牛蒡苷元及牛蒡苷对H2O2诱导的SH-SY5Y细胞氧化损伤的保护作用

目的：研究牛蒡苷元及牛蒡苷对H2O2诱导的SH-SY5Y细胞氧化损伤的保护作用。方法：体外培养人多巴胺神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y细胞,加入不同浓度的牛蒡苷元及牛蒡苷预保护细胞SH-SY5Y 24 h后,加入H2O2继续共同培养24 h,采用MTT法检测细胞存活率。结果：与模型组相比,5 μmol·L-1和10 μmol·L-1的牛蒡苷元和20 μmol·L-1的牛蒡苷可提高细胞的存活率。结论：牛蒡苷及其苷元均能保护H2O2诱导的SH-SY5Y细胞氧化损伤,且牛蒡苷元对SH-SY5Y细胞氧化损伤的保护作用强于牛蒡苷。     

氯化钴诱导SH-SY5Y细胞缺氧损伤作用的研究

目的探讨氯化钴(Co Cl2)诱导SH-SY5Y细胞缺氧损伤的作用及相关机制。方法用四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT)观察不同浓度Co Cl2对SH-SY5Y细胞生长情况影响;ELISA法检测细胞内相关凋亡蛋白Bcl-2、Bax、Caspase-3及缺氧相关蛋白HIF-1α的表达情况。结果 Co Cl2可以诱导SH-SY5Y细胞损伤,并呈现浓度和时间依赖性;Co Cl2作用于SH-Y5Y细胞导致HIF-1α、Caspace-3和Bax的表达增多(P<0.05),Bcl-2表达减少(P<0.01)。结论 Co Cl2诱导SH-SY5Y细胞缺氧损伤与上调HIF-1α表达、促进细胞凋亡有关。     

HSPA1L在H2O2诱导SH-SY5Y细胞损伤中的作用

目的 研究HSPA1L蛋白在H2O2诱导SH-SY5Y细胞损伤中的作用.方法 将SH-SY5Y细胞用不同浓度的H2O2(1 200、800、600、400、200、100、50、0μmol/L)处理24 h,倒置显微镜观察SH-SY5Y细胞形态学的变化,MTF法检测SH-SY5Y细胞存活率,Western-blot检测SH-SY5Y细胞HSPA1L蛋白表达水平的变化.结果 与0 μmol/L组比较,不同浓度H2O2处理后,细胞形态发生了剂量依赖性损伤;SH-SY5Y细胞的存活率随H2O2浓度升高,呈现剂量依赖性降低;HSPA1L蛋白的表达水平随H2O2浓度升高,呈现剂量依赖性升高.结论 HSPA1L在H2O2诱导的SH-SY5Y细胞损伤模型中,呈现剂量依赖性升高,这可能是细胞应对氧化应激损伤的一种补偿机制.     

何首乌提取物对MPP+诱导的SH-SY5Y细胞损伤的保护作用

目的 研究何首乌提取物对1-甲基-4-苯基-吡啶离子(MPP+)诱导SH-SY5Y细胞损伤的保护作用.方法 体外培养SH-SY5Y细胞,建立MPP+致SH-SY5Y细胞损伤模型,实验分为对照组、MPP+损伤模型组、何首乌提取物干预组.干预组在MPP+损伤的基础上,给予不同浓度何首乌提取物(终质量浓度5、25、100 mg/L).MTT比色法检测细胞活力;Hoechst33258染色和白光下观察细胞形态变化,比色法检测细胞培养上清液中乳酸脱氢酶(LDH)及细胞中丙二醛(MDA)含量;通过荧光强度观察活性氧(ROS)的含量和线粒体膜电位的变化.结果 与对照组相比,模型组中细胞活性显著降低,Hoechst33258染色和白光下可见细胞胞体变小、核皱缩、碎裂有明显的颗粒状和固缩状荧光,并且细胞上清液中LDH泄漏明显增多、细胞中MDA含量和ROS显著升高而线粒体膜电位显著降低(P＜0.05).与模型组比较,预先4h给予不同浓度的何首乌提取物(5、25、100 mg/L)能明显改善SH-SY5Y细胞的活性,降低细胞产生的LDH、MDA含量,并恢复线粒体膜高能电位,且对ROS有明显的抑制效果(P＜0.01).结论 何首乌提取物对Mpp+诱导的SH-SY5Y细胞损伤具有显著的保护作用,其保护作用与其抗氧化应激作用有关.     

