TNP-470对血管肉瘤细胞增殖的影响

目的:观察TNP-470抗血管肉瘤细胞增殖的作用.方法:采用Alamar Blue assay方法测定TNP-470对体外培养的ISOS-1细胞生长抑制、检测TNP-470对BAIB/C小鼠微血管内皮细胞(mECs)生长的抑制作用.结果:TNP-470对ISOS-1细胞生长有中度抑制作用,对mECs细胞生长有显著抑制作用.在体内检测中,大于30 mg/kg的TNP-470能明显抑制ISOS-1细胞肿瘤的生长,且呈剂量依赖性.结论:研究结果表明,TNP-470可能是一种治疗血管肉瘤的有效药物.     

紫杉醇抑制Hut78细胞生长及诱导凋亡的实验研究

目的：研究紫杉醇对皮肤T细胞淋巴瘤（cutaneous T cell lymphoma,CTCL）Hut78细胞株的生长抑制及诱导凋亡作用,并探讨其诱导凋亡作用的机制。方法：将紫杉醇按不同浓度、不同作用时间分别处理Hut78细胞,四甲基偶氮唑蓝（MTT）法测定Hut78细胞的生长抑制率,端粒酶重复序列扩增及酶联免疫吸附法（TRAP—PCR—ELISA）检测端粒酶活性的变化,采用形态学观察和流式细胞仪检测其诱导Hut78细胞凋亡的情况。结果：紫杉醇明显下调端粒酶活性表达,对Hut78细胞具有生长抑制及诱导凋亡的作用,且呈时间依赖和剂量依赖性。表现为G2／M期阻滞,出现典型的凋亡细胞特征,流式细胞仪检测可见明显的凋亡峰。结论：紫杉醇能下调端粒酶的活性,诱导细胞凋亡是其发挥抗癌作用的机制之一。     

HINT1对人黑素瘤细胞A375增殖和凋亡的影响

目的 探讨HINTl基因对人黑素瘤细胞A375增殖、凋亡的影响及其作用机制.方法 应用构建的peDNA.3.1/mye-His(-)A-HINTl真核表达载体,建立稳定转染且能高表达HINTI的A375细胞模型.用M1rr法检测细胞增殖活性变化,流式细胞仪检测细胞周期及细胞凋亡率,TUNEL法检测细胞凋亡.分光光度法检测Caspase 3,Caspase 8及Caspase 9的相对活性.Western印迹法检测bcl-2、bax、细胞色素C及p53的表达.结果 与空载体-A375及未转染A375细胞相比,HINT1-A375细胞生长速度明显减慢(P<0.05);Gl期细胞增多(73.17%±3.99%,F=25.65,P<0.05),S期细胞减少(16.75%±1.62%.F=75.48,P<0.01),细胞出现明显的晚期凋亡(23.57%±9.58%,F=11.71,P<0.01). TUNEL法显示凋亡阳性细胞百分比(12%±1%)显著增高(F=358.02,P<0.01);Caspase 9(0.45±0.03,F=135.62,P<0.01)和Caspase 3表达(0.46±0.04,F=90.28,P<0.01)升高.凋亡相关蛋白bax、细胞色素C及p53表达增加,bel-2表达降低.结论 高表达H1NT1可抑制A375细胞的增殖,促进其凋亡,细胞周期出现G_1期阻滞,提示HINT1可能是人黑素瘤的抑癌基因.     

