手工制作组织芯片的技术心得

目的介绍一种组织芯片的手工制备技术。方法利用改进的穿刺针、盖玻片朔料包装盒及x线废片手工制作组织芯片,进行免疫组织化学和常规HE染色。结果阵列蜡块完整,组织蜡芯排列整齐有序、无移位,组织芯片切片染色效果满意。组织位点的形态可观测率为94．37％。结论手工制备组织芯片方法简单易行、费用低廉;制片质量可媲美进口的组织微阵列仪或组织芯片制作机的制片质量,且易于推广。     

HE徕卡全自动染色机和手工染色的对比分析

目的探讨HE徕卡全自动染色机与手工染色的区别。方法通过HE徕卡全自动染色机，设定程序进行染色封片处理，并与手工染色结果进行对比分析。结果与手工染色相比，HE徕卡全自动染色机的石蜡切片染色均匀，色彩鲜明，细胞质、细胞核结构对比清晰，未发生气泡、溢胶现象。结论HE徕卡全自动染色机操作简便，工作效率高，值得推广应用。     

一种简易的组织微阵列技术及其应用

组织微阵列又称组织芯片,是近年来新兴的一项生物芯片技术。它是将数十、数百甚至上千个小的组织片整齐地排列在某一载体上而成的微缩组织切片。1998年Kononen等在DNA微阵列的基础上,首先制作了乳腺癌的组织微阵列,并应用荧光原位杂交(FISH)、免疫组织化学和mRNA原位杂交技术研究了6种基因及其产物的表达状态。组织芯片具有高效、快速、成本低、信息含量高、实验误差小、自身内对照和可比性强的特点。我们尝试了组织芯片的制作,并在组织芯片上进行了HE染色和数种抗体的免疫组织化学染色,取得了一些体会。     

HE染色的石蜡切片人工褪色后的免疫组化染色

8例HE染色的石蜡切片经人工褪色后进行不同胰酶消化时间的免疫组化染色效果比较。对照为未染HE的切片,微波炉内50℃消化30秒钟。结果:6例在50℃消化90秒后,2例在50℃消化120秒后,达到对照片的免疫组化染色强度。提示HE染色的切片经人工褪色后,适当延长消化时间仍可获得满意的免疫组化染色结果。     

组织芯片在病理学的研究进展

组织芯片 (tissue chip)又称组织微阵列 (tissuemicro- array) ,是将数十至上千个小组织整齐地排放在一张玻璃片上制成的组织切片 [1]。分为多组织切片 (multi- tissue section,最多可含 6 0个直径 2mm的组织 )和组织微阵列 (最多可含 1 0 0 0个直径 0 .6 mm的组织 )。组织芯片的特点是 :体积小 ,信息含量大 ,一次性实验即可获大量结果 (high-throughout)。组织芯片可用于组织中的 DNA、RNA和蛋白质的定位分析和检测。象普通切片一样 ,可做苏木精—伊红 (HE)染色、特殊染色、免疫组织化学、DNA/ RNA原位杂交、荧光原位杂交(fluorescen…     

制作优质HE病理组织切片的要素

目的制作一张优质的病理组织切片。方法对病理组织制片过程中出现的问题加以注意及改进。结果病理组织固定、脱水效果好,制作的组织切片薄,HE染色胞浆分明。     

组织染色中HE染色法的改良

目的：比较改良苏木素伊红（HE）染色法与传统染色法的染色效果。方法：分别用传统染色法和改良染色法对组织切片和细胞涂片进行染色，进行比较。结果：改良染色法较传统染色法，染色液中沉淀更少，无氧化膜，染色时间短，不需过滤，使用期限长，染色效果好。结论：改良染色法克服了传统染色法的缺点，有利于切片质量的提高。     

组织芯片用于免疫组织化学染色的效果

组织芯片(tissue chip)是近几年发展起来的一项生物芯片技术，它分为多组织片，组织阵列和微组织阵列^[1]。笔者把这一技术应用到常规免疫组织化学染色中，进行多药耐药基因蛋白P-gP和谷胱甘肽S转移酶GST-π的染色，以指导临床化疗。     

应用自制组织芯片研究P53在乳腺癌中的表达

目的应用手工自行研制组织芯片的方法研究P53在乳腺癌中的表达。方法选取82例乳腺疾病组织，每例穿取1．0mm组织柱1条，人工自行制备82点阵组织芯片，P53免疫疫组化染色，结果乳腺癌中P53阳性表达率随恶性程度增加呈逐渐升高趋势，乳腺癌组与乳腺良性增生组比较，差异有显著性（X^2=10．001，P〈0．05）。结论提示P53的失活可能在乳腺癌的发生发展中起重要作用。     

徕卡全自动免疫组化机和手工免疫组化的对比分析

目的：比较徕卡全自动免疫组化机与手工免疫组化染色的效果。方法采用常规多种免疫试剂一抗及同种二抗,采用徕卡全自动免疫组化机与手工免疫组化法,进行免疫组化染色操作,分析两种染色方法的染色效果。结果与手工免疫组化染色法相比,全自动免疫组化染色法染色均匀,定位准确,背景清晰,染色效果更佳。结论徕卡全自动免疫组化染色具备操作规范、标准化程度高、结果精准等特点,有效避免了人工操作所致的人为误差,值得临床推广。     

常规HE染色苏木素液配制改良法

Harris明矾苏木素液是病理技术室最常用、最重要的HE染液之一，也为一般实验室所采用，几乎所有的常规切片、冷冻切片、涂片以及免疫组化后的复染均使用这种染液，它有很多优点，但也有不尽人意的地方，如使用期短，染片量多时约一个月就得更换一次；氧化结晶多，每次使用必须过滤，否则有一种发光的结晶物沉淀在切片上，推测这种物质可能是氧化汞在氧     

