ARMS与NGS对比检测NSCLC患者标本EGFR、KRAS、BRAF、EML4-ALK融合等基因探索

目的 探讨突变扩增阻滞系统(ARMS)法和下一代测序(NGS)法检测非小细胞肺癌(NSCLC)患者标本多驱动基因改变上的差异,指导临床个体化治疗.方法 51例NSCLC患者标本首先采用ARMS法,对所有样本进行表皮生长因子受体(EGFR)、鼠类肉瘤病毒癌基因(KRAS)、鼠类肉瘤滤过性毒菌致癌基因同源体B1 (BRAF)、棘皮动物微管相关类蛋白4-间变性淋巴瘤激酶(EML4-ALK)等基因检测,随后采用NGS对上述标本进行高通量检测对比,收集临床资料,定期随访.结果 51例NSCLC样本应用ARMS法与NGS检测EGFR、KRAS、EML4-ALK突变阳性率(48.9％vs53.3％、11.1％ vs 8.9％、13.7％ vs 5.9％)差异无统计学意义.两种方法检测出的EGFR-19del突变组比EGFR-L858R突变组靶向治疗生存期较长,差异有统计学意义(P=0.0L0),但两组在性别、年龄、靶向治疗阶段等方面差异无统计学意义.NGS法检测出EGFR-19del、L858R突变患者肿瘤特有基因平均数量分别为7.1、4.6个,EGFR-L858R多为抑癌基因突变(91％).2例EGFR/KRAS双突变患者较EG-FR单突变患者预后差.结论 ARMS法和NGS均适用于NSCLC患者突变驱动基因检测.对于DNA点突变检测,NGS不仅显示ARMS检测的遗漏,还显示突变丰度、伴随突变及非常规突变等,对ARMS检测有补充作用.EGFR-19del患者靶向治疗生存期比EGFR-L858R突变患者长,EGFR-L858R主要为抑癌基因突变.EGFR合并KRAS双突变患者预后较差,但仍需进一步研究证实.     

肺癌患者呼出气冷凝液与血液中EGFR、KRAS基因及其变异的检测

目的:研究肺癌患者检测呼出气冷凝液(EBC)中表皮生长因子受体(EGFR)、KRAS基因及其变异的可行性,与肺癌患者血液中EGFR、KRAS基因及其变异的检测进行对比研究,并结合病理及影像学等临床资料分析其临床意义。方法:将收治的30例肺癌患者作为研究组,选取同一时间健康志愿者30例作为对照组。分别采集两组研究对象的EBC和血液标本,检测EBC和血液EGFR、KRAS基因表达及变异性情况。结果:研究组和对照组对象EBC标本中,通过多种检测方法均未提取到EBC样本基因组DNA,无法扩增出检测目的基因。研究组中EGFR基因中有18例发生突变,其中有15例样本中19外显子缺失敏感型突变,仅3例发现21外显子L858R突变,KRAS基因仅1例发生突变,为Gly12Asp突变。15例19外显子缺失敏感型突变中腺癌12例,鳞癌3例。对照组中EGFR基因中均未发生突变。KRAS基因中均未发生突变。研究组EGFR基因野生型和突变型比例与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05);KRAS基因野生型和突变型两组差异无统计学意义(P>0.05)。结论:用EBC标本检测肺癌患者中EGFR、KRAS基因是一个理想的无创的方法,但目前因多种原因及条件限制无法完成。血液中EGFR、KRAS基因及其变异性是目前比较实用的方法,创伤小。     

肺癌表皮生长因子受体基因测序分析

目的：探讨中国人肺癌患者表皮生长因子受体（Epidermal growth factor receptor,EGFR）基因突变状态。方法用基因测序的方法检测了416例肺癌肿瘤细胞标本EGFR基因第18、19、21外显子,并检测了其中11例EGFR第20外显子区域。23例肺癌患者血液标本作为对照。结果416例肿瘤标本中共发现118例（28.37%）EGFR基因突变,其中19外显子缺失突变占46.09%,21外显子点突变占42.19%,并发现了4例EGFR第20外显子区域突变（4/11）。23例肺癌患者血液标本均未发现突变。肺腺癌的突变率为32.52%,比鳞癌（12.96%）（P=0.004）、其他类型癌（13.89%）（P=0.021）增高,差异有统计学意义。EGFR基因突变在女性患者中（36.72%）所占比例比男性患者高（22.18%）（P=0.001）。结论女性、肺腺癌患者EGFR突变率高,提示可能在表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂的治疗中获益。     

