铅硒联合作用对原代培养海马神经元影响

目的观察铅、硒对原代培养的海马神经元生长及存活的影响，研究硒对铅的神经细胞生长抑制的拮抗作用。方法建立新生Wistar大鼠海马神经元原代无血清培养技术，通过PbCl2，Na2SeO3单独及联合作用，观察神经细胞的生长和存活情况。结果10^-5mol／L铅明显抑制了原代培养的海马神经元突起生长，引起神经元存活率下降；单独硒（2×10^-6mol／L）有明显促进海马神经元突起生长的作用．尤其在神经元突起生长早期；但对海马神经元存活率的影响不明显。铅和硒共同孵育时，培养早期硒能拮抗铅对神经元突起延伸的抑制．但随着培养时间延长，这种拮抗作用消失；从神经元存活率来看，在实验剂量下，未见硒能拮抗铅对神经元存活的抑制作用。结论铅具有抑制神经元生长和存活的毒性。本实验剂量下的硒在细胞培养早期有促进神经元突起生长和拈抗铅对神经元生长和存活的抑制作用。     

低剂量铅对原代培养的海马神经元的影响

目的 研究低剂量铅对原代培养的海马神经元生长及存活的影响。方法 建立新生大鼠海马神经元原代无血清培养技术，通过不同浓度PbCl2染毒后，于不同时间点观察神经细胞的生长和存活情况。结果 极低浓度的铅(10^-7mol／L)即可引起神经元出芽延迟，突起长度缩短，细胞存活率下降，随剂量增加和时间延长，毒效应越严重。结论 低剂量铅具有抑制神经元生长和存活的毒性。     

牛磺酸对海马神经细胞的营养和保护作用

目的 :　利用无血清培养的新生大鼠原代海马神经细胞 ,观察牛磺酸 ,谷氨酸和过氧化氢对神经细胞损伤的保护作用。方法 :　用含不同剂量牛磺酸的培养基培养神经元 ,动态观察神经细胞的生长情况以了解牛磺酸对神经细胞的营养作用 ;不同剂量牛磺酸与神经细胞预孵育 2 4 h后 ,分别加入损伤剂 (谷氨酸和过氧化氢 ) ,观察神经细胞存活数及乳酸脱氢酶的漏出率的变化 ;并且利用双波长荧光分光光度计观察谷氨酸对神经细胞内钙稳态的改变及牛磺酸的拮抗作用。结果 :　牛磺酸能促进体外培养的海马神经元的生长 ,并延长其存活时间 ;而且能剂量依赖性地拮抗过氧化氢和谷氨酸引起的神经细胞存活数下降及乳酸脱氢酶漏出率增高 ;牛磺酸还可抑制谷氨酸引起的升钙作用。结论 :　牛磺酸能促进神经细胞的生长 ,对谷氨酸和过氧化氢引起的细胞损伤均有明显的保护作用。     

硒对中脑神经细胞生长影响的研究

目的 :研究硒对体外大鼠胚胎中脑神经细胞生长的影响。方法 :用原代培养大鼠胚胎中脑神经细胞 ,MTT法检测不同浓度硒作用下神经细胞的存活率 ;透射电镜观察法定性检测细胞凋亡。结果 :低浓度 (≤ 5μmol/ L)的硒对神经细胞的生长无明显影响 ,高浓度的硒 (≥ 1 0 μmol/L)可降低细胞存活率。结论 :硒可能通过诱发神经细胞凋亡而降低细胞存活率     

锌对新生大鼠海马培养神经元生长发育的作用

采用无血清培养的新生大鼠海马神经细胞，观察锌对脑细胞生长发育的作用。结果表明，锌能促进体外培养海马神经元的神经突起生长，突起数增多；神经元的活存数和神经元胞体的直径和面积增加。用流式细胞术分析证明，神经元总蛋白含量增高。本结果提示，锌对海马神经元的生长发育具有促进作用     

