人参皂甙Rh2对人胶质瘤细胞U87MG凋亡的影响

目的 观察人参皂甙Rh2对胶质瘤细胞凋亡的影响并初步探讨其可能机制。方法 将培养的人胶质瘤细胞U87MG随机分为人参皂甙Rh2组、人参皂甙Rh2+尼莫地平组和对照组。人参皂甙Rh2组在常规培养细胞时加入20 μg/ml的人参皂甙Rh2，人参皂甙Rh2+尼莫地平组在人参皂甙Rh2组培养细胞时加入浓度为10 μmol/L的尼莫地平。利用流式细胞仪检测U87MG细胞凋亡，利用激光共聚焦显微镜和流式细胞仪检测U87MG细胞内钙离子浓度。结果 与对照组相比，人参皂甙Rh2促进U87MG细胞凋亡（P<0.05），且增加细胞内游离钙离子浓度（P<0.05）；尼莫地平显著减少人参皂甙Rh2引起的U87MG细胞凋亡（P<0.05）。结论 人参皂甙Rh2可以通过增加细胞内游离钙离子浓度促进U87MG细胞凋亡。     

PI3K抑制剂AZD8835对人脑胶质瘤细胞生物学功能的作用

目的探究PI3K抑制剂AZD8835体外对人脑胶质瘤细胞(U87细胞和U251细胞)生物学功能的作用。方法在U87细胞和U251细胞中加入不同浓度的AZD8835,应用CCK8法和EDU实验检测AZD8835对胶质瘤细胞增殖能力的影响,应用Transwell实验检测AZD8835对胶质瘤细胞侵袭能力的影响,应用流式细胞术检测AZD8835对胶质瘤细胞凋亡的影响。结果 AZD8835显著抑制胶质瘤细胞U87和U251增殖能力和侵袭能力,并诱导细胞凋亡,其对胶质瘤细胞生物学功能的影响呈明显剂量依赖性。结论 AZD8835能有效抑制胶质瘤细胞U87和U251增殖与侵袭,诱导细胞凋亡,从而发挥抗肿瘤作用。AZD8835可作为一种潜在提高胶质瘤疗效的辅助疗法。     

太白银莲花皂甙-1抑制人脑胶质瘤U251细胞生长的实验研究

目的研究太白银莲花皂甙-1对人脑胶质瘤U251细胞生长的影响及其机制。方法采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测太白银莲花皂甙-1对U251细胞增殖的影响;应用倒置显微镜和Hochest33342荧光染色、透射电子显微镜观察细胞形态的变化;通过逆转录酶多聚酶链反应(RTPCR)检测与凋亡相关基因Bcl-2 mRNA和Bax mRNA水平的表达变化,Western blot分析Bcl-2和Bax在胶质瘤U251细胞中蛋白的表达情况。结果 U251细胞经太白银莲花皂甙-1诱导后,细胞的增殖明显受到抑制,通过RT-PCR结果证实Bcl-2 mRNA在太白银莲花皂甙-1作用下明显呈低表达而Bax mRNA的表达随时间延长逐渐增高,Western blot检测结果显示太白银莲花皂甙-1作用后,下调抑凋亡蛋白Bcl-2的表达并激活了促凋亡蛋白Bax的表达。结论太白银莲花皂甙-1明显抑制U251细胞的生长活性,且能引起胶质瘤细胞大量凋亡,具有显著的抗肿瘤作用。     

