大鼠胚胎移植受胚模型改良及在着床前阿司匹林染毒致畸机制…

在建立可靠的大鼠胚胎移植受坯模型，使适用圩着床前染毒致畸的机制研究。本文比较输精管结扎绝育和氯丙二醇灌胃绝育雄鼠制备假服地受胚鼠的优劣。结果表明以氯丙二醇绝育雄鼠制备假孕受胚鼠，可简化实验步骤，并明显提高移植胚胎着床率。     

小鼠2细胞期胚胎移植方法的探讨

目的以近交系C57BL/6J小鼠作为供体胚小鼠，封闭群ICR小鼠及昆明鼠作为假孕体，对2细胞期的胚胎移植方法和假孕鼠品系进行对比探讨。方法经超数排卵的C57BL/6J雌鼠于正常雄鼠交配，取受精卵，培养到2细胞期，进行输卵管伞移植和输卵管壁移植，妊娠产仔。结果从KM为假孕鼠，对2细胞期胚胎进行的输卵管壁移植的妊娠数量最多18只，90%的妊娠率，产仔数最多188只，产仔率达34.8%。结论输卵管壁移植的技术简单易行具有较高的妊娠率及产仔率。     

降压药对小鼠胚胎与发育毒性影响的比较研究

目的:研究并比较五类降压药利尿剂氢氯噻嗪、β-受体阻滞剂比索洛尔、ACEI卡托普利、ARB缬沙坦和钙拮抗剂非洛地平对小鼠胚胎与发育毒性的影响。方法:清洁级健康ICR小鼠180只(6⁸周龄),随机分为氢氯噻嗪组、比索洛尔组、卡托普利组、缬沙坦组、非洛地平组和阴性对照组,每组雌、雄各15只,所有动物自交配前65 d开始给药或水直至处死,观察药物的胚胎与发育毒性表现。结果:非洛地平胚泡着床后至出生前死亡数高于阴性对照组、比索洛尔组、卡托普利组与缬沙坦组。卡托普利组出生0 d仔鼠体重、出生4 d仔鼠体重和每只仔鼠体重增重均高于阴性对照组,比索洛尔组、非洛地平组、氢氯噻嗪组与缬沙坦组出生0 d仔鼠体重均低于卡托普利组,比索洛尔组、氢氯噻嗪组与缬沙坦组出生4 d仔鼠体重均低于卡托普利组;比索洛尔组和缬沙坦组仔鼠体重增重均低于卡托普利组。卡托普利、比索洛尔与氢氯噻嗪有致畸作用,表现为卷尾和(或)身材短小。结论:ARB缬沙坦未见明显胚胎与发育毒性,而利尿剂氢氯噻嗪、β-受体阻滞剂比索洛尔、ACEI卡托普利和钙拮抗剂非洛地平均有一定的胚胎与发育毒性,但是表现各异。     

615小鼠胚胎移植初探

目的 提高615小鼠胚胎移植成功率。方法 采用经超量排卵的615雌鼠与正常雄鼠交配，取受精卵，再经手术分别将单胚卵、双胚卵移入发情的假孕雌鼠的输卵管中，妊娠产仔。结果 单胚卵移卵后妊娠率为63．3％、产仔率为35．8％；双胚卵移入第1．5天、第0．5天的假孕雌鼠妊娠率为0.72％，后者的产仔率为52．7％；结论 移植双胚卵可提高615小鼠的胚胎移植成功率。     

