老年脑梗死患者蛋白C系统及抗凝血酶系统测定的研究

目的　探讨老年脑梗死患者血浆抗凝系统蛋白C系统及抗凝血酶系统的水平变化及临床意义。方法　酶联免疫吸附测定 (ELISA)法测定蛋白C(PC)、总蛋白S(TPS)、游离蛋白S(FPS)及凝血酶 抗凝血酶Ⅲ复合物 (TAT)的含量 ,发色底物法测定活化蛋白C(APC)和抗凝血酶Ⅲ (ATⅢ )活性。结果　与对照组相比 ,老年脑梗死患者急性期PC、FPS、ATⅢ明显下降 [(2 .89± 1.0 4) μg/ml、(7.85± 2 .2 6 ) μg/ml、(77.2 1± 2 5 .43) % ;(3.42± 1.13) μg/ml、(9.34±3.0 1) μg/ml、(97.2 8± 2 0 .42 ) % ;P <0 .0 5 ],恢复期无差异(P >0 .0 5 ) ;APC、TAT在脑梗死急性期及恢复期明显增高 (P<0 .0 1)。随病情加重PC、FPS显著下降 ,而TAT明显升高 ;有TIA病史的脑梗死患者FPS水平明显低于无TIA病史者 [(6 .5 4± 2 .97) μg/ml,(7.99± 1.13) μg/ml;P<0 .0 1]。PC、FPS与血脂间无相关性。结论　老年脑梗死患者存在凝血的激活 ,抗凝系统的异常参与了老年脑梗死的病理过程     

甲苯达唑在不同介质中的溶解度研究

目的 研究甲苯达唑在几种油相和水相介质中的溶解度,通过观察溶解度的变化情况,为药物生物利用度的提高奠定基础.方法 将甲苯达唑分散于大豆油、甘油三油酸酯以及油酸等9种油相介质中,并以1％西黄耆胶和去离子水作为对照,于25℃或37℃的恒温水浴中以100 r/min的速度机械振荡24 h后离心,取上清液采用高效液相色谱法(HPLC)测定甲苯达唑在上述介质中的浓度.结果 在25℃时甲苯达唑在大豆油、甘油三油酸酯以及油酸中的溶解度分别为(2.1±0.2)μg/ml、(54.1±1 9)μg/ml以及(329.4 +9.7) μg/ml,均高于在去离子水(1.0±0.1) μg/ml和1％西黄芪胶(5.5±0.7) μg/ml的溶解度.当介质温度升高到37℃,甲苯达唑在上述溶剂中的溶解度均随着介质温度的升高而增加,其中在3种油相中的溶解度为(34.1 ± 1.9) ～(900.7±57.1)μg/ml,而在1％西黄耆胶和去离子水中增加到(7.2±0.7)μg/ml和(3.7±1.2)μg/ml.结论 与传统的水相给药介质相比,将甲苯达唑分散于油相溶剂中,可显著增加其溶解度.     

五种抗深部真菌药物对烟曲霉体外抗菌活性的实验研究

目的 测定五种抗深部真菌药物对烟曲霉体外抗菌活性,为临床治疗侵袭性烟曲霉感染提供理论依据.方法 应用美国临床实验室标准化协会(CLSI)的微量液基稀释法 M38-A方案,测定烟曲霉临床株对伊曲康唑(ICZ)、两性霉素B(AmB)、伏立康唑(VRC)、卡泊芬净(CBF)、 氟康唑(FCZ)的敏感性.结果 MIC几何均数VRC为 0.29 μg/ml、CBF为0.45 μg /ml、ICZ为0.52 μg /ml、AmB为0.55 μg /ml、FCZ为62.58 μg /ml.结论 VRC、CBF、ICZ、AmB均有很强的抗烟曲霉作用,FCZ对烟曲霉均耐药.     