浙江省非小细胞肺癌患者EGFR基因与EML4-ALK融合基因突变的检测及其临床特征

目的:检测中国人非小细胞肺癌表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)基因和棘皮动物微管相关蛋白样-4与渐变性淋巴瘤激酶(EML4-ALK)融合基因的突变情况,同时分析这两种基因与非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)临床病理特征的关系?方法:采用PCR扩增和基因测序法检测252例NSCLCs EGFR基因外显子19和21的突变情况,real-time PCR法检测EML4-ALK融合基因的突变情况,分析突变与临床特征的关系?结果:252例非小细胞肺癌组织标本EGFR的突变率为38.8%(98例),其中19外显子突变率为15.8%(40例),21外显子突变率为23.0%(58例)?EGFR突变的患者多为女性?无吸烟史和腺癌(P < 0.05),与患者年龄无关(P > 0.05)?252例非小细胞肺癌组织标本中,EML4-ALK融合基因突变率4.7%(12例)?EML4-ALK基因突变患者多为女性和年龄较小者(P < 0.05),与患者吸烟史和病理类型无关(P > 0.05)?没有检测到EGFR和EML4-ALK的突变共存情况?结论:中国人中NSCLCs的EGFR突变率较高,在使用EGFR酪氨酸激酶抑制剂治疗前进行EGFR基因突变检测很有必要?EML4-ALK基因突变代表了NSCLC另一种分子亚型,这为临床NSCLC患者的治疗提供了一种新的选择方案?EML4-ALK融合基因突变与EGFR突变共存是罕见的现象?     

基于悬浮点阵技术的新型EGFR基因突变检测方法的建立和应用

目的构建基于悬浮点阵技术的新型表皮生长因子受体(EGFR)基因突变的检测方法,检测并分析非小细胞肺癌(NSCLC)组织中EGFR酪氨酸激酶抑制剂(TKI)相关的EGFR基因突变状况。方法选取61例经影像学和病理学检查确诊的NSCLC患者作为研究对象,手术后留取新鲜肺癌组织,提取基因组DNA,采用多重聚合酶链式反应(PCR)对组织样本的EGFR基因18、19、20和21号外显子中包含8种高频突变位点的特异片段进行扩增,并经多重连接酶检测反应(LDR)以特异性探针对扩增片段中的突变进行连接,再基于悬浮点阵技术平台对连接产物进行检测,最后通过DNA测序对检测结果进行验证。结果在61例NSCLC组织样本中,运用PCR-LDR联合悬浮点阵技术共检出EGFR基因突变19例,突变率为31.1%,其中外显子19缺失突变E746-A750 del(1)、E746-A750 del(2)各1例,外显子20点突变T790M 1例,外显子21点突变L858R 14例、L861Q2例,经DNA测序验证完全正确。结论运用PCR-LDR联合悬浮点阵技术初步建立了一种新型的EGFR基因突变检测方法,能同时准确检测EGFR基因中的8种高频突变...     

基于悬浮点阵技术的新型EGFR基因突变检测方法的建立和应用

目的构建基于悬浮点阵技术的新型表皮生长因子受体(EGFR)基因突变的检测方法,检测并分析非小细胞肺癌(NSCLC)组织中EGFR酪氨酸激酶抑制剂(TKI)相关的EGFR基因突变状况。方法选取61例经影像学和病理学检查确诊的NSCLC患者作为研究对象,手术后留取新鲜肺癌组织,提取基因组DNA,采用多重聚合酶链式反应(PCR)对组织样本的EGFR基因18、19、20和21号外显子中包含8种高频突变位点的特异片段进行扩增,并经多重连接酶检测反应(LDR)以特异性探针对扩增片段中的突变进行连接,再基于悬浮点阵技术平台对连接产物进行检测,最后通过DNA测序对检测结果进行验证。结果在61例NSCLC组织样本中,运用PCR-LDR联合悬浮点阵技术共检出EGFR基因突变19例,突变率为31.1%,其中外显子19缺失突变E746-A750 del(1)、E746-A750 del(2)各1例,外显子20点突变T790M 1例,外显子21点突变L858R 14例、L861Q2例,经DNA测序验证完全正确。结论运用PCR-LDR联合悬浮点阵技术初步建立了一种新型的EGFR基因突变检测方法,能同时准确检测EGFR基因中的8种高频突变...     