ME491／CD63对小鼠胚胎发育及着床的影响

目的：研究ME491／CD63对小鼠胚胎体外发育及着床的影响,以及ME491／CD63mRNA及蛋白在假孕D1～8小鼠子宫中的表达规律．方法：①将小鼠8-细胞胚胎培养于含不同浓度ME491／CD63抗体的培养液中,观察胚胎发育,记录囊胚形成及脱透明带的情况．②妊娠D4小鼠宫角注射ME491／CD63抗体,于妊娠D8观察小鼠胚胎植入数量．③用RT—PCR及免疫组织化学技术观察ME491／CD63mRNA及蛋白在假孕小鼠子宫的表达规律．结果：①ME491／CD63抗体可影响胚胎在体外的发育．与对照组相比,在ME491／CD63抗体浓度为1：400及以上时,囊胚的形成率明显降低（P〈0．05）;在抗体浓度为1：800及以上时,胚胎脱带率显著下降（P〈0．05）,ME491／CD63抗体对胚胎发育的影响具有浓度依赖性．②宫角注射一定量的ME491／CI）63抗体可以显著提高小鼠胚胎的着床数[（5．8±2．3）vs（4．1±1．8）,P〈0．05]．③ME491／CI）63mRNA在假孕D1～8小鼠子宫中均有表达,于D6表达最丰富．MFA91／CD63蛋白在假孕D1—8的子宫腺上皮细胞均有表达,假孕D1～5腔上皮细胞无表达,假孕D6—8,子宫腔上皮细胞阳性表达．结论：①ME491／CD63在小鼠胚胎发育和着床过程中发挥重要作用．②ME491／CD63在妊娠小鼠子宫的表达是非胚胎依赖性的,其表达量的变化可能与胚胎存在与否有一定关系．     

孕大鼠在胚泡着床前给予醋氨酚对器官形成期胚胎发育的影响

研究孕大鼠胚泡着床前药物损伤对胚胎器官形成期发育的影响，探索药源性胚泡异常与胎仔发育的关系。方法：母鼠孕第3天给予醋氨酚0．25～1．00g／kg．孕第4天处死母鼠．计数胚泡细胞数，胚泡微核数及微核率；孕第12．5天处死母鼠，评价胚胎组织器官形态分化程度及胚胎生长发育状况。结果：醋氨酚（0．25～1．00g／kg）抑制着床前胚泡发育,对胚泡细胞产生遗传毒作用，并呈明显剂量依赖关系。与对照组相比，孕第12．5天（器官形成期）胚胎生长发育状况无明显差异，胚胎组织器官形态分化无显著改变。醋氨酚0．5g，1．0g／kg对胚胎发育具毒性，导致胚胎发育迟缓、胚胎畸形、胚胎死亡数显著增加。结论：胚胎发育毒性与着床前胚泡遗传物质损伤相关。     

敌枯双不同途径给药对大鼠胚胎发育的影响

目的 研究敌枯双不同给药途经对大鼠胚胎发育的影响。方法 清洁级妊娠SD大鼠30只随机分成对照组、经口染毒组、腹腔注射组，每组10只，称重和编号。孕鼠于妊娠7～16d染毒，妊娠20d处死，分析胚胎发育指标与胎仔发育指标，检查有无外观畸形和骨骼畸形。结果 各组间着床数比较无显著性差异（P〉0．05），孕鼠第20天增重、胎鼠体重、体长、尾长、活胎数、吸收胎率指标，经口染毒组，腹腔注射组与对照组相比有极显著差异（P〈0．01），死胎率腹腔注射组与对照组相比有极显著差异（P〈0.01），经口染毒组与对照组相比有显著差异（P〈0．05），在死胎率、吸收胎率指标上，腹腔注射组高于经口染毒组具有极显著差异（P〈0．01）。骨骼畸形率、内脏畸形率腹腔注射组、经口染毒组与对照组相比有极显著差异（P〈0．01），但二者之间无显著差异。结论 敌枯双腹腔注射对大鼠母体毒性、胚胎毒性、发育毒性和致畸方面的作用比经口染毒更明显，值得相关研究借鉴。     

p38丝裂原活化蛋白激酶在小鼠早期胚胎及围植入期子宫内膜的表达

目的检测p38MAPK在小鼠不同发育阶段胚胎和围植入期子宫内膜的表达。方法取小鼠早期胚胎、动情期未孕、真孕及假孕1～8d小鼠子宫，利用免疫组织化学染色及图像分析法，检测p38MAPK在不同发育阶段早胚及围植入期子宫内膜中的表达和变化规律。结果① p38MAPK在小鼠胚植入前各细胞期均呈阳性表达,随着妊娠进展,其表达逐渐加强;② 真孕组孕3d,小鼠子宫内膜腔上皮p38MAPK呈阳性表达,孕4d呈强阳性表达，此后腔上皮表达逐渐减弱；腺上皮p38MAPK的表达一直维持在阳性水平，而蜕膜细胞的表达从孕5d开始逐渐增强。假孕组只有孕4?d呈弱阳性表达。结论① p38MAPK可能参与了小鼠植入前胚的发育分化。② p38MAPK参与胚泡植入过程，并可能参与子宫内膜的蜕膜化反应。③ p38MAPK 在子宫内膜中的表达不仅受母体因素调控，还与胚泡的刺激有关。     