隐球菌临床及环境分离株对卡泊芬净与特比萘芬的体外联合药敏试验

目的　了解隐球菌临床及环境分离株对卡泊芬净与特比萘芬的体外联合抗菌活性。方法　采用美国国家实验室标准委员会 (NCCLS)M 2 7 A方案推荐的酵母菌微量稀释法及其微量稀释棋盘法 ,检测 78株新生隐球菌临床和环境分离株对卡泊芬净与特比萘芬的体外抗菌活性及其联合抗菌活性。结果　卡泊芬净和特比萘芬对新生隐球菌最小抑菌浓度 (MIC)值范围分别是 0 .2 5～ 32 μg/ml、2～16 μg/ml;几何均数分别是 32 μg/ml、8μg/ml。联合药敏试验结果显示 ,两者联合后对其中 5 %菌株有协同作用 ,4 2 %菌株有累加作用及 5 3%菌株有无关作用 ,任何菌株均无拮抗作用。同时卡泊芬净的MIC几何均数由 2 6 .8μg/ml降至 2 0 .6 μg/ml(P <0 .0 0 0 1) ,特比萘芬的MIC几何均数由7.9μg/ml降至 1.3μg/ml(P <0 .0 0 0 1)。此外 ,有 4株菌株对卡泊芬净药物敏感 ,其MIC分别是 2 μg/ml、2 μg/ml、0 .5 μg/ml、0 .2 5 μg/ml。 结论　卡泊芬净与特比萘芬的体外联合药敏试验表明 ,两者联合应用对新生隐球菌具有较好的体外抗菌活性     

Extraction of protoporphyrin disodium and its inhibitory effects on HBV-DNA

AIM:To explore an ideal method for extracting protoporphyrindisodium (PPN) from unanticoagulated animal blood,andto study the inhibitory effects of PPN on HBV-DNA duplicationand its cytotoxicity to 2.2.15 cell strain.METHODS:Protoporphyrin methyl ester and otherintermediate products were prepared with protohemeseparated from protein hydrolysates of coagulated animalblood,which were finally made into PPN and detectedquantitatively with an ultraviolet fluorescent analyzer.Ten μg/ml,20 μg/ml,40 μg/ml,80 μg/ml and 160 μg/ml ofPPN-aqueous solution were added into culture medium for2.2.15 cells respectively.Eight days later,the drugconcentration in supernatant from the culture medium wasdetected when inhibition rate of HBeAg,cell survival ratewhen inhibition rate of HBeAg was 50% (ID50),and whensurvival cells in experimental group were 50% of those incontrol group (CD50),and the therapeutic index (TI) wasalso detected.PPN with different concentration of 10 μg/ml,20 μg/ml,40 μg/ml,80 μg/ml and 160 μg/ml was respectivelymixed and cultivated with HepG2 2.2.15 cell suspension,and then the inhibition of PPN against HBV-DNA was judgedby PCR.RESULTS:The extract of henna crystal was identified to bePPN.When the concentrations of PPN were 160 μg/ml and80 μg/ml,the inhibition rates of HBeAg were 89.8% and82.4%,and the cell survival rates were 98.7% and 99.2%.CONCLUSION:It is suggested that PPN can be extractedfrom unanticoagulated animal blood.PPN can inhibit HBV-DNA expression and duplication in vitro,and has nocytotoxicity to liver cells.Further study and application ofPPN are warranted.     

阿司匹林、肝素对血小板活化及表达CD40L的影响

目的探讨血小板活化与表达CD40L的关系以及阿司匹林、肝素对此过程的影响.方法体外分离健康人血小板,经不同浓度二磷酸腺苷(ADP)、凝血酶诱导后,应用流式细胞术测定血小板活化指标P选择素和炎性标志CD40L表达水平,观察二者随诱导时间延长的变化过程,并分析阿司匹林、普通肝素、低分子肝素对血小板活化及表达CD40L的影响.结果 ADP、凝血酶均呈浓度依赖方式增加血小板P选择素、CD40L表达,二者表达水平随诱导时间延长而同步增减,呈显著正相关(P<0.05).阿司匹林(2.5 μg/ml)对ADP(4 μmol/L)和凝血酶(1U/ml)诱导的血小板活化及CD40L表达无任何影响(P>0.05);普通肝素(2.5U/ml)和低分子肝素(2.5U/ml)单独或与阿司匹林合用,均能极显著地抑制凝血酶诱导的血小板活化及CD40L表达(P＜0.001),但对ADP的诱导过程无影响(P>0.05).结论炎性介质CD40L可表达在活化血小板表面,在多种诱导剂存在的情况下,阿司匹林及肝素能部分抑制血小板的活化及CD40L表达.     