建立基于脱氧次黄嘌呤核苷修饰等位基因PCR方法检测EGFR基因热点突变

目的建立基于脱氧次黄嘌呤修饰等位基因特异荧光聚合酶链反应（dI-AS-PCR）方法,检测表皮生长因子受体（EGFR）基因热点突变L858R 和19del（2235～2249,2236～2250）。方法设计包含扩增EGFR基因L858R 和19del 热点突变在内的特异性引物、荧光探针和内参体系;且特异检测基因突变的等位基因PCR引物3’- 末端n-1 或n-2 位置采用脱氧次黄嘌呤（dI）修饰。建立标准品和质控样品,应用荧光PCR 检测,并分析结果。结果dI-AS-PCR能够在野生型背景下检测低于0.1%的突变,对50 例肺癌临床样本进行检测,有9 例（18%）EGFR 基因发生L858R 突变,14（28%）例19del 基因突变。基因热点突变率为46%,其检测结果与DNA 测序完全一致。结论基于dI-AS-PCR 技术的特异荧光PCR 检测EGFR基因热点突变,敏感性高,特异性强,可以应用于临床EGFR基因突变检测,指导个性化用药及酪氨酸激酶抑制剂（TKI）治疗耐药监测。     

非小细胞肺癌中表皮生长因子受体基因突变的筛查

目的检测非小细胞肺癌患者的表皮生长因子受体(EGFR)基因外显子的突变情况。方法收集24例肺腺癌和25例肺鳞癌手术标本,抽提组织DNA,对EGFR基因的1-28号外显子进行扩增并测序,筛查EGFR基因的突变。结果在8例肺腺癌患者中检出EGFR突变,在肺鳞癌患者中未检测到突变。检测到的突变位点位于19-21号外显子内,且均为非吸烟患者,占非吸烟肺腺癌患者的61.5%(8/13)。结论 EGFR基因突变在非吸烟的肺腺癌患者具有较高的发生率,突变主要集中发生于19-21号外显子。     

非小细胞肺癌患者EGFR、K-ras基因突变与厄洛替尼治疗的相关性研究

目的 研究非小细胞肺癌患者表皮生长因子受体（EGFR）、K-r基因位点突变与厄洛替尼靶向治疗效果的关系.方法 采用PCR、测序等方法检测入选40例患者EGFR、K-ras基因突变情况,确诊入选病例给予厄洛替尼治疗,评价治疗效果与基因突变位点之间的关系.结果 疗效好组22例患者中,18外显子突变11例,19外显子突变11例,20外显子突变4例,无K-ras突变;疗效差组18例患者中,18外显子突变2例,19外显子突变1例,20外显子突变10例,K-ras突变8例.疗效好组和疗效差组在EGFR基因18、19、20外显子和K-r基因突变数量上比较,差异有统计学意义（P＜0.05）.结论 对厄洛替尼有效组EGFR突变主要集中在18、19外显子上,并无K-ms突变;而无效组的EGFR突变主要集中在20外显子上,并伴有明显的K-ras突变,提示临床非小细胞肺癌厄洛替尼治疗时应关注EGFR、K-ras基因突变的具体情况.     

非小细胞肺癌171例患者EGFR基因突变分析

目的 研究171例非小细胞肺癌(NSCLC)患者表皮生长因子受体(EGFR)基因突变状况,为肺癌的基因诊断和靶向治疗提供依据.方法 171例肺癌患者取新鲜病理组织标本,用厦门艾德核酸提取试剂提取体细胞DNA,采用扩增阻滞突变系统荧光PCR(ARMS-PCR)技术检测EGFR基因突变.结果 在95例男性肺癌患者中,共有4例患者EGFR基因同时检测到存在2个位点突变.171例NSCLC病例中,EGFR基因野生型比率为48.57%(85/175),EGFR基因突变型比率为51.43%(90/175),突变型中21L858R点突变占24.00%(42/175),19Del突变占21.71%(38/175).男女患者比较,EGFR基因野生型比率男性为57.58%(57/99),女性为36.84%(28/76),差异有统计学意义(P=0.007);EGFR基因19Del女性为28.95%(22/76),男性为16.16%(16/99),差异有统计学意义(P=0.042).EGFR基因21L858R点突变女性为28.95%(22/76),男性为20.20%(20/99),差异无统计学意义(P=0.179).结论 NSCLC患者EGFR基因突变率大约为50%左右,突变型以21L858R和19Del占大多数,突变型中女性显著多于男性.     

肺和其他脏器多原发癌21例

报告海军总医院收治的双原发肺癌5例(同时性1例,非同时性4例)及肺与其他脏器多原发癌16例(同时性4例,非同时性12例)的治疗经验,对其发生原因及提高诊治水平的方法与措施进行了简要讨论.     