4000/人参皂甙Rb1、Rg1对许旺细胞NGF表达的影响(英文他译）

背景：人参皂甙可以促智抗衰老,保护大脑皮质运动神经元,具有抗细胞凋亡作用,但作用机制不清。 目的：观察人参皂甙Rb1和Rg1对许旺细胞神经生长因子表达的影响。 设计、时间及地点：细胞学体外观察,于2004-03/06在深圳市第二人民医院完成。 材料：成人新鲜离体神经取自创伤离断无法再植的肢体,由深圳市第二人民医院提供。人参皂甙Rb1、Rg1由长春白求恩医科大学提供。 方法：剥去神经外膜,剪成1.0~2.0 mm碎块,采用酶消化法分离许旺细胞,双30 min差速黏附法去除成纤维细胞,获得纯净度达95%以上的许旺细胞。将纯化的许旺细胞按每孔10万个细胞接种在预先涂有多聚赖氨酸的96孔细胞培养板上,设立3组：人参皂甙Rb1组分别加入含量为10,20,40,60,80 μg的人参皂甙Rb1 20 μL;人参皂甙Rg1组分别加入含量为10,20,40,60,80 μg的人参皂甙Rg1 20 μL;对照组加入PBS液20 μL。 主要观察指标：流式细胞仪检测许旺细胞神经生长因子的表达率。 结果：与对照组比较,培养48 h后人参皂甙Rb1组、人参皂甙Rg1组许旺细胞神经生长因子表达率均明显升高(P < 0.05),且呈剂量依赖性增加,当人参皂甙Rb1和Rg1质量浓度达 60 mg/L时许旺细胞神经生长因子表达率最高。人参皂甙Rb1及Rg1相同剂量组之间比较,许旺细胞神经生长因子表达率差异无显著性意义(P > 0.05)。 结论：人参皂甙Rb1和Rg1可以通过促进许旺细胞分泌神经生长因子而具有潜在加速周围神经损伤修复的作用。     

白藜芦醇对脑胶质瘤U87细胞及干细胞凋亡诱导作用

目的比较研究白黎芦醇(Res)对人脑胶质瘤U87细胞及其胶质瘤干细胞(GSC)的作用。方法膜联蛋白Ⅴ(AnnexinⅤ)和碘化丙啶(PI)染色法测定细胞凋亡;CD133标记、CD133与AnnexinⅤ/PI共标记检测GSC相对含量及GSC的凋亡;实时荧光定量逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测mdr1基因mRNA表达,流式细胞术(FCM)测定P-糖蛋白(P-gp)的表达;集落形成法(CFU)检测细胞的自我更新和增殖能力。结果不同浓度的Res显著诱导U87细胞凋亡,抑制U87细胞集落的形成。40～160μmol/L Res作用后U87细胞群体中CD133+GSC相对含量显著增高、GSC凋亡细胞数量增加,但GSC对Res的敏感性低于U87群体细胞。Res诱导后U87细胞群体中高表达mdr1/P-gp的细胞显著增高,并与GSC含量的增高基本相一致。结论白黎芦醇可诱导脑恶性胶质瘤U87群体细胞及其干细胞凋亡。     

华蟾素诱导人胶质瘤U87细胞凋亡的作用机制研究

目的 探讨华蟾素(Cinobufacini)对人胶质瘤U87细胞凋亡的促进作用及其机制。方法 将体外培养的胶质瘤U87细胞分为对照组、华蟾素组(依华蟾素水平不同分为3个亚组),MTT法测定细胞增殖率,流式细胞仪测定细胞凋亡率,Hoechst 33258核染色法观察细胞核凋亡,透射电镜观察细胞形态学的变化,Western blot法检测胶质瘤U87细胞内Cleaved Caspase-3及Cleaved Caspase-9的蛋白表达水平。结果 华蟾素对胶质瘤U87细胞增殖有抑制作用; 流式细胞仪及Hoechst 33258核染色法的检测显示,随着华蟾素作用浓度的递增,胶质瘤U87细胞凋亡率呈剂量依赖性递增; 华蟾素作用后可使Cleaved Caspase-3及Cleaved Caspase-9蛋白的表达水平升高。结论 华蟾素通过改变Cleaved Caspase-3及Cleaved Caspase-9蛋白的表达水平来抑制胶质瘤U87细胞增殖并促进其凋亡。     

