院临床分离的碳青霉烯类抗生素非敏感肠杆菌科细菌34株,用Vitek2 Compact系统进行细菌鉴定和常规药敏检测,改良Hodge试验筛选产碳青霉烯酶菌株,用肠杆菌基因间重复一致序列(enterobacterial repetitive intergenic consensus,ERIC)-PCR进行分子流行病学调查。PCR扩增Int 1、Int 2、Int 3整合酶基因,质粒接合和消除试验研究细菌耐药基因的传播方式。 结果：19株细菌改良Hodge试验阳性。来自7个不同科室的12株大肠埃希菌和17株阴沟肠杆菌可以分为3种和6种基因型,来自4个不同科室的5株肺炎克雷伯菌只有1种基因型。27株菌Int1基因阳性,未检出Int2和Int3基因。除骨科1株阴沟肠杆菌外,其余33株细菌质粒消除和接合试验均成功。 结论：本院碳青霉烯类抗生素非敏感肠杆菌科细菌主要发生在外科各科室;所有肺炎克雷伯菌和泌尿外科大肠埃希菌属同一基因型,表明此类菌株呈局部流行;碳青霉烯类抗生素非敏感肠杆菌科细菌耐药性主要通过质粒传播。     

肠杆菌科细菌产ESBLs、AmpC酶和碳青霉烯酶的研究进展

肠杆菌科细菌是临床常见致病菌,也是院内感染的重要菌。抗生素的大量应用使得其耐药率居高不下,因此,对其耐药机制（主要为β-内酰胺酶）的研究成为热点。细菌产生的一些酶可对抗生素进行修饰降解使其失活,是细菌耐药重要机制之一。产酶是细菌应对抗生素的高选择性压力的主要方式,肠杆菌科细菌主要的酶有以下三类：超广谱B一内酰胺酶（ESBLs）、头孢菌素酶（AmpC酶）和碳青霉烯酶。产酶耐药株的出现给临床抗菌治疗带来了极大的困难。因此,临床微生物检验技术人员对其应有充分的认识,掌握其耐药特性,建立适当的检测和报告方式,及时、准确地检测出产酶菌株和其他具有临床意义的耐药菌株及其耐药机制,对指导临床合理使用抗生素、延缓细菌耐药性的产生、控制耐药菌株的播散和流行,制定感染控制的政策、措施和具体方案,具有十分重要的意义。本文对这三种肠杆菌科细菌最重要的酶的生物学特点、分类、基因调控、检测方法及其耐药特征综述如下。     

应用改良Hodge试验检测肠杆菌科细菌产碳青霉烯酶的研究

目的应用改良Hodge试验(MHT)检测肠杆菌科细菌产碳青霉烯酶的应用价值。方法应用MHT检测对碳青霉烯类抗菌药物敏感性降低的24株肠杆菌科细菌产碳青霉烯酶的情况。同时利用聚合酶链反应(PCR)检测碳青霉烯酶的基因,包括KPC、NDM、IMP、SIM和VIM,PCR阳性的产物测序结果与Gen Bank数据库进行比对。综合分析MHT和PCR检测碳青霉烯酶的效率。结果对碳青霉烯酶抗菌药物敏感性降低的24株肠杆菌科细菌应用MHT检测碳青霉烯酶的阳性菌株共为13株,而PCR检测出碳青霉烯酶基因的只有5株。且PCR产物测序结果经比对后证实1株为KPC-2和4株为IMP-4。对比分析MHT和PCR的检测结果可知有4株肠杆菌科细菌的MHT和PCR同时检测出碳青霉烯酶;有9株肠杆菌科细菌的MHT为阳性,但PCR没检测出碳青霉烯酶的基因;有1株肠杆菌科细菌MHT为阴性,但PCR检测出碳青霉烯酶的基因。结论 MHT作为筛查碳青霉烯酶肠杆菌科细菌的准确性值得继续探讨。     

肠杆菌科细菌产碳青霉烯酶的主要类型和流行病学分析

目的：了解对碳青霉烯类抗生素耐药的肠杆菌科细菌（CRE）中碳青霉烯酶的主要类型及流行情况。方法收集上海瑞金医院2011年5月至2013年6月对亚胺培南或美罗培南药敏纸片抑菌圈直径≤22 mm的CRE共114株,采用PCR方法扩增常见的碳青霉烯酶基因（blaKPC 、blaIMP 、blaOXA‐48、blaVIM 、blaNDM ）并对PCR扩增产物进行测序;所有菌株均进行了质粒接合试验;采用脉冲场凝胶电泳（PFGE）对KPC‐2检测阳性的肺炎克雷伯菌进行同源性分析。结果114株CRE以肺炎克雷伯菌、大肠埃希菌和肠杆菌属细菌为主,其中98株产碳青霉烯酶,以K PC‐2酶为主要类型（78／98）、其次为IM P‐4酶（15／98）, IMP‐8酶（2／98）,1株肺炎克雷伯菌同时携带有 blaKPC‐2和 blaIMP‐4基因,还发现4株产 NDM‐1酶的菌株,未见OXA‐48酶及VIM酶阳性菌株。21株（21．4％,21／98）CRE菌株转移接合试验成功。PFGE结果显示49株 blaKPC‐2阳性肺炎克雷伯菌共分为12个型,其中34株属于同一谱型（type A ）。CRE菌株主要分离自ICU ,共39株,其次为普外科14株,血液科11株,呼吸科9株,其余科室共41株。结论本次分离的肠杆菌科细菌所产碳青霉烯酶的基因型以blaKPC‐2为主,其次为blaIMP‐4,并发现4株blaNDM‐1阳性CRE菌株,产KPC‐2酶的肺炎克雷伯菌在外科ICU、呼吸科及胸外科等科室间存在克隆株的流行传播,应采取及时有效的防控措施。     

肠杆菌科菌株产A类碳青霉烯酶检测

目的 调查肠杆菌科细菌产A类碳青霉烯酶的现状.方法 纸片扩散法和微量肉汤稀释法两种常规药敏试验作为初筛试验、改良Hodge试验作为表型确认试验.结果 在598株耐三代头孢菌素及碳青霉烯药物的肠杆菌科细菌,以三代头孢菌素、亚胺培南、美罗培南、厄他培南为底物,初筛试验两种方法阳性菌株数分别为569,-,29,29;551,29,28,28,确认试验阳性菌株数分别为13,21,22,24.四种底物确认试验阳性率分别为2.28%(13/569),72.41%(21/29),75.86%(22/29),82.76%(24/29),厄他培南检出率最高.8株菌同时产A类碳青霉烯酶与ESBL,6株菌同时产A类碳青霉烯酶和质粒AmpC酶 ,没有菌株同时产这3种酶.结论 表型确认试验操作简便,适合各级医院常规开展肠杆菌科细菌A类碳青霉烯酶检测,可为临床合理应用抗菌药物、控制感染和流行病学研究提供依据.