锰对SH-SY5Y细胞氧化应激水平的影响及维生素C的保护作用

目的 研究染锰不同浓度对SH-SY5Y细胞总超氧化物歧化酶(T-SOD)、锰超氧化物歧化酶(Mn-SOD)活性及丙二醛(MDA)含量的影响,并观察维生素C对染锰多巴胺能神经细胞的保护作用,探讨锰的神经毒性作用机制及防治措施.方法 人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞在分别含O,25,50,100,200,300 μmol/L浓度氯化锰(MnCl2)及10 mmol/L维生素C+300 μmol/LMnCl2的培养基中培养72 h后,试剂盒检测MnCl2对细胞T-SOD、Mn-SOD活性和MDA含量的影响及维生素C的保护作用.结果 MnCl2能显著降低SH-SY5Y细胞T-SOD、Mn-SOD活性;而随着MnCl2浓度的增加,细胞MDA含量显著升高,且呈剂量.效应关系.维生素C预处理可显著降低染锰细胞的氧化应激水平.结论 MnCl2可显著降低SH-SY5Y细胞T-SOD、Mn-SOD的活性,并使细胞内MDA生成量增多,提示氧化应激可能是锰产生多巴胺能神经毒性的重要机制之一,而维生素C对锰诱导的氧化应激具有明显的抑制作用.     

连翘苷对MPP+诱导人神经母细胞株SH-SY5Y细胞损伤的保护作用

目的：研究连翘苷对1-甲基-4-苯基吡啶离子（1-methyl-4-phenylpyridinium,MPP⁺）诱导人神经母细胞株SH-SY5Y细胞损伤的神经保护作用。方法：培养的SH-SY5Y细胞加入不同浓度的连翘苷,以MTT代谢率为指标确定连翘苷的无毒范围;对培养的SH-SY5Y细胞加入连翘苷100,10,1 μmol·L^-1预孵育24 h,加入1 mmol·L^-1 MPP⁺ 作用48 h诱导损伤,观察MTT代谢率、乳酸脱氢酶（Lactate dehydrogenase,LDH）漏出率的改变。结果：连翘苷在1~100 μmol·L^-1浓度范围内不影响SH-SY5Y细胞存活率;与正常对照组细胞相比,MPP⁺损伤模型组MTT代谢率明显降低（P＜0.001）,LDH漏出率显著增加（P＜0.001）;与模型组相比,连翘苷各组细胞活性显著升高（P＜0.05）,LDH漏出率明显降低（P＜0.01）。结论：连翘苷对MPP⁺诱导的SH-SY5Y细胞损伤具有神经保护作用。     

芍药苷通过促进细胞自噬抑制H2O2诱导的SH-SY5Y细胞的氧化损伤

目的研究芍药苷对氧化损伤细胞模型的抗氧化作用和细胞自噬的调控作用。方法以H_2O_2诱导的SH-SY5Y细胞系构建氧化损伤模型。实验设对照组,模型组,芍药苷低、中、高剂量组。采用MTT法检测芍药苷干预后细胞存活率;2',7'-二氯荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)检测细胞内ROS水平;Ad-mCherry-GFP-LC3B融合蛋白腺病毒检测细胞自噬水平;Western blot检测细胞自噬相关蛋白LC3及SQSTM1/p62的表达水平。结果 250μmol/L H_2O_2干预24 h后SH-SY5Y细胞存活率约55%为模型复制条件。芍药苷低、中、高剂量干预后,与模型组比较,细胞存活率呈剂量依赖性上升(P0.05)。与对照组相比,模型组细胞内ROS水平升高,差异具有统计学意义(P0.05);自噬溶酶体形成受阻;LC3Ⅱ及SQSTM1/p62在细胞内表达升高,差异具有统计学意义(P0.05)。芍药苷的干预可促进自噬小体与溶酶体结合;与模型组比较,芍药苷中、高剂量组细胞内ROS水平显著下调(P0.05);细胞内LC3Ⅱ及SQSTM1/p62的表达降低,差异具有统计学意义(P0.05)。结论芍药苷可通过促进细胞自噬改善H_2O_2诱导的SH-SY5Y细胞氧化损伤。     

神经节苷脂预处理对罗哌卡因诱导SH-SY5Y细胞焦亡的神经保护作用

目的:探讨神经节苷脂(GM-1)抑制罗哌卡因诱导神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)发生焦亡的神经保护作用及分子机制.方法:将对数生长期SH-SY5Y细胞随机分为对照组(C组):无罗哌卡因或GM-1干预;GM-1预处理组(G组):SH-SY5Y细胞中加入5 μmol/L的GM-1培养24h;GM-1预处理组(G+R组):...     