尖锐湿疣角质形成细胞中陷窝蛋白1的表达与细胞增殖和凋亡的相关性

目的 探讨陷窝蛋白1在尖锐湿疣角质形成细胞中的表达及其与角质形成细胞增殖和凋亡的相关性.方法 免疫组化En Vision法和TUNEL技术检测40例尖锐湿疣皮损组织和10例健康人包皮组织中角质形成细胞陷窝蛋白1、增殖细胞核抗原的表达和细胞凋亡,计算陷窝蛋白1平均吸光度、增殖指数和凋亡指数,比较两组之间的差异,并分析尖锐湿疣组中陷窝蛋白1表达与增殖指数、凋亡指数的相关性.针对陷窝蛋白1基因设计3条siRNA,用脂质体转染法将siRNA导人HaCaT细胞,用荧光定量PCR方法筛选出于扰效果最佳的siRNA,转染HaCaT细胞为实验组,转染非特异序列的细胞为阴性对照组,未转染的细胞为空白对照组.Western印迹和免疫荧光检测转染48 h后陷窝蛋白1的表达水平;MTS法分别测定干扰陷窝蛋白1基因24、48、72 h后HaCaT细胞增殖的变化;流式细胞仪(FCM)检测干扰陷窝蛋白1基因48 h后HaCaT细胞的凋亡情况.结果 尖锐湿疣角质形成细胞中陷窝蛋白1的表达(0.042±0.021)显著低于正常包皮组织(0.181±0.075),差异有统计学意义(t=5.843,P＜0.001).尖锐湿疣皮损中角质形成细胞的增殖指数(65.63％±19.86％)和凋亡指数(24.12％±10.86％)均显著高于正常包皮组织(23.51％±4.00％,3.13％±1.12％),两组差异有统计学意义(t=12.440、11.970,均P＜ 0.001).尖锐湿疣组陷窝蛋白1表达与增殖指数呈显著负相关(r=-0.798,P＜0.05),与凋亡指数呈显著正相关(r=0.825,P＜ 0.05).荧光定量PCR显示siRNA-2在浓度25 nmol/L下抑制效果最佳.Western印迹和免疫荧光显示,转染siRNA 48 h后,实验组陷窝蛋白1的表达显著低于空白对照组和阴性对照组(P＜0.05).MTS结果显示,实验组细胞24、48和72 h时的A值分别为0.563±0.013、0.628±0.006和0.811±0.018,高于空白对照组(0.541±0.009、0.575±0.012和0.722±0.004)和阴性对照组(0.536±0.006、0.571±0.015和0.719±0.002),差异有统计学意义(均P＜0.05),空白对照组和阴性对照组间差异无统计学意义(P＞0.05).实验组HaCaT细胞凋亡率为(8.90％±0.06％),低于空白对照组(20.59％±0.87％)和阴性对照组(20.64％±0.09％),差异有统计学意义(均P＜ 0.05),空白对照组和阴性对照组间差异无统计学意义(P＞0.05).结论 尖锐湿疣角质形成细胞中陷窝蛋白1表达下降,可能与角质形成细胞增殖加快、细胞凋亡减少有关.     

紫草素对角质形成细胞株增殖的抑制及凋亡的作用

目的：探讨紫草素对角质形成细胞株colo-16增殖及凋亡的调节作用。方法：利用体外细胞培养技术、MTT法、流式细胞仪、荧光显微镜技术检测不同浓度的紫草素对colo-16细胞株增殖及凋亡的影响。结果：紫草素对colo-16细胞株的作用与浓度及时间呈一定的关系，浓度越高，时间越长，其抑制作用越强。终浓度为0．25μg/ml、0．5μg/ml的紫草素，培养48h后，细胞的凋亡率分别为9．89％、25．04％，正常对照组为5．86％，两者相比差异显著。结论：紫草素值得进一步深入地研究与探讨。     

银屑病患者表皮细胞增殖与cvclinD1的关系研究

银屑病是一种良性增生性皮肤病，其病理特征为表皮过度增殖，伴角化及真皮淋巴细胞浸润。银屑病角质形成细胞动力研究发现表皮内角质形成细胞增生周期变短，进入增生的细胞增多。银屑病表皮细胞增殖较正常皮肤表皮细胞强，与增加循环干细胞数量以加强角质形成细胞向外生长能力有关。为了探讨其细胞增殖能力与细胞循环周期的关系，我们选择了在分     

中波紫外线诱导HaCaT细胞凋亡中TF-1细胞凋亡相关基因19的表达

目的：研究在中波紫外线(UVB）诱导正常永生化角质形成细胞(HaCaT）凋亡过程中，T细胞凋亡相关基因19(TFAR 19）的表达时相及位置，方法：使用流式细胞仪、膜联蛋白V(Annexin—V）、激光扫描共聚焦显微镜等方法进行研究。结果：在凋亡过程中，TFAR 19逐渐向核周聚积，最后向核膜内移位，在核膜及其周围以及核内表达。结论：在UVB诱导HaCaT细胞凋亡的早期和晚期过程中TFAR 19均有表达。     

