腺苷对原代培养的大鼠海马神经元大电导钙激活钾通道的作用

目的在离子通道水平研究腺苷对原代培养的大鼠海马神经元大电导钙激活钾通道(BKCa)的作用。方法采用新生24h的乳鼠,取出海马,清除表面血管,以胰酶消化和巴氏管吹打的方法制备海马神经元,细胞培养6～8d后,MAPⅡ染色鉴别神经元表面标志;采用全细胞膜片钳技术,对细胞进行封接、破膜并记录BKCa通道电流,以细胞旁方式给药观察不同浓度腺苷对BKCa通道的作用。结果原代培养的海马神经元上可以成功记录到BKCa电流,其为一组幅值较大,可以快速激活且几乎不失活的外向电流;腺苷(1～100μmol/L)可以增大BKCa电流,浓度越高,增长幅度越大;100μmol/L腺苷对BKCa电流的影响具有电压依赖性,同时它还可以使BKCa电流的激活曲线负向漂移。结论腺苷可以增大海马神经元BKCa电流幅值,这可能是腺苷作为内源性抗癫痫物质发挥抗癫痫作用的机制之一。     

氯胺酮对缺氧大鼠海马神经元钙激活钾通道的作用

目的 研究氯胺酮对缺氧马神经元钙激活钾通道（KCa通道）的作用,以揭示氨胺酮抗缺血性脑损伤的电生机机制。方法 应用膜片钳制技术记录缺氧海马神经元上的单通道电流活动,经P－clamp软件进行微机采样、储存数据和数据的分析处理。结果 氨胺酮对缺氧海马神经元KCa通道具有明显激活作用：增加通道开放概率P0,缩短通道关闭时间。结论 氯胺酮对海马神经元KCa通道的作用可能为氯胺酮治疗脑缺血损伤的另一种重要机制。     

钙激活钾通道在钙离子致神经细胞损伤中的作用

采用膜片钳单通道记录方法,观察原代培养新生ＳＤ大鼠皮层神经元的钙激活钾通道（ＫＣａ）特征及胞内不同游离钙水平对通道开放动力学的调节。结果显示：培养ＳＤ大鼠皮层神经元的ＫＣａ以大电导活动占优势,胞内游离钙为１０－８ｍｏｌ／Ｌ时,通道几乎不开放,在１０－６ｍｏｌ／Ｌ时达最大激活。由此表明神经元上ＫＣａ通道开放概率明显依赖于胞浆中钙离子和膜电位,ＫＣａ对胞内钙离子浓度变化极为敏感。钾通道的开放剂可能有一定的神经细胞保护作用。     

马桑内酯对大鼠海马锥体神经元钙激活钾通道的影响

目的　了解致痫剂马桑内酯 (CL)对培养的大鼠海马锥体神经元细胞膜钙激活钾通道 (KCa)的调节作用及癫痫的发病机理。方法　采用膜片钳单通道电流记录技术进行定量研究。结果　 1在内面向外式膜片下 ,KCa(12 0 .34± 2 5 .12 ) p S表现出钙离子浓度依赖性 (n=6 )、电压依赖性 (n=17)和四乙基胺 (TEA)阻断特点 ;2在细胞贴附式膜片下 ,浴液中加入 CL 可明显激活 KCa(P<0 .0 1) ;3在对称性高钾溶液中 ,使浴液 [Ca2 + ]i 为 10 - 8m ol/L,维持神经元膜电位为 2 0 m V,当 CL 为 0 μl/ m l和 1.0 μl/ m l时 ,可分别使 KCa开放概率从 0 .0 2 5增加到 0 .5 5 3(P<0 .0 1) ,通道活动的平均开放时间 (ms)从 1.875± 0 .4 12增加到 6 .82 9± 0 .136 ,平均关闭时间 (m s)从 179.342±13.831降低到 6 .4 12± 1.383(n=2 5 ,P<0 .0 1)。结论　在 CL 诱导的癫痫发病中 ,钙激活钾通道活化可能起重要的负反馈调节作用。     

