新城疫病毒体外诱导S180细胞凋亡的实验研究

目的：探讨新城疫病毒（Newcastle disease virus,NDV）体外对S180肉瘤细胞（简称S180）生长有无抑制和诱导细胞凋亡作用。方法：取培养至对数生长期的S180细胞浓度为5×104/mL和1×106/mL分别接种于96孔板和50mL培养瓶中,加入不同浓度的NDV（1∶20、1∶10、1∶5）作用24h,分别用MTT法检测NDV对S180瘤细胞的生长抑制作用,荧光显微镜和琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡。结果：经上述不同浓度的NDV作用24h,对S180细胞生长的抑制率依次为10%、26%、39%,各实验组吸光度值（A490）与对照组比较差异均有统计学意义（P〈0.05）。荧光显微镜观察实验组培养的S180瘤细胞,出现细胞核固缩及凋亡小体,琼脂糖凝胶电泳见DNA梯形条带。结论：NDV对体外培养S180细胞增殖有明显抑制作用,可诱导S180细胞凋亡。     

乙醇诱导人体外培养K562细胞系凋亡的研究

目的：探讨乙醇对人K562细胞的细胞毒作用机制。方法：采用不同浓度乙醇加入体外培养的K562细胞中,用荧光显微镜和倒置光显微镜观察细胞形态学变化,用琼脂糖凝胶电泳的方法检测细胞DNA裂解。结果：1％乙醇能有效诱导K562细胞凋亡,且随剂量增大凋亡时间缩短。5％乙醇作用30h则可引起细胞坏死。结论：长期饮酒者血液中有核细胞数量减少,可能与其促凋亡作用有关。     

枸杞多糖对人白血病K562细胞株凋亡作用的基础研究

目的 探讨枸杞多糖（LBP-X）抑制人慢性粒细胞白血病（CML）K562细胞增殖的作用机制,研究LBP-X对K562细胞凋亡的影响,探讨LBP-X与三氧化二砷（As2O3）诱导K562细胞凋亡的剂量对应关系.方法 用LBP-X、As2O3处理K562细胞,四氮甲唑蓝（MTT）比色法检测药物对细胞的抑制作用,倒置显微镜观察细胞形态变化,流式细胞仪分析细胞DNA含量变化及凋亡细胞的比例.结果 LBP-X对K562细胞的IC50约为227.50 μg/ml,经LBP-X作用后,K562细胞呈现凋亡的形态学改变.流式细胞仪可在2倍体前检测到凋亡峰,凋亡细胞比例为8.43%-57.92%.结论 LBP-X对K562细胞有抑制作用,并能诱导其发生凋亡.LBP-X对K562细胞的效能和效价强度约为As2O3的1/1 000.     

抗原致敏树突状细胞诱导CTL杀伤K562细胞体外实验研究

目的 研究体外负载K562细胞冻融抗原的树突状细胞（DC）诱导细胞毒性T淋巴细胞（CTL）的特异性杀伤作用。方法 联合应用细胞因子从外周血单个核细胞（PBMC）诱导培养出DC,在体外负载K562细胞冻融抗原。采用乳酸脱氢酶释放法,对比K562冻融抗原致敏DC组、未致敏DC组、淋巴细胞组、前列腺癌PC3冻融抗原致敏DC组分别激活的CTL对K562细胞的杀伤作用。结果 培养出具有典型特征的DC;在效靶比为10：1及20：1时。K562冻融抗原致敏DC组诱导的CTL对K562细胞的杀伤率分别为55．9％土22．0％、90．2％＋24．8％,均高于其他3组（p,0．05）。结论 K562细胞冻融抗原致敏DC可诱导激活CTL,具有明显杀伤K562细胞作用。并具有特异性。     

