急性白血病钙素基因甲基化的PCR检测

应用多聚酶链反应（ＰＣＲ）技术检测了１０例急性淋巴细胞白血病（ＡＬＬ）和２２例急性随细胞白血病（ＡＭＬ）降钙素（ＣＴ）基因的甲基化程度。结果表明，７例ＡＩＬ与１６例ＡＭＬ的ＣＴ基因都发生了高度甲基化。临床完全缓解的３例ＡＭＬ和２例ＡＩＬ中有１例ＡＬＬ为阳性，另有１例阴性的ＡＭＬ于１个月后转为阳性，随后出现临床复发。     

HpaII—PCR检测急性白血病降钙素基因高度甲基化

应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）结合ＨｐａⅡ限制性内切酶消化法（ＨａｐⅡ－ＰＣＲ）检测７８例急性白血病（ＡＬ）患者降钙素（ＣＴ）基因的甲基化状态。病例组待检细胞ＤＮＡ经ＨｐａⅡ消化后，再用两对ＣＴ基因特异性引物作ＰＣＲ扩增，分别产生长度为５６６ｂｐ和１．４ｋｄ特异片段。急性淋巴细胞白血病阳性率６８．８％（３３／４８），急性非淋巴细胞白血病７３．３％（２２／３０），敏感性达１０＾－３。证明ＣＴ基因５＇高度     

恶性血液病降钙素基因高度甲基化的研究

目的探讨降钙素（ＣＴ）基因高度基化在恶性血液病中的临床意义。方法，用限制性内切酶（ＨＰａⅡ）消化ＤＮＡ，应用多聚酶链反应（ＰＣＲ）技术检测了７３例恶性血液病和对照组６例正常人以及２４例非恶性血液病的ＣＴ基因的甲基化程度。结果８５．７％（１２／１４）急性淋巴细胞白血病（ＡＬＬ）、６０％（９／１５）急性非淋巴细胞白病（ＡＮＬＬ）、８０％（８／１０）慢性粒细胞白血病（ＣＭＬ）、３３．３％（５／１５）淋巴     

白血病中P16基因突变的检测

用聚合酶链反应－单链构象多态性（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）、ＤＮＡ直接测序和多重ＰＣＲ法，检测了１８例慢性粒细胞白血病（ＣＭＬ），１例Ｋ５６２细胞株，９例急性粒细胞性白血病（ＡＭＬ），６例急性淋巴细胞性白血病（ＡＬＬ），２例多发性骨髓瘤（ＭＭ）患者外周血／培养细胞ＤＮＡ中Ｐ１６基因的点突变和基因缺失。用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ共筛查出５例ＣＭＬ中Ｐ１６基因的异常，突变率为２７．８％（５／１８），对其中１例外显子２异常者经测序证实为第１５１密码子ＣＣＣ→ＣＧＣ的转换，导致Ｐｒｏ→Ａｒｇ的错义突变；并检出１例ＭＭ中Ｐ１６基因外显子３的异常；受检的ＡＬＬ，ＡＭＬ，Ｋ５６２细胞株中，未检出突变。各病例中均未检出Ｐ１６基因的缺失。本文探讨了白血病中Ｐ１６基因突变的意义。     

小儿急性白血病MTS1基因缺乏及点突变的研究

为探讨ＭＴＳ１基因突变与恶性血液病的关系，应用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ和ＤＮＡ印迹方法检测３５例急性白血病（ＡＬ）患儿ＭＴＳ１基因改变。结果显示：急性淋巴细胞白血病（ＡＬＬ）缺乏（包括点突变）为２５．８％（８／１３）。Ｂ－ＡＬＬ纯合缺失为１６％（４／２５），Ｔ－ＡＬ为３３％（２／６）。点突变则两型各１例。结果证明：我国儿童ＡＬＬ ＭＴＳ１基因失活的存在，Ｔ－ＡＬ高于Ｂ－ＡＬＬ，点突变仅见于少数病例。该基     