转化生长因子在小鼠胚卵及孕鼠子宫的表达

目的：研究转化生长因子α（TransformingGrowthFactorα，TGFα）在小鼠胚卵及着床前孕鼠子宫的表达。方法：免疫组织化学和地高辛标记cDNA探针原位杂交。结果：2-细胞胚至胚泡的整个发育过程中，均有TGFα的蛋白质及基因表达。着床前孕鼠子宫组织多种细胞呈现TGFα的蛋白质及核酸反应阳性。结论：小鼠胚卵和着床前子宫各自合成TGFα，可能参与胚胎发育和蜕膜反应，影响子宫内膜对着床的接受性。     

在小鼠着床前胚胎中c-myc的表达

目的: 观察小鼠着床前胚胎细胞中c-myc基因的表达, 了解其对早期胚胎发育可能影响的作用. 方法: 采用原位杂交及免疫组织化学ABC法,分别检测小鼠着床前胚胎细胞中c-myc mRNA及c-myc蛋白. 结果: 在小鼠2细胞、4细胞、6细胞、8细胞和囊胚期胚细胞中均检测到原癌基因c-myc转录产物的表达,c-myc mRNA分布于胚细胞的胞质和胞核. 免疫组织化学方法也发现,2细胞至囊胚期胚胎细胞的 c-myc蛋白均呈免疫反应阳性, 阳性物质分布于胞质和胞核中, 胚胎透明带则呈阴性反应. 结论: 小鼠早期胚胎有c-myc基因表达,c-myc基因对小鼠着床前胚胎发育可能起重要调节作用.     

小鼠品系影响胚胎移植成功率的比较研究

目的:探讨不同受体鼠和供体鼠品系对胚胎移植成功率的影响以及不同品系胚胎混合移植的可行性. 方法:以Balb/c雄鼠和C57BL/6雌鼠杂交F1代(B6CF1)小鼠24只和昆明鼠(KM鼠)14只作为供体鼠,共取状态良好的受精卵362颗,分别或混合回种于8只B6CF1和16只KM受体鼠输卵管内,比较两种品系鼠的产仔率. 结果:除同品系回种可产仔外,KM鼠和B6CF1杂交鼠受精卵交叉回种B6CF1或KM受体鼠以及两品系受精卵混合回种均可产仔. 其中B6CF1受体鼠产仔率(29.0%)明显高于KM受体鼠(7.0%),B6CF1供体鼠产仔率(16.0%)也略高于KM供体鼠(11.0%);杂交B6CF1受精卵同品系回种产仔率最高(32.0%),KM鼠受精卵同品系回种产仔率仅4.0%,而B6CF1和KM鼠作为受体鼠混合回种两品系受精卵的产仔率分别为25.0%和15.0%. 结论:不同品系小鼠胚胎可交叉或混合回种,小鼠胚胎移植技术不受品系限制,但同品系胚胎移植成功率更高;B6CF1作为胚胎移植实验动物明显优于KM鼠.     

两种小鼠胚胎移植方法的比较

目的:通过将传统的撕破囊膜进行小鼠胚胎移植的方法改为囊膜穿刺,以期提高胚胎移植的成功率.方法:共移植ICR和C57BL/6供体小鼠106只,其中改进方法移植47只(ICR小鼠31只,C57BL/6小鼠16只),传统方法移植59只(ICR小鼠39只,C57BL/6小鼠20只).结果:囊膜穿刺方法将输卵管和腹壁的炎性黏连发生率由60%降低到了20%,减轻了对移植后胚胎存活的不利影响,将ICR小鼠和C57BL/6小鼠胚胎移植成功率分别提高到了61%和37%.结论:通过囊膜穿刺进行胚胎移植提高了胚胎移植成功率.     