吡拉西坦对海马神经元钙激活钾通道的作用

目的 研究吡拉西坦对原代培养海马神经元钙激活钾通道（KCa通道）的作用,以揭示吡拉西坦抗缺血性脑损伤的电生理机制。方法 应用膜片钳制技术记录原代培养的海马神经元的单通过电流活动,经p-CLAMP软件进行微机采样储存数据和数据的分析处理。结果 吡拉西坦对KCa通道具有明显的激活作用,增加通道开放概率,缩短通道关闭时间（P＜0．01）。结论 吡拉西坦可能通过激活KCa通道而对缺血神经元具有保护作用。     

钙激活钾通道及ATP敏感性钾通道在海马神经元缺氧超极化中的作用

研究缺氧超极化缺氧海马神经元中的电生理机制,以提示缺氧超极化在脑损伤中的作用。方法：应用膜片钳制技术的细胞贴附式膜片记录缺氧海马神经元的单通道电流活动,经p-CLAMP软件进行采样储存数据和数据的分析处理。结果：缺氧引起钙激活钾通道（KCa通道）和ATP敏感性通道（KATP通道）的激活,增加通道的开放概率。结论：缺氧超极化可能是缺血性脑损伤早期的重要代偿机制。     

大鼠血清对猪冠状动脉平滑肌细胞钙激活钾通道的作用

目的:研究大鼠血清对猪冠状动脉平滑肌细胞(SMC)钙激活钾通道(KCa)的作用,为血清药理学方法与膜片钳技术结合应用于相关离子通道机制研究奠定基础.方法:用EGTA处理血清中的Ca2 、Mg2 等离子,用膜片钳单通道技术研究处理后的血清对SMC上的KCa的影响.结果:处理后的血清浓度依赖性的不可逆性的阻断SMC上的KCa.在细胞贴附式膜片(cell-attached patch)下,血清10、50、100、150μl·ml-1,使通道开放概率从0.0285±0.0102分别降低到0.0205±0.0046(n=7,P>0.05)、0.0145±0.0007(n=7,P<0.05)、0.0045±0.0002(n=7,P<0.01)、0(n=7,P<0.01).在内面向外式膜片(inside-out patch)下,血清10、50、100、150μl·ml-1,使通道开放概率从0.3821±0.0491分别降低到0.1298±0.0331(n=7,P<0.05)、0.0405±0.0048(n=7,P<0.05)、0.0117±0.0011(n=7,P<0.01)、0.0008±0.0005(n=7,P<0.01).随着血清浓度的增加,通道活动逐步减少至完全抑制,这种作用冲洗后不可逆.结论:血清对猪冠状动脉平滑肌细胞钙激活钾通道有一定阻断作用.     

钙激活钾通道在钙离子致神经细胞损伤中的作用

采用膜片钳单通道记录方法,观察原代培养新生ＳＤ大鼠皮层神经元的钙激活钾通道比（Ｋｃａ）特征及胞内不同游离钙水平对通道开放动力学的调节,结果显示：培养ＳＤ大鼠皮层神经元的Ｋｃａ以大电导活动占优势,胞内游离钙为１０＾－８ｍｏｌ／Ｌ时,通道几乎不开放,在１０＾－６ｍｏｌ／Ｌ时达最大激活。由此表明神经元上Ｋｃａ通道开放概率明显依赖于胞浆中钙离子和膜电位,Ｋｃａ对胞内钙离子浓度变化极为敏感,钾通道的开放剂可     