新生大鼠海马神经元细胞体外培养方法改良研究

目的探讨改良的新生大鼠海马神经元细胞体外培养方法,为新生儿缺血性脑损伤模型等海马神经元相关疾病研究奠定基础。 方法采用本研究自行设计的改良新生大鼠海马神经元细胞的体外培养方法,进行新生大鼠海马神经元细胞的体外培养。判断新生大鼠原代海马神经元细胞体外培养成功的标准为：荧光显微镜下,可见微管相关蛋白(MAP)2在海马神经元细胞体和树突中表达。该改良方法具体为：①以L-多聚赖氨酸和鼠尾胶原作为神经元细胞体外培养的生长基质,分离出生24 h内新生SD大鼠海马结构。将其运用单一胰蛋白酶水浴振荡消化后,吹打成细胞悬液,将海马神经元细胞以适当的密度种植于含10%胎牛血清DMEM培养基中,贴壁培养4 h后,更换为Neurobasal维持培养基继续培养,以后每3 d更换1/2培养液。②采用抗MAP2-5-异硫氰酸荧光素(anti-MAP2-FITC)免疫荧光法,对所获得的海马神经元细胞进行鉴定。 结果①新生大鼠海马神经元细胞的体外培养结果显示,新生大鼠海马神经元细胞于培养30 min时,大部分细胞贴壁生长,培养2 h后,细胞贴壁明显,少数细胞开始长出突起。于培养5 d后,神经元突起进一步增多,并形成神经细胞网络,培养7 d后,神经元细胞分化更加成熟,神经元细胞之间的突起联系更加紧密,可见密集的神经细胞网络。海马神经元细胞体外培养至第21天后,神经元细胞开始退化、变性,细胞体皱缩,残留细胞体痕迹,周围光晕消失,折光性减弱,突起融合而粗大杂乱,神经细胞网络粗大老化。②anti-MAP2-FITC免疫荧光法对所获得的海马神经元细胞进行鉴定的结果显示,在所有细胞中,免疫荧光染色MAP2阳性新生大鼠海马神经元细胞纯度达96.3%。 结论通过上述改良方法培养获得的新生大鼠海马神经元细胞生长状态良好,并具有较高的纯度,可为进一步进行新生儿缺血性脑损伤模型等海马神经元相关疾病的研究提供实验条件。     

不同浓度牛磺酸对原代培养皮层神经元的影响

目的研究不同浓度牛磺酸对原代培养的皮层神经元生长及存活的影响。方法建立新生大鼠皮层神经元原代培养技术，加载不同浓度牛磺酸对培养皮层神经元进行干预，观察神经细胞的生长和存活情况。结果适当浓度的牛磺酸能够促进培养的皮层神经元存活，突起生长，促进神经元间网络的形成。结论牛磺酸能够促进原代培养皮层神经元生长。     

氟对原代培养大鼠海马细胞NCAM mRNA和蛋白表达的影响

目的 探讨氟对原代大鼠海马细胞生长发育、神经细胞黏附分子（NCAM）mRNA及蛋白表达的影响。方法 原代培养大鼠海马细胞暴露于20、40和80μg/ml氟化钠24h后,观察染氟前后海马细胞生长情况,采用噻唑蓝比色试验、逆转录-聚合酶链反应和蛋白印迹技术分别检测大鼠海马细胞存活情况、NCAMmRNA和蛋白表达水平。结果与对照组相比,80μg/ml剂量组海马细胞数量减少,突起减少、变短,细胞存活率下降。40、80μg/ml剂量组NCAM mRNA水平均显著低于对照组,20μg/ml剂量组NCAM mRNA水平虽与对照组之间差异无统计学意义,但存在下降的趋势,NCAM mRNA水平与氟浓度呈现一定的剂量效应关系,且随染氟浓度升高而降低。40、80μg/ml剂量组细胞NCAM-180蛋白表达水平显著低于对照组,各染氟组细胞NCAM-140蛋白表达水平显著低于对照组,80μg/ml剂量组细胞NCAM-120蛋白表达水平显著低于对照组。结论 氟可抑制海马细胞生长和存活,并使NCAMmRNA和蛋白表达水平下降,氟对发育中海马损伤可能是其神经毒性的作用位点之一。     