microRNA-490-3p抑制胶质瘤增殖及凋亡的作用研究

目的探讨微小RNA-490-3p(miR-490-3p)对胶质瘤细胞增殖和凋亡的影响,观察miR-490-3p对胶质瘤生物学行为的影响。方法通过荧光实时定量PCR(qRT-PCR)检测16例胶质瘤样本、胶质瘤旁组织及4种胶质瘤细胞系中miR-490-3p的表达;利用人工合成miR-490-3p mimic瞬时转染脑胶质瘤细胞株,qRT-PCR检测细胞中miR-490-3p的表达水平;采用MTT比色法检测胶质瘤细胞增殖情况;流式细胞术检测胶质瘤细胞凋亡。结果胶质瘤样本及胶质瘤细胞系中miR-490-3p的表达量较瘤旁与正常胶质细胞系显著降低,miR-490-3p mimic能够显著上调胶质瘤细胞株中miR-490-3p的表达水平,并显著抑制胶质瘤细胞株U251、U87细胞的增殖能力显著增加细胞凋亡数量;结论 miR-490-3p在胶质瘤样本及胶质瘤细胞系中呈现低表达,过表达miR-490-3p有效抑制了胶质瘤细胞株的增殖,增加凋亡,提示miR-490-3p可能成为胶质瘤治疗的新靶点。     

甘草查尔酮A对胶质瘤的增殖抑制及促凋亡作用机制研究

目的探讨甘草查尔酮A(LCA)对人胶质瘤U87、U251细胞的增殖抑制和促凋亡作用及其机制研究。方法通过四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖抑制作用,并计算出半数抑制浓度(IC50),按IC50和100μM不同浓度进行分组。采用倒置显微镜观察细胞形态,流式细胞术检测细胞凋亡以及Western Blot从蛋白水平检测凋亡相关分子的改变情况。结果 MTT显示LCA对人胶质瘤U87、U251细胞具有明显的增殖抑制作用,呈浓度及时间依赖性,LCA对U87、U251细胞48 h的IC50值分别为61.54μM和53.02μM,倒置显微镜下观察细胞密度减少,形态发生明显改变。流式细胞术结果显示,LCA可促进胶质瘤U87、U251的细胞凋亡(P0.01)。Western Blot结果显示,LCA干预后可显著降低胶质瘤U87、U251细胞内Bcl-2的表达(P0.01),相反,增加Bax的表达(P0.05),呈浓度依赖性。结论 LCA对胶质瘤U87、U251细胞具有明显的增殖抑制作用,可能通过内源性凋亡途径诱导其凋亡。     

miR -21抑制替莫唑胺诱导U87细胞凋亡的体外实验研究

目的 探讨miR -21过表达在替莫唑胺诱导胶质瘤U87细胞凋亡中的作用及其机制.方法 miR - 21过表达载体转染U87细胞,Hoechst 33258染色和流式细胞分析凋亡,Westem blot验证Bax和Bcl -2表达及检测Caspase -3活性.结果 替莫唑胺可显著诱导U87细胞凋亡,上调Bax 表达、下调Bcl-2表达及增加Caspase -3活性.U87细胞预转染miR -21过表达载体后,替莫唑胺的这种效应可部分被抑制.结论 miR -21过表达可通过下调Bax/Bcl -2比率及Caspase -3活性部分抑制替莫唑胺诱导的U87细胞凋亡,提示胶质瘤中miR -21过表达可能是胶质瘤对替莫唑胺耐药的一大新的因素.     

miR-370-3p对胶质母细胞瘤U87-MG细胞株增殖能力的影响

目的 探讨微小RNA-370-3p（miR-370-3p）对人脑胶质瘤细胞系U87-MG增殖能力的影响及其机制。方法 将常规培养的U87-MG细胞分为空白组、无义序列转染组和模拟物转染组,后两组分别转染miRNA无义序列及miR-370-3p模拟物,qRT-PCR法检测其转染效率,免疫印迹法检测转染细胞叉头框蛋白M1（FoxM1）的表达;采用EdU法评估细胞的增殖能力,采用平板克隆形成实验检测细胞的增殖能力。结果 与空白组和无义序列转染组比较,模拟物转染组细胞miR-370-3p表达显著增加（P<0.05）,而FoxM1的蛋白表达显著减少（P<0.05）;而且模拟物转染组U87-MG细胞增殖能力及克隆形成率均明显减少（P<0.05）。结论 miR-370-3p能够抑制U87-MG细胞的增殖能力,可能与减少FoxM1的表达有关。     