骨髓增生性疾病降钙素基因高度甲基化的检测

①目的探讨骨髓增生性疾病（ＭＰＤ）与降钙素（ＣＴ）基因高度甲基化的关系。②方法采用多聚酶链反应（ＰＣＲ）技术检测了５０例慢性粒细胞白血病（ＣＭＬ）、６例原发性骨髓纤维化（ＭＦ）及１例真性红细胞增多症（ＰＶ）病人的ＣＴ基因高度甲基化的阳性程度。③结果４２．００％的ＣＭＬ和６６．６７％的ＭＦ病人发生了ＣＴ基因高度甲基化；１例ＰＶ病人为阴性。ＣＭＬ病人阳性率分别为慢性期２０．６９％，加速期为６６．６７％，急变期为７７．７８％，慢性期比加速期和急变期的阳性率均明显降低（χ２＝９．６７７１，Ｐ＜０．０１）。④结论ＣＴ基因的高度甲基化与ＣＭＬ，ＭＦ病人的病程进展有关，它可作为ＣＭＬ，ＭＦ病人判断预后的一个有临床应用价值的分子标志     

急性髓性白血病降钙素基因甲基化定量研究

为探讨降钙素（ＣＴ）基因高甲基化能否作为急性髓性白血病（ＡＭＬ）微小残留病（ＭＲＤ）的检测指标。采用设有内、外参照的聚合酶链反应（ＰＣＲ），结合限制内切酶和激光扫描技术，检测了４０例ＡＭＬ患者骨髓细胞的ＣＴ基因５′端甲基化率（ＣＴＭＲ）。结果：初发ＡＭＬ患者ＣＴＭＲ为５２５％±１９３７％，显著高于对照组（８１％±３７３％；Ｐ＜００００５），部分缓解（ＰＲ）组显著高于对照组而显著低于初发组；完全缓解（ＣＲ）组显著高于对照组而与ＰＲ组差别无显著性；ＡＭＬ患者的ＣＴＭＲ与骨髓白血病细胞数呈显著正相关（ｒ＝０．７１５，Ｐ＜０００１），ＣＲ组１６例中４例ＣＴＭＲ在５０％以上，分别于２、４、４５和９个月后复发。结果提示：ＣＴＭＲ有可能成为检测ＡＭＬ微小残留病的有用指标     

PCR扩增IgH和TCRβ基因重排在检测淋巴细胞白血病微小残…

利用ＩｇＨ和ＴＣＲβ克隆性基因重排原理，用多聚酶链反应（Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ Ｃｈａｉｎ Ｒｅａｃｔｉｏｎ，ＰＣＲ）技术检测小儿急性淋巴细胞白血病（ＡＬＬ）骨髓和外周血共１３例。结果：ＡＬＬ初治的２例患儿ＰＣＲ检测全部呈现阳性特异性单带。ＡＬＬ完全缓解（ＣＲ）的１１例患儿中阳性７例，阴性４例，其中２例骨髓移植（ＢＭＴ）患儿移植前ＰＣＲ阳性，移植后转为阴性。１例自体骨髓移植（ａｕｔｏ－ＢＭＴ）患儿于     

PCR扩增IgH和TCR_β基因重排在检测淋巴细胞白血病微小残留病中的应用

利用ＩｇＨ和ＴＣＲ＿β克隆性基因重排原理，用多聚酶链反应（ＰｏｌｙｍｅｒａｓｅＣｈａｉｎＲｅａｃｔｉｏｎ．ＰＣＲ）技术检测小儿急性淋巴细胞白血病（ＡＬＬ）骨髓和外周血共１３例。结果：ＡＬＬ初治的２例患儿ＰＣＲ检测全部呈现阳性特异性单带。ＡＬＬ完全缓解（ＣＲ）的１１例患儿中阳性７例，阴性４例，其中２例骨髓移植（ＢＭＴ）患儿移植前ＰＣＲ阳性，移植后转为阴性。１例自体骨髓移植（ａｕｔｏ－ＢＭＴ）患儿于移植后２个月时ＰＣＲ检测又重新出现阳性，但临床无复发现象。４例对照者ＰＣＲ均为阴性。结果表明ＰＣＲ技术具有简便、快速、敏感、特异性强等优点，在检测微小残留（ＭＲＤ）中具有广阔前景。     