硝酸甘油对人脐血管内皮细胞内钙离子浓度的影响

目的探讨不同剂量硝酸甘油对体外培养人脐血管内皮细胞内钙离子浓度的影响.方法分离人脐静脉内皮细胞,体外原代培养,细胞经钙荧光探针Fluo-3-AM染色后,在激光共聚焦显微镜下观察培养液中分别加入三种浓度硝酸甘油后,细胞内游离钙离子浓度[Ca2+]i的动态变化情况.结果低浓度和高浓度硝酸甘油作用后,[Ca2+]i呈现不同的变化曲线.10 μg/ml NTG持续缓慢下降;30 μg/ml NTG先明显下降,然后缓慢上升;1000 μg/ml NTG持续缓慢上升.结论硝酸甘油的药理作用与内皮细胞有关,不同浓度的硝酸甘油可能通过不同的信号传导路径发挥不同的生理作用.     

中药天南星提取物抗肿瘤活性研究

目的 探讨中药天南星提取物的体外抗肿瘤作用.方法 分别选用人红白血病细胞株K562、人胃癌细胞株BGC823、人宫颈癌细胞株HeLa,用MTT法测定天南星醇提物(RAE)和水提物(RAW)对体外肿瘤细胞的抑制作用.结果 体外抑瘤实验表明,对RAE敏感的最低药物浓度分别为3.9、62.5和250 μg/ml,半数抑制率(IC50)分别为65.07 μg/ml、0.59 mg/ml和5.11 mg/ml;对RAW敏感的最低药物浓度分别为15.6、62.5和250 μg/ml,IC50分别为0.24 mg/ml、0.78 mg/ml和82.17 mg/ml.结论 RAE和RAW体外均有很强的抗肿瘤作用,且RAE的作用高于RAW.     

铁梭葡胺标记对骨髓干细胞向神经样细胞分化影响的实验研究

目的探讨铁梭葡胺(SHU555A)体外标记大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)对其向神经样细胞分化的影响。方法在大鼠BMSCs培养液中分别加入10×稀释的SHU555A纳米颗粒10、20、40、80 μl,使铁的终浓度分别为14 μg/ml(14μg/ml标记组)、28 μg/ml(28 μg/ml标记组)、56 μg/ml(56 μg/ml标记组)和112 μg/ml(112 μg/ml标记组);另取无铁培养液的BMSCs作为对照组。各组BMSCs经DMSO+丁羟茴醚诱导6 h后,分别采用RT PCR和Western blot法检测神经上皮干细胞蛋白(nestin)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)和神经胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)的mRNA表达和nestin表达。结果与对照组比较,不同浓度标记组nestin、NSE和GFAP的mRNA均呈高表达,但差异无统计学意义(P0.05)。各组nestin表达差异无统计学意义(P0.05)。结论 14～112μg/ml的SHU555A标记浓度对大鼠BMSCs向神经样细胞分化无明显影响。     