Propranolol Inhibits the Proliferation of Human Glioblastoma Cell Lines through Notch1 and Hes1 Signaling System

ObjectiveThe anti-tumor effect of the beta-adrenergic receptor antagonist propranolol in breast cancer is well known; however, its activity in glioblastoma is not well-evaluated. The Notch-Hes pathway is known to regulate cell differentiation, proliferation, and apoptosis. We investigated the effect of propranolol to human glioblastoma cell lines, and the role of Notch and Hes signaling in this process. MethodsWe performed immunohistochemical staining on 31 surgically resected primary human glioblastoma tissues. We also used glioblastoma cell lines of U87-MG, LN229, and neuroblastoma cell line of SH-SY5Y in this study. The effect of propranolol and isoproterenol on cell proliferation was evaluated using the MTT assay (absorbance 570 nm). The impact of propranolol on gene expression (Notch and Hes) was evaluated using real-time polymerase chain reaction (RT-PCR, whereas protein levels of Notch1 and Hes1 were measured using Western blotting (WB), simultaneously. Small interfering RNA (siRNA) was used to suppress the Notch gene to investigate its role in the proliferation of glioblastoma. ResultsPropranolol and isoproterenol caused a dose-dependent decrease in cell proliferation (MTT assay). RT-PCR showed an increase in Notch1 and Hes1 expression by propranolol, whereas WB demonstrated increase in Notch1 protein, but a decrease in Hes1 by propranolol. The proliferation of U87-MG and LN229 was not significantly suppressed after transfection with Notch siRNA. ConclusionThese results demonstrated that propranolol suppressed the proliferation of glioblastoma cell lines and neuroblastoma cell line, and Hes1 was more closely involved than Notch1 was in glioblastoma proliferation.     

过表达miR-21通过PI3K-AKT 通路抑制替莫唑胺对胶质瘤U87细胞的增殖抑制作用

目的 探讨miR-21 过表达在替莫唑胺(TMZ)诱导胶质瘤U87 细胞增殖中的作用及其机制,明确miR-21 过表达在替莫唑胺临床治疗胶质瘤耐药中的作用.方法 Pre-miR-21 过表达载体转染U87 细胞,通过形态学观察,噻唑蓝(MTT)试验检测细胞增殖情况.Western 印迹验证Akt 和p-Akt 表达及检测PI3K 活性.结果 替莫唑胺可显著抑制U87 细胞生长,下调Akt 和p-Akt 表达及抑制PI3K 活性.U87 细胞预转染pre-miR-21 过表达载体后,替莫唑胺的这种效应可部分被miR-21 过表达所抑制.结论 miR-21 过表达可通过活化PI3K-AKT 通路部分抑制替莫唑胺诱导的U87 细胞凋亡,提示胶质瘤中miR-21 过表达可能是替莫唑胺临床治疗胶质瘤药物抵抗的一大新的因素.     

慢病毒介导的RNAi下调miR-221抑制U87胶质瘤细胞生长的研究

目的 探讨下调miR-221对U87胶质瘤细胞生长的影响及可能的作用机制.方法 构建靶向miR-221的siRNA慢病毒表达载体并感染U87胶质瘤细胞,应用原位杂交、定量PCR和Western blot法检测干扰后细胞内miR-221及p27蛋白表达变化,MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡及周期变化,Transwell法检测细胞侵袭力改变.结果 成功构建了靶向miR221的siRNA慢病毒表达载体,该载体能有效抑制内源性miR-221的表达,同时上调p27蛋白的表达,同时抑制细胞生长,诱导凋亡,降低细胞的侵袭力.结论 成功构建靶向miR-221的RNAi慢病毒表达载体,该载体能够有效抑制miR-221的表达并抑制U87胶质瘤细胞的生长,为以miR-221为靶点的胶质瘤基因治疗的后续研究奠定基础.     