人参皂苷拮抗醋酸铅对大鼠胚胎发育毒性的研究

目的：探讨人参皂苷对醋酸铅胚胎发育毒性的拮抗作用。方法：应用全胚胎体外培养技术建立胚胎致畸模型,并进行胚胎发育毒性的拮抗实验。结果：铅对大鼠胚胎有较强的发育毒性作用,并呈剂量—效应关系,人参皂苷可拮抗醋酸铅胚胎发育毒性,使胚胎正常生长。结论：人参皂苷对铅所致胚胎畸形有较好的拮抗作用,并可均衡地促进胚胎的分化和发育。     

氨基酸浓度对昆明小鼠胚胎体外发育的影响

目的探讨培养液中氨基酸成分对植入前昆明小白鼠胚胎发育的影响,摸索植入前胚胎体外培养氨基酸的最佳浓度。方法从超排昆明小鼠输卵管中取出的630枚受精卵均分为7组,分别在经添加不同浓度Eagle's氨基酸的去牛血清白蛋白KSOM培养液(mKSOM、mKSOM 1/16AA、mKSOM 1/8AA、mKSOM 1/4AA、mKSOM 1/2AA、mKSOM AA、mKSOM 2AA)中培养,对比观察各组胚胎体外发育的过程。用卡方检验分析添加各浓度氨基酸的培养液培养效率的差别,并将8细胞发育率和囊胚发育率分别与相应的氨基酸浓度进行曲线拟合分析。结果与未添加氨基酸组对比,添加氨基酸组胚胎发育率高,8细胞胚和囊胚的形成率与培养液中氨基酸的浓度关系均符合三次模型,在氨基酸为1/2浓度时8细胞胚和囊胚的形成率均达到最高。结论氨基酸对胚胎的体外发育有促进作用,但含有高浓度氨基酸的培养液培养效果反而有所下降,可能是由于高浓度的氨基酸影响胚胎的代谢和渗透压的改变,且氨基酸分解及胚胎代谢所产生的铵对胚胎有毒性作用。     

低可利用胚胎患者的胚胎移植策略

探讨受精后第2天(D2)行胚胎移植在低可利用胚胎患者体外受精或卵母细胞质内单精子显微注射(IVF/ICSI)周期的应用价值.选择接受WF/ICSI治疗、年龄<40岁且可利用胚胎数实3枚的患者作为研究对象,共191个周期;其中D2行胚胎移植99个周期(D2移植组),D3行胚胎移植 92个周期(D3移植组),比较D2与D3移植组以及D2移植与其既往D3移植组的临床结局.D2移植组的获卵数及胚胎耗损率均显著低于D3移植组(P<0. 05),优胚率显著高于D3移植组(P<0.05),但胚胎种植率、临床妊娠率、早期流产率及异位妊娠率均与D3移植组间差异无统计学意义. D2移植组的胚胎耗损率及周期取消率均显著低于既往D3移植周期(P<0.05),但胚胎种植率及临床妊娠率均显著高于既往D3移植周期(P<0. 05).对低可利用胚胎患者,选择D2行全胚胎移植不失为一个有价值、可供选择的胚胎移植策略.     