芍药苷对过氧化氢诱导SH-SY5Y细胞PCNA及Caspase-3表达的影响

目的探讨芍药苷对过氧化氢(H2O2)诱导SH-SY5Y氧化损伤的保护作用及其可能机制。方法MTT法测定细胞存活率,细胞免疫化学技术检测细胞细胞核增殖抗原(PCNA)、Caspase-3的表达。结果 0.87mmol/L H2O2可使细胞存活率降低,PCNA的表达减少,Caspase-3的表达增加。经过39μg/mL和62.5μg/mL浓度的芍药苷处理后,H2O2诱导的SH-SY5Y细胞存活率明显升高,PCNA的表达明显增加,同时抑制Caspase-3的表达。结论芍药苷可抑制过氧化氢诱导的SH-SY5Y细胞凋亡,其作用机制可能与其增加细胞PCNA的表达,减少Caspase-3的表达有关。     

远志正丁醇提取物对SH-SY5Y细胞增殖及抗氧化损伤作用

目的:研究远志正丁醇提取物对SH-SY5Y细胞的增殖作用及对H2O2诱导的SH-SY5Y细胞氧化损伤的保护作用.方法:增殖实验以0(对照组)、5、10、20、40、80和100μg/mL的远志正丁醇提取物培养SH-SY5Y细胞48 h,观察细胞形态,用MTT法测算存活率.损伤实验重取细胞并随机分为空白组、对照组、实验组...     

五味子乙素对谷氨酸诱导SH-SY5Y细胞损伤的保护作用及其机制

目的: 探讨五味子乙素(Sch B)对谷氨酸(Glu)致人神经母瘤细胞SH-SY5Y细胞损伤的保护作用,阐明其对ATR信号通路的影响。 方法: 将处于对数生长期的SH-SY5Y细胞分为对照组、DMSO组、模型组、Sch B1组、Sch B2组和Sch B3组。对照组SH-SY5Y细胞不做任何处理;DMSO组SH-SY5Y细胞用17 mmol·L^-1 DMSO作用24h;模型组SH-SY5Y细胞用20 mmol·L^-1 Glu孵育24h造成细胞损伤模型;Sch B1、Sch B2和Sch B3组采用0.05、 0.10和1.00 μmol·L^-1浓度Sch B预处理SH-SY5Y细胞24 h后再用Glu(20 mmol·L^-1 )继续孵育24 h。MTT法检测细胞存活率,流式细胞术检测细胞周期变化,Western blotting法检测ATR、p-CHK1、p-Cdc25c和P53蛋白表达情况。 结果: MTT法检测,与模型组比较,Sch B1、Sch B2和Sch B3组细胞存活率明显升高(P<0.05或P<0.01),且Sch B2组细胞存活率最高,故选取Sch B2组作为Sch B组进行后续实验。细胞周期检测,与对照组比较,模型组G₀/G₁期细胞所占百分比降低(P<0.05),S期和G₂/M 期细胞所占百分比升高(P<0.05);与模型组比较,Sch B组G₀/G₁期细胞所占百分比升高(P<0.05),S期和G₂/M 期细胞所占百分比降低(P<0.05)。Western blotting法检测,与对照组比较,模型组细胞中ATR、p-CHK1、p-Cdc25c和P53蛋白表达水平明显升高(P<0.05);与模型组比较,Sch B组细胞中ATR、p-CHK1、p-Cdc25c和P53蛋白表达水平均降低(P<0.05)。 结论: Sch B对Glu致SH-SY5Y细胞损伤具有保护作用,其机制可能与下调ATR信号通路、减少细胞周期阻滞有关。     