红芪总黄酮对慢性粒细胞系K562细胞周期及凋亡影响研究

目的观察中药红芪总黄酮对K562细胞周期及凋亡的影响。方法以不同剂量的药物处理K562细胞，MTT法检测红芪总黄酮对细胞的抑制作用，流式细胞仪检测其周期及凋亡的改变。结果与对照组比较，不同浓度红芪总黄酮作用K562细胞24h、48h和72h，K562细胞增殖表现为明显抑制；有一定的时间剂量依赖关系。IC50分别为263．757μg,／ml、120．502μg／ml、117．075μg／ml。药物作用48小时，各药物组与对照组相比吸光度值（A值）均明显降低，有统计学意义（P〈0．01），但无明显凋亡现象，表现为K562细胞阻滞于G0／G1、G2／M期时相。结论红芪总黄酮对K562细胞生长有抑制作用，但其抑制机制不是通过诱导细胞凋亡，而是通过诱导K562细胞的G0／G1、G2／M期阻滞。     

地塞米松对柔红霉素诱导K562细胞核因子kappa B活化及凋亡的影响

目的探讨地塞米松（DXM）对柔红霉素（DNR）诱导K562细胞核因子kappaB（NF—κB）活化及凋亡的影响。方法采用免疫组化二步法检测K562细胞的NF—κB活化,用流式细胞检测术检测K562细胞的凋亡率。结果DNR同时具有诱导K562细胞凋亡和NF—κB活化的作用;DXM50μg／L能显著抑制DNR诱导的K562细胞的NF—κB活化和增强DNR诱导的K562细胞凋亡,NF—κB活化抑制率为20．17％（P〈0．01）,细胞凋亡增强率为25．44％（P〈0．01）。结论DNR诱导K562细胞凋亡的同时激活NF—κB p65活化;DXM通过抑制NF—κB活化,增强其诱导K562细胞凋亡的作用。     

榄香烯对K562细胞株的体内外抑制作用

目的：探讨榄香烯对慢性粒细胞白血病急变的细胞K562株的体内外作用。方法：不同浓度榄香烯体外作用K562细胞不同时间,CCK-8法检测体外增殖抑制作用,Annexin V/PI双染色法检测细胞凋亡,DAPI染色进行细胞核形态学分析,动物实验观察榄香烯对K562的体内抑制作用。结果：榄香烯对K562细胞生长具有明显的抑制作用,呈量效和时效关系;榄香烯能诱导K562细胞凋亡,呈量效关系;DAPI染色显示榄香烯诱导K562细胞并显示特征性的凋亡细胞核形态;榄香烯明显抑制K562细胞在SCID小鼠体内增殖。结论：榄香烯主要通过诱导细胞凋亡,发挥对K562细胞明显的增殖抑制作用。     

氧化苏木素抑制ABCB1介导肿瘤多药耐药活性的研究

目的探讨氧化苏木素对ABCBl介导的肿瘤多药耐药活性的影响抑制。方法MTT试验检测氧化苏木素对人白血病K562及其耐药K562／ADR（ABCBl高表达）细胞的细胞毒作用;AnnexinV／PI双染,流式细胞仪检测细胞凋亡的发生。结果氧化苏木素对耐药的K562／ADR细胞具有高效的细胞毒作用,氧化苏木素对K562和K562／ADR细胞的IC50值分别为（5．45±0．36）和（5．62±0．43）μmol／L,二者无显著性差异。流式细胞仪检测凋亡的结果显示：0、5、10、20Ixmol／L的氧化苏木素分别处理K62和K562／ADR细胞后。K562细胞的凋亡率从（3．41±0．55）％依次升高到（24．67±2．08）％、（40．33±3．51）％和（66．67±3．64）％,K562／ADR细胞的凋亡率从（2．82±0．57）％依次升高到（23．01±3．60）％、（38．23±4．06）％和（65．77±5．51）％。结论氢化苏木素克服了ABCBl介导的肿瘤多药耐药活性．诱导耐药细胞凋亡是茸作用的机制．     