阿托伐他汀对C反应蛋白诱导的CD14+单核细胞Toll样受体4表达影响的实验研究

目的 观察阿托伐他汀对C反应蛋白(CRP)诱导的外周血CD14+单核细胞Toll样受体4(TLR4)表达,以及TLR4信号传导下游炎症因子肿瘤坏死因子α(TNFα)、白细胞介素-6(IL-6)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的影响,探讨阿托伐他汀的抗炎机制.方法 不同浓度(0、5、25、50、100 μg/ml)和不同作用时间(0、6、12、24、48 h)的C反应蛋白(CRP)刺激正常人外周血CD14+单核细胞.给予CRP 50 μg/ml预先干预CD14+单核细胞2 h后,再用不同浓度的阿托伐他汀(1.0、2.5、5.0、7.5、10.0 μmol/L)进行干预.应用流式细胞仪检测细胞表面TLR4蛋白的表达,并应用定量PCR方法检测TLR4 mRNA和髓样分化蛋白2(myeloid differentiation protein,MD2)mRNA的表达,ELISA法检测刺激前后细胞上清液TNFα、IL-6和MMP-9的蛋白水平.结果 (1)CRP 0 μg/ml组TLR4蛋白表达量为19.59%,CRP 5 μg/ml组的TLR4蛋白表达为29.33%,差异有统计学意义(P<0.01),并随着CRP浓度的增加,TLR4蛋白表达量逐渐增加.以CRP 0 h组为空白对照,CRP 6 h组的TLR4蛋白表达量为25.75%,差异有统计学意义(P<0.01),并随着时间的增加,TLR4表达量逐渐增加.(2)以CRP 50 μg/ml组为对照组,CRP 50 μg/ml和阿托伐他汀1.0 μmol/L组、2.5 μmol/L组、5.0 μmol/L组、7.5 μmol/L组、10.0 μmol/L组,TLR4蛋白表达分别为(68.17±1.71)%、(52.43±1.38)%、(27.72±4.55)%、(17.46±3.20)%、(9.99±2.81)%.(3)以CRP 50 μg/ml组为标准,CRP 50 μg/ml〖JP〗和阿托伐他汀1.0 μmol/L组、2.5 μmol/L组、5.0 μmol/L组、7.5 μmol/L组、10.0 μmol/L组,TLR4 mRNA分别为对照组的82.72%、67.34%、48.16%、30.88%、13.85%.MD2 mRNA分别为对照组的81.78%、71.04%、47.85%、27.06%、18.30%.随着阿托伐他汀浓度增加,TLR4和MD2的mRNA含量减少.(4)当单核细胞未受CRP和阿托伐他汀刺激时,分泌TNFα、IL-6和MMP-9的基础值分别为(16.3±5.8)pg/ml、(31.1±9.5)pg/ml 和(155.0±47.2)ng/ml.CRP 50 μg/ml组,单核细胞分泌TNFα、IL-6和MMP-9分别为(106.9±7.5)pg/ml、(566.9±10.0)pg/ml和(416.9±37.1)ng/ml,与空白对照组比较,差异均有统计学意义,P均<0.01.而CRP和阿托伐他汀2.5 μmol/L组,单核细胞分泌TNFα、IL-6和MMP-9分别为(81.1±5.4)pg/ml、(433.9±18.1)pg/ml和(310.5±16.3)ng/ml,与CRP 50 μg/ml组比较差异均有统计学意义,P均<0.01.结论 CRP可剂量依赖性和时间依赖性地增加CD14+单核细胞TLR4和MD2的表达,阿托伐他汀通过抑制CRP诱导单核细胞TLR4信号转导途径,降低炎症因子TNFα、IL-6和MMP-9的分泌,是其抗炎作用的机制之一.

Abstract：

Objective To investigate the effects of atorvastatin on C-reactive protein (CRP)induced Toll-Like receptor 4(TLR4)expression on CD14+ monocyte, and the production of proinflammatory cytokines tumor necrosis factor α (TNFα), interleukin-6 (IL-6), matrix metalloproteinases-9 (MMP-9), and to study the anti-inflammatory mechanisms of statins. Methods The monocytes were isolated from blood of healthy volunteers by the Ficoll density gradient and stimulated by CRP with different doses (5, 25, 50, 100 μg/ml)and different exposure time (6, 12, 24, 48 h). Cells were also incubated with atorvastatin of different doses (1.0, 2.5, 5.0, 7.5, 10.0 μmol/L)in the presence of CRP 50 μg/ml. The protein expression of TLR4 was measured by flow cytometry, mRNA expression of TLR4 and of myeloid differentiation protein (MD2)was detected by quantitative PCR. TNFα, IL-6, MMP-9 concentrations in supernatants of cultured medium were measured by ELISA.Results (1)Compared with the un-stimulated control group, enhanced TLR4 protein expression was already detected at a concentration of 5 μg/ml of CRP and increased in a dose-dependent manner (32.22±2.80)%, (49.94±5.58)%, (74.82±3.24)% and (90.82±2.88)% at 5, 25, 50 and 100 μg/ml CRP. (2)TLR4 protein expression on 50 μg/ml CRP stimulated cells also increased in a time-dependent manner (29.80±2.70)%, (47.44±4.41)%, (81.71±2.92)% and (50.57±3.34)% after 6 h, 12 h, 24 h, 48 h.(3)When monocytes were incubated with CRP 50 μg/ml and atorvastatin (1.0, 2.5, 5.0, 7.5, 10.0 μmol/L), protein expression [(68.17±1.71)%, (52.43±1.38)%, (27.72±4.55)%, (17.46±3.20)%, (9.99±2.81)%］and mRNA expression (82.72%, 67.34%, 48.16%, 30.88%, 13.85%)of TLR4 as well as mRNA expression of MD2 (81.78%, 71.04%, 47.85%, 27.06%, 18.30%)were reduced in a dose-dependent manner. (4)Level of TNFα, IL-6 and MMP-9 in supernatants was significantly reduced by atorvastatin (2.5 μmol/L)compared with control group(P<0.01). When monocyte incubated with CRP 50 μg/ml and atorvastatin 10.0 μmol/L, the level of TNFα, IL-6, MMP-9 decreased to (25.8±2.5)pg/ml, (128.2±14.7)pg/ml, (65.2±12.3)ng/ml, respectively.Conclusion CRP increased the protein expression of TLR4 on CD14+ monocyte in a dose-dependent and time-dependent manner. Atorvastatin can inhibit the signal transduction of TLR4 and reduce proinflammatory cytokines release induced by CRP on CD14+ monocyte, and this might be one of the anti-inflammatory mechanisms of atorvastatin.     