瘦素减轻鱼藤酮诱导的SH-SY5Y细胞损伤

目的 探讨瘦素对鱼藤酮（rotenone） 所诱导的人神经母细胞瘤SH-SY5Y 细胞凋亡的抑制作用。 方法 建立鱼藤酮诱导的SH-SY5Y 细胞损伤模型,用瘦素进行干预,采用MTT 比色法检测细胞存活率,锥虫蓝检测细胞死亡率,细胞形态学观察,并用Western blot 法检测Bcl-2、Bax、p-GSK-3β（Ser9） 和GSK-3β 的表达水平,免疫荧光检测α-synuclein 的表达水平。 结果 成功建立了鱼藤酮诱导的SH-SY5Y 细胞损伤模型。在模型的基础上,瘦素干预后,细胞状态改善,细胞存活率提高约14%（P ＜ 0.05）,细胞死亡率降低约17%（P ＜ 0.05）,α-synuclein 的浓度下降,Bcl-2 和p-GSK-3β 的表达显著提高。 结论 瘦素对鱼藤酮诱导的SH-SY5Y 细胞损伤具有明显的抑制作用,可能是通过抑制GSK-3β 的活性上调Bcl-2/Bax 的比率和降低α-synuclein 的表达而得以实现。     

甘草酸对大鼠肝星状细胞氧化应激抑制作用的机制研究

目的 探讨甘草酸对大鼠肝星状细胞(HSC)的氧化应激及核转录因子E2相关因子2(Nrf2)/血红素加氧酶(HO)-1信号通路的影响.方法 体外培养HSC细胞,将细胞分为5组:空白对照组、次氮基三乙酸铁(Fe-NTA)处理组、Fe-NTA+5 μmol/L甘草酸组、Fe-NTA+10 μmol/L甘草酸组及Fe-NTA+20 μmol/L甘草酸组;给药24 h后收集细胞,采用相关试剂盒检测HSC细胞中丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)、谷胱甘肽(GSH)的含量及超氧化物歧化酶(SOD)的活性;RT-PCR和Western blot方法分别检测Nrf2和HO-1 mRNA及蛋白表达水平.结果 Fe-NTA处理组中MDA、NO含量明显升高,而GSH水平显著降低,SOD酶活性也显著降低;而甘草酸处理的3组细胞中MDA、NO含量显著降低,GSH水平显著升高,SOD酶活性也显著升高,差异均有统计学意义(P<0.05).Fe-NTA处理组中Nrf2和HO-1mRNA及蛋白表达水平与空白对照组比较显著降低,而甘草酸处理的3组细胞中Nrf2和HO-1mRNA及蛋白表达水平相对于Fe-NTA处理组显著上调,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 甘草酸有抗HSC细胞氧化应激损伤的作用,其作用机制可能与激活Nrf2/HO-1信号通路有关.     

Ⅱ型单胺囊泡转移体在SH-SY5Y细胞中的稳定表达

目的构建稳定表达Ⅱ型单胺囊泡转移体（VMAT2）的SH-SY5Y细胞系。方法构建VMAT2真核表达载体，利用脂质体转染神经母细胞瘤SH-SY5Y，选择筛选后挑取单克隆扩大培养，通过Western-blot及免疫荧光的方法鉴定蛋白质在细胞中的表达，并通过免疫双荧光技术对VMAT2在细胞系中的分布进行定位。结果Western-blot及免疫荧光结果显示该蛋白在挑选的细胞系中有高效表达。免疫双荧光结果显示表达的蛋白定位在大密度核心囊泡（LDCV）。结论该细胞系的成功构建为研究VMAT2在帕金森氏病（PD）发病机制中的作用奠定良好的基础。     