制作HE染色石蜡切片的关键技术

病理学是一门形态学科,侧重研究疾病不同发展时期的结构变化,辅助诊断疾病的主要手段。制作HE石蜡的质量优劣,可影响疾病诊断甚至导致误诊。作者根据经验介绍其关键技术如下：     

PIK1在大肠癌组织中的表达及统计分析

目的:探讨PIK1在大肠癌组织中的表达及统计分析。方法:应用免疫组织化学技术检测人大肠癌组织芯片150芯(包括70例大肠癌组织和5例癌旁组织)中PIK1的表达。采用多光谱成像系统对免疫组织化学结果进行图像分析,并用SPSS13.0软件对各组染色分析后的数据做单因素方差分析和SNK(q)检验,检验水准α为0.05。结果:大肠癌组织中PIK1呈高表达,癌旁组织中呈低表达;2组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:PIK1在大肠癌的发生和发展中起了重要作用。     

正丁醇在组织切片和苏木素伊红染色中的应用体会

目前在临床病理诊断及病理、组胚等基础教学中,一般沿用石蜡切片和苏木素伊红(HE)染色,在其操作全过程中多以苯类溶剂(苯、二甲苯、甲苯)作为煤浸、脱蜡和透明溶剂,但苯的毒性作用对于人体肝脏、造血机能及中枢神经系统等均有不同程的损害,长期接触可以发生慢性苯中毒。为了减少苯的刺激,我们在参考同行的经验与报道的基础上,经过多年的探索、实践,自1980年以来用正丁醇作组织脱水兼透明     

组织芯片技术分析生存素在胶质瘤中的表达

目的 探讨生存素在人脑正常组织及不同级别胶质瘤组织中的表达及其临床意义.方法 构建含9例止常脑组织及90例不同级别胶质瘤的组织芯片,应用免疫组织化学SP法检测生存素的表达.结果 生存素在所有组织中均有不同程度的表达,但肿瘤组织中的表达明显高于正常组织,且随肿瘤级别的升高呈升高趋势.结论 生存素表达与肿瘤的恶性程度呈正相关,可为胶质瘤的临床病理分级提供依据.     

组织芯片技术在研究肿瘤组织中抗原表达的应用

目的:研究多种肿瘤组织芯片、肿瘤进展组织芯片以及肿瘤预后相关组织芯片中多种抗原的表达,明确组织芯片技术在肿瘤研究中的应用。方法:运用组织芯片技术和免疫组织化学法检测多种肿瘤组织中雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)的表达、肺癌进展组织中P53的表达及肺鳞癌组织中P16的表达。结果:手工制作的组织芯片阵列排列整齐,仅有1个组织缺失(1/625=0.16%),3个组织有折叠(3/625=0.48%),其余组织形态均好;ER、PR在乳腺癌、宫颈癌、子宫内膜癌、卵巢癌、肺癌、食管癌、胃癌等多种肿瘤中均有强弱不等的表达;P53在肺癌及不典型增生组织中阳性表达率(70%,40%)明显高于在正常支气管黏膜中的表达(0%)(P<0.05);P16蛋白在肺鳞癌中失表达率为57.9%,其中有转移组(8/13=61.5%)高于无转移组(7/17=41.2%)(P<0.05)。结论:组织芯片技术能快速、高效地对大量肿瘤组织样本进行各种检测分析,低消耗、可比性强,手工制作简单又经济,可以广泛地应用于肿瘤病理研究的各个方面;应用组织芯片技术,检测到ER,PR在多种肿瘤中均有表达,提示两者与多种肿瘤的发生有关;证明了P53基因的突变是肺癌发生的早期事件,参与了肺癌的发生与发展;P16基因在肺鳞癌中有一定的失表达率,而且与肿瘤预后相关因素中是否转移有一定相关性。     

HE染色切片褪色后再进行免疫组化染色方法的比较

目的:探讨HE染色切片褪色后是否可以用免疫组化的方法检测蛋白的表达。方法:将封好的HE切片放入二甲苯浸泡,去除盖玻片和中性树胶;梯度酒精水化之后用蒸馏水(或自来水)水洗;放入用75%酒精配置的1%的盐酸酒精分化液中浸泡1min,晾干后,再放入1%的盐酸酒精分化液中1min,反复数次直至颜色完全褪去,然后水洗;将防脱片剂多聚-L-赖氨酸工作液滴在已褪色的切片上,烤片60min,PBS浸泡;根据抗体需求采取合适的修复液(EDTA或柠檬酸盐)和修复方法(高压修复或水浴修复);根据常规免疫组化(Envision二步法)的方法和阳性对照片一起进行免疫组化染色。结果:所有对照片和滴加多聚-L-赖氨酸工作液的实验片均为阳性,无1例脱片。结论:此方法可以用于常规HE染色切片褪色后继续用于做免疫组化检测相关标志物,具有一定的临床实用价值。     

淋巴组织细针吸取细胞HE染片褪色后作免疫组化的探讨

目的：探讨淋巴组织细针吸取细胞HE染片褪色后作免疫组化的情况。方法：分析20例淋巴组织细针吸取细胞，首先进行HE染色，然后通过高锰酸钾、草酸褪色，在进行免疫组化，在显微镜下观察染色情况。结果：HE涂片褪色免疫组化标记组良性符合率和恶性符合率均明显高于HE染色组，P〈0.05，差异均有统计学意义。结论：淋巴组织细针吸取细胞HE染片褪色后作免疫组化对于淋巴结良恶性判定和肿瘤分型有重要的意义，为细胞学诊断和鉴别诊断开创了新的方法，值得临床推广应用。