NO-cGMP通路对下丘脑钙激活钾通道的调控研究

目的研究一氧化氮（ＮＯ）对ＳＤ乳鼠下丘脑神经元钙激活钾（ＫＣａ）通道的作用及其机制。方法采用内面向外 式及细胞贴附式膜片钳技术比较浴槽液中加入１００μmol/L硝普钠（ＳＮＰ）前后动物下丘及神经元ＫＣａ通道动力学 的改变。结果细胞贴附式时浴槽液中加入１００μmol/L ＳＮＰ,通道开放概率由（７．３±１．５）％升高至（４０．２±６．５）％,开放时 间由（７．１２±１．４１） ｍｓ增大至（１５．３４±３．４５） ｍｓ,开放频率由（１１．３±３．５）Ｈz升高为（２６．６±４．２） Ｈz（ｎ＝１０, Ｐ＜０．０５）。结论 ＮＯ－cＧＭＰ通路可显著提高通道的开放概率,这种增强作用是通过延长通道开放时间及增加开放频率实现的,它的 病理或生理作用还有待于进一步研究。     

Mg^2＋对猪冠冠脉平滑肌细胞钙激活钾通道的激活作用的初步研究

研究Ｍｇ＾２＋对猪冠脉肌细胞钙激钾通道的作用，以揭示Ｍｇ＾２＋扩血管作用的电生理机制。方法：应用膜片钳制技术ｉｎｓｉｄ－ｏｕｔ方式记录冠脉平滑肌上的单通道活动，经ＰＣＬＡＭＰ软件进行微机采用储存数据和数据的分析处理。结论：Ｍｇ＾２＋对钙激活钾驼的激活作用可能为Ｍｇ＾２＋调节心血管活动的重要机制之一。     

大鼠海马神经元大电导钙激活钾通道的全细胞电流记录

目的 探讨记录全细胞的大电导钙激活钾通道的技术方法。方法 首先酶解急性分离大鼠海马神经元；利用全细胞膜片钳技术记录大电导钙激活钾电流。结果 可记录到一系列快速的外向钾离子电流。结论 所记录到的外向钾离子电流中，快速出现并很快减小的呈尖峰样的瞬变外向电流主要由大电导的钙激活钾电流组成。     

Mg~(2+)对猪冠脉平滑肌细胞钙激活钾通道的激活作用的初步研究

目的：研究Mg2+对猪冠脉平滑肌细胞钙激活钾通道的作用,以揭示Mg2+扩血管作用的电生理机制。方法：应用膜片钳制技术inside－out方式记录冠脉平滑肌上的单通道活动,经PCLAMP软件进行微机采样储存数据和数据的分析处理。结果：Mg2+对猪冠脉平滑肌钙激活钾通道具有明显激活作用：增强通道开放概率P0,增加膜片通道开放数目。结论：Mg2+对钙激活钾通道的激活作用可能为Mg2+调节心血管活动的重要机制之一。     

原代培养猪冠状动脉平滑肌的电压依赖和钙激活钾通道

目的：研究原代培养的猪冠状动脉平滑肌电压依赖性和钙激活外向钾通道的特性。方法：离子通道电流采用膜片钳技术进行记录。结果：在内面向外式膜片构型,当膜内外K^ 浓度梯度类似生理状态时,该通道单位电导值约为100pS,而当膜内外K^ 浓度为对称的140mM浓度时,该通道单位电导值约270pS。其平均电流显示该通道具时间和电压依赖性激活特性,而无任何时间和电压依赖性失活特性。另外,通道的开放时间常数和开放概率随除极及胞内Ca^2 的增加而显著增加。通过用EGTA降低胞浆内Ca^2 浓度,可使外向电流抑制。动力学分析显示通道激活时存在一种开放状态和至少两种关闭状态。四乙胺（TEA）可在胞外侧阻断该电流,但高达15mM的4－氨基吡啶（4－AP）在胞内外都对通道无影响。在全细胞构型,对细胞膜进行除极可引出宏观外向电流。随着细胞的除极,该电流的激活时间常数逐渐缩短,并显示快速激活动力学特性。结论：在原代培养的猪冠状动脉平滑肌上存在有电压依赖和Ca^2 激活的K^ 选择性离子通道。该类通道具有非常高的单位电导值,除极时快速开放,对胞内Ca^2 高度敏感,但无失活等特性。     