纳米SiO2对人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞的凋亡诱导作用及其机制

目的:探讨纳米二氧化硅(SiO₂)对人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞凋亡和周期的影响,阐明其作用机制。方法:选取不同浓度粒径为90 nm的SiO₂颗粒作用于SH-SY5Y细胞,分别为0、3.125、6.250、12.500、25.000、50.000 mg·L^-1 SiO₂组,其中0 mg·L^-1组为对照组。MTT法检测各组SH-SY5Y细胞存活率;采用AO/EB染色和 Annexin Ⅴ-FITC/PI法检测各组细胞凋亡率;流式细胞术(FCM)检测细胞周期百分比和细胞中活性氧(ROS)水平。结果:MTT检测,6.250、12.500、25.000和50.000 mg·L^-1 SiO₂组细胞存活率低于对照组 (P<0.05),12.500、25.000和50.000 mg·L^-1 SiO₂组细胞存活率低于3.125 mg·L^-1 SiO₂组 (P<0.05)。AO/EB染色和 Annexin V-FITC/PI法检测,6.250、12.500、25.000和50.000 mg·L^-1 SiO₂组细胞凋亡率高于对照组(P<0.05),12.500、25.000和50.000 mg·L^-1 SiO₂组细胞凋亡率高于3.125 mg·L^-1 SiO₂组(P<0.05)。FCM检测,3.125、6.250、12.500、25.000和50.000 mg·L^-1 SiO₂组细胞中ROS水平高于对照组 (P<0.05)。25.000和50.000 mg·L^-1 SiO₂组G₀/G₁期细胞百分比低于3.125 mg·L^-1SiO₂组和对照组(P<0.05),50.000 mg·L^-1 SiO₂组G₂/M期细胞百分比高于对照组 (P<0.05)。结论:纳米SiO₂ 可降低SH-SY5Y细胞的活力,诱导细胞凋亡,增加细胞中ROS水平,可干扰细胞周期进程,对SH-SY5Y细胞的增殖具有抑制作用。     

褪黑素对精神分裂症模型大鼠海马神经元氧化应激损伤的保护作用

目的：研究褪黑素（MT）对精神分裂症模型大鼠海马神经元氧化应激损伤的保护作用及机制。方法：60只雄性SD大鼠被分为5组：对照组、模型组、模型+MT低剂量组（12.5 mg/kg）、模型+MT高剂量组（25 mg/kg）、模型+MT受体阻断剂组（Luzindole,1 mg/kg）,每组12只。采用腹腔注射MK-801的方法建立精神分裂症大鼠模型,造模成功后,模型+MT低剂量组、模型+MT高剂量组以及模型+MT受体阻断剂组均腹腔注射相应药物,对照组及模型组注射10%无水乙醇溶液,持续21 d。采用Morris水迷宫实验检测大鼠的学习记忆功能,试剂盒法检测海马组织匀浆液中氧化应激相关因子ROS、SOD、MDA含量,免疫组织化学法检测神经元标记蛋白NeuN的表达,Western blot法检测海马核因子E2相关因子2（Nrf2）、血红素加氧酶-1（HO-1）蛋白水平。结果：与对照组比,模型组大鼠学习记忆功能受损,海马ROS、MDA含量显著增加,SOD活性下降,NeuN阳性细胞数明显减少,海马Nrf2、HO-1蛋白表达显著升高（均P＜0.05）;与模型组比,模型+MT高剂量组大鼠学习与记忆功能均有较明显的改善,海马ROS、MDA含量均下降,SOD活性升高,NeuN阳性表达增加,Nrf2、HO-1蛋白表达显著升高（均P＜0.01）。与模型+MT高剂量组比,模型+MT受体阻断剂组大鼠学习记忆功能受损,海马ROS含量上升,NeuN阳性表达下降,Nrf2、HO-1蛋白表达下降（P＜0.05）。结论：MT具有保护精神分裂症大鼠海马神经元氧化应激损伤的作用,其机制与调控Nrf2/HO-1信号通路有关。     

14-3-3蛋白过表达对SH-SY5Y细胞的保护作用

目的探讨14-3-3蛋白过表达对神经母细胞瘤细胞株（SH-SY5Y）的保护作用和可能机制。方法利用脂质体转染的方法在SH-SY5Y细胞株中瞬时表达14-3-3蛋白。通过四甲基偶氮唑盐（MTT）法、Ho-echst 33342染色法、流式细胞仪和荧光显微镜分别检测14-3-3蛋白过表达对神经母细胞瘤细胞株SH-SY5Y的细胞活性、细胞凋亡、细胞内活性氧类物质（ROS）水平的影响。结果 14-3-3蛋白过表达可促进SH-SY5Y细胞的增殖;抑制SH-SY5Y细胞内ROS的产生。结论 14-3-3过表达对SH-SY5Y起神经保护作用,其机制可能是通过抑制细胞内ROS的产生而实现的。