哌唑嗪对K562白血病细胞增殖和凋亡的影响

目的：研究α1受体拮抗剂哌唑嗪在体外对K562白血病细胞系增殖及凋亡的影响。方法：采用四唑盐（MTT）比色实验、集落形成实验为指标观察哌唑嗪对K562细胞增殖作用的影响;采用细胞形态学、Hochset33258荧光染色实验、流式细胞术检测细胞凋亡。结果：哌唑嗪能抑制K562细胞的增殖,这种增殖抑制作用呈剂量依赖关系。在5×10-6mol/L哌唑嗪作用下,K562细胞在形态学上可以看见凋亡细胞;流式细胞术也可检测到凋亡峰。结论：哌唑嗪能抑制K562白血病细胞的增殖,并能诱导其凋亡。     

大黄素诱导白血病K562细胞凋亡及对Caspase-3基因表达的影响

目的：探讨大黄素对人白血病K562细胞的增殖抑制与诱导凋亡作用．方法：采用四唑蓝比色试验（MTT）检测大黄素对K562细胞的增殖抑制作用;通过电子显微镜观察细胞的形态学变化;运用原位缺口末端标记技术检测大黄素对K562细胞的凋亡效应;采用流式细胞技术检测细胞周期变化与凋亡情况;通过比色法检测Caspase-3的相对活性,RT—PCR检测细胞内凋亡相关基因Caspase-3的转录水平．结果：大黄素能显著抑制K562细胞的增殖,作用24,72h后的半数抑制率浓度分别为80,40μmol／L;处理组细胞可见典型的凋亡形态学改变;TUNEL法检测到K562细胞在大黄素的诱导下出现凋亡;流式细胞仪结果分析发现,处理组的K562细胞被阻滞于G0／G1期,与对照组相比,凋亡率明显升高并呈现时间-剂量依赖性（P〈0．01）;大黄素可触发Caspase-3的活性增高（P〈0．01）,并呈现剂量依赖性;RT—PCR结果显示,Caspase-3 mRNA表达上调．结论：大黄素能有效地抑制K562细胞的增殖并诱导其凋亡,可能与Caspase-3活化有关．     

3-溴丙酮酸对人肝癌HepG-2细胞增殖和凋亡的影响

目的：通过3-溴丙酮酸作用于HepG-2细胞,观察3-溴丙酮酸对HepG-2细胞增殖和凋亡的影响。方法：MTT法检测细胞增殖,倒置显微镜和透射电镜观察细胞形态,流式细胞术检测细胞周期分布和细胞凋亡。结果：3-溴丙酮酸在25～75μg/mL范围内,对HepG-2细胞的增殖具有明显的抑制作用并呈现剂量依赖性。3-溴丙酮酸处理HepG-2细胞后,倒置显微镜观察到细胞生长稀疏,细胞质透亮度下降,细胞脱落增多;透射电镜观察到染色质固缩、边集,核质内可见空泡。流式细胞术结果显示3-溴丙酮酸可将HepG-2细胞阻滞于S期,且DNA直方图上可见亚二倍体峰。在3.125～25μg/mL范围内,3-溴丙酮酸可剂量依赖性的诱导HepG-2细胞凋亡。结论：3-溴丙酮酸抑制HepG-2增殖并诱导HepG-2凋亡。     

20（S）-原人参二醇对人胚肾293细胞生长的抑制作用

目的：研究20（S）-原人参二醇（PPD）对人胚肾293细胞（HEK-293细胞）生长抑制作用。方法：采用台盼蓝染色和噻唑蓝（MTT）法观察PPD对HEK-293细胞增殖的抑制作用,同时通过Hoechst33258染色和DNA Ladder方法测定PPD对HEK-293细胞凋亡影响。结果：PPD可明显降低HEK-293细胞存活率和细胞活性,半数抑制浓度（IC50）为21.8μmol/L。PPD处理后HEK-293细胞核出现典型的凋亡形态学的改变,琼脂糖电泳呈现明显的DNALadder条带。结论：PPD对HEK-293细胞生长有明显的抑制作用并有剂量依赖关系。     