UMR106细胞膜钾离子通道的记录及鉴定方法研究

目的 :建立一种研究大鼠成骨肉瘤细胞 (UMR10 6 )钾离子通道的方法。方法 :采用膜片钳技术 ,在细胞贴附方式下用内面向外的方法记录。并用TTX、CdCl2 分别阻断电压依赖性钠通道和钙通道。结果 :首次在URM10 6细胞上记录到一种电导为 8.79ps电压依赖性钾通道的通道电流。并观察了开放时间、关闭时间以及开放概率随电压的变化。结论 :通过使用钾通道阻断剂证实本方法记录的是一种电压依赖性内向整流型钾通道。     

Effect of Chengzai Pill on the L-Type Ca^2＋ Channel Currents of Osteoblasts Pretreated with Methylprednisolone

Objective: To observe the effect of the serum containing Chengzai Pill on the L-type voltage-sensitive calcium channels current (L-VSCCsC) of osteoblastic MC3T3-E1 cells pretreated with methylprednisolone (mPSL). Methods: A control group, a model group, a low dose group and a high dose group were set up. The whole cell patch clamp technique was used to record L-VSCCsC of 10 osteoblastic MC3T3-E1 cells in each group and their peak currents were determined. Results: The peak current of the control group was 0.2284±0.0209 nA; the peak current of the model group was 0.1839±0.0179 nA; decreased by 19.5% as compared with the control group (P<0.01); the peak current of the low and high dose groups was 0.2526± 0.0093 nA and 0.2671±0.0120 nA respectively, increased by 37.4% and 45.2% as compared with the model group (P<0.01); the difference between the low and high dose groups was P<0.05. Conclusion: 1. mPSL inhibits L-VSCCsC of osteoblasts; and 2. The serum containing Chengzai Pill increases L-VSCCsC of osteoblasts pretreated with mPSL.     

Effects of isoflurane and ethanol on large conductance Ca^2＋ -activated K^＋ channels

To study the effect of isoflurane and ethanol on large conductance Ca^2 -activated K^ channels (BK channels). Methods: The cRNA of mslol encoding BK channels was injected into Xenopus oocytes. Oocytes were incubated in ND96 (96 mmol/L NaCI, 2.0 mmol/L KCI, 1.8 mmol/L CaCl2, 1.0 mmol/L MgCl2, and 5.0 mmol/L HEPES, pH 7.4) at 4 ℃. Patch clamp recording (outside-out) were performed after 2-3 d. Isoflurane was administrated by the vaporizer driven by air, ethanol was applied by a cloud, manual-controlled administration system. Different test potentials from 0 to 10 mV were given to observe changes of currents. Results: 0.7 mmol/L and 1.2 mmol/L of isoflurane could inhibit BK currents obviously at different command potentials, but 50 mmol/L, 100 mmol/L, or 200 nunol/L of ethanol had no any effect on BK currents. Conclusion: Clinical concentration of isoflurane can distinctly inhibit isolating BK currents.     

慢性低氧状态对肾小球足细胞高通量钙激活钾通道表达和功能的影响

目的 探讨慢性低氧对人肾小球足细胞高通量钙激活钾通道（BK 通道）表达和功能的影响,及其在慢性肾脏病进展中的作用。方法 分化完全的条件永生性人类足细胞分别置于常氧（21% O2）和低氧（10%或2% O2）条件下培养6 ～ 48 h,采用实时聚合酶链反应（real-time PCR）和Western blot 检测足细胞BK 通道α、β3 及β4 亚基的表达;用电生理膜片钳技术记录全细胞模式下足细胞BK 通道功能的变化。结果 电生理研究结果显示低氧环境（2% O2 24 h）中,足细胞BK 通道在+80 mV 电压刺激下的电流水平由（14.45±2.06）pS 下降至（4.78±1.12）pS,差异有统计学意义（P <0.05）,且通道激活的时间常数由（4.59±1.67）增加至（25.16±11.04）（P <0.05）;分子生物学研究提示在低氧条件（2% O2 24 h）下足细胞BK 通道的β4 亚基水平升高,且表现为时间依赖性和剂量依赖性。结论 慢性低氧通过上调β4 亚基表达抑制BK 通道活性。