莪术醇对肝星状细胞-T6细胞基因表达的影响

[目的]研究莪术醇对肝星状细胞(HSC)-T6细胞基因表达的影响.[方法]从基因库中查询50种肝纤维化相关基因的mRNA序列,用寡核苷酸探针设计软件设计探针,在PE8909DNA合成仪上合成寡核苷酸,用OGR-04点样仪及醛基化玻片制备成基因芯片.以莪术醇不同浓度含药培养液培养HSC-T6细胞,根据细胞毒性实验,确定细胞存活率在50%以上的药物浓度作为实验所用浓度,每组设空白对照,分别按1、6、12、24 h 4个时间段收集细胞.按操作步骤提取细胞总RNA,经反转录荧光标记,杂交和洗涤,用Genepix 4000B扫描仪扫描芯片,ImaGene 4.2软件进行数据分析和归一化处理,使用看家基因和阳性对照对Cy3和Cy5扫描结果进行校正.[结果]莪术醇1.562 5 μg/ml作用HSC-T6细胞12 h,可使基因转化生长因子β1、细胞色素P450a表达下调2.3、2.1倍.[结论]从分子水平揭示了莪术有效成分莪术醇的抗肝纤维化机制.     

低剂量化疗联合中药抗肿瘤疗效及其作用机理

目的 探讨低剂量化疗联合中药抗肿瘤疗效及Fas/FasL基因在其中的作用.方法 将0、0.01、0.1、1 μg/ml表阿霉素处理的肝癌细胞分别和有、无参芪处理的淋巴细胞共培养,观察低剂量化疗药联合中药或FasL单克隆抗体介入后抗肿瘤的效果;用PCR测定化疗药处理的肝癌细胞Fas/FasL基因的表达.结果 1 μg/ml表阿霉素处理的肝癌细胞OD值高于0、0.01、0.1 μg/ml表阿霉素处理的肝癌细胞,未处理肝癌细胞的OD值最高;7402肝癌细胞表达Fas和FasL基因,与0 μg/ml表阿霉素干预过的7402肝癌细胞FasL表达比较,0.01、0.1 μg/ml的降低,1 μg/ml的增高;FasL单克隆抗体介入后,0、0.01、0.1 μg/ml表阿霉素处理的肝癌细胞OD值高于空白对照.结论 低剂量化疗药联合中药抗肿瘤可减毒增效;Fas/FasL系统在抗肿瘤免疫机制中起重要作用.     

尿激酶溶栓治疗急性脑梗死时凝血酶抗凝血酶Ⅲ复合物的变化

目的 观察急性脑梗死患者尿激酶(urokinase,UK)静脉溶栓治疗对机体凝血系统的影响.方法 以血浆凝血酶抗凝血酶Ⅲ复合物(thrombin-antithrombin Ⅲ complex,TAT)作为凝血系统激活及凝血酶生成的分子标志物,对急性脑梗死患者20例入院时,UK静脉滴注30 min后即刻、2 h、4 h、6 h、8 h、1 d、3 d及7 d血浆TAT进行动态观察,并与正常健康对照组19名进行比较.结果 急性脑梗死患者UK溶栓治疗前TAT中位数为5.4 μg/L,25～75百分位数为4.0和8.4 μg/L,较正常对照组[(3.1±1.1)μg/L)]显著增高(P＜0.01).TAT在溶栓治疗后即刻(中位数12.8 μg/L)及治疗后2 h(中位数15.4 μg/L)较治疗前均有明显升高(P＜0.01),4 h以后已基本恢复至溶栓治疗前水平(P＞0.05),但7 d时(中位数6.7 μg/L)仍高于正常人(P＜0.01).1例溶栓治疗后8 h出现血管再闭塞,其TAT下降后再次出现明显增高.结论 急性脑梗死患者凝血酶活性增加,UK溶栓治疗导致TAT短暂性进一步增高;溶栓治疗后的血管再闭塞可能与TAT增高有关.     