塞来昔布与茶多酚合用对乳腺癌细胞增殖及凋亡的影响

目的：研究塞来昔布与茶多酚合用对三阴乳腺癌MDA—MB-231细胞增殖及凋亡的影响。方法：MTT比色法检测塞来昔布、茶多酚单药及两者联合用药对乳腺癌MDA—MB-231细胞增殖的影响。Hoechst33258荧光染色观察细胞形态学改变。流式细胞术Annexin V—FITC／PI双染检测细胞凋亡率。结果：MTT结果显示塞来昔布（10umol／L）与不同浓度茶多酚（6．25、12．5、25、50、100ug／mL）单用及合用均对MDA—MB-231细胞产生增殖抑制作用,且联合用药组的抑制率高于各单用组,差异具有统计学意义（P〈0.05）。Hoechst33258荧光染色结果显示塞来昔布（10umol／L）与茶多酚（50、100ug／mL）合用组的凋亡细胞较单用组明显增加,出现典型凋亡形态学特征。流式细胞术进一步证明两药合用使凋亡率显著增加。结论：塞来昔布与茶多酚合用具有显著抑制三阴乳腺癌MDA—MB-231细胞增殖,诱导细胞凋亡的作用。     

大蒜素对肾细胞癌ketr-3细胞增殖影响

目的观察大蒜素对肾细胞癌ketr-3细胞生长、细胞凋亡及细胞周期的影响。方法不同浓度的大蒜素作用于体外培养的ketr-3细胞。倒置显微镜下观察ketr-3细胞的形态学变化,采用四唑盐比色法(MTT)及流式细胞术(FCM)检测不同时期ketr-3细胞形态变化、增殖以及细胞凋亡的作用。结果大蒜素对肾细胞癌ketr-3细胞生长具有抑制作用,在作用24、48、72h点上不同浓度的大蒜素对ketr-3细胞的抑制率之间差异有统计学意义(P0.05)。大蒜素作用24 h即可检测到凋亡细胞,0.05 mg/m L、0.1 mg/m L、0.3mg/m L、0.5mg/m L药物组凋亡率分别为9.21%、27.43%、37.72%、46.52%,1mg/m L组的凋亡率最高,达到62.21%,而对照组仅为3.13%,差异有统计学意义(P0.05)。结论大蒜素能够诱导ketr-3细胞凋亡,阻滞细胞周期,抑制细胞增殖。     

miR-34c对Ⅱ型子宫内膜癌HEC-1-B细胞生长和凋亡的影响

目的：研究miR-34c对Ⅱ型子宫内膜癌HEC-1-B细胞的生长及凋亡的影响。方法：用hsa-miR-34cmimics转染HEC-1-B细胞。流式细胞技术测定细胞转染率,实时荧光定量PCR验证转染后miR-34c的表达。CCK-8检测细胞增殖能力的改变。细胞克隆形成实验观察miR-34c对细胞生长的长期抑制。流式细胞技术测细胞凋亡。结果：细胞转染率为81．16％。相对于对照组,转染后实验组miR-34c表达明显增加,细胞增殖、克隆形成能力减弱,凋亡增加（P〈0．05）。结论：miR-34c能明显抑制Ⅱ型子宫内膜癌细胞的增殖,促进细胞凋亡,是Ⅱ型子宫内膜癌的潜在抑癌基因。     