维生素C对海马神经细胞生长影响的研究

本研究用新生大鼠脑海马区细胞进行体外培养，观察不同浓度（１０－３～１０－６ｍｏｌ／Ｌ）维生素Ｃ（ＶＣ）对海马细胞生长的影响。结果表明，培养１４天的细胞存活数在１０－６ｍｏｌ／Ｌ和１０－５ｍｏｌ／ＬＶＣ组与对照组（培养液中不加ＶＣ）之间无明显差别，１０－４ｍｏｌ／ＬＶＣ组明显高于对照组，而１０－３ｍｏｌ／ＬＶＣ组存活细胞很少。进一步观察可见１０－４ｍｏｌ／ＬＶＣ组细胞突起数目、长度、胞体面积和周长均高于对照组（Ｐ＜０．０５），细胞总蛋白相对含量明显增加。结果提示，１０－４ｍｏｌ／ＬＶＣ对体外培养海马神经细胞的生长有一定促进作用。     

不同浓度醋酸铅对大鼠原代培养大脑皮层神经元的影响

目的　研究不同浓度铅对原代培养的皮层神经元生长及存活的影响。方法　建立新生大鼠皮层神经元原代培养技术 ,通过不同浓度醋酸铅染毒 ,观察神经细胞的生长和存活情况。结果　终浓度为 10 - 8mol L的醋酸铅即可抑制神经元突起生长 ,使细胞生长活力下降甚至死亡。随着醋酸铅的终浓度进一步加大 ,对神经元的损伤逐渐增强。结论　铅能够抑制原代培养皮层神经元生长和存活。     

多烯脂肪酸对海马神经元细胞脂肪酸构成和生长的作用

目的 :　观察长链多不饱和脂肪酸花生四烯酸 (AA)和 /或二十二碳六烯酸 (DHA)对体外培养新生大鼠海马神经元脂肪酸构成和生长发育的作用。方法 :　采用无血清培养液培养新生大鼠海马神经元 ,实验组分别在对照组的无血清培养液中添加 4μmol/L AA、4μ mol/L DHA或总浓度为 4μmol/L、比例为 1∶ 2～ 1 6∶ 1的 AA和 DHA。采用毛细管气相色谱法分析神经元中脂肪酸的构成 ,NSE染色鉴定神经元并利用图像分析技术 ,测量神经元胞体大小和突起长度。结果 :　当培养液中 AA和 DHA总浓度为 4μmol/L、比例为 1∶ 2～ 1 6∶ 1 ,海马神经元中 AA百分含量、AA/DHA比值与培养液中 AA和 DHA比例均呈正相关 ;当培养液中 AA和 DHA总浓度为4μmol/L,比例为 2∶ 1或 4∶ 1时 ,海马神经元的胞体面积、最大长径、最大短径和平均突起长度均显著高于单一添加 4μ mol/L AA、4μmol/L DHA、对照组以及其余各比例组。结论 :　 AA和DHA具有显著促进体外培养海马神经元生长发育的作用     