克隆演化与中枢神经系统白血病复发的关系

应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术检测４５份急性淋巴细胞白血病（ＡＬＬ）脑脊液标本ＩｇＨ、ＴＣＲＶγＩ－Ｊγ及ＴＣＲＶδ２－Ｄδ３基因重排，从２２份标本（４８．９％）发现基因重排阳性，而用形态学方法检查，阳性率为２４．４％（１１／４５）；２２例阳性病人中的２例（９．１％）脑脊液白血病细胞基因重排类型同骨髓标本不一致，此两例均为中枢神经系统白血病（ＣＮＳＬ）复发。上述结果表明，应用ＰＣＲ技术检测ＡＬＬ脑脊液标本重排基因有助于隐匿ＣＮＳＬ诊断；克隆演化现象可能是某些单独ＣＮＳＬ复发的主要原因     

急性髓系白血病GLIPR1基因甲基化及其表达

目的：检测GLIPR1基因在急性髓系白血病（AML)细胞株和AML患者骨髓细胞中的甲基化状态和表达水平,探讨其表达水平与启动子甲基化的关系。 方法：以5株白血病细胞株, 以及54例治疗前AML患者骨髓、48例急性淋巴细胞胞白血病（ALL）患者骨髓、40例慢性粒细胞白血病（CML）患者骨髓、35例对照骨髓和8例治疗后完全缓解AML患者骨髓为样本,采用RT-PCR检测GLIPR1 mRNA表达水平,采用甲基化特异PCR（MS-PCR）方法检测GLIPR1基因甲基化状态,并对GLIPR1 mRNA表达水平与其甲基化状态进行相关性分析。 结果：GLIPR1基因在AML细胞株中的表达水平低于CML急性变细胞株和ALL细胞株,而前者甲基化水平高于后者。5-aza-2dC处理细胞后,GLIPR1基因在AML细胞株中的表达水平明显上调,而在CML急性变细胞株和ALL细胞株中的表达水平上调不明显。GLIPR1基因在AML骨髓中的表达水平（0.38±0.20）明显低于ALL骨髓（0.76±0.18）、CML骨髓（0.80±0.14）和对照骨髓（0.85±0.12）,在完全缓解AML骨髓中的表达水平明显高于治疗前AML骨髓（0.78±0.13 vs. 0.36±0.20）;而ALL和CML骨髓中的表达水平与对照骨髓比较无明显差异(P＞0.05）。GLIPR1基因在AML骨髓的甲基化阳性率(81.5%)明显高于ALL骨髓（37.5%)、CML骨髓（27.5%)和对照骨髓（14.3%),在完全缓解AML骨髓中的甲基化阳性率明显低于治疗前骨髓(12.5% vs. 75.0%);而在ALL和CML骨髓中的甲基化阳性率与对照骨髓比较无明显差异(P＞0.05）。GLIPR1基因在AML骨髓中的表达水平与其甲基化呈负相关。结论：GLIPR1基因在AML中表达下调或缺失及启动子甲基化可能是导致GLIPR1基因表达沉默的原因,GLIPR1基因表达和甲基化水平对判断AML患者的疗效有一定意义。     