阿维A抑制鼠黑素瘤B16细胞的增殖作用

目的:探讨阿维A(acitretin)、顺铂及两者联合应用对鼠黑素瘤B16细胞株(简称B16细胞)的作用.方法:分别采用阿维A(浓度为0.1、1.0、10.0、100.0μmol/L)、顺铂(浓度为2、4、8 mg/L)及两药联合处理B16细胞,对照组B16细胞培养不加上述药物.在显微镜下观察细胞形态变化,以四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞存活率,应用两药相互作用指数(CDI)分析阿维A与顺铂的作用.结果:不同浓度阿维A对B16细胞增殖均具有抑制作用,与对照组相比,吸光度(A)值均有不同程度下降(P<0.01);对照组细胞贴壁生长良好,用药组细胞皱缩、破裂;两药CDI均>0.85.即阿维A和顺铂联合应用对B16细胞的增殖抑制具有相互协同作用.结论:阿维A对B16细胞的增殖有抑制作用,与顺铂联合应用相互间可增强诱导B16细胞的凋亡作用.     

基底细胞癌瘤细胞增殖、凋亡和微血管密度的相关性研究

目的 :　探讨侵袭性基底细胞癌 (A -BCC)与非侵袭性基底细胞癌 (NA -BCC)的瘤细胞凋亡、增殖及瘤间质微血管密度之间的相关性。方法 :　应用免疫组化SP法检测 78例BCC石蜡标本组织 (36例A -BCC ,42例NA -BCC)中的Ki6 7、M30和vWF表达 ;并采用TMVLD测量法检测肿瘤间质中微血管密度。结果 :　A -BCC组的AI、PI和TMVLD的均值皆明显比NA -BCC组的高 (P <0 .0 5 ) ;其中A -BCC组的AI与PI在统计学上具有显著的相关性 (r=0 .45 9,P <0 .0 5 )。未发现BCC的AI和PI与TMVLD在统计学上有相关性。结论 :　不同性质BCC的凋亡与增殖特点不同 ;肿瘤微血管的形成与BCC瘤细胞的凋亡与增殖没有必然联系。     

miR-384靶向HTRA1影响瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖和凋亡

目的:明确miR-384对瘢痕疙瘩成纤维细胞(KFBs)增殖和凋亡的影响.方法:RT-qPCR和Western Blot检测miR-384和靶向高温需求因子A1(HTRA1)在KFBs和人瘢痕疙瘩皮肤组织中的表达.CCK-8细胞计数试剂盒检测KFBs增殖活力;流式细胞术检测KFBs细胞凋亡;Western Blot检测...     

卡泊三醇对小鼠黑素瘤B16细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨不同浓度卡泊三醇(CPT)对小鼠黑素瘤B16细胞增殖及凋亡的影响。方法不同浓度CPT作用于体外培养的小鼠黑素瘤B16细胞24h,在倒置显微镜下观察细胞密度及形态,采用MTT比色法和AnnexinV/PI染色法分别检测细胞增殖抑制率和凋亡率。结果与对照组相比,CPT浓度为1,10μg/mL组中B16细胞密度及形态无明显变化,也无增殖抑制作用(P>0.05)。而当CPT为102,103μg/mL时,细胞密度减少,形态由多角形变为略圆钝,甚至皱缩,对细胞增殖呈剂量依赖性的抑制作用(P<0.05)。CPT为1,10,102μg/mL时对B16细胞无凋亡诱导作用(P>0.05),而103μg/mL时则明显促进细胞凋亡(19.17±0.31)%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 CPT≤10μg/mL对B16细胞密度形态、增殖抑制率和凋亡率无明显影响;CPT≥102μg/mL能改变B16细胞形态,并呈浓度依赖性地抑制其增殖;而当CPT≥103μg/mL时能诱导B16细胞凋亡。     