不同浓度超顺磁性氧化铁纳米粒子对小鼠RAW264．7巨噬细胞的影响

目的 评价不同浓度超顺磁性氧化铁纳米粒子（superparamagnetic iron oxides,SPIO）对小鼠RAW264.7巨噬细胞的细胞活性及吞噬功能的影响.方法 常规方法培养小鼠RAW264.7巨噬细胞,应用不同浓度SPIO（0 μg/ml、14μg/ml、28μg/ml、56μg/ml、84μg/ml、140μg/ml、280μg/ml、560μg/ml、840μg/ml）标记小鼠RAW264.7巨噬细胞,采用普鲁士蓝染色检测细胞标记率,台盼蓝染色检测细胞活性,四唑盐（MTT）比色实验检测细胞增殖能力,中性红吞噬实验检测细胞吞噬功能.结果 SPIO含铁浓度84 μg/ml标记24小时,细胞标记率可以达到100%;以后随SPIO浓度的增加,细胞内吞噬的铁颗粒增加,当SPIO含铁浓度为280 μg/ml时,细胞内吞噬铁颗粒达到饱和;当SPIO含铁浓度大于280 μg/ml时,细胞活性下降,吞噬能力降低;当SPIO含铁浓度大于140 μg/ml时,细胞增殖能力下降.结论 SPIO含铁浓度为（84～140）μg/ml标记24h,细胞的标记率为100%并且不影响细胞活性、细胞增殖能力及吞噬能力.     

衣原体肺炎的化疗

由于衣原体肺炎诊断的不明确性和混合感染的存在 ,有关肺炎衣原体的治疗尚处于经验积累的过程。衣原体的体外培养需在细胞内进行 ,肺炎衣原体的体外药敏试验的资料也是有限的 ,已有资料表明衣原体在体外对大环内酯类、四环素类、氟喹诺酮类、利福平和新的抗菌药物酮内酯敏感。大环内酯类抗生素中以克拉霉素对肺炎衣原体的抗菌作用最强 ,其 MIC在0 .0 0 4～ 0 .2 5 μg/ml,高于红霉素 (0 .0 1～ 0 .5 μg/ml)、罗红霉素 (0 .0 5～ 2μg/ml)和阿奇霉素 (0 .0 1～ 2μg/ml) ,四环素类的米诺霉素 (MIC为 0 .0 16～ 0 .0 6 μg/ml)和多西环素 …     

HBeAg对树突细胞分泌白细胞介素6和12的影响

目的 研究HBeAg对脂多糖(LPS)诱导树突细胞(DCs)分泌炎症因子白细胞介素(IL)-12和IL-6的影响. 方法 密度梯度离心法分离浓缩白细胞获得单个核细胞,经贴壁法纯化的单核细胞由刺激因子诱导得到未成熟DCs,形态学观察及免疫表型鉴定DCs;加入不同浓度(1、2、5 μ g/ml)HBeAg,LPS刺激摄取抗原的DCs,酶联免疫法测定培养上清液中IL-12和IL-6水平.细胞表型比较用Mann-WhitneyU检验,不同浓度组间数据的多重比较用LSD-t检验(方差齐)或Dunnett'sT3检验(方差不齐).结果 HBeAg 1、2、5 μg/ml组及对照组上清液的IL-6分泌水平分别为(1177.64±167.38)pg/m1、(1092.88±60.90) pg/ml、(793.65±96.29) pg/ml和(1612.38±244.59)pg/ml,HBeAg 1、2、5μg/ml组的IL-6水平均低于对照组,差异有统计学意义(t值分别为3.35、4.00和6.32,P＜0.05或P＜0.01),HBeAg 1 μg/ml组IL-6分泌水平明显高于5 μg/ml组(t=2.96,P＜ 0.05);HBeAg 1、2、5μg/ml组及对照组上清液的IL-12分泌水平分别为(1037.64±58.46)pg/ml、(885.31±13.00) pg/ml、(804.34±15.25) pg/ml和(1101.46±30.76) pg/ml,HBeAg1 μg/ml组与对照组的IL-12分泌水平差异无统计学意义(t=1.67,P＞0.05),2μg/ml和5μg/ml组IL-12分泌水平较对照组明显下调(t值分别为11.21和14.99,P值均＜0.01),5 ug/ml组IL-12分泌水平明显低于2 μg/ml组(t=7.00,P＜0.05).结论 HBeAg能下调DCs分泌炎症因子IL-12和IL-6,这可能是HBV持续感染的免疫逃逸机制之一.     