氨基酸浓度对昆明小鼠胚胎体外发育的影响

目的探讨培养液中氨基酸成分对植入前昆明小白鼠胚胎发育的影响,摸索植入前胚胎体外培养氨基酸的最佳浓度.方法从超排昆明小鼠输卵管中取出的630枚受精卵均分为7组,分别在经添加不同浓度Eagle‘s氨基酸的去牛血清白蛋白KSOM培养液(mKSOM、mKSOM 1/16AA、mKSOM 1/8AA、mKSOM 1/4AA、mKSOM 1/2AA、mKSOM AA、mKSOM 2AA)中培养,对比观察各组胚胎体外发育的过程.用卡方检验分析添加各浓度氨基酸的培养液培养效率的差别,并将8细胞发育率和囊胚发育率分别与相应的氨基酸浓度进行曲线拟合分析.结果与未添加氨基酸组对比,添加氨基酸组胚胎发育率高,8细胞胚和囊胚的形成率与培养液中氨基酸的浓度关系均符合三次模型,在氨基酸为 1/2浓度时8细胞胚和囊胚的形成率均达到最高.结论氨基酸对胚胎的体外发育有促进作用,但含有高浓度氨基酸的培养液培养效果反而有所下降,可能是由于高浓度的氨基酸影响胚胎的代谢和渗透压的改变,且氨基酸分解及胚胎代谢所产生的铵对胚胎有毒性作用.     

低剂量诺坤复和赠卵治疗卵巢功能衰竭不孕症

1999年1月至12月,用诺坤复(微粒化17β雌二醇),黄体酮和赠卵治疗卵巢衰竭不孕症20例共21个周期,由17例同时行IVF-ET或GIFT的不孕患者和l例正常妇女提供卵母细胞,供卵和接受赠卵者共移植38个周期,妊娠16例,妊娠率为42．1％。其中接受赠卵21个周期中,临床妊娠10例,供卵者移植17例中,临床妊娠6例,妊娠率分别为47．6％和35．3％,两组无显著差别。妊娠与未妊娠患者之间平均年龄,不孕原因和移植的胚胎数均无显著差别。     

乙型肝炎病毒(adr亚型)preS2-S基因转基因小鼠的建立

目的：建立可表达乙型肝炎病毒（adr亚型）包膜中蛋白的转基因小鼠品质。方法：通过原核显微注射法制备带有乙型肝炎病毒（adr亚型）preS2-S基因的转基因小鼠。应用PCR方法筛选乙型肝炎病毒preS2-S基因转基因首建者（founder）小鼠，再以免疫组织化学法分析乙型肝炎病毒蛋白在这些小鼠中的表达特性，PCR和免疫组化均阳性的转基因小鼠与正常同系异性小鼠交配用于传代培育，并用PCR法检测其子代小鼠。结果：共注射受精卵69枚。选取存活受精卵58枚分别植入4只假孕小鼠，产仔并存活23只。经尾组织DNA PCR筛选得到5只整合preS2-S基因的founder小鼠，免疫组织化学法发现其中3只小鼠的肝脏中表达HBsAg，进而对其中表达较强的阳性鼠进行保种。结论：所建立的乙型肝炎病毒（adr亚型）preS2-S基因转基因小鼠品系具有表达乙肝病毒中蛋白的生物学特性，这一品系的建立为中蛋的相关研究提供了技术平台。     

两种助孕方式下D5、D6囊胚行冻融移植后妊娠结局的比较

目的 比较体外受精-胚胎移植(IVF-ET)与胚胎植入前遗传学诊断或胚胎植入前遗传学筛查(PGD/PGS)周期中D5、D6囊胚形成情况及妊娠结局,同时探究D5、D6囊胚的发育潜能及两种助孕方式的优劣.方法 回顾性分析行IVF-ET助孕的138个周期及PGD/PGS筛查助孕的148个周期,按移植胚胎的发育天数分为IVF-D5组、IVF-D6组、PGD/PGS-D5组和PGD/PGS-D6组,分析比较各组的一般情况、囊胚形成情况及冻融移植后的种植率、临床妊娠率、流产率等.结果 IVF-D5组与IVF-D6组相比、PGD/PGS-D5组与PGD/PGS-D6组相比,D5组囊胚形成率、优质胚胎率、种植率、临床妊娠率均高于D6组(P＜0.05);PGD/PGS周期中D5组整倍体囊胚检出率高于D6组(p＜0.05);IVF-D5组与PGD/PGS-D5组相比、IVF-D6组与PGD/PGS-D6组相比,两组间的囊胚形成率、优质胚胎率、种植率及临床妊娠率均差异无统计学意义.结论 两种助孕方式下冻融移植D5囊胚比D6囊胚可获得较好的临床妊娠结局;与IVF相比,PGD/PGS并未明显改善患者的妊娠结局.