亚砷酸对角质形成细胞增殖及凋亡的影响

目的：研究亚砷酸对不同角质形成细胞增殖及凋亡的影响。方法：以体外培养的角质形成细胞株为对象，不同浓度的亚砷酸处理细胞后，用MTT比色分析法反映细胞增殖变化，用光镜和电镜观察细胞形态，流式细胞仪测定细胞周期分布及凋亡峰的出现，Annexin-V染色荧光照相证实凋亡的发生。结果：0.5-10μmol/L亚砷酸对良性角质形成细胞株HaCaT细胞有明显抑制作用，并呈时间和剂量依赖关系，而该浓度砷剂对A431细胞无明显影响。光镜及HE染色后观察均显示随浓度升高、时间延长，凋亡细胞增多。高于上述范围HaCaT细胞变性死亡增多，流式细胞仪检测细胞周期分布变化，G2M期细胞比例及亚G1期凋亡明显升高，Annexin-V法显示有绿色荧光的阳性细胞。而A431细胞无明显形态和细胞周期分布变化。结论：一定浓度的亚砷酸可抑制HaCaT细胞增殖，并具有诱导凋亡作用，对皮肤鳞状细胞癌A431细胞无明显影响，提示良性表皮角质形成细胞株HaCaT对亚砷酸的处理比鳞状细胞癌A431细胞株更敏感。     

婴幼儿皮肤血管瘤发生发展与细胞增殖和凋亡的研究

目的　观察小儿皮肤血管瘤增生消退过程中细胞增生和凋亡状态 ,以探讨小儿血管瘤发生发展机理。方法　采用免疫组化S P法和TUNEL检测 5 8例不同阶段血管瘤组织中PCNA增殖指数 (PI)和凋亡指数 (AI)。结果　增生期血管瘤PI明显高于消退期 ,AI显著低于消退期 (P <0 .0 5 )。消退Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期PI逐渐降低 ,AI逐渐增高 ,除Ⅱ、Ⅲ期AI之间无显著性差异外 ,其余各组之间均有显著性差异 (P <0 .0 5 )。AI/PI在消退期明显高于增生期 ,在消退Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期随着病变发展明显增高 (P <0 .0 1)。结论　小儿皮肤血管瘤发生发展与细胞增生、凋亡有关。凋亡指数增高可作为血管瘤自然消退的早期判断指标。     

存活素反义寡核苷酸对角质形成细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨存活素反义寡核苷酸对角质形成细胞增殖和凋亡的影响。方法以脂质体介导存活素反义寡核苷酸转染体外培养的角质形成细胞。采用MTT方法观察存活素反义寡核苷酸对角质形成细胞生长曲线的影响;采用RT-PCR方法观察存活素反义寡核苷酸对角质形成细胞存活素表达水平的影响;采用流式细胞仪检测存活素反义寡核苷酸对角质形成细胞细胞周期和凋亡的影响。结果存活素反义寡核苷酸作用于角质形成细胞后,细胞增殖受到明显抑制,存活素mRNA表达水平明显下降,细胞出现明显的凋亡现象。结论存活素反义寡核苷核酸能够抑制角质形成细胞增殖,促进角质形成细胞凋亡。提示存活素可能会成为一个新的治疗银屑病的靶分子。     

大蒜素对小鼠黑素瘤细胞B16-F1增殖和凋亡的影响

目的探讨大蒜素对小鼠黑素瘤细胞B16-F1增殖及凋亡的影响。方法传代培养小鼠黑素瘤B16-F1细胞,使细胞浓度为5×104个/m l,分别加入不同浓度(3,6,9,12,15μg/m l)的大蒜素细胞培养液。培养12,24,36,48 h后,噻唑蓝(MTT)法检测细胞生存活性,原位末端标记(TUNEL)法检测细胞凋亡,定量RT-PCR法检测ras基因的表达水平。结果3~15μg/m l的大蒜素对B16-F1细胞均有杀伤作用,当大蒜素的浓度为3~6μg/m l,诱导肿瘤细胞凋亡,且呈浓度时间相关性。当大蒜素的浓度较高时,细胞呈中毒反应,凋亡作用不明显。3~15μg/m l的大蒜素下调ras基因的表达,并且呈显著的浓度相关性。结论大蒜素对小鼠黑素瘤B16-F1细胞有杀伤作用,可以明显诱导肿瘤细胞的凋亡,并且对肿瘤细胞ras基因的表达均有不同程度的下调作用。     

90锶对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨放射性核素在治疗瘢痕疙瘩中的作用机制.方法:取手术切除的瘢痕疙瘩组织作成纤维细胞的原代培养,传代培养后采用不同剂量的β射线进行照射,应用MTT法检测细胞的活性, 流式细胞仪测定细胞凋亡率.结果:瘢痕成纤维细胞经过不同剂量β射线照射后,细胞生长缓慢,但瘢痕成纤维细胞的凋亡率却提高了.结论:β射线能抑制体外增生性癜痕成纤维细胞的生长及促进成纤维细胞凋亡.     