细胞间黏附分子-1在红霉素抗炎机制中的作用

目的 从分子水平上探讨红霉素(EM)的抗炎作用机制.方法 体外培养人支气管上皮细胞(16HBE),将细胞随机分为8组,先加入EM干预,后加入肿瘤坏死因子α(TNF-α)刺激.分组如下:①空白对照组;②TNF-α(20 ng/ml,16 h)组;③EM(0.3 μg/ml,24 h)+TNF-α(20 ng/ml,16 h)组;④EM(3 μg/ml,24 h)+TNF-α(20 ng/ml,16 h)组;⑤EM(30 μg/ml,24 h)+TNF-α(20 ng/ml,16 h)组;⑥EM(0.3 μg/ml,48 h)+TNF-α(20 ng/ml,16 h)组;⑦EM(3 μg/ml,48 h)+TNF-α(20 ng/ml,16 h)组;⑧EM(30 μg/ml,48 h)+TNF-α(20 ng/ml,16 h).然后收集各组细胞分别提取RNA,应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法 检测细胞间黏附分子-1(ICAM-1) mRNA的表达.因ICAM-1 RT-PCR产物分子大小约为700 bp,与原设计产物分子大小490 bp不相符,进一步作基因克隆测序了解基因之间是否具有同源性.结果 ICAM-1的RT-PCR产物即为目的 基因:ICAM-1基因.TNF-α刺激人支气管上皮细胞(16HBE)后,细胞ICAM-1mRNA表达增高.先加入不同浓度及作用时间的EM,后加入TNF-α刺激人支气管上皮细胞(16HBE),各组细胞ICAM-1mRNA表达均降低,且提示有浓度与时间依赖性.结论 TNF-α能激活人支气管上皮细胞使其ICAM-1基因表达增高,促进炎症的发生发展.EM能抑制人支气管上皮细胞ICAM-1基因表达,可能是EM的抗炎作用机制之一.     

原人参二醇对胃癌诱导血管内皮细胞增殖的抑制作用

目的 探讨原人参二醇(Ppd)对胃癌诱导血管内皮细胞(VEC) 增殖的抑制作用.方法 采用MTT 法检测不同浓度Ppd对VEC、人胃癌SGC-7901 细胞增殖及SGC-7901细胞诱导VEC增殖的影响.结果 Ppd对VEC、人胃癌SGC-7901 细胞生长有明显的抑制作用,且呈量效关系,IC_(50)为2.0 μg/ ml,且肿瘤细胞产生明显的G_1期阻滞现象,Ppd为2.0 μg/ml时,G_1细胞百分率达76.08%,而在Ppd为10.0 μg/ml时为81.17%,较对照组39.02%明显增多(P<0.05),而S期、G2+M期细胞数明显减少.Ppd浓度为2.0 μg/ml时,对SGC-7901细胞条件培养液诱导的VEC增殖有抑制作用(P< 0.01),抑制率为13.10 %～77.38 %.结论 Ppd对胃癌细胞条件培养液诱导的VEC 增殖具有抑制作用.     

大蒜素和顺铂联合应用对人视网膜母细胞瘤Rb细胞抑制作用的研究

目的 探讨大蒜素和顺铂联合应用对人视网膜母细胞瘤Rb细胞的抑制作用,及其对Rb细胞凋亡的影响.方法 分别用大蒜素(15 μg/ml)、顺铂(3 μg/ml)及大蒜素(15 μg/ml)和顺铂(3 μg/ml)联合处理人视网膜母细胞瘤Rb细胞,观察不同时间Rb细胞的形态,并应用免疫细胞化学SP法检测bcl-2和程序化细胞死亡因子5(PDCD5)的表达.结果 与对照组比较,各实验组Rb细胞生长增殖受到抑制,形态学变化明显;bcl-2表达下调,PDCD5表达上调.与单用大蒜素或顺铂组比较,二者联用可增强对Rb细胞的生长抑制,下调bcl-2和上调PDCD5表达的作用更强(P<0.05).结论 大蒜素和顺铂联合用药作用强于单独用药,可进一步提高药物对肿瘤细胞的生长抑制.