急性白血病死亡相关蛋白激酶基因启动子的甲基化

目的 研究死亡相关蛋白激酶(DAPK)基因启动子甲基化和基因表达在初治急性白血病患者中的临床意义.方法 采用MSP方法和RT-PCR方法分别检测60例急性髓系白血病患者、55例急性淋巴细胞白血病患者和17例正常人DAPK基因的甲基化状态及其mRNA的表达,统计学分析各组之间的表达差异.结果 急性淋巴细胞白血病组的DAPK甲基化阳性率(29.1％)高于急性髓细胞白血病组(5％)和正常组(0％)(P＜0.0l25),但甲基化与急性淋巴细胞白血病组患者临床特征无关(P＞0.05).DAPK基因mRNA的表达水平以正常组最高,急性髓细胞白血病组次之,急性淋巴细胞白血病组最低(P=0.000).急性淋巴细胞白血病组患者DAPK mRNA表达与其启动子甲基化呈显著负相关(P＜0.05).结论 DAPK基因启动子在初治急性淋巴细胞白血病患者中甲基化率高于初治急性髓细胞白血病患者和正常人,但与患者临床特征无关.急性淋巴细胞白血病患者DAPK基因表达水平低或不表达可能与其甲基化有关.     

P16基因缺失与各型白血病关系

Ｐ１６基因缺失在人类不同组织来源的细胞株和原发肿瘤中频繁发生，为探讨Ｐ１６基因缺失与各型白血病的关系，采用ＰＣＲ扩增技术检测了３０例白血病，结果显示：１７例ＡＬＬ中有６例Ｐ１６基因缺失，其中８例Ｔ－ＡＬＬ中有５例、９例Ｂ－ＡＬＬ中有１例Ｐ１６基因缺失，而在５例ＣＭＬ、８例ＡＭＬ中Ｐ１６基因存在。结果表明：Ｐ１６基因缺失与ＡＬＬ尤其是Ｔ－ＡＬＬ有关。Ｐ１６基因检测对ＡＬＬ发病机制的探讨以及诊断都有一定的指导意义     

Quox-1基因在人类白血病骨髓细胞中的表达

Ｑｕｏｘ－１是从５ｄ胚龄鹌鹑的ｃＤＮＡ文库中克隆的同源盒基因,属于ＣｌａｓｓⅠＨｏｘ基因家族的特别成员,至今未分离出其人类同源基因。用免疫细胞化学技术（ＳＰ法）检测了４２例人白血病患者骨髓细胞的Ｑｕｏｘ－１表达。结果发现１０例急性淋巴细胞性白血病（ＡＬＬ）全部阳性,染色部位在细胞核,而在慢性髓性白血病（ＣＭＬ）、慢性淋巴细胞性白血病（ＣＬＬ）、急性髓细胞白血病（ＡＭＬ,包括Ｍ１～Ｍ７）中表达低甚至不表达,这为进一步从相应肿瘤中筛选、克隆Ｑｕｏｘ－１的人类同源基因提供了可能的肿瘤模型,并为临床诊断ＡＬＬ提供了一种参考指标。     

成人急性白血病患者骨髓中p16基因的表达

目的：研究成人急性白血病患者p16基因纯合缺失和甲基化变化与其表达之间的关系，探讨其成人急性白血病发生发展中的生物学意义，方法：分别用多重聚合酶联反应（PCR）技术及甲基化敏感限制性内切酶－PCR技术检测了71例成人急性白血病患者DNA中p16基因纯合缺失及甲基情况；应用原位杂交及免疫技术检测p16基因mRNA及p16基蛋白表达，结果：71例成人急性白血病患者中，2例检测出p16基因纯合缺失，在无p16基因纯合缺失的病例中，5例急性淋巴细胞白血病（5／26）和9例急性髓性白血病（9／43）患者测出p16基因甲基化，p16mRNA及p16蛋白的阳性率分别为70．4％（50／71例）、61．9％（44／71例），结论：在成人急性白血病的发生发展中，p16基因甲基化比p16基因纯合缺失更具有意义；p16基因表达异常与成人急性白血病的发生发展密切相关。     

A study on DNA methylation status in promoter region of p15 gene in patients of acute myeloid leukemia and myelodysplastic syndrome