皮肤鳞状细胞癌的细胞凋亡及某些凋亡相关基因产物的表达

目的观察皮肤鳞状细胞癌（ＳＣＣ）的细胞凋亡及ｐ５３、ｂｃｌ ２、Ｂａｘ和Ｆａｓ蛋白的表达。方法采用ＴＵＮＥＬ法和免疫组化染色。结果在２２例ＳＣＣ病变组织中,均可见到细胞凋亡,分化差、核分裂像多的ＳＣＣ中凋亡细胞较多,而分化好、核分裂像少的ＳＣＣ中则凋亡细胞少。在２７例ＳＣＣ中,１６例ｐ５３阳性表达,１４例ｂｃｌ ２阳性,１９例Ｂａｘ阳性,６例Ｆａｓ阳性。结论ＳＣＣ的发生与细胞凋亡及某些凋亡相关基因产物的异常表达有关。     

Stromal Fibroblast-Specific Expression of ADAM-9 Modulates Proliferation and Apoptosis in Melanoma Cells In Vitro and In Vivo

ADAMs are members of the zinc metalloproteinase superfamily characterized by the presence of disintegrin and metalloprotease domains. In human melanoma, ADAM-9 is expressed in focalized areas of the tumor-stroma border in both melanoma and stromal cells. However, the role of ADAM-9 in melanoma progression remains elusive. To analyze the role of stromal-derived ADAM-9 for the growth and survival of melanoma cells, we have used in vitro coculture systems of melanoma cells and ADAM-9(-/-) fibroblasts. Coculture of melanoma cells in the presence of ADAM-9(-/-) fibroblasts led to increased melanoma cell proliferation and reduced apoptosis as compared with control cocultures. We identified TIMP-1 and sTNFRI as the two relevant factors expressed in increased amounts in culture supernatants from ADAM-9(-/-) fibroblasts. TIMP-1 was associated with induced melanoma cell proliferation, whereas soluble TNFR1 mediated the reduced cellular apoptosis in vitro. In vivo, injection of murine melanoma cells into the flank of ADAM-9(-/-) animals resulted in the development of significantly larger tumors than in wild-type animals as a result of increased proliferation and decreased apoptosis of melanoma cells. Taken together, stromal expression of ADAM-9 during melanoma development modulates the expression of TIMP-1 and sTNFR1, which in turn affect tumor cell proliferation and apoptosis.     

复方青黛饮含药血清对体外HaCaT细胞增殖和凋亡的影响

目的体外观察复方青黛饮大鼠含药血清对人永生化角质形成细胞株HaCaT细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响,并探讨其作用机制。方法根据中药血清药理学方法,用SD大鼠制备实验血清,采用MTT法、流式细胞术、免疫荧光Hoechst染色,观察含药血清对细胞生长抑制率、凋亡率、细胞周期分布及细胞形态学的影响。结果体外培养HaCaT细胞24h和48h后,复方青黛饮高、中、低三个剂量不同浓度的含药血清组,对HaCaT细胞的生长均有不同程度的抑制,与空白血清组相比,差异有统计学意义(P<0.05),其中高剂量组抑制作用最明显。复方青黛饮含药血清组细胞凋亡率和G0/G1比例明显增加,与空白血清组相比,差异有统计学意义(P<0.05),在镜下呈现凋亡的特征性形态改变。结论复方青黛饮大鼠含药血清对体外培养的角质形成细胞株HaCaT细胞有生长抑制和诱导凋亡作用,并对细胞周期有一定的影响。     

超抗原SPE对SLE患者外周血T淋巴细胞增殖和凋亡作用的研究

目的研究超抗原SPE对SLE患者外周血T淋巴细胞增殖及凋亡的作用。方法用SPE刺激SLE患者外周血T淋巴细胞,用流式细胞仪观察T淋巴细胞增殖、细胞表型以及凋亡情况,ELISA法检测IL2产生。结果SPE有促进SLE患者外周血T淋巴细胞增殖的作用,增殖细胞主要为CD4+T淋巴细胞,同时产生大量的IL2;再次用SPE刺激,可诱导T淋巴细胞凋亡。结论链球菌感染后,可能通过SPE诱导T淋巴细胞激活、随后出现细胞凋亡的途径而导致SLE病情活动加重。