硒和B-27添加剂在神经干细胞存活与分化中的作用

目的 观察微量元素硒和神经细胞培养添加剂B-27对神经干细胞存活与分化的影响。方法 采用新生Wistar大鼠神经干细胞体外分离培养技术,应用盖玻片培养法和免疫细胞化学法来观察在无血清培养液中加入添加剂B-27和不含B-27时,硒对神经干细胞存活以及神经元分化标记蛋白β-微管蛋白、星形胶质细胞标记蛋白抗胶质细胞醋酸纤维蛋白（GFAP）和少突胶质细胞标记蛋白抗环核苷酸磷酸二酯酶（CNP酶）表达的影响。结果 在培养液中加入B-27添加剂同时加入硒时,神经干细胞能够存活并且分化成熟良好。在不含B-27添加剂同时也不含硒的培养液中神经干细胞不能够存活。在不含B-27添加剂而含有硒时,神经干细胞则能够存活并且能分化成神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞,各种细胞的形态典型。显微镜下计数发现神经干细胞在含硒的培养液中向神经胶质细胞方向分化比例较高。其中神经元分化β-微管蛋白阳性细胞每高倍视野为11．2个。胶质细胞分化方向GFAP阳性和CNP酶阳性细胞计数平均每高倍视野分别为16．1个和9．3个。结论 硒对于神经干细胞体外存活和分化是必需的营养成分。在不含B-27,但有硒存在时,神经干细胞能够存活并分化成熟。     

二十二碳六烯酸对神经细胞生长发育的作用

目的 :　观察二十二碳六烯酸 ( DHA)对神经细胞生长发育的作用。方法 :　将无血清培养的新生大鼠大脑神经细胞分为实验组和对照组 ,实验组加入 0 .33mol/ L( 5mol/ 1 5L)乳化DHA40 μl。对两组细胞进行神经细胞活力、蛋白质含量、神经特异性烯醇化酶 ( NSE)活性测定及神经细胞形态学观察。结果 :　实验组大脑神经细胞突起生长速度、胞体面积和直径、神经细胞存活率、NSE和神经细胞活力及蛋白含量均显著高于对照组。结论 :　DHA对神经细胞的生长有促进作用 ,且这一作用可能与促进神经细胞蛋白质合成有关。     

不同浓度锂对大鼠原代培养大脑皮层神经元的影响

目的　通过研究不同浓度锂对原代培养的皮层神经元生长及存活的影响 ,进一步探讨锂的神经元保护作用以及锂对脑发育的影响。方法　建立新生大鼠皮层神经元原代培养技术 ,通过加载 0 .6 2 5、1.2 5 0、2 .5 0 0、5 .0 0 0和 10 .0 0 0mmol L浓度的氯化锂 ,镜下观察神经元的生长和存活情况 ,测量神经元最长突起长度 ,通过噻唑蓝 (MTT)还原法进一步观察细胞的生长活力。结果　与对照组相比 ,氯化锂处理组的神经元胞体透亮 ,出芽快 ,神经元突起明显增长 ;且生长活力强于对照组 ,以5 .0 0 0mmol L浓度 [(5 3.80± 5 .84 ) μm]的锂作用最强 ,差异有显著性 (P <0 .0 1)。结论　锂可促进原代培养皮层神经元的生长和存活。     

补锌及补硒对婴幼儿铅中毒治疗效果分析

目的探讨补锌、补硒对铅中毒婴幼儿的治疗效果。方法将入选轻、中度铅中毒患儿随机分为病A组和病B组。病A组补锌、补硒治疗铅中毒,病B组通过进食有排铅作用的食物驱铅,并选择健康儿童作对照组比较。3组婴幼儿治疗前后分别测定血铅、血锌、血硒。结果病A组降铅效果明显优于病B组,治疗后病A组血锌、血硒接近对照组水平,而病B组血锌、血硒较治疗前还低。结论补锌、补硒治疗轻、中度铅中毒疗效明显且更合理。     

砷对原代培养大鼠海马神经元毒性作用的研究

目的研究砷对原代培养大鼠海马神经元的直接毒性作用。方法在海马神经元原代培养的基础上给予不同浓度的亚砷酸钠(0,0.04,0.40,4.00,10.00 mg/L)分别处理8 h和24 h后,观察神经元活力、神经元形态学以及细胞内代谢活动的变化。结果亚砷酸钠可致体外培养的大鼠海马神经元形态结构改变、细胞活力降低、培养上清液中乳酸脱氢酶(LDH)水平升高和丙二醛(MDA)水平升高。结论亚砷酸钠对培养的海马神经元有直接毒性作用且呈剂量-时间依赖关系。