BackgroundAcute myeloid leukemia (AML) and myelodysplastic syndrome (MDS) are a spectrum of hematological malignancies with a multistep process of accumulated genetic and epigenetic alterations. DNA methylation is most extensively studied epigenetic alteration in malignancies. Recent research studies in the field have brought out translational implications of promoter methylation of tumor suppressor gene p15 in tumors. Therefore, we studied the role of DNA Methylation of p15 gene in AML and MDS.MethodsThe study was carried out in 41 consecutive AML/MDS cases reporting to hematological OPD of a tertiary care center along with 25 age and sex-matched healthy controls. The methylation status in the promoter region of the p15 gene was assessed by methylation-specific PCR (MSP) from blood samples after ethical approval and informed consent of the patients and controls. The association of methylation status was studied with clinical presentations, AML subtypes, and cytogenetics using Chi-square test/Fisher''s exact test tools.ResultsA total of 41 cases included in the study comprised 33 cases of AML and 08 cases of MDS with an age range between 06 months and 82 years. Of the 41 cases, 29 revealed promoter methylation of the p15 gene, which compared to healthy controls was found statistically significant (p < 0.001). The methylation status did not significantly correlate with AML subtypes or the cytogenetic abnormalities detected in cases.ConclusionThe outcome of the study indicates p15 promoter DNA methylation in cases of AML and MDS may identify those individuals who might benefit from the targeted therapeutic approaches.     

Semi-quantitative study of calcitonin gene methylation in myelodysplastic syndrome

ＯｂｊｅｃｔｉｖｅＴｏｅｖａｌｕａｔｅｗｈｅｔｈｅｒｈｙｐｅｒｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎｏｆｃａｌｃｉｔｏｎｉｎ（ＣＴ）ｇｅｎｅｃｏｕｌｄｓｅｒｖｅａｓａｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇｓｉｇｎａｌｏｆｍｙｅｌｏｄｙｓｐｌａｓｔｉｃｓｙｎｄｒｏｍｅ（ＭＤＳ）...     

白血病细胞对白细胞介素—2的反应研究

为研究重组人ＩＬ－２（ｒｈＩＬ－２）对白血病治疗的可用性和安全性，用＾３Ｈ胸腺嘧核苷（＾３ＨＴｄＲ）掺入法检测有白介素－２受体（ＩＬ－２Ｒ）基因表达的７个白血病细胞株，６例急林巴细胞白血病（ＡＬＬ）患者和８例生髓细胞白血病（ＡＭＬ）患者白血病细胞体外对ｒｈＩＬ－２的反应性。结果显示，ＩＬ－２Ｒ基因表达阳性细胞体外对ｒｈＩＬ－２的反应呈不均一性。ＩＬ－２ＲαｍＲＮＡ和ＩＬ－２ＲｍＲＮＡ均为阳性的Ｎｕ     

急性白血病人P_(16)基因结构的研究

为了解急性白血病中Ｐ１６基因突变的情况，应用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ技术检测了３１例急性髓细胞性白血病人（ＡＭＬ）和１４例急性淋巴细胞性白血病人（ＡＬＬ）Ｐ１６基因结构。结果：３１例ＡＭＬ中有７例存在突变，突变率２２．６％，１４例ＡＬＬ中有２例突变，突变率为１４．４％，治疗达到缓解病人Ｐ１６基因突变消失，恶化病例突变出现，提示Ｐ１６基因的突变在ＡＭＬ和ＡＬＬ的发生、发展中起一定作用。     

白血病细胞诱导分化过程中降钙素基因异常甲基化的研究

采用ＰＣＲ检测技术，观察白血病细胞诱导分化前后ＣＴ基因甲基化型的变化和检测本方法的灵敏度及对检测白血病ＭＲＤ的意义。结果发现随着ＨＬ－６０细胞以及人早纪粒白血病体外诱导分化成熟，该基因由收藏 化状态转变为正常，２例缓解期的ＡＰＬ病人，其甲基化正常，本方法的度为１／１０００白血病细胞，如进一步提高敏感性，将有助于ＭＲＤ的检测。