白藜芦醇对人宫颈癌SiHa细胞增殖与凋亡作用的影响

目的：探讨白藜芦醇（Res）诱导宫颈癌SiHa细胞凋亡的作用及可能的机制．方法：MTT法检测不同浓度（0,12．5,25,50,100,200,300,400和600μmol／L）Res处理24,48和72h对SiHa细胞的抑制率;流式细胞仪采用AnnexinV和PI双染检测细胞的凋亡率．荧光显微镜观测SiHa细胞的形态学改变．分光光度法检测Caspase-3活性．结果：Res在一定浓度范围内,以浓度和时间依赖的方式抑制宫颈癌SiHa细胞的生长（P〈0．05）．以0,200和300μmol／L Res处理细胞48h,SiHa细胞早期凋亡率分别为1．1％,8．9％和11．1％,晚期凋亡比例为3．1％,15．0％和14．0％．荧光显微镜下细胞呈现典型的凋亡性改变．200μmol／L Res处理8h后,Caspase-3活性增加,24h达高峰,后逐渐下降,经50,100和200μmol／L Res处理24h后,Caspase-3活性与对照组相比,分别增加了1．92倍,2．51倍和4．53倍（P〈0．05）．结论：白藜芦醇通过诱导Caspase-3活性增加以时间依赖和浓度依赖的方式抑制宫颈癌SiHa细胞增殖,诱导细胞凋亡．     

微小RNA-155反义寡核苷酸对乳腺癌MDA—MB-157细胞及裸鼠移植瘤的作用

目的：探讨微小RNA-155（microRNA．155,miR-155）反义寡核苷酸（antisenseoligonucleotide,AS0）对乳腺癌MDA-MB-157细胞增殖、凋亡及裸鼠移植瘤的作用。方法：设计合成化学修饰的miR-155ASO,通过Lipofectamine^TM 2000转染MDA-MB-157细胞,激光共聚焦检测转染率,real-timePCR测定转柒后miR-155表达水平的变化,CCK-8法检测细胞增殖抑制率,流式细胞仪检测细胞凋亡率,观察miR-155ASO对裸鼠成瘤能力的影响,免疫组织化学法检测瘤体组织Caspase-3的表达。结果：激光共聚焦检测转染率达80％以上。转染miR-155AS0后,miR-155表达明显下降,细胞增殖能力降低,凋亡增加。miR-155AS0能明显抑制裸鼠移植瘤生长,抑制率为52．98％,并且能显著增加Caspase-3的表达。结论：miR-155AS0能显著下调miR-155的表达水平,继而抑制乳腺癌MDA-MB-157细胞的增殖,促进其凋亡;并且通过增加靶基因Caspase-3的表达,抑制裸鼠移植瘤的生长,为miR-155作为乳腺癌治疗靶点提供了实验依据。     

刺五加注射液对Hela细胞抑制作用的实验研究

目的：探讨刺五加注射液对人宫颈癌细胞株Hela体外增殖的抑制作用。方法：采用MTT法测定了不同浓度的刺五加注射液对人宫颈癌细胞株Hela的体外抑制作用,倒置显微镜观察细胞形态变化。结果：刺五加注射液浓度越高对Hela细胞抑制作用越好,作用时间越长抑制效果越强,量效关系和时效关系良好;形态学观察到细胞凋亡。结论：刺五加注射液对人宫颈癌细胞株Hela的细胞增殖有较强的抑制作用。     

没食子酸抑制人脐静脉血管内皮细胞增殖作用研究

目的 探讨没食子酸对人脐静脉血管内皮细胞（HUVECs）增殖的抑制作用.方法 MTT比色法检测没食子酸对HUVECs增殖的抑制作用;用AO/EB荧光双染色法检测细胞凋亡和坏死;激光共聚焦显微镜检测没食子酸对F-actin和细胞核的影响.结果 浓度为40、60、80和100 μg/mL的没食子酸明显抑制了HUVECs细胞增殖,与对照组相比差异有统计学意义（P〈0.05）;荧光双染色法结果显示没食子酸诱导HUVECs发生凋亡和坏死,且随没食子酸浓度的增加,死亡细胞的比例显著增多;荧光染色显示细胞骨架蛋白F-actin的细丝发生断裂或重排,细胞核发生边集.结论 没食子酸具有显著抑制HUVECs增殖,诱导其凋亡和坏死的作用;此外,没食子酸还能破坏细胞骨架蛋白F-actin,这与抑制细胞迁移密切相关.