I型γ-分泌酶抑制剂对恶性胶质瘤细胞株增殖及凋亡的影响

目的 探讨I型γ-分泌酶抑制剂(GSI-I)对U87、U251胶质瘤细胞的增殖抑制及诱导凋亡作用.方法 应用GSI-I作用于U87、U251胶质瘤细胞,通过MTT法观察GSI-I对上述两种细胞的增殖抑制作用,通过流式细胞仪检测GSI-I对该两种细胞细胞周期的影响及诱导凋亡的作用.结果RT-PCR及实时定量荧光RT-PCR结果显示,GSI-T可明显抑制胶质瘤细胞中Notch通路的活性,主要体现为Notch通路的靶基因Hes-1表达明显下调.MTT检测结果显示2.5μmol/L及以上浓度的GSI-I对U87及U251胶质瘤细胞有明显的增殖抑制作用.与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05),且该抑制作用呈剂量依赖型增加.流式细胞检测结果显示GSI-I主要使U87胶质瘤细胞的细胞周期阻滞在G1期而抑制细胞增殖,对于U251胶质瘤细胞则主要通过诱导凋亡来抑制增殖.结论 GSI-I可明显抑制U87及U251胶质瘤细胞的增殖并诱导凋亡,为恶性胶质瘤的临床治疗提供了理论参考依据.     

TIMP-2基因对人脑胶质瘤U87细胞周期与增殖的影响

目的探讨金属蛋白酶组织抑制因子(TIMP-2)对人脑胶质瘤细胞的抑制作用,主要是对细胞周期与细胞增殖的作用.方法用含TIMP-2基因的重组腺病毒载体,体外转染人胶质瘤细胞系U87,用Western blot检测目的蛋白的表达.通过细胞生长实验,流式细胞仪分析技术检测U87转染前后细胞增殖、周期与凋亡的变化.结果转染AdTIMP-2病毒后的U87细胞TIMP-2蛋白表达上调,转染后对U87细胞的生长有抑制作用,并出现明显的G0 -G1 期阻滞,但无明显的细胞凋亡峰出现.结论重组腺病毒载体介导的TIMP-2基因在体外对人脑胶质瘤细胞系U87 的生长有抑制作用,可作为胶质瘤治疗的有效工具.     

Notch受体阻断剂MW167抑制U87胶质瘤细胞增殖的作用研究

目的 探讨Notch受体阻断剂MW167对胶质瘤细胞系U87增殖及凋亡的影响.方法 采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测MW167对体外培养的胶质瘤细胞系U87的增殖抑制作用.流式细胞仪AnnexinV-FITC和PI双染检测凋亡率.结果 MTT法检测显示MW167能明显抑制U87细胞的增殖并呈剂量依赖关系:流式细胞仪检测显示MW167可诱导U87胶质瘤细胞发生凋亡并呈剂量依赖关系.结论 MW167明显抑制U87胶质瘤细胞的增殖并诱导其发生凋亡,提示Noah受体阻断剂MW167对人脑胶质瘤的治疗具有潜在的临床应用价值.     

反义miR-21通过调控hTERT表达抑制胶质瘤细胞生长

目的探讨敲低miR-21表达对人胶质瘤细胞系U87细胞功能的影响以及相关作用机制。方法脂质体介导转染miR-21反义寡聚核苷酸（miR-21 inhibitor）敲低U87细胞miR-21的表达。使用实时荧光定量PCR鉴定转染后U87细胞miR-21表达水平;MTT法检测转染后细胞增殖水平,流式法评价转染后细胞周期分布及凋亡变化,并结合Western印迹及RT-PCR验证在U87细胞中miR-21和hTERT间关系。结果体外转染反义miR-21寡聚核苷酸能明显抑制U87细胞生长,诱导其凋亡,并且能够明显下调hTERT表达。结论反义miR-21可能通过下调hTERT表达抑制胶质细胞生长,miR-21可作为胶质瘤基因治疗的靶点。