试论癌毒瘀滞导致癌瘤发生的理论基础

癌瘤的发生和发展为阴、阳两方面相互作用的结果,即癌毒、瘀滞这两方面共同致病,体内外邪气可化毒,而体内气血津液的失调也可参与癌毒的形成,探讨癌毒、瘀滞和癌瘤形成之间的联系,可为癌瘤形成提供新的理论基础,并为其治疗提供新的思路。     

Caveolin-1在复发膀胱尿路上皮癌组织中的表达及临床意义

目的 研究Caveolin-1在膀胱尿路上皮癌初发与复发之间表达的差异,探讨Caveolin-1与膀胱尿路上皮癌复发的分子机理及具有的临床病理意义。 方法 应用免疫组化方法检测23例初发膀胱尿路上皮癌和37例复发膀胱尿路上皮癌组织中Caveolin-1的表达,分析其与膀胱尿路上皮癌临床病理特征、肿瘤复发之间的关系。     

微生物组与泌尿系统肿瘤研究进展

泌尿系统肿瘤作为常见的恶性肿瘤,严重影响了人类的健康。近年来,越来越多的研究揭示了微生物组与泌尿系统肿瘤之间的相互影响。本文对微生物组与泌尿系统肿瘤相关性的相关研究进行综述,以明确微生物组对泌尿系统肿瘤的发病机制、治疗和预后的深远影响。     

残胃癌和残胃再发癌的X线诊断

报告残胃癌和残胃再发癌１９例，对病变部位、大小、类型等进行了分析，重点讨论了ｘ线征象和检查技术问题。并认为术后５年开始定期复查，尽可能避免采用毕罗Ⅱ式手术方式和初次手术后及时摄片，是预防残胃发生癌变的重要措施。     

96例高龄食管癌、贲门癌外科治疗及预后分析

目的探讨高龄食管癌、贲门癌外科治疗及预后分析。方法收集本院2006年6月～2011年5月96例高龄食管癌贲门癌患者,对其病变特征、同术期处理及术式的选择进行回顾性总结和分析,且进行电话随访。结果本组病例中男性患者平均发病年龄明显低于女性患者（73．3岁vS76．7岁,P〈0．05）;上、中、下段各个发病部位均是男性居多;临床分期以Ⅱ、Ⅲ期患者居多;癌症患病种类与性别无关（P〉0．05）;术后并发症发生率为18．75％;5年生存率28．13％。结论对高龄食管癌和贲门癌患者,如全身情况允许,应积极考虑手术治疗,且应严格控制适应证及适宜的术式,加强围术期的处理。     

同时性大肠多原发癌的诊治(附34例报告)

目的提高同时性大肠多原发癌的诊断正确率。方法对2677例大肠癌病人进行术前钡灌肠、纤维结肠镜检查及术中纤维结肠镜检查。结果发现34例同时性多原发性大肠癌，占同期大肠癌病人的1．3％。同时性多原发性大肠癌常因临床医生不够重视而漏诊。结论大肠癌病人术前应常规行钡灌肠及纤维结肠镜检查，术前未作纤维结肠镜检查的病人术中应加做结肠镜检查，以减少同时性多原发癌的漏诊。术中应常规解剖标本检查，从而决定手术切除范围。     

肺癌诊治水平的进展与提高

目的 肺癌是恶性肿瘤死亡的首要原因。本专题主要针对肺癌流行病学、早期筛查及诊断、以及治疗策略等热点问题进行研究,提出目前肺癌的临床流行病学及病理类型分布的变化,阐述低剂量CT及孤立性结节影像学特点在肺癌早期筛查诊断中的价值,研究晚期脑转移肺癌及肺肉瘤样癌患者的治疗策略,并探索靶向治疗的新靶点。在规范化诊治的基础上,通过基础研究获得新发现并逐步应用于临床,从而提高肺癌高危人群早期筛查的准确率,从分子病理水平对肺癌进行分子分型,充分实现个体化治疗,改善晚期肺癌治疗策略,达到改善患者生存和预后的目的。     

中心型与周围型广泛期小细胞肺癌一线治疗疗效及预后比较

目的 比较中心型与周围型广泛期小细胞肺癌(small cell lung cancer,SCLC)一线治疗的疗效及预后.方法 回顾性分析2010年1月- 2014年1月本院肿瘤科使用依托泊苷联合顺铂(etoposide and carboplatin,EP)或依托泊苷联合卡铂(etoposide and cispatin,EC)方案一线治疗的122例广泛期SCLC患者的临床资料,按影像学表现分为周围型组和中心型组,统计分析两组的一线治疗疗效及预后的差异.结果 一线治疗有效率两组无统计学差异(78.2%vs73.6%,P=0.57);疾病控制率两组无统计学差异(87.0%vs 89.5%,P=0.67);一线治疗无进展生存期两组无统计学差异(8.0个月vs 5.3个月,P=0.46),总生存期周围型组显著优于中心型组(18.5个月vs12.9个月,P=0.00).结论 一线治疗使用EC或EP方案,周围型SCLC的总生存